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Caractersticas fisicoqumicas e citolgicas do lquido sinovial da articulao temporomandibular em eqinos1

Fernanda A. Fonseca2, Roberto S. Zambrano2, Glucia M.B. Dias3, Eduardo M.M. Lima2, Geraldo E.S. Alves4 e Roberta F. Godoy2*
ABSTRACT.- Fonseca F.A., Zambrano R.S., Dias G.M.B., Lima E.M.M., Alves G.E.S. & Godoy R.F. 2009. [Physical, biochemical and cytological characteristics of the equine temporomandibular joint synovial fluid.] Caractersticas fisicoqumicas e citolgicas do lquido sinovial da articulao temporomandibular em eqinos. Pesquisa Veterinria Brasileira 29(10):829-833. Hospital Veterinrio de Grandes Animais, Faculdade de Agronomia e Veterinria, Universidade de Braslia, Braslia, DF 70636-200, Brazil. Email: robertagodoy@unb.br Physical, biochemical and cytological characteristics of the temporomandibular joint synovial fluid were studied in ten clinically normal horses. It is a viscous, pale yellow, clear fluid and without flocculent material at room temperature. There was blood contamination in three samples, they presented red-yellow to red and cloudy. The range of glucose levels were 100 to 250 and its protein concentration was up to 3,8g/dL. Nucleated cells mean number was 417 cells/L, with predominating large mononuclear cells and lymphocytes. Equine temporomandibular synovial fluids can be easily evaluated, being feasible in clinical and surgical routine, and the information may be useful to the diagnosis, treatment and prognosis of animals with temporomandibular alterations.
INDEX TERMS: Equine, synovial fluid, temporomandibular joint.

RESUMO.- Foram estudadas as caractersticas fisicoqumicas e citolgicas do lquido sinovial da articulao temporomandibular de dez eqinos hgidos. Verificouse que o lquido viscoso, amarelo claro a citrino, lmpido e livre de partculas temperatura ambiente. Houve contaminao da amostra por sangue em trs amostras que se apresentaram amarelo avermelhadas a vermelhas e de aspecto turvo. A taxa de glicose variou entre 100 e 250 e a concentrao protica no ultrapassou 3,8g/dL. O nmero mdio de clulas nucleadas foi de 417 clulas/L, com predominncia de grandes clulas mononucleares e linfcitos. As mensuraes das caractersticas
Recebido em 2 de maro de 2009. Aceito para publicao em 1 de julho de 2009. 2 Hospital Veterinrio de Grandes Animais, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinria, Universidade de Braslia (UnB), Granja do Torto, Braslia, DF 70636-200, Brasil. *Autor para correspondncia: robertagodoy@unb.br 3 Sant Laboratrios, Sociedade Hpica de Braslia, SAIS no.8, Braslia, DF 70602-900, Brasil 4 Departamento de Clnica, Escola de Veterinria, Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG), Av. Antnio Carlos 6627, Belo Horizonte, MG 30123-970, Brasil. 829
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pesquisadas no lquido sinovial da articulao temporomandibular de eqinos so de execuo simples e passveis de implantao na rotina de atendimentos clnicocirrgicos.
TERMOS DE INDEXAO: Eqino, lquido sinovial, articulao temporomandibular.

INTRODUO
O lquido sinovial (LS) existente nas cavidades articulares pode ser considerado um fluido especializado que reflete alteraes intra-articulares devido a patologias (Van Pelt 1962; 1974). As principais funes do lquido sinovial so lubrificar e nutrir a cartilagem articular, que no possui irrigao nem inervao (Parry 1999). Atravs da anlise do fluido podem-se obter informaes sobre a natureza e a extenso das leses intra-articulares e definir o tratamento e prognstico, aliada aos sinais clnicos e histrico (Tew & Hotchkiss 1981, Moyer 1983, Barnab et al. 2005). Ainda, avaliaes seriadas auxiliam na avaliao da resposta terapia (Kiehl 1997). A anlise do lquido sinovial de fcil execuo e constitui de anlise fsica (cor, volume, turbidez), qumica (concentrao de protenas totais e formao de cogulo de

