You are on page 1of 9

Biofarmasetika Genotyping of the N-acetyltrasferas polymorphism in the Prediction of Adverse Drug Reaction to Isoniazid in Japanese Patients.

Profesi Apoteker XXIV

Disusun oleh : .

Melinda Fikriyah , S.Farm. Muliyani, S.Farm. Miftahul Jannah, S.Farm. Nurul Ratri, S.Farm. Nur Halimah, S.Farm. Nofara Saputri, S.Farm. Nevi Riani, S. Farm Nurul Aulia Rahmi , S.Farm. Pusparani Aisyah A, S.Farm.

(12762117) (12762118) (12762119) (12762120) (12762121) (12762122) (12762123) (12762124) (12762125)

Universitas Ahmad Dahlan Yogyakarta 2012

Latar Belakang Isoniazid (INH) adalah obat penting yang sangat diperlukan untuk profilaksis dan pengobatan TB. N-acetyltransferase2 (Nat2) bertanggung jawab terutama untuk metabolisme INH. Nat2 menunjukkan turunan dari determinasi polimorfisme. dan fenotipe individu dapat diklasifikasikan sebagai cepat, menengah, atau asetilator lambat (RAs, IAs, atau SAs, masing-masing) sesuai dengan aktivitas asetilasi. Ras tersebut harus mengambil dosis yang lebih besar dari inh daripada sas. Tingkat obat yang rendah plasma di RAs adalah salah satu alasan kegagalan terapi. Di sisi lain, SAs beresiko reaksi yang merugikan. Polimorfisme ini menunjukkan perbedaan ras: hampir 50% dari Kaukasia adalah SAs, sedangkan frekuensi SAs di Jepang hanya 10%. Gen manusia Nat2 berisi 870-bp. Sampai saat ini, 1 alel kode untuk asetilasi cepat (wild type) dan beberapa alel bermutasi kode untuk kegiatan asetilasi terganggu telah ditemukan. Dari semua varian alelik Nat2 yang telah diidentifikasi, 3 varian (Nat2 * 5, Nat2 * 6 dan Nat2 * 7) telah terbukti untuk menjelaskan sebagian besar genotipe Sas dalam subjek Jepang. Selama perawatan INH, reaksi obat yang serius yang merugikan (ADR) termasuk neuritis perifer, demam dan toksisitas hati telah diakui pada beberapa pasien, meskipun kesamaan dosis mereka yang diambil oleh orang lain. Dalam sebagian besar penelitian ini, rasio metabolisme asetil-INH (AcINH) dan INH pada 3 jam. Dosis adalah penilaian yang akurat dari RA, Ia, dan fenotipe SA genotyping dari NAT2 sangat berguna untuk mengevaluasi fenotip dari INH, dimana genotyping dan fenotyping berguna untuk memonitor dan mengoptimasi terapi menggunakan obat ini. Terdapat hubungan yang signifikan pada pengamatan sebelumnya yaitu yang diterapi dengan antara hepatotoksisitas dan genotip NAT2 pada pasien Jepang dengan pulmonary tuberculosis INH dan rifampicin. Tetapi akan menjadi tidak jelas jika hubungan ini diteliti tanpa pemberian rifampicin. Tujuan penelitian ini untuk menginvestigasi hubungan antara genotip NAT2 dan insiden terjadinya ADR yang diinduksi INH pada pasien Jepang yang menderita penyakit yang sama dan menrima INH (tanpa pemberian rifampicin). Jika hubungan antara genotip NAT2 dan insiden terjadinya ADR yang diinduksi INH dapat dibuat jelas, genotyping dapat memungkinkan untuk mengidentifikasi pasien yang rentan terhadap ADR sebelum pemberian obat.

