UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO Facultad de Estudios Superiores Cuautitln Lic.

Bioqumica Diagnostica Asignatura: toxicologa Grupo: 1701 Equipo: 7 Fecha de realizacin de la prctica: 28/09/12 Fecha de entrega del reporte: 05/10/12

DETERMINACIN DE CL50 CON ARTEMIAS SALINAS

Garca Ruiz Guido Alejandro, Mondragn Fuentes Laura, Rivera Ruiz Nancy Michel

RESUMEN La preocupacin sobre los posibles efectos ecolgicos de los contaminantes comenz a expandirse entre los aos 50's y 60's. Es muy difcil precisar cuantas molculas han sido sintetizadas hasta ahora; sin embargo, el Servicio de Resmenes Qumicos (Chemical Abstract Service) de los Estados Unidos cuenta con ms de nueve millones de sustancias listadas, de ah que la ecotoxicologa estudie el destino y los efectos de los contaminantes en los ecosistemas, intentando explicar las causas y prever los riesgos probables. Con la finalidad de determinar el potencial toxico de dos sustancias qumicas K2Cr2O7 y HgCl2 se realizo un bioensayo de toxicidad agudo utilizando un modelo de ecosistema acutico con Artemia Salina que se pusieron a prueba a concentraciones crecientes de estas sustancias, monitoreando de su viabilidad cada 15 min, y evaluando el efecto letal despus de 120 min, con lo que se obtuvo una curva dosis respuesta en unidades probit calculando la CL50 que para K2Cr2O7 fue---de y para HgCl2 fue--- evidenciando la capacidad de inducir toxicidad de esta sustancias, as como la necesidad de controlar y crear conciencia principalmente para el rea industrial acerca de su uso y desecho adecuado. PALABRAS CLAVE: Ecotoxicologa, bioensayo, CL50, letalidad. ABSTRAC Concern about the potential ecological effects of pollutants began to expand from the 50's and 60's. It is very difficult to determine how many molecules have been synthesized so far, however, the Chemical Abstracts Service (Chemical Abstract Service) of the United States with over nine million listed substances, hence the ecotoxicology study the fate and effects of pollutants in ecosystems, trying to explain the causes and predict the likely risks. In order to determine the potential toxicity of two chemicals HgCl2 K2Cr2O7 and a bioassay was performed using an acute toxicity to aquatic ecosystem model brine shrimp that were tested at concentrations of these substances, monitoring of viability every 15 min and assessing the lethal effect after 120 min, thereby obtained a dose response curve probit units for calculating LC50 ---- of K2Cr2O7 was HgCl2 was --- and showing the ability to induce toxicity of this substances and the need to control and awareness mainly to the industrial area about their use and proper disposal. KEY WORDS: Ecotoxicology, bioassay, LC50, lethality.
INTRODUCCION

La artemia salina han sido utilizadas en bioensayos por numerosos laboratorios de todo el mundo, y los resultados en la determinacin de la LC50 han sido publicados para una serie de toxinas y qumicos conocidos. Es reciente su empleo en el campo de la ecotoxicologa, el cual incluye investigaciones de la toxicidad en mezclas de qumicos y muestras ambientales, evaluacin de riesgos, screening agudo de sustancias qumicas, productos alimenticios y farmacuticos; adems, el estudio de la transferencia trfica de contaminantes, ya que desde el punto de vista ecotoxicolgico los invertebrados acuticos juegan un importante papel en la transferencia de alimentos o flujo de energa dentro de la cadena alimentaria de estos ecosistemas, por lo que las alteraciones originadas por la presencia de un agente

