RECONOCIMIENTO DE LPIDOS MATERIALES Y REACTIVOS

Tubos de ensayo Gradilla Varillas de vidrio Mechero Vasos de precipitados Pipetas 5 erlenmeyers de 125 15 ml de cloroformo 10 ml de Sudn II al 0.2%. A 200 mg de Sudan II Se le aaden 100 ml de etanol al 70%, calentado en bao mara, se mezclan y se deja en reposo durante 24 horas, por lo menos. - 5 ml de cido sulfrico concentrado - 5 ml de lecitina al 0,2% en etanol al 96%. 0,1 gr en 50 ml de etanol. 20 ml de peryodato sdico al 2 % 20 ml de reactivo de Schiff: Se disuelven 0.5 g de rosanilina en 50 ml de agua, decolorada por el paso a su travs de una corriente de anhdrido sulfuroso, filtrada a travs de carbn activado y diluida hasta 500ml; debe guardarse en el refrigerador en botella oscura. - 50 ml de cloruro de cadmio al 1,5% en etanol al 96%. - Solucin de NaOH al 20% - Solucin de Sudn III - Tinta china roja - Aceite de oliva

2.1. SAPONIFICACIN FUNDAMENTO Las grasas reaccionan en caliente con el hidrxido sdico o potsico descomponindose en los dos elementos que las integran: glicerina y cidos grasos. stos se combinan con los iones sodio o potasio del hidrxido para dar jabones, que son en consecuencia las sales sdicas o potsicas de los cidos grasos. En los seres vivos, la hidrlisis de los triglicridos se realiza mediante la accin de enzimas especficos (lipasas) que dan lugar a la formacin de cidos grasos y glicerina. PROCEDIMIENTO . Colocar en un tubo de ensayo 2ml de aceite y 2ml de NaOH al 20%. . Agitar enrgicamente y colocar el tubo al bao Mara de 20 a 30 minutos. . Pasado este tiempo, se pueden observar en el tubo 3 fases: una inferior clara que contiene la solucin de sosa sobrante junto con la glicerina formada, otra intermedia semislida que es el jabn formado y una superior lipdica de aceite inalterado.

2.2. TINCIN FUNDAMENTO Los lpidos se colorean selectivamente de rojo-anaranjado con el colorante Sudn III. PROCEDIMIENTO . Disponer en una gradilla 2 tubos de ensayo colocando en ambos 2ml de aceite. . Aadir a uno de los tubos 4-5 gotas de solucin alcohlica de Sudn III. . Al otro tubo aadir 4-5 gotas de tinta roja.
1/3

. .

Agitar ambos tubos y dejar reposar. Observar los resultados: en el tubo con Sudn III todo el aceite tiene que aparecer teido, mientras que en el tubo con tinta, sta se ir al fondo y el aceite no estar teido.

2.3. SOLUBILIDAD FUNDAMENTO Los lpidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en pequesimas gotas formando una emulsin de aspecto lechoso, que es transitoria, pues desaparece en reposo por reagrupacin de las gotitas de grasa en una capa que, por su menor densidad, se sita sobre el agua. Por el contrario, las grasas son solubles en disolventes orgnicos, como el ter, cloroformo, acetona, benceno, etc. PROCEDIMIENTO . Poner 2ml de aceite en dos tubos de ensayo. . Aadir a uno de ellos 2ml de agua y al otro 2ml de ter u otro disolvente orgnico, . Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar. . Observar los resultados: Se ver cmo el aceite se ha disuelto en el ter y, en cambio no lo hace en el agua y el aceite subir debido a su menor densidad. 2.4 PRUEBA PARA COLESTEROL FUNDAMENTO Un ensayo tpico para reconocer la presencia de colesterol, es la prueba de Liebermann Burchard que se basa en la acetilacin del grupo alcohlico del colesterol en 3. Si adems el colesterol presenta un doble enlace en C 5, como es el caso del colesterol y el ergosterol, en presencia de cido sulfrico concentrado, se presenta una deshidratacin con epimerizacin del grupo acetilado de 3 a 3, con lo que se genera una coloracin rosa que cambia a prpura y finalmente a azul verdoso y verde. Esta reaccin sirve para determinar cuantitativamente los esteroles presentes en las muestras comparando las absorbancias a 625 nm logradas en los problemas a los 30 minutos de iniciarse la reaccin con las obtenidas con los patrones. PROCEDIMIENTO En dos tubos de ensayo coloque, respectivamente, 2 ml de cloroformo puro y 2 ml de la solucin de colesterol que se encuentra como reactivo, y en cada uno agregue 0.5 ml de anhdrido actico y 1 ml de cido sulfrico concentrado y mezcle bien con una varilla de vidrio. Se dejan los tubos a temperatura ambiente durante unos 20 minutos. La aparicin de un color verdoso indica la presencia de colesterol y otros esteroides con un grupo OH en posicin 3 y un doble enlace en 5. 2.5 PRUEBAS PARA FOSFOLPIDOS FUNDAMENTO El reactivo de Schiff permite reconocer lpidos que contengan materiales con radicales OH- contiguos como es el caso de los fosfatidilinositoles, fosfatidilglicridos y cerebrsidos. Como los carbohidratos poseen las mismas caractersticas carbonos con radicales OH contiguos- esta prueba tambin da positiva. El cadmio permite reconocer los fosfolpidos que tienen colina como sustituyente a continuacin del grupo fosfato en el tercer carbono. PROCEDIMIENTO Coloque una gota del fosfolpido, sobre un papel de filtro, deje que se seque y coloque una segunda gota encima de la anterior. En la misma forma agregue una tercera gota.- En otros dos sitios del papel filtro repita el mismo procedimiento con una gota de aceite y una gota de lecitina. Marque con un lpiz donde coloc cada gota. Cuando el
2/3

papel est seco, lvelo varias veces con agua destilada, dejando correr un pequeo chorro sobre l. Deje secar el papel al aire y luego sumrjalo durante un minuto en peryodato sdico al 2%. Lave nuevamente el papel con agua y djelo un minuto en un bao con el reactivo de Schiff. Los lpidos que contienen materiales con radicales OH contiguos dan manchas violceas al cabo de unos 10 a 15 minutos. En un tubo de ensayo vierta 2 ml de solucin de lecitina y aada 1 ml de solucin de cloruro de cadmio. Se debe formar un precipitado blanco en forma de copos de un compuesto de cadmio con lecitina. Repita la experiencia con la solucin de fosfolpido. CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4. 5. Qu son los jabones? Cmo se pueden obtener los jabones? Por qu en la saponificacin la glicerina aparece en la fase acuosa? Qu enzima logra en el aparato digestivo la hidrlisis de las grasas? Indica lo que ocurre con la mezcla aceite-Sudn III y aceite-tinta y explica a qu se debe la diferencia entre ambos resultados. 6. Qu ocurre con la emulsin de agua en aceite transcurridos unos minutos de reposo? Y con la de benceno y aceite? A qu se deben las diferencias observadas entre ambas emulsiones? 7. Consulte las funciones que realiza el colesterol en la clula

3/3