METODE Bahan Kimia: INH, hydrazine (Hz), dan acetyl-hydrazine (AcHz) didapat dari Aldrich, Milwaukee, WI. AcINH disintesis dengan metode yang telah dijelaskan oleh Yale et al. Bahan kimia lain seperti reagen diperoleh secara komersial. Sampel Darah: darah vena didapat dari pasien yang masuk dan keluar di Rumah Sakit Tohoku University (Sendai, Jepang). Komite etik lokal menerima studi ini dan izin tertulis didapatkan dari para pendonor darah. Pasien: 102 pasien jepang (28 wanita, 74 pria, usia 43 17 tahun, berat badan 56,1 9,2 kg, warga Jepang semua) yang memenuhi syarat pada studi ini antara 1999-2002. Semua pasien mendapat INH (300 mg/hari) peroral tanpa pemberian rifampicin dua kali seminggu selama lebih dari 2 minggu, dan sampel darah dikumpulkan 3 jam setelah pemberian INH. Pada awal pengobatan, tes fungsi hati menunjukkan hasil yang relatif normal pada serum aspartat aminotransferase dan alanin aminotransferase. 26 pasien didiagnosa menderita kelainan ginjal, sedangkan yang lain menunjukkan fungsi ginjal yang normal. ADR pada studi ini yaitu mual dan muntah, demam (lebih dari 380 C), gangguan pengelihatan, neuritis peripheral, dan aktivitas serum yang tinggi pada aminotransferase hepatik diikuti terapi INH yang menghilang setelah penghentian. Genotyping NAT2: DNA diisolasi dari sel darah perifer yang di-antikoagulasi-kan dengan K2EDTA menggunakan GFX Genomic Blood DNA Purification Kit (Amersham Pharmacia Biotech, Buckinghamshire, UK) berdasarkan rekomendasi pabrik. NAT2*5 (T341C), NAT2*6 et al. Analisis HPLC dari INH, AcINH, Hz, dan AcHz: Darah vena (5 ml) dikumpulkan 3 jam setelah pemberian obat. Setelah sentrifugasi, sampel plasma disimpan pada suhu 800C hingga proses assay (pengujian kadar logam). Preparasi sampel dan analisis HPLC dilakukan menurut metode Seifart et al dengan sedikit modifikasi. (G590A), dan NAT2*7 (G875A) dideteksi menggunakan allele-spesific real-time PCR assay yang telah dijelaskan oleh Hiratsuka

Gambar1. Garis besar prosedur pada preparasi sampel. Sistem HPLC (Tosoh SC8020), Tokyo, Jepang, terdiri dari pompa (CCPS), ultraviolet detector (PD8020) pada 340 nm, dan autosampler (AS8020). Fase stationery adalah fase berulang Capcell Pak C18 kolom (4,6 mm i.d x 150 mm, ukuran partikel 5m, Shiseido, Tokyo, Jepang). Fase mobile terdiri dari campuran solven A (50 mM KH2PO4) dan solven B (acetonitrilisopropanol; 4:1 v/v). Pada menit pertama kromatografi, fase mobile terdiri dari 20% solven B, yang kemudian meningkat secara linier mencapai 50% setelah 8 menit, dan 70% setelah 11 menit, dan mencapai sempurna pada 15 menit. Laju alir 0,8 ml/menit. Retention time INH (dan post-hydrolisis AcINH), Hz (dan post-hydrolisis AcHz), dan baku internal (berberine sulfate trihydrate pada H2O) adalah 6,8 menit, 12,7 menit, dan 10,5 menit. Kurva kalibrasi linier pada rentang konsentrasi 0,1 5,0 g/mL (r2>0,999) untuk INH, 0,5 10,0 g/mL (r2>0,999) untuk AcINH, 0,01 0,1 g/mL (r2>0,999) untuk Hz, dan 0,05 2,5 g/mL (r2>0,999) untuk AcHz. Analisis statistik: T-Tes siswa digunakan untuk membandingkan konsentrasi INH, AcINH, Hz, dan AcHz, dan rasio metabolik AcINH/INH diantara genotip yang berbeda. Tes dengan Chi-square dan Fishers exact test digunakan untuk analisis statistik dari insiden terjadinya ADR yang diinduksi INH berkaitan dengan genotip NAT2. HASIL Allele dan frekuensi genotip NAT2: NAT2 allele diidentifikasi pada 102 pasien menggunakan Allele specific real-time PCR assay seperti yang telah dijelaskan sebelumnya. Seperti yang terlihat pada Tabel 1. wild-type allele NAT2*4 menunjukkan frekuensi yang lebih baik (73,5%) daripada mutant allele (NAT2*6, 15,7%. NAT2*7, 9,8%. NAT2*5, 1%) pada 102 pasien. Homozigot dari NAT2*4 merupakan yang paling frekuen (52,9%), diikuti oleh heterozigot NAT2*4 dan mutant allele (24,5% NAT2*4/*6 ; 14,7% NAT2*4/*7; dan 2% NAT2*4/*5). Mutant allele dikombinasi hanya pada 6 dari 102 pasien (5,9%).

