..ESCUELA POLITCNICA DEL EJRCITO DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA CARRERA DE INGENIERA EN BIOTENCOLOGA FITOQUMICA INTEGRANTES: Luis E. Gavilanes T.

Yanara Naranjo. Alejandra Oviedo. NRC: 3333

FECHA: 14 de mayo del 2013 PRCTICA N: 4 1. TEMA Extraccin e Identificacin de antocianinas de muestras vegetales: berenjena (Solanum melongena) y uva rosada (Vitis vinifera).

2. OBJETIVOS 2.1. OBJETIVO GENERAL:

Extraer e identificar las antocianinas presentes en la muestra de berenjena (Solanum melongena) y uva rosada (Vitis vinifera) mediante reacciones especficas de coloracin y cromatografa en capa fina.
2.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS:

Interpretar las reacciones de cambio de coloracin que se producen en el extracto despus de hacerlos reaccionar con diferentes reactivos. Identificar la presencia de antocianinas mediante la tcnica de cromatografa de capa fina por valores de R.F.
3. FUNDAMENTO TERICO Las Antocianinas son flavonoides descritos por primera vez por Marquat en 1835 y estn basadas qumicamente en una nica estructura aromtica, aquella de la cianidina, y todas se consideran derivadas de ella por adicin o sustraccin de grupos hidroxilo, por metilacin o por glicosidacin (Lock., 1997). Son intensamente coloreadas responsables de la mayora de colores rojo, rosa, morado y azul de las plantas; siendo importantes en la atraccin de animales para la polinizacin (Lincoln & Zeiger., 2006).

Son solubles en sustancias polares y cuando carecen de azcar se las denomina antocianidinas. El color de las antocianinas depende de diferentes factores: el nmero de grupos hidroxilo y metxido en los anillos B de la antocianina, la presencia de cidos aromticos esterificados en el anillo principal y el pH de las vacuolas celulares que almacenan estos pigmentos (Lincoln & Zeiger., 2006). Ciertos frutos como las uvas poseen antocianinas como resveratrol o flavon 3-ol, y otros vegetales como las berenjenas xantocianinas, licopeno y terpenos (Arizpe & Arizpe., 2012). Las berenjenas adems poseen nasunin que es un fitonutriente que se halla en la cscara y compuestos del cido fenlico que predominan como el cido cloro-gnico (Reardon., S/A).

Imagen 1. Estructura del Resveratrol Imagen 2. Estructura del cido clorognico de presente en uvas (C. scientists., 2013). la berenjena (Food-Info., 2003)

Imagen 3. Estructura del nasunin, una antocianina de la berenjena (Noda, et al., 2000).

4. OBSERVACIONES Y RESULTADOS:

4.1 Observaciones: a. Extraccin:

Para la extraccin de antocianinas, las muestras vegetales se encontraban frescas y se usaron berenjena (Solanum melongena) y uva rosada (Vitis vinfera L.), de las cuales se obtuvieron de 3 a 5 gr de muestra vegetal nicamente de la corteza. Se procedi a molerlas en un mortero hasta lograr la ruptura de la mayor parte del material vegetal. En la uva se puede observar una coloracin rojo fuerte-azulado, mientras que en la berenjena la coloracin es caf oscura. La extraccin de las antocianinas de la corteza de la materia vegetal se realiz mediante la ayuda de un solvente polar, en este caso se utiliz Etanol, el cual debido a las propiedades fsico-qumicas de la molcula que le permite la formacin puentes de hidrgeno y ser arrastrada con el solvente, razn por la cual se observa que el etanol usado para uva toma una coloracin rojiza y el de berenjena una coloracin caf-verdosa. b. Separacin: Para la separacin se usan dos solventes: 1.Eter etilo: cido frmico: H2O (70:15:15) y 2.Butanol: cido actico: H2O (40:10:50) El tiempo de migracin en el solvente 1 fue menor que el tiempo del solvente 2, debido a que el segundo es un solvente apolar lo que dificulta la migracin y separacin de las antocianinas. 4.2 Resultados: a. Cromatografa de capa fina: Frmula de clculo de Factor de retardo:

Donde: a: distancia de la migracin de la muestra b: distancia de la migracin del solvente

Tabla 1: Valores de RF para la placa de cromatografa 1 en el solvente ter etilo: cido frmico: H2O (70:15:15) Muestra Uva Compuesto 1 2 3 4 5 1 b 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5 6,5 a 3,5 4 4,9 5,2 5,3 6,5 RF (%) 53,84 61,53 75,38 80 81,53 100

Berenjena

Tabla 2: Valores de RF para la placa e cromatografa 2 en el solvente Butanol: cido actico: H2O (40:10:50) Muestra Uva Compuesto 1 2 3 4 1 2 b 5,7 5,7 5,7 5,7 5,7 5,7 a 2,2 3,7 4,5 5,1 4,5 5,2 RF (%) 38,59 64,91 78.94 89,47 78,94 91,22

Berenjena

Fotografia 1: Placa de cromatografa en capa fina con solvente Butanol: A. Acetico: H2O (40:10:50), las muestras de Uva y Berenjena ocupan los nmeros 4 y 5 respectivamente, se puede observar la separacin de 4 compuestos en la primera y 2 en la segunda. b. Pruebas de identificacin:

PRUEBA

MUESTRA REACCIN OBSERVACIN

FOTOGRAFA Blanco Reaccin

Uva

+++

La muestra tom una coloracin ms oscura, a medida que se colocaba las gotas de FeCl3

CLORURO FRRICO

Berenjena

La muestra no cambia de coloracin con la aplicacin del reactivo.

Uva ACIDO CLORHIDRICO

+++

La muestra se torna rosada tras la aplicacin del reactivo

Berenjena

La muestra ha oscurecido su coloracin

Uva

++

La muestra tom una coloracin azul-verdosa oscura

HIDRXIDO DE POTASIO Berenjena _ Es posible que la antocianina extraida no posee radicales (-OH) libres

5. CONCLUSIONES

La uva tiene diversos compuestos fenlicos entre ellos las antocianinas como resceratrol, flavon 3-ol; las cules de dan el color caracterstico al fruto de la uva. Las berenjenas posee ciertos compuestos del acido fenlico como el acido clorogenico, adems posee nasunin que es un fitonutriente presente en la cascara por lo cual al momento de realizar la extraccin se obtiene un color verde no caracterstico a los compuestos que contienen antocianidinas. La prueba de Shinoda result prueba positiva para chalconas y auronas obteniendo una coloracin roja. El extracto de mora posee leucoantocianidinas determinado por la prueba de Rosenheim dndonos una coloracin carmes. El extracto presenta 5-dihidroxiflavonas lo cul se identific con la prueba de Dimirot. En el extracto de uva se identific flavonoides mediante la coloracin roja oscura con la prueba de Cloruro Frrico, mientras tanto en la muestra con berenjena el resultado es negativo. De acuerdo a valores Rf obtenidos en el solvente orgnico n-butanol: Ac. Actico: Agua. 40:10:50 los compuestos que se encuentran en la mora son la Cianidin-3-galactsido (37%) y la Malvidin-3- galactsido (36%).