txico en uno de estos grupos pueden en algn grado, interferir con otros componentes interdependientes de la cadena trfica. Por el potencial impacto que representa para el ambiente, la emisin de bicloruro de mercurio y dicromatos (cromo VI), vertidos producto de la actividad de diferentes sectores industriales, se determina la toxicidad aguda de estos en Artemia salina como mtodo alternativo aplicado a la ecotoxicologa. En este verstil mtodo se exponen a diferentes concentraciones del compuesto y se determina la LC50 correspondiente, as como otros efectos adversos que pueda ocasionar. Esta metodologa combina simplicidad, rapidez, confiabilidad y bajo costo, por lo que su empleo como screening en pruebas ecotoxicolgicas permite en un corto plazo predecir la toxicidad de numerosas sustancias qumicas para los ecosistemas acuticos. El bicloruro de mercurio es un compuesto muy txico, la dosis letal vara entre 0,2 y 0,4 gramos, adems de ser un contaminante marino severo. La principal aplicacin del cloruro de mercurio (II) es como catalizador en la conversin del acetileno a cloruro de vinilo, el precursor del PVC. En disoluciones diluidas, se emplea como antisptico, es aplicado al suelo para el control de enfermedades fungosas e insectos; utilizados en soluciones de inmersin de bulbos y tubrculos, incluyendo la semilla de papa, para el control de la lombriz de tierra. Tambin en el control de infeccin por hongos en los arboles de membrillo y como repelente de hormigas, cucarachas y termitas. El cloruro de mercurio (II) puede afectar al organismo si es inhalado o se pone en contacto con la piel o los ojos. Tambin puede afectar al organismo si se le ingiere. El cloruro de mercurio (II) es muy txico, se puede absorber por inhalacin del aerosol, a travs de la piel y por ingestin. Los efectos debido a la inhalacin varan desde unas severas irritaciones en el tracto digestivo, provoca tos, dolor de garganta, sensacin de quemazn, jadeo. Pueden producirse efectos similares a los de va ingestin, calambres abdominales, dolor abdominal, sensacin de quemazn, gusto metlico, diarrea, nuseas, dolor de garganta, vmitos, shock o colapso. La sustancia es muy txica para los organismos acutic0s. Puede producirse una bioacumulacin de esta sustancia a lo largo de la cadena alimentaria, por ejemplo en los organismos acuticos. La sustancia puede causar efectos prolongados en el medio acutico, los microorganismo convierten el cloruro de mercurio (II) en metil mercurio, el cual es absorbido fcilmente por el plancton y las algas y de esta manera ingresa a la cadena alimentaria, dando lugar a bioconcentracion de gran magnitud. El dicromato de potasio es utilizado en la produccin de productos pirotcnicos, explosivos, colorantes, productos para impresin, para curtido de pieles, para telas repelentes al agua, en baterias elctricas, como oxidante en la elaboracin de otros productos qumicos orgnicos, en la elaboracin de cerillos de seguridad, en el blanqueo de aceite de palma, ceras y esponjas, como inhibidor de corrosin, como reactivo analtico, en la industria cermica y en la obtencin de pigmentos, entre otros.

El principal problema de este producto es su capacidad para corroer e irritar piel, ojos, membranas mucosas y tracto respiratorio, as como hgado y riones, por lo que es peligroso inhalado, ingerido o por contacto con la piel.
MATERIALES Y MTODOS

RESULTADOS Tabla 1: Respuesta obtenida en cada grupo de Artemia salina en funcin de la concentracin para K2Cr2O7 Concentracin Artemias totales Vivas a los 120 Muertas a los 120 min min. 5 mg/ml 30 X = 30 9 X=9 21 X = 21 30 9 21 10 mg/ml 30 X = 30 19 X = 24 11 X=6 30 29 1 15 mg/ml 30 X = 30 2 X = 11 28 X = 19 30 20 10 20 mg/ml 30 X = 30 5 X=9 25 X = 21 30 13 17 25 mg/ml 30 X = 30 7 X=8 23 X = 22 30 9 21 Tabal 2: Respuesta obtenida en cada grupo de Artemia salina en funcin de la concentracin para HgCl2 Concentracin Artemias totales Vivas a los 120 Muertas a los 120 min min. 0.005 % 30 X = 30 29 X = 28 1 X=2 30 28 2 0.025% 30 X = 30 30 X = 29 0 X=1 30 29 1 0.05% 30 X = 30 30 X = 29 0 X=1 30 29 1 0.1% 30 X = 30 30 X = 27 0 X=3 30 24 6 0.15% 30 X = 30 23 X = 23 7 X=7 30 23 7 0.20% 30 X = 30 10 X = 15 20 X = 15 30 19 11 0.40% 30 X = 30 2 X=5 28 X = 25