Genotip dan insiden ADR: Gambar 2 menunjukkan hubungan antara genotip NAT2 dengan INH menginduksi toksisitas untuk 102 pasien. 6 pasien (5,9%) mengalami ADR selam pemberian INH.

Frekuensi alel dan genotipe NAT2: alel NAT2 yang diidentifikasi pada 102 pasien dengan alel spesifik menggunakan alat PCR. Seperti yang ditunjukkan dalam tabel 1, wild-jenis alel NAT2 * 4 diungkapkan pada frekuensi yang lebih besar (73.5z) daripada alel mutan (NAT2 * 6, 15.7%; NAT2 * 7, 9.8%; NAT2 * 5, 1.%) pada pasien 102. Homozygote NAT2 * 4 adalah paling sering (52.9%), diikuti oleh heterozygote NAT2 * 4 dan mutan alel (24.5% NAT2 * 4W * 6, 14.7% NAT2 * 4W * 7, dan 2.0z NAT2 * 4W * 5). Alel mutan ini digabungkan dalam hanya 6 102 pasien (5.9%). Genotipe dan insiden ADR: Fig. 2 menunjukkan hubungan antara NAT2 dan toksisitas INH pada 102 pasien Enam pasien (5.9%) mengalami ADR ketika INH adalah diberikan. Cukup signifikan perbedaan yang dapat dilihat mengenai laju insiden dari ADR selama pengobatan. Kketika membandingkan RA dengan s.a. pasien dan agloco dengan s.a. pasien ( fig. 2 ). Tidak ada ra pasien dalam kelompok orang dengan toksisitas inh-induced. Di antara 42 agloco pasien, hanya satu ( 2.4%) yang dialami adrs.

Fenotipe asetilator INH dan hubungan genotipe-fenotipe: Pada 45 pasien di Jepang diobati dengan INH, plasma konsentrasi INH, AcINH, Hz, dan AcHz akan diukur dengan HPLC setelah 3 jam. Seperti yang ditunjukkan dalam tabel 3, ada tidak ada perbedaan yang signifikan dalam konsentrasi plasma rasio AcINH, Hz, dan AcHz, dan AcHzWHz di 3 jam post-dose antara wild-jenis (* 4W * 4) dan heterozigot. Sebaliknya, pembawa NAT2 * 4W * 4 genotipe menunjukkan konsentrasi INH yang lebih rendah dan lebih tinggi rasio AcINH/INH di 3 jam daripada dalam mata pelajaran dengan genotipe NAT2 lain.

Fenotipe dan insiden ADR: seperti yang ditunjukkan dalam gambar 3, ada tidak ada signi % u02C6cant hubungan antara plasma konsentrasi INH (A) pada jam 3 posting dosis dan ADR diinduksi INH. PEMBAHASAN Ini adalah studi pertama untuk mengungkapkan hubungan signifikan antara genotipe NAT2 dan kejadian INH diinduksi ADR pada pasien jepang tanpa rifampisin co-administrasi. Insiden ADR tinggi pada pasien SA(83.3%) dan rendah pada pasien jenis RA( 0%) dan jenis IA(2,4%). Dengan demikian, pasien dengan SA genotipe mempunyai risiko tinggi memperbesar INH-induced toksisitas ketika dosis standar Jepang INH (300mg/hari) diberikan. Hal ini menunjukkan bahwa NAT2 genotip berguna dalam mengidentifikasi pasien rentan untuk kejadian tersebut. Baru-baru ini, Seifart dkk, telah melaporkan bahwa plasma INH konsentrasi dan rasio metabolisme (AcINH/INH) pada 3 jam pasca-dosis adalah penilaian yang akurat RA,IA,dan fenotipe SA. Dalam penelitian ini, konsentrasi plasma rasio INH dan AcINH/INH pada jam 3 setelah pemberian pada pasien IA sebagai serta pasien SA yang signifikan berbeda dari mereka pada pasien RA. Namun, perkembangan INH-diinduksi ADR pada pasien SA secara signifikan sering dibandingkan dengan genotipe RA dan IA. Sana adalah beberapa pasien di RA dan IA-tipe yang tidak mengalami yang INHdiinduksi ADR dan menunjukkan lebih tinggi konsentrasi INH dibandingkan SA-jenis pasien. Hasil penelitian itu menunjukkan bahwa mekanisme mengembangkan INHinduced ADR tidak dapat dijelaskan oleh peningkatan konsentrasi INH saja. Dengan demikian, ada korelasi antara kejadian INH-induced ADR dan konsentrasi plasma INH pada 3 jam setelah pemakaian. Ada hubungan yang baik antara nilai rendah dari AcINH/INH rasio dan kejadian ADR. Namun, pasien yang menunjukkan nilai yang lebih rendah dari AcINH/INH rasio tidak selalu mengembangkan INHinduced ADR. Dari pasien IA, INH induced ADR juga diamati pada satu pasien IA (No.95) dengan genotipe NAT2 *4/*6. Meskipun tidak ada statistik signifikan, konsentrasi INH dan AcINH/INH rasio pasien menunjukkan relatif berbeda dari rata- rata pada pasien IA lainnya. Pengamatan klinis lain mengungkapkan rendahnya tingkat plasma albumin (3,1 g/ dL) dan tingkat tinggi dari BUN (27 mg / dL) (data tidak ditampilkan). Dengan demikian, gangguan ginjal

mungkin terjadi dan menyumbang pembersihan penurunan INH pada pasien ini. Karena ada pasien yang memiliki gangguan ginjal dan tidak mengembangkan ADR, dan semua jenis SA-pasien yang mengembangkan INHinduced ADR tidak memiliki gangguan ginjal (Tabel 2), gangguan ginjal hanya tidak mungkin risiko Faktor untuk mengembangkan INH-induced ADR. Karena sejumlah kecil diperiksa, itu adalah di <kultus untuk memecahkan Mekanisme mengembangkan INH-induced ADR. Namun, izin penurunan INH mungkin risiko faktor mengembangkan INH-induced ADR. masa depan investigasi farmakokinetik perlu menjelaskan mekanisme. Dalam penelitian ini, berbagai INH-induced ADR diakui pada pasien SA. Reaksi ini termasuk mual / muntah, demam, gangguan penglihatan, dan perifer neuritis. Demam (sekitar 390C) diamati dalam dua pasien (No. 44 dan 138). INH-induced Demam telah dijelaskan sebelumnya oleh banyak investigators10-13) dan dianggap sebagai hasil dari baik beracun dan /atau reaksi alergi, namun tidak ada laporan telah menyarankan bahwa demam INH-diinduksi dikaitkan dengan Nat2 genotipe. Karena demam diamati hanya dalam dua mata pelajaran (SA), tidak jelas apakah ada perbedaan dalam kejadian INH-diinduksi demam antara Nat2 genotipe. Karena sebuah penelitian retrospektif, semua di-pasien yang diobati dengan INH (300 mg / hari, dua kali seminggu) sebelum genetik analisis Nat2. Setelah itu, kami telah dianggap bahwa semua pasien SA berada di bawah risiko yang lebih tinggi dari penampilan ADR dari INH, dan dianjurkan untuk dokter yang INH ditarik, diganti dengan obat lain, atau dosis yang dikurangi. Setelah mengubah resep, gejala membaik atau semua yang berkurang di Pasien SA terjadi suatu INH-induced ADR (Tabel 2). KESIMPULAN Sebagai kesimpulan, hasil yang disajikan menunjukkan bahwa efek samping yang disebabkan oleh INH tanpa rifampisin coadministration di SA-jenis pasien secara signifikan sering dibandingkan dengan genotipe RA dan IA. Penentuan dari Nat2 genotipe dan asetilasi fenotip dalam hal pengobatan INH yang diusulkan berguna secara klinis untuk prediksi dan pencegahan dari INH-toksisitas diinduksi. Kejadian ADR inh meningkat pada pasien slow acetilators (83,3%) dan kejadian ADR menurun pada pasien rapid acetilator (0%) dan intermediet acetilator (2,4%). Untuk mencegah toksisitasan sebelum pengobatan INH penting untuk mencari tahu genotif dari Nat2.

You might also like