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UAP

Universidad Alas Peruanas

UNIVERSIDAD ALAS PERUANAS FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGA MEDICA REA DE LABORATORIO CLNICO Y ANATOMA PATOLGICA.

Automatizacin en Microbiologa
Lic. TM Lus Caldern Cumpa

IMPORTANCIA DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA EN LA PRACTICA CLINICA

CONTROL DE INFECCIONES INTRAHOSPITALARIAS ESTUDIOS EPIDEMIOLOGICOS VIGILANCIA EPIDEMIOLOGICA EN INSTITUCIONES HOSPITALARIAS USO EFECTIVO DE TERAPIA ANTIMICROBIANA

CLIENTES
Mdicos Enfermeras Pacientes

CICLO DEL SERVICIO MICROBIOLOGIA


SALIDA ENTRADA

VERIFICADO POR

MDICO
TECNOLOGO MEDICO

PACIENTE ENFERMERA AUXILIAR LAB SECRETARIA

Entrega de resultados

Solicitud de exmenes

Impresin de resultados

Recoleccin de muestras y transporte

Reporte y validacin de resultados

PROVEEDORES
Servicios a terceros Casas comerciales

Proceso de muestras

Recepcin de muestras y facturacin Recoleccin de muestras

EQUIPOS DE MICROBIOLOGIA

FASE ANALITICA

FASE POST ANALITICA

PORQUE LLEGAR A LA AUTOMATIZACION?

DIAGNOSTICO DE LABORATORIO DE INFECCIONES

TINCION DE GRAM.

EL RENDIMIENTO DE LA TINCION DE GRAM PUEDE SER 20% MENOR EN PACIENTES QUE HAN RECIBIDO TERAPIA ANTIMICROBIANA PREVIA.

IDSA GUIDELINES AGOSTO 2004 CLINICAL INFECTIUOS DISEASES 2004; 39:1267-84

MUESTRA CLINICA

GRAM

SIEMBRA

INTERPRETACION

AISLAMIENTO

AISLAMIENTO INTERPRETACION

IDENTIFICACION ANTIBIOGRAMA

Bacterias: como estafilococos, estreptococos, micrococos, neumococos, enterococos, bacilos de !a difteria y bacilos del ntrax.

Bacterias: como gonococos, meningococos, bacilos conformes, shgelas, salmonelas o vibriones del clera.

COLORACIN GRAM
Poly Stainer : automtico para la tincin de Gram. totalmente programable Almacena diez programas diferentes, para definir el bao, el tiempo de inmersin y la agitacin.

Primer Mtodo utilizado (1966), Estandarizado 0.5 Escala Mc Farland (Turbidez-inoculo)

ANTIBIOGRAMA
BP (Breakpoint) Susceptibilida d in vitro cualitativa (S, I, R) Concentraci n de antibitico equivalente a las reglas CLSI breakpoints 1-2 diluciones por droga 29-33 ATB por
MIC (Concentracin Mnima Inhibitoria) Concentracin del antibitico in vitro por mtodo cuantitativo. 4 5 diluciones por antibitico 17 27 ATB /panel

Criterios de Interpretacin (R, I, y S)


Los escatogramas o scatterplots
Para la interpretacin de CIM y disco difusin . Los aislamientos son analizados con los mtodos estndar de difusin por disco y CIM del NCCLS. La CIM y su correspondiente dimetro de zona son delineados para cada aislamiento.

STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE RESISTENTE A PENICILINA: EVALUACIN CUANTITATIVO


<0,12 mg/ml 0,12 - 1,0 mg/ml 2,0 mg/ml

Hansman & Bullen, 1967, en Australia.