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mucina) e citolgica (contagem de clulas nucleadas e anlise do esfregao) (Parry 1999). A articulao temporomandibular do eqino uma diartrose formada, em cada antmero, pelo ramo da mandbula e a poro escamosa do osso temporal. As partes articulares so de congruncias desiguais com a presena de um disco articular entre as superfcies articulares, dividindo a cavidade articular em compartimentos dorsal e ventral. A cpsula articular reforada por dois ligamentos, o ligamento lateral e o ligamento caudal (Baker 2002, Moll & May 2002). Nos eqinos, as alteraes da articulao temporomandibular podem estar associadas diretamente aos problemas dentrios. Sabe-se que anormalidades dentrias levam inflamao da articulao e conseqente dor, diminuindo o desempenho do animal, podendo levar a problemas comportamentais. A despeito da sua importncia, existem poucos estudos cientficos a respeito da ATM em eqinos, a maioria das informaes vem de comparaes com estudos desta estrutura em humanos, e ainda no foram estabelecidos padres de normalidade para o LS existente nesta articulao (Moll & May 2002, Moura et al. 2004, Schumacher 2006). Com o advento da odontologia eqina, necessrio o conhecimento dos parmetros fsico-qumicos e citolgicos normais do LS da ATM para viabilizar a interpretao de amostras alteradas, pois, como em outras articulaes, estas informaes so importantes. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar as caractersticas fsicas, qumicas e citolgicas do lquido sinovial da articulao temporomandibular de eqinos hgidos.

MATERIAL E MTODOS
Foram utilizados dez eqinos sem raa definida, adultos e hgidos; sendo trs fmeas e sete machos. Os animais foram selecionados com base na inexistncia de doena sistmica e de ausncia de alteraes dentrias, aps exame da cavidade oral com abre-bocas, fotforo e espelho. Os animais foram contidos em um brete de conteno para eqinos, e tiveram 5,0mL de seu sangue venoso colhido por venipuno jugular. O sangue foi acondicionado em tubo contendo EDTA com fluoreto de sdio para determinao de glicose e um tubo sem anticoagulante para determinao de protena srica total. Os animais foram sedados com detomidina na dose de 0,03mg/kg por via intravenosa para a realizao da coleta do lquido sinovial (LS). A regio da articulao temporomandibular (ATM) foi submetida tricotomia e antissepsia de rotina para evitar introduo de contaminantes na articulao. A puno foi realizada na poro caudal do compartimento dorsal da articulao temporomandibular, segundo a tcnica proposta por Rosenstein et al. (2001). O cndilo da mandbula foi identificado como uma protruso aproximadamente na poro mdia , entre a comissura lateral do olho e a base da orelha. O processo zigomtico do osso temporal foi palpado 1-2cm dorsal ao cndilo da mandbula e uma linha foi traada entre estas duas estruturas. O local para a puno foi a depresso na rea de menor resistncia palpao entre estas duas estruturas e 0,5-1,0cm caudal linha imaginria. A agulha era inclinada
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levemente rostral e ventralmente em uma angulao de aproximadamente 15 e aprofundada aproximadamente 1,253,0cm. Foi realizada puno com agulha hipodrmica 25x7mm, com o auxlio de uma seringa de polietileno de 3mL (Schumacher 2006). A puno foi feita nas articulaes de ambos antmeros de cada animal. As amostras de LS foram divididas entre um tubo de coleta sem anticoagulante, para dosagem de protena total pelo mtodo de biureto, e outro com EDTA para as demais determinaes, e armazenadas em isopor com gelo, para encaminhamento ao laboratrio. A amostra era primeiramente avaliada macroscopicamente pela sua colorao e aspecto. Posteriormente, o pH a quantidade de glicose e de protena foram mensurados atravs de fita Combur-test da Roche Diagnostics. A protena total no LS foi mensurada tambm atravs do teste do biureto em um analisador bioqumico automtico. Para as caractersticas citolgicas do LS, as contagens globais de hemcias e clulas nucleadas (CN) foram realizadas com hematocitmetro de Neubauer. As contagens diferenciais de CN foram realizadas nos esfregaos corados com mistura de metanol, May-Grnwald e Giemsa. As amostras foram centrifugadas durante trs minutos na velocidade 9 para a confeco das lminas do sedimento para a anlise citolgica devido baixa celularidade encontrada na maioria das amostras de LS que no possuem alterao. Foram contadas 100 clulas nucleadas de cada lmina, sendo classificadas como linfcitos, grandes clulas mononucleares, neutrfilos segmentados e eosinfilos. As grandes clulas mononucleares constituramse de moncitos, macrfagos e eventuais clulas da membrana sinovial. A glicose plasmtica e a protena total srica foram analisadas em um analisador bioqumico automtico (Labquest). Os dados foram submetidos anlise estatstica descritiva, para estabelecimento de mdia e desvio padro dos parmetros avaliados. Caractersticas subjetivas como turbidez e clorao foram submetidas anlise de freqncia. As variveis paramtricas foram comparadas entre o lquido sinovial da ATM do antmero esquerdo e do antmero direito com o teste t de Student.

