MODULACIN DE LA EXPRESIN GENTICA

La idea de que se podra tratar una enfermedad gentica mediante el

uso de

medicamentos que modulan la expresin gnica habra parecido descabellada. Sin embargo, los avances en el conocimiento de los fundamentos normales y patolgicos de la expresin gnica han hecho viable esta estrategia. As, es probable que este mtodo se generalice an ms a medida que se incrementen nuestros conocimientos de la expresin gnica y de la forma de manipulacin de la misma.

TRATAMIENTO MEDIANTE LA MODIFICACIN DEL GENOMA O DE SU EXPRESIN TIPO DE MODIFICACIN EJEMPLO CARACTERSTICAS

Tratamiento con decitabine Modulacin Farmacolgica para estimular la sntesis de En fase de investigacin. De La Expresin Gentica
globina (y, por tanto, la

produccin de Hb F) en la enfermedad falciforme. Interferencia (ARNi) para del ARN Terapia gnica de ARNi la para suprimir la

reducir

cantidad de una protena neurodegeneracin inducida Tratamiento experimental. txica negativa. o dominante por poliglutamina en un

modelo murino de ataxia espinocerebelosa.

Potenciacin de la expresin gentica a partir del locus natural o mutante Los efectos teraputicos se pueden obtener mediante el incremento en la cantidad de RNA mensajero transcrito a partir del locus natural asociado a una enfermedad dominante, o a partir de un locus mutante en los casos en los que la protena mutante retiene parte de su funcin. Hay un tratamiento efectivo de este tipo que se utiliza frente a una enfermedad infrecuente pero potencialmente mortal, el angioedema hereditario, un

trastorno autosmico dominante debido a mutaciones en el gen que codifica el inhibidor de la esteras a del complemento 1 (Cl). Los individuos afectados sufren episodios impredecibles de edema submucoso y subcutneo de gravedad muy variable. Los episodios que afectan al tracto respiratorio superior pueden ser mortales. Dada la

naturaleza rpida impredecible de los episodios de angioedema, a menudo se administra una profilaxis a largo plazo con andrgenos atenuados, especialmente danazol. El danazol incrementa significativamente la cantidad del mRNA del inhibidor Cl, presumiblemente a partir de los locis normal y mutante. En la mayor parte de los pacientes se consigue una reduccin espectacular en la frecuencia de episodios graves, a pesar de que la administracin de andrgenos a largo plazo tambin conlleva sus propios efectos adversos.

Potenciacin de la expresin gentica a partir de un locus no afectado por la enfermedad Una estrategia teraputica relacionada es la potenciacin de la expresin de un gen normal que compensa el efecto de la mutacin en otro locus. Esta estrategia parece extremadamente prometedora para el tratamiento de la enfermedad falciforme y de la talasemia; en estos trastornos se estn utilizando medicamentos que inducen la hipometilacin del DNA con objeto de incrementar la cantidad de hemoglobina fetal (Hb F) que constituye normalmente menos del 1% de la hemoglobina del adulto. Los pacientes con enfermedad falciforme tratados con decitabina muestran uniformemente un incremento de Hb F hasta los niveles que influyen de manera significativa en la morbilidad y mortalidad. Se estn realizando ensayos clnicos de gran envergadura para evaluar la eficacia y la seguridad a largo a plazo de decitabina, no solamente en pacientes con enfermedad falciforme sino tambin en los que sufren B-talasemia, dado que el incremento de las concentraciones de Hb F tambin es til en esta hemoglobinopata.

Efecto del anlogo de la citosina decitabina, un compuesto que induce la hipometilacin del ADN, sobre el porcentaje de Hb F en 13 pacientes con enfermedad falciforme, en comparacin con su nivel de Hb F sin tratamiento. Todos los pacientes presentaron un incremento significativo de la Hb F durante el tratamiento con decitabina.