6. BIBLIOGRAFA Romero A. Qumica de la Flora Mexicana. Investigaciones en el Instituo de Qumica. UNAM. Heleniun Mexicanum. Mxico (2006) Lock Olga. Colorantes Naturales. Pontifica Universidad Catlica del Per. Per (1997) Lincoln T. & Zeiger E. Fisiologa Vegetal. Universitat Jaume. Catello de la Plana. Sao Paulo (2006) Arizpe M. & Arizpe P. Tu Zona de Alimentacin. Balboa Press. EE.UU. (2012). Noda Y., Kneyuki T., Igarashi K., Mori A. & Packer L. (2000)La actividad antioxidante de nasunin, una antocianina en las cscaras de Berenjena. Departamento de Biologa Molecular y Celular, 251 Vida adicin Ciencias de la Universidad de California en Berkeley, Berkeley,EE.UU. [09/05/2013] Extrado de: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0300483X0000202X Reardon J. (S/A) Berenjena. North Carolina Department of Agriculture and Consumer Services. Food and Drug Protection Division. [10/05/2013] Extrado de: http://www.ncagr.gov/fooddrug/espanol/documents/Berenjena.pdf Imgenes: Resveratrol. (2013) [10/05/2013] Extrado de: http://crazysscientists.files.wordpress.com/2013/01/reveratrol1.gif Nasuni de berenjena. [10/05/2013] Extrado de: http://origin-ars.els-cdn.com/content/image/1-s2.0-S0300483X0000202Xgr2.gif cido clorognico.(2003) [10/05/2013] Extrado de: http://www.food-info.net/es/products/coffee/acids.htm 7. CUESTIONARIO Cul es el rol biolgico de estos metabolitos secundarios? Las antocianinas dan colores a ciertas partes de las plantas por lo que ayudan interaccin planta-animal para la polinizacin y dispersin de semillas, absorben ciertas radiaciones ultravioleta, participan en el proceso de la fotosntesis y actan como fitoalexinas. Adems intervienen en la regulacin del crecimiento vegetal (Lpez, et al; 2008). Qu funciones cumplen en el hombre? Las antocianinas tienen caractersticas antioxidantes, presentando beneficios en la salud humana, ya que ayudan a la prevencin de enfermedades crnicas como el

cncer, diabetes, hipertensin, etc. (Brouillard., 1999) Estos compuestos vegetales ejercen una gran variedad de efectos fisiolgicos positivos sobre el hombre, tienen una gran cantidad de acciones corporales, debidas principalmente a sus efectos sobre el colgeno corporal y sobre la respuesta inflamatoria y alrgica; tiene propiedades farmacolgicas y teraputicas reduciendo la enfermedad coronaria, antitumorales, antiinflamatorios, adems del mejoramiento de la agudeza visual y del comportamiento cognitivo (Aguilera., 2011). Qu aplicaciones puede darles a estos metabolitos? Las aplicaciones de las Antocianinas se dan dentro de la industria de alimentos como colorantes naturales, utilizndose para colorear alimentos como refrescos, yogurt, cerezas, caramelos, helados, entre otros. Para remplazar aquellos colorantes sintticos y artificiales de productos cosmticos. (Lpez, et al; 2008). Realice un cuadro sinptico y describa las estructuras de los diferentes esqueletos de los flavonoides.

Flavonoles

Flavanonoles

Isoflavonoides

Flavonas

Clasificacin

Flavonoides

Flavononas

Neoflavonoides

Chalconas

Auronas

Antocianidinas

Cul es el mecanismo que utilizan estas molculas para actuar como antioxidante? El estudio de la capacidad antioxidante de las antocianinas se relaciona con el nmero de grupos OH que presentan y el lugar de la sustitucin en la que se ubique. A su vez las antocianinas son compuestos muy sensibles a cambios de

pH y temperatura debido a la deficiencia del electrn en su estructura (Taiz., 2006). Por qu es importante el consumidor una cierta cantidad de estos compuestos en la alimentacin? Las antocianinas son pigmentos que estn contenidos en determinados alimentos que ayudan a bajar el colesterol en forma natural, adems de beneficiar la salud cardiovascular, prevenir dao celular mediante el efecto antioxidante y la capacidad antitumoral (ABC., 2010). Bibliografa ABC. Alimentos ricos en antocianinas para bajar el colesterol. (2010) [09/05/2013] Disponible en: http://www.abajarcolesterol.com/alimentos-ricos-en-antocianinas-parabajar-el-colesterol/ Aguilera M., Reza M., Chew R. Propiedades Funcionales De Las Antocianinas. (2011) [09/05/2013] Disponible en: http://www.biotecnia.uson.mx/revistas/articulos/16-BIO-11DPA-06.pdf Lpez, Quionez, Echeverri, Identificacin preliminar de los metabolitos secundarios de los extractos acuosos y etanlicos del fruto y hojas de Morinda citrifolia L. noni y cuantificacin espectrofotomtrica de los flavonoides totales. (2007) [09/05/2013] Disponible en: http://revistas.concytec.gob.pe/pdf/scientia/v2n2/a02v2n2.pdf

ANEXOS.-