RESULTADOS E DISCUSSO
No houve diferena significativa (P<0,05) entre os antmeros direito e esquerdo quanto s caractersticas pesquisadas no lquido sinovial (LS) da ATM. Obteve-se LS em 95% (19/20) das punes realizadas na ATM. Em um antmero de um animal no foi coletado nenhuma quantidade de lquido sinovial, aparentemente a articulao estava sem lquido, o que pode caracterizar uma condio inflamatria crnica, ou ser em razo da idade, pois este animal apresentava 11 anos. Segundo Van Pelt (1974) as articulaes de animais jovens possuem mais volume de LS. As amostras analisadas apresentaram volume mdio de 2,00,9mL. O volume compatvel com o tamanho da ATM e com o fato de no haver comunicao entre seus compartimentos dorsal e ventral. Van Pelt (1974) relata que o volume total do lquido sinovial aspirado de qualquer articulao geralmente varia em proporo ao tamanho articular e a comunicao com outra articulao. As

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Quadro 1. Nmero de amostras, mdias, desvios-padro e valores limites para volume, densidade e caractersticas qumicas e citolgicas do lquido sinovial da articulao temporomandibular de eqinos sadios. Braslia, 2008
Varivel Volume (mL) pH Densidade Glicose (mg/dL) Protenas totais - Mtodo do Biureto(g/dL) Protenas totais - Fita (g/dL) Hemcias (clulas/L) Clulas nucleadas (clulas/L) Neutrfilos segmentados (%) Linfcitos (%) Grandes clulas mononucleares (%) Eosinfilos (%) Nmero de amostras 19 19 19 19 12 19 18 18 16 16 16 16 Mdiaerro-padro 2,00,9 8,560,42 1.020,613,84 108,3335,36 2,730,98 2,00 1.2822.334 417239 8,339,57 60,518,43 26,2222,86 0,330,77 Valores limite 0,5-3,0 8-9 1.012-1.027 100-250 2,13-3,8 2,0 0-57.000 70-870 0-36 10-90 0-90 0-2

patologias articulares geralmente acarretam em alteraes de volume e composio do lquido sinovial. Van Pelt (1974) e Parry (1999) afirmaram que o volume de LS obtido varia de acordo com o tamanho da articulao. Parry (1999) estudando vrias articulaes de ces obteve volume variando de 0,01-1,0mL. Nas 11 amostras colhidas houve predomnio do aspecto amarelo claro em 47,4% dos animais (9/19), lmpido e ausncia de partculas em suspenso. Trs amostras (15,8%) foram contaminadas com sangue durante a puno da ATM, apresentando colorao amarelo-avermelhada a vermelha e aspecto turvo, o que, segundo Barnab et al. (2005), comum na puno de lquido sinovial, em conseqncia da ruptura de capilares subsinoviais e essa pde ser confirmada pela inexistncia de amostras com colorao alterada no incio da puno e colorao amarelo-claro aps sua centrifugao, ou seja ausncia de xantocromia. Segundo Brannan et al. (2006), em geral, o aspecto lmpido do lquido est relacionado com a baixa contagem de leuccitos da amostra, pois esta quanto estiver acima dos nveis normais levar a um aspecto semiturvo a turvo do LS. Volume, densidade e caractersticas qumicas e citolgicas do LS da ATM dos eqinos encontram-se no Quadro 1. Em todas as amostras, na anlise com a fita, a concentrao de protena total foi igual a 2,0 g/dL, pois este o valor limtrofe para a aferio deste parmetro com a fita. Sugere-se ento que a anlise de protena total seja realizada pelo mtodo do biureto para uma maior acurcia. Quando analisadas pelo mtodo do biureto as amostras de LS, apresentaram uma mdia de 2,73g/dL de protenas totais, corroborando os achados de Parry (1999) em ces, que obteve entre 1,8 e 4,8g/dL. No entanto, no que se refere protena total, os achados neste estudo discordam de Barnab et al. (2005) que relataram uma concentrao protica de 0,60-1,75g/dL no LS de eqinos. Porm esta baixa concentrao de protena encontrada por Barnab et al. (2005) pode ser reflexo do jejum de 24 horas, ao qual os eqinos foram submetidos antes da coleta. Valores aumentados de protena so encon-