Reduccin de la expresin de un producto gentico mutante dominante: interferencia del RNA

Las alteraciones patolgicas de algunas enfermedades hereditarias dominantes se deben a la produccin de un producto gentico que es txico para la clula, tal como ocurre con las protenas de las enfermedades que cursan con una expansin repetitiva inestable (como la enfermedad de Huntington), o bien a la disminucin en la contribucin del alelo natural de la protena normal como ocurre con el efecto negativo dominante de algunas cadenas de colgenos anmalas en algunas formas de osteognesis imperfecta. En cualquiera de estas situaciones, el objetivo del tratamiento es la disminucin en la cantidad de la protena mutante elaborada, sin desestructuracin de la produccin de la protena por parte del alelo normal. Un ejemplo de la manera de conseguir este objetivo lo constituye la tecnologa denominada interferencia del RNA (RNAi). La RNAi se puede utilizar para degradar un RNA especfico, tal como el que codifica la protena huntigtina mutante en la enfermedad de Hungtington. Brevemente, los ARN cortos que

corresponden a secuencias especficas del RNA diana se introducen en las clulas mediante, por ejemplo, tcnicas de transferencia gnica vrica. Las cadenas de RNAi se unen al RNA diana e inician su degradacin. Interferencia Por ARN (ARNi): La interferencia por ARN, ARN de interferencia o ARNi, es un proceso de silenciamiento gnico mediado por molculas de ARN. Es caracterstico de clulas eucariotas y tiene gran importancia en procesos de desarrollo y diferenciacin celular, cncer y defensa frente a virus. Actualmente numerosas tcnicas de biologa molecular empleadas en investigacin bsica y terapia se basan en este proceso. El ARN de interferencia (o ARNi) es responsable de un proceso de silenciamiento gnico mediado por molculas de ARN conocidas como molculas de ARN interferente. Estas molculas de ARN interferente pueden ser siRNA (Small Interfering RNA) o microRNA segn su procedencia. Las siRNA tienen origen exgeno mientras que las microRNA estn codificadas en el genoma de la clula. El proceso de ARNi es un proceso complejo donde participan numerosas protenas pertenecientes a distintas familias. Existen distintas modalidades segn participen molculas de siRNA o de microRNA. Este trmino de glosario se centra en el proceso mediado por molculas de siRNA. Se trata de un mecanismo especfico ya que el silenciamiento gnico se basa en la complementariedad de bases entre la molcula de siRNA y la molcula de ARN mensajero. Si la complementariedad de bases es perfecta se producir la hidrlisis del mensajero mientras que, si no lo es, simplemente se inhibir la traduccin al impedir la unin del ribosoma. El mecanismo mejor caracterizado es aquel que se inicia con la incorporacin a la clula de una molcula larga de ARN de cadena doble, conocida como dsRNA (DoubleStranded RNA). Esta molcula puede ser introducida artificialmente, o ser un intermediario en el ciclo de vida de un virus. En el citoplasma la molcula de dsRNA es reconocida por la enzima Dicer que la fragmenta en pequeas molculas de cadena doble, llamadas siRNA (Small Interfering RNA). Cada molcula de siRNA es incorporada a un complejo multiproteico conocido como RISC (RNAi Silencing Complex). Este complejo separa las dos hebras de la molcula de siRNA quedndose una de las hebras incorporada en el complejo. La hebra que queda en el complejo es usada como molde para reconocer a la molcula de ARNm, si la complementariedad con la molcula de ARNm diana es perfecta el complejo RISC degrada este ARNm. Si por el contrario la complementariedad no es perfecta, el complejo RISC no degrada el ARNm pero s evita la unin del ribosoma. En cualquiera de los dos casos se produce el silenciamiento del gen complementario a la secuencia de la molcula de siRNA. Posteriormente se descubri que el complejo RISC unido a la hebra molde del siRNA puede llevar a cabo silenciamiento gnico a nivel del ncleo ya que puede entrar en el

ncleo, reconocer secuencias especficas del genoma y alterar el patrn de metilacin del ADN y de las histonas provocando el silenciamiento del gen antes de que llegue incluso a transcribirse. Al tratarse de un mecanismo de regulacin gnica, el ARN de interferencia tiene un papel clave en los procesos de desarrollo y diferenciacin celular, en situaciones patolgicas como el cncer o en defensa frente a virus.

Huntingtina mutante La enfermedad de Huntington tiene la mayor prevalencia de todas las enfermedades neurodegenerativas autosmicas con repeticin CAG. El gen de la huntingtina mutante confiere toxicidad atribuida a la protena mutante, aunque la contribucin de su ARNm para el proceso an no se ha probado completamente. La neuropatologa se caracteriza por atrofia neuronal estriatal y cortical. Los pacientes generalmente desarrollan movimientos involuntarios, disfuncin cognitiva y cambios de comportamiento en la cuarta dcada de la vida.

A pesar de la identificacin de la huntingtina mutante como la causa gentica en 1993, no existