P.O.P.

(Procedimento operacional padro)

Identificao de Helmintos
Elaborado por: Alessandra Francisco, Layla Nunes e Thamirys Oliveira; Alunas de Biomedicina Universidade Castelo Branco

Procedimento Operacional Padro Projeto de Parasitologia para profissionais da sade

Rio de Janeiro 11-04-2013

Laboratrio 1

Elaborado por: Alessandra Francisco Layla C. Nunes Thamirys Oliveira

Mtodos Parasitolgicos para a identificao de Helmintos

Mtodo de Lutz
Fundamento
Sedimentao espontnea

Objetivo
Identificao de ovos pesados, que tendem a sedimentar na gua. Este mtodo ideal para a identificao dos ovos dos seguintes helmintos: Ascaris lumbricoides, Tricuris trichiura e Schistosoma mansoni.

Procedimento
1 Colocar cerca de 2,5g de fezes em um frasco de Borrel contendo aproximadamente 5 mL de gua; triturar bem com um basto de vidro. OBS: Para as fezes colhidas em soluo conservante (MIF, Formol 10%) deve-se colocar +/- 5 mL do homogeneizado em frasco de Borrel ou copo de plstico) e seguir o item 2. 2 Acrescentar aproximadamente 20 mL de gua. 3 Filtrar a suspenso para um clice de sedimentao de 100 mL de capacidade total. OBS: No processo, usar gaze cirrgica dobrada em quatro ou tela de nylon. 4 Os detritos contidos na gaze ou tela de nylon so lavados em mais 20 mL de gua, medida que vo sendo misturados com o basto de vidro. O lquido resultante recolhido no mesmo clice de sedimentao. 5 Deixar a suspenso do clice em repouso entre 1 e 24 horas.

6 Aps esse tempo, decantar o sobrenadante evitando suspender o sedimento. Se o lquido sobrenadante ainda estiver turvo, fazer nova lavagem (adicionar mais gua no sedimento que ficou no clice) e deixar em repouso por at 60 minutos. 7 Aps este tempo, decantar a gua e colher uma gota do sedimento, colocar na lmina limpa, cobrir com lamnula e observar ao microscpio com as objetivas de 10X a 40X.

Mtodos Parasitolgicos para a identificao de Helmintos

Mtodo de Willis
Fundamento
Flutuao em soluo saturada de cloreto de sdio.

Objetivo
Identificao de ovos leves que tendem a flutuar em soluo NaCl. Este mtodo ideal para a identificao de Ancilostomdeos uma vez que so ovos que possuem baixo peso especfico.

Procedimento
1-Transferir do bquer de 25mL um pouco de soluo de cloreto de sdio saturada, para um pote mbar, at que alcanar aproximadamente 0,5cm da base. 2- Em seguida, com o auxlio de uma palheta de madeira, homogeneizar cerca de 2 gramas de fezes formadas nesta soluo. Quando for obtida a soluo homognea, completar o volume do pote com mais soluo de cloreto de sdio at bem prximo a sua abertura. 3- Posicionar uma lmina de microscpio sobre o pote, com o devido espao para poder complet-lo, at que a soluo encostasse inteiramente na face inferior da lmina, sem a formao de bolhas. Deslizar com cuidado esta lmina para tampar completamente o pote, e esperar por volta de 30 45 minutos. 4- Aps o tempo indicado retirar a lmina, invertendo rapidamente a face antes encostada na soluo para cima, para que no haja perda do pequeno volume de lquido sobre a lmina por conta dos efeitos da tenso superficial e cobrir com a lamnula. 5- Em seguida pode-se realizar uma anlise microscpica da lmina

Mtodos Parasitolgicos para a identificao de Helmintos

Mtodo de Baermann-Moraes
Fundamento
Migrao de larvas a partir do termo-hidrotropismo.

Objetivo
Visualizao possveis larvas vivas de Strongyloides stercoralis,deve levar em conta que os pacientes infectados por esse nematdeo, em vez de ovos, eliminam larvas em suas fezes.

Procedimento
1- Encher o funil com gua corrente, aquecida a 40-45C. 2- Abrir a pina de Mohr, deixando escorrer uma pequena quantidade de gua para evitar a formao de bolhas de ar na haste e no tubo de ltex. 3 - Colocar 8 a 10 g de fezes, recentemente emitidas, sobre gaze dobrada quatro vezes e, se necessrio, juntar mais gua, at que as fezes fiquem submersas. 4- Deixar em repouso durante 60 minutos. 5- Abrir a pina e coletar parte do lquido em vidro de relgio; examinar ao microscpio estereoscpio (aumentos 20 a 30 x). 6- Deixar em repouso durante alguns minutos, pois desta forma as larvas migraro para o centro do vidro de relgio. 7- Examinar o sedimento entre lmina e lamnula.

Mtodos Parasitolgicos para a identificao de Helmintos

Mtodo de Tamisao
Fundamento
Reteno na parte superior de tamis dos proglotes, adultos ntegros ou partes de nematelmintos.

Objetivo
Pesquisa de proglotes do Gnero Taenia.

Procedimento
01- Instruir coleta do mximo possvel da evacuao do suspeito (normalmente todos os dejetos do dia por 03 dias) em potes de boca larga com capacidade de aproximadamente 500 ml ou mais; 02- Diluir o material no prprio recipiente de coleta; 03- Filtrar o material em tamis em cuba de pia, empregando um jato de gua de pequena potncia para completar a lavagem do material; 04- Coletar possveis proglotes, helmintos adultos ntegros ou partes de nematelmintos adultos para posterior identificao.

OBS: 1) Para identificao de proglotes de cestides, deve-se submeter o(s) mesmo(s) a clarificao pelo cido actico glacial por 10 a 20 min, na dependncia do tamanho dos mesmos e em seguida comprimi-lo(s) entre duas 11 lminas, Observando-o(s) diretamente por transiluminao sem que seja necessrio o uso de microscpio. 2) Caractersticas para diferenciao de proglotes grvidas: T sollium tem proglotes grvidas com ramificaes pouco numerosas e dendriticas e T saginata muitas ramificaes uterinas e dicotmicas.

Mtodos Parasitolgicos para a identificao de Helmintos

Mtodo de Gota espessa

Fundamento
Sua tcnica baseia-se na visualizao do parasito, atravs de microscopia tica, aps colorao pelo mtodo de Walker ou Giemsa.

Objetivo
Visualizao de microfilrias de Wuchereria bancroft.

Procedimento
Para a confeco da gota espessa, podemos colocar pequenas gotas de sangue nas posies relativas aos vrtices de um quadrado imaginrio e uni-las com um movimento circular utilizando um palito descartvel ou o vrtice de uma lmina comum. OBS: Procedimento noturno de 23h as 01h

Mtodos Parasitolgicos para a identificao de Helmintos Mtodo de Biopsia de Ndulo ou Pele

Fundamento
Identificao do verme adulto ou microfilrias por meio de biopsia de ndulo ou pele.

Objetivo
Visualizao de microfilrias de Onchocerca volvulus.

Procedimento
Aspirao do ndulo

Referncias:
1. Amato Neto V, Corra LL Exame Parasitolgico de Fezes. Sarvier, 5 ed., 1991.

2. NEVES, D.P. - Parasitologia Humana. Rio de Janeiro, Editora Atheneu. 2005. 3. REY, L. - Bases da Parasitologia Mdica. Rio de Janeiro, Editora Guanabara Koogan, 2002. 4. http://www.medicinanet.com.br/conteudos/revisoes/1723/ancilostomiase.h tm
5. http://www.medicinanet.com.br/conteudos/revisoes/1760/filariase_por_wuchere ria_bancrofti.htm