Universidad Industrial de Santander- Facultad de Salud Escuela de Bacteriologa y Laboratorio Clnico Programa de Microbiologa y Bioanlisis Asignatura: Biologa molecular

TALLER No 2: EL USO DE LAS MICROPIPETAS En el laboratorio, la habilidad para medir de manera exacta y reproducible y transferir volmenes pequeos de lquidos son crticos para obtener resultados tiles. Para los volmenes menores de 1 mL, el mtodo ms comn para medir lquidos requiere el uso de un dispositivo conocido como micropipeta. PAUTAS GENERALES Revisar la pipeta al inicio del da de trabajo para retirar suciedad y polvo Ajustar el volumen en el rango especificado para la pipeta. No Trate de colocar la micropipeta para volmenes mayores que el mximo, o para volmenes menores del cero, esto descalibrar y daar la micropipeta. Sujetar la pipeta de forma que el reposamanos de la pipeta descanse sobre el dedo ndice Para maximizar exactitud, la pipeta, la punta y el lquido deben estar a la misma temperatura. La temperatura de los lquidos debe estar entre 15 y 40 C. Comprobar que las puntas son las adecuadas para la pipeta y que est correctamente ajustada. Toda micropipeta utiliza puntas desechables. Usar las puntas una sola vez No volver la pipeta del revs, de forma que el lquido de la punta afecte al interior de la pipeta. No utilizar la micropipeta con lquidos que atacan el polipropileno. No utilizar lquidos que estn emitiendo vapores. Evitar contaminaciones de las puntas usando el eyector y los guantes Si es usada inadecuadamente, la micropipeta transferir volmenes inexactos. Calibrar las pipetas de forma regular, al menos una vez al ao TCNICAS DE PIPETEO

Caractersticas de las micropipetas usadas en biologa molecular, mecanismo de accin. 1: posicin normal; 2: primer tope; 3: segundo tope

 Pipeteo Normal: Recomendada para soluciones acuosas como tampones, cidos diluidos y bases. Pipeteo Reverso: Esta tcnica se usa para pipetear soluciones con una gran viscosidad o tendencia a formar espuma. Slo se puede realizar con pipetas de desplazamiento de aire. Para soluciones de alta viscosidad el llenado y la expulsin deben ser ms lentas. Pipeteo Repetitivo: Esta tcnica est especialmente indicada para pipeteo repetido del mismo volumen. Pipeteo de muestras heterogneas: Esta tcnica est especialmente indicada para pipeteo de muestras viscosas en las que no se puede lavar previamente la punta con la muestra y se necesita pipetear el volumen total disponible. Por ejemplo, sangre o suero

METODO DE CALIBRACIN DE LA MICROPIPETAS POR GRAVIMETRIA

Evala el estado de precisin y exactitud que presentan las micropipetas, utilizadas en los laboratorios de biologa molecular, basado en la determinacin del mtodo gravimtrico:

La densidad del agua es 1 g/mL a 25 C, por lo tanto un volumen de 1 mL corresponde aproximadamente a una masa de 1 g, 300 L a 0.3 g, 200 L a 0.2 g, 60 L a 0.06 g, 10 L a 0.01 g y 3 L a 0.003 g.

Entonces en teora cada l de agua deber pesar 0.001g. De esta manera, mediante la determinacin del peso de cada volumen medido con una pipeta, podramos correlacionar el valor terico contra el valor medido por gravimetra y evaluar el porcentaje de inexactitud y de imprecisin.

Realice N mediciones seriadas a 100, 50 y 20% del volumen nominal medible por la pipeta dado el caso de que sea con volumen ajustable. % 100 VOLUMEN TEORICO VOLUMEN GRAVIMETRICO

MODELO

50

20 Exactitud: Es el grado en que el valor medido se aproxima al valor correcto. Usualmente se expresa en porcentaje de error. Determine el porcentaje de inexactitud, para la pipeta utilizada % Exactitud = Valor obtenido Valor gravimtrico *100 Valor gravimtrico Determine la precisin con que trabaja la pipeta utilizada 1- Calcular la media: (X1 + X2 + X3 + X Xn) / n 2- Calcular la varianza: Suma (X1 - Media)2 / n 1 3- Desviacin estndar Raz al cuadrado de la Varianza. La desviacin estndar nos permite determinar el grado de dispersin que podran tener los datos medidos con respecto a la media, estos datos no debern ser mayores a dos desviaciones estndar para contener un 95% de reproducibilidad.

TALLER DE REPASO N 3: MUESTRAS USADAS EN BIOLOGA MOLECULAR

Para el desarrollo prctico de Biologa Molecular y cualquier proceso analtico se han determinado 3 fases claves: PREANALITICA ANALITICA POSANALITICA

Para las cuales se ha definido y sintetizado un: Esquema unificado del proceso analtico que sufre una muestra

El proceso de anlisis en Biologa Molecular est basado en la evaluacin de tres molculas fundamentales obtenidas a partir de muestras que deben poseer caractersticas especiales:
Protena

1. Seleccione un tipo de muestra y describa sus caractersticas necesarias para ser usada en Biologa Molecular? 2. Las diversas muestras utilizadas en biologa molecular para el diagnstico clnico requieren de extraccin y anlisis de ADN/ARN, protenas y/o macromolecular. Como en todo proceso analtico se desarrollan 3 fases, la preanalitica, analtica y post analtica. Escoja una muestra biolgica y ejemplifique con ella las tres fases. 3. Nombre 3 variables que pueden afectar la muestra en la fase preanalitica. Explique. 4. Con el avance de la tecnlogia hoy en da es posible hacer un diagnostico temprano de anormalidades fetales. Para ello se utilizan diferentes ripos celulares u tejido embrionario. Cules clulas/tejido pueden ser usados. Descrbalos y explique su uso.

5. Se necesita realizar extraccin de ADN con el fin de hacer la identificacin de un cuerpo encontrado en la escena de un crimen. Al parecer lleva ms de dos das sin vida con lo cual una muestra de sangre perifrica no sera adecuada. De mayor a menor concentracin de ADN enliste los tejidos que podran ser utilizados para extraer ADN. Tras la obtencin de una muestra ideal y para el desarrollo de un proceso analtico ptimo, es indispensable el manejo y estudio adecuado de cada uno de los componentes, materiales y equipos que sern utilizados Uno de los equipos ms influyentes, con mayor utilidad y determinantes durante ensayos que requieren mucha precisin, son la pipetas y/o micropipetas. 2. Cules son los tipos de pipetas, sus usos y aplicaciones en la Biologa Molecular?