0.80% 1%

30 30 30 30 30

X = 30 X = 30

9 O 2 0 12

X=1 X=6

21 30 28 30 18

X = 29 X = 24

Tabla 3: Resultados obtenida en las poblaciones de Artemia salina en funcin de la concentracin para

K2Cr2O7
Concentracin mg/ml Artemias totales (n) Vivas a los 120min Muertas a los 120min Probabilidad r/n %E P*100 Unidades probit Log de la concentracin

5 10 15 20 25

30 30 30 30 30

9 24 11 9 8

21 6 19 21 22

0.7 0.2 0.63 0.7 0.73

70 20 63 70 73

5.52 4.16 5.33 5.52 5.61

0.69 1 1.17 1.30 1.39

Grafico1: Se muestra la curva Dosis-respuesta para K2Cr2O7 as como la DL50

Nota: Prueba Q realizada para el dato aberrante de 5.52 unidades Probit para la concentracin de 5 mg/ml de K2Cr2O7. (Tablas de Q anexo clculos parte I) 4.16, 5.52, 5.52, 5.33, 5.61

Qcal >Qtabla con n=5 y 95% de confianza 15.11>0.710 por lo tanto se rechaza el valor

 Calculo de DL50 para K2Cr2O7

Tabla 4: Resultados obtenida en las poblaciones de Artemia salina en funcin de la concentracin para HgCl2
Concentra cin % Concentra cin mg/ml Artemias totales (n) Vivas a los 120min Muertas a los 120min Probabilidad r/n %E P*100 Unidades probit Log de la concentracin Log de la Concentracin + 1

0.005 0.025 0.05 0.1 0.15 0.20 0.40 0.80 1

0.05 0.25 0.5 1 1.5 2 4 8 10

30 30 30 30 30 30 30 30 30

28 29 29 27 23 15 5 1 6

2 1 1 3 7 15 25 29 24

0.06 0.03 0.03 0.1 0.23 0.5 0.83 0.96 0.8

6 3 3 10 23 50 83 96 80

3.45 3.12 3.12 3.72 4.26 5 5.95 6.75 6.28

-1.30 -0.60 -0.30 0 0.17 0.30 0.60 0.90 1

-0.30 0.4 0.7 1 1.17 1.30 1.60 1.90 2

Grafico 2: Se muestra la curva Dosis-respuesta para HgCl2 as como la DL50

Nota: El mtodo Probit indica que para nmero negativos del eje de las X se debe de sumar una unidad, el primer valor cae dentro de los nmeros positivos y sin posibilidad de realizar un aprueba Q se procedi a eliminarlo.

 Calculo de DL50 para HgCl2

)(

DISCUSIN DE RESULTADOS CONCLUSIN REFERENCIAS

1) Albert L., (1997), Introduccin a la Toxicologa Ambiental, Centro Panamericano de Ecologa Humana y Salud, OPS/OMS, paginas consultadas 227-228. 2) Casarett y Doull, (2005), Fundamentos de Toxicologa, McGraw-Hill Interamericana, Madrid, paginas consultadas 398-400. 3) Crdoba Daro, (2006), Toxicologa, 5 ed., El manual moderno, Bogot, paginas consultadas 235237.
ANEXOS Parte I) Tablas para determinar las Unidades Probit con un nivel de confianza de 95%.

Tablas valor de Q

Parte II) Clculos concentraciones de bicloruro de mercurio en mg/ml 0.005%= 0.005g/100ml 0.025%= 0.025g/100ml 0.05%= 0.05g/100ml 0.1%= 0.1g/100ml 0.15%= 0.15g/100ml 0.20%= 0.20g/100ml 0.40%=0.40g/100ml

0.80%= 0.80g/100ml 1%= 1g/100ml Parte III) Diagrama de flujo.

R1: residuos de dicromato: juntar todos los residuos en un frasco de vidrio rotulado adecuadamente para su posterior tratamiento; Residuos que contienen dicromato de potasio se pueden tratar con sulfato

de hierro(II)(FeSO4). Este reduce el cromo(VI) a cromo(III) que precipita en forma del hidrxido o del xido R2: residuos de cloruro de mercurio: reunir todas las suluciones se puede emplear celdas fotocataliticas con dixido de titanio que permitir que el mercurio quede atrapado en la celda y asi puede ser recuperado fcilmente