trados em processos inflamatrios, bem como a presena de protenas maiores, como o fibrinognio, entram no lquido sinovial. A concentrao srica mdia de protenas totais foi de 8,630,72g/dL, sendo que a protena, avaliada pelo mtodo do Biureto, no LS correspondeu, em mdia, a 31,63% da concentrao plasmtica, concordando com os achados de Curtiss (1964), van Pelt (1974), Levick (1987) e Rasera (2007). Porm a proporo de protena total no LS em relao srica diferem dos achados de Barnab et al. (2005) que obtiveram uma concentrao de protena no LS cerca de 16,2% em relao srica, no indicando porm patologias. Durante as inflamaes articulares a protena no LS tende a estar proporcionalmente aumentada, em relao protena srica, pelo aumento da permeabilidade da membrana sinovial s macromolculas (Rasera 2007). A concentrao mdia de glicose no LS se mostrou prxima ao limite superior em relao concentrao plasmtica considerada normal (75-115 mg/dL) para a espcie (Kaneko et al. 1997), conforme descrito por Curtiss (1964); Van Pelt (1974) e Barnab (2001). Quando comprada concentrao plasmtica de glicose (98,3419,61mg/dL), a concentrao no LS foi 10% superior, porm sem diferena significativa, concordando com os achados de Van Pelt (1974) e Barnab et al. (2005) que tambm encontraram valores similares entre a concentrao de glicose plasmtica e no LS. De acordo com Mahaffey (2002), em condies normais existe um equilbrio de glicose entre o sangue e LS, obtido pela livre difuso desta molcula atravs da membrana sinovial. Neste ensaio, o nmero de hemcias nas amostras de LS variou consideravelmente, devido contaminao de amostras de LS no momento da puno, ainda que tenha sido notada visualmente em apenas trs amostras. Os achados referentes s hemcias no LS so compatveis com os achados de Barnab et al. (2005) no LS de eqinos. O valor mdio da contagem global de clulas nucleadas (CN) manteve-se entre aqueles considerados normais para o LS (Van Pelt 1967, 1974, Tew & Hotchkiss 1981,
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Malark et al. 1991, Barnab et al. 2005). Os linfcitos predominaram, seguidos pelas grandes clulas mononucleares, neutrfilos segmentados e eosinfilos, discordando dos achados de Barnab et al. (2005) que obtiveram uma maior proporo de grandes clulas mononucleares, seguidas por linfcitos, neutrfilos segmentados e eosinfilos. No entanto, os resultados foram condizentes com Van Pelt (1974) e Rasera (2007) que relataram predominncia de clulas mononucleares, ou seja linfcitos e moncitos. Estas variaes podem indicar que cada articulao possui caractersticas individuais, salientando a importncia de se obter parmetros de normalidade especificamente. A contagem de clulas nucleadas em lquido sinovial normal varia conforme a articulao, mas o normal se apresentarem abaixo 3.000/L (Parry 1999). Neste estudo, todas amostras apresentaram valores inferiores a este limite, podendo ser consideradas amostras de articulaes saudveis (70-870 clulas/L). Segundo Brannan et. al (2006), a contagem global de clulas um exame importante para a classificao de processos articulares como inflamatrios ou no-inflamatrios. Algumas amostras apresentaram inverso de predominncia entre as grandes clulas mononucleares e os linfcitos, mas ambos os tipos celulares sempre foram os mais abundantes. Barnab et al. (2005) tambm observaram esta caracterstica e atriburam influncia que a concentrao e o grau de polimerizao da molcula de cido hialurnico exercem sobre a migrao linfocitria para a cavidade sinovial. De acordo com Van Pelt (1962), as caractersticas fisico-qumicas e citolgicas do lquido sinovial normal podem ser empregadas para avaliar as vrias artrites, estabelecer diagnsticos precoces e prognsticos, determinar a resposta articular s terapias. As alteraes patolgicas decorrentes das artrites e sinovites, provavelmente, se manifestam precocemente no LS, como descrito nos processos articulares por Tulamo et al. (1989), alterando sua composio fsico-qumica e citolgica antes que outros sintomas clnicos apaream. Assim, uma vez conhecidos os valores de referncia para o LS da ATM dos eqinos, sua anlise prov informaes que agilizam o diagnstico (Barnab 2001, Barnab et al. 2004), podendo ajudar no estabelecimento do grau de severidade das leses associadas a essas estruturas, propiciando elementos dinmicos para reavaliaes de casos clnicos e prognstico mais acurado.

O valor mdio da contagem global de clulas nucleadas (CN) foi de 417239 clulas/L. Os linfcitos predominaram, seguidos pelas grandes clulas mononucleares, neutrfilos segmentados e eosinfilos. Na coleta de LS as amostras devem ser divididas em tubos com e sem EDTA para viabilizar uma melhor mensurao da concentrao de protenas totais pelo mtodo do biureto.
Agradecimentos.- FAPDF pelo apoio financeiro para execuo da pesquisa (Proc.193.000.468/2008).

REFERNCIAS
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CONCLUSES
As mensuraes das caractersticas pesquisadas no lquido sinovial (LS) da ATM de eqinos so de execuo simples e passveis de implantao na rotina de atendimentos clnico-cirrgicos, podendo trazer contribuio significativa ao diagnstico, tratamento e prognstico de animais com alteraes patolgicas da ATM. A contaminao de amostras de LS com pequena quantidade de sangue no ocasiona prejuzos a sua anlise.
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