Appelbaum et al., 1977; Jacobs et al., 1978; Koornhof et al., 1978, en frica del Sur. CIM2,0 mg/ml de penicilina Resistencia se incrementa a nivel mundial, Espaa, Africa del Sur, Sudeste Asitico y Estados Unidos

ANTIBITICOS EN PANELES
Antibiticos que se liberarn en cuanto estn listos Amikacina Ampicillina Ampicillina/Sulbactam* Ceftazidima Ceftriaxona Cefuroxima Ciprofloxacina Gatifloxacina Gentamicina Imipenem Levofloxacina Meropenem Moxifloxacina Nitrofurantoina* Norfloxacina Piperacillina/Tazobactam* Piperacillina* Tobramicina Antibiticos de incubacin convencional
Amoxicillina/Clavulanato

Aztreonam

Cefazolina
Cefepime Cefotaxime Cefotetan Cefoxitin

Cefalotina
Cloramfenicol Tetraciclina Ticarcillina Ticarcillina/Clavulanato * Antibiticos de incubacin convencional en algunos paneles.

PAPEL DE LA AUTOMATIZACIN

Los sistemas automatizados acortan los tiempos porque mejoran la sensibilidad analtica de los mtodos Capaces de detectar el desarrollo bacteriano en una suspensin con y sin antimicrobianos antes que el TM detecte turbidez (fundamento de los sistemas automatizados)

Metodologa: - colorimetra turbidimetria - fluorometria, etc.

METODOS DE HEMOCULTIVOS

MANUALES

LECTURA DE CO2 PRESION DE GASES

SIMPLES
MEDIO LIQUIDO MEDIO BIFASICOS

CONCENTRACION RADIOMETRICOS NO RADIOMETRICOS


LISIS CONCENTRACION LISIS CENTRIFUGACION INTERMITENTES CONTINUOS

INDICADORES DE GAS

HEMOCULTIVOS
Sntomas de sospecha de bacteremia : Fiebre de origen desconocido (> 38C) o hipotermia (<36C) shock, escalofros Infecciones severas (meningitis, endocarditis, neumonia, pielonefritis, Absceso abdominal). Frecuencia cardaca acelerada Alta o baja presin sangunea Aumento de la frecuencia respiratoria

MTODO TRADICIONAL
Paso 2

Paso 3
24 72 hrs.
Identificacin y antibiograma

Dia 1 al 15

24 48 hrs
Subcultivo

Se requiere un mximo de 15 das para descartar un negativo

SISTEMAS AUTOMATIZADOS PARA HEMOCULTIVOS

TECNOLOGA COLORIMTRICA

Utilizacin de un sensor liquido tipo plasma. Membrana de silicona impregnada al plasma de sensibilidad Cambio sensitivo de CO2 diluido Generacin de color permanente.

IMPORTANCIA DE LA AUTOMATIZACIN TIEMPO DE RECUPERACIN


Bourbeau PP et al. Routine incubation of BacT/ALERT FA and FN blood culture bottles for more than 3 days may not be necessary. J Clin Microbiol. 2005;43:2506-2509

73% en Da 1 20% en Da 2 4% en Da 3 2% en Da 4 1% en Da 5
Estos resultados demuestran que el 97% de los aislamientos clnicamente significativos fueron recuperados en los 3 primeros das de incubacin y el 93% dentro de los 2 das de incubacin.

COLORIMETRICA Y TURBIDEZ

Colorimetrica Enzimatica

Fluorescente

Fluorescente y Turbidez

SISTEMAS AUTOMATIZADOS

VITEX

System

MicroScan
Phoenix Sensitre Mini

WalkAway

ARIS

API

MICROSCAN
Presenta base de datos con informacin que incluye : Lista de 470 especies (Bacterias y levaduras) lista para controles de calidad con cepas ATCC y lista de antibiticos un promedio de 79 con dosificacin y costo Utiliza un panel, que es una placa de 96 pocillos que contiene en forma deshidratada de 20 a 32 pruebas bioqumicas para la Identificacin (ID) y 17 a 33 antibiticos para MIC o BP

Tipos de paneles
Cromognicos Convencionales (Gram positivos y Gram negativos. Principio colorimtrico: Desarrolla colores en la serie bioqumica y turbidez en el antibiograma Cromognicos rpidos: Permite la identificacin en 4 horas, mide la actividad enzimtica formadas en el aislamiento primario: Haemophilus y Neisseria, levaduras, anaerobios. Rpidos: fluoromtricas de 6 a 8 horas.

EQUIPOS - LINEA MICROSCAN


AutoScan-4
Equipo

semiautomatizado para identificacin bacteriana y susceptibilidad antimicrobiana Utiliza metodologa colorimtrica Espectrofotmetro modificado con 6 longitudes de onda y sistema de fibras pticas para la lectura de los paneles en apenas 5 segundos

WALK AWAY 40/96


Equipo

automatizado para identificacin bacteriana y susceptibilidad antimicrobiana Presenta dos metodologas: colorimtrica y fluoromtrica Contiene incubadora, pipeta de reactivos , lectora fotomtrica e impresora. Adems lectora de cdigo de barras que identifican al panel en cualquier posicin

Walk Away

AutoScan-4

Capacidad

de procesar simultneamente 40 paneles (Walkaway40) o 96 paneles (Walkaway 96) Los paneles conteniendo pocillos mltiples son inoculados manualmente con un dispositivo especial y luego colocados en la incubadora, el sistema dispensa reactivos y realiza lecturas peridicas Los equipos vienes acompaados de un completo programa de Gerenciamiento de datos denominados : DMS y LabPro

SISTEMA DE GESTIN DE DATOS


Realiza

bsquedas multparamtricas Informes epidemiolgicos completos Flexibilidad Supresin de antibiticos Finalizacin automtica Copia de seguridad en disco Normas NCCLS

PHOENIX
Sistema

automatizado de identificacin y sensibilidad Comunicacin con el equipo por iconos. Capacidad de incubacin de 100 paneles Sistema de fcil inoculacin Control y calibracin interna, no requiere mantenimiento. Lectura : convencional, fluoro gnico y cromognico. Medidas cinticas de las reacciones: cada 20 min. Funcionamiento autnomo, incluyendo el sistema experto BDXper. Conexin al sistema Epicenter Conexin al Sistema de Gestin de Laboratorio

PHOENIX: PANTALLA

PHOENIX: INSUMOS
Panel

y sellador: bandeja de poliestireno, moldeada sellada y autoinoculante. 136 pozos: 51 ID y 85 en AST. Caldo Phoenix ID y AST Indicador Azul de Alamar Estacin de Inoculacin Recipiente para paneles Nefelmetro Crystal Spec o BD Phoenix Spec. Pipeta 25 ul con micropuntas.

PHOENIX: INSUMOS
Identificacin: 45 substratos: convencionales, fluorognicos y cromognicos, Carbohidratos, fuentes de carbn o Esculina. Sin adicin de reactivos 5 bases de datos Resultados a 2,3,4, 6 y 12 hrs. Informacin de valores de confianza y reacciones de los substratos. B-Lact en la parte ID para los paneles G+

PHOENIX: INSUMOS

Paneles para ID/AST Combo o solo AST para 1x25:

Gram negativos: NMIC/ID Gram positivos PMIC/ID Streptococcus SMIC/ID Panel de formato nico: NID,PID,PMIC,NMIC,SMIC.

Temp. almacenamiento de reactivos: ambiente. Bioseguridad: Cierre hermtico Resultados rpidos: 80% de los resultados de AST completo en < de 10h.

PHOENIX: INOCULACIN
Colonias

puras, 18-24 hr de incubacin. escala de McFarland 0.5 o 0.25.

Hacer

Aadir

una gota del indicador azul de Alamar.

PHOENIX: INOCULACIN
Transferir

25 ul o 50 ul de inoculo ID al caldo AST. ambas soluciones en el panel segn corresponde ID o AST. el panel: hermtico.

Servir

Cierre

PHOENIX: INCUBACIN
1.- Escanear el cdigo de barras. 3. Introducir el panel en el Phoenix.

2.

Teclear o escanear el numero de muestra.

PHOENIX: CONTROL DE CALIDAD


de lotes automtica Cepas ATCC variadas
Lectura

VENTAJAS
Para el Paciente Resultados rpidos: Esencial para pacientes de enfermedades criticas, terapias mas precisas, reducir el tiempo de estada Alternativas de antibiticos Reducir combinacin de terapias Reducir la Infecciones Intrahospitalarias

DESVENTAJAS

Se debe todava aislar las bacterias y preparar una suspensin bacteriana para el inculo. Puede ser ms caro el uso de insumos descartables. Utiliza baterias de sensiblidad con antimicrobianos fijos, debiendo obligadamente adoptarse algunos de los paneles.

Incapacidad de examinar todos los grupos bacterianos clnicamente importantes. Sobre los resultados de las pruebas de susceptibilidad se han reportado diversos problemas, los fabricantes deben incluir sus limitaciones para algunas combinaciones droga - microorganismo. El control de calidad es dependiente del uso de cepas ATCC especificadas por el fabricante, adems NCCL no provee estndares al respecto.

IMPORTANCIA DE LA AUTOMATIZACIN CONCLUSIONES


Tratamiento

inicial acertado Beneficios clnicos Menor morbi-mortalidad Menor tiempo de internacin Menor toxicidad Reduccin de costos Beneficios epidemiolgicos Disminuir presin de seleccin de cepas R

CONDICIONES SOBRE SU UTILIZACION DE LA AUTOMATIZACION EN MICROBIOLOGIA

VENTAJAS

ESPECIFICACIN
Rapidez en el resultado de 3 a 10 horas. Inicio o cambio precoz del antimicrobiano costos hospitalizacin y anlisis de laboratorio ,de usos de antibiticos de la reproductibilidad intra e nter laboratorio Requieren menos personal

Impacto clnico

Estandarizacin y control de calidad Disminucin de la carga de trabajo

VENTAJAS

ESPECIFICACIN
Evita la transcripcin errnea de resultados por el uso de programas

Disminucin de errores post analticos

Permite actualizar anualmente las guas de Utilizacin de sistemas de NCCLS que permite el informe selectivo de los expertos antimicrobianos. Monitorizar resultados inconsistentes

VENTAJAS

ESPECIFICACIN
Permite sospechar la presencia de B lactamasas de espectro extendido y cefalosporinas Almacenar y procesar informacin para una anlisis de tendencias anuales de susceptibilidad

Patrones fenotipicos de resistencia

Facilita las estadsticas

Facilita el control en el uso Informe de resultados en de antimicrobianos lnea con el comit farmacolgico

DESVENTAJAS

ESPECIFICACIONES

El equipamiento y los insumos Alto costo (3 veces mayor que los (Paneles o Tarfetas ) - Tarifas diferenciadas o Uso para manuales) Hospitalizacion y Criticos Frente a cualquier falla se necesita UN BACK UP o Metodologia manual de reespaldo.

Requiere metodo de respaldo

No existen normas NCCLS para sistemas AUTOMATIZADOS, No aplicables a todas las bacterias.

Sin embargo, se deben considerar los metodos empleados (PUNTOS DE CORTE O MIC)

DESVENTAJA

ESPECIFICACIONES
Paneles o tarjetas estn determinadas por el fabricante. Existen tarjetas especiales pero requiere consumo mnimo

Poca flexibilidad en los antimicrobianos ensayados

DESVENTAJA

ESPECIFICACIONES

Problemas: Haemophilus Influenza Neumococos, Gram (-) Discrepancia con mtodos no fermentadores, y Anaerobios . convencionales de Cefepime y Pseudomonas referencia Vancomicina (I) en el caso de Enterococcus Imipenem ,falsa (R) o (S) con Pseudomona y Acinetobacter baumanii .

DESVENTAJAS

ESPECIFICACIONES
Problemas: B lactamasa en algunos Gram negativos requieren prolongada incubacin para expresar ( R ) FDA recomienda para errores mayores (sistema informe R siendo (S) ,la tasa no > 1.5% ,la concordancia sea 90% , fallas de crecimiento =< 10%

Discrepancia con mtodos convencionales de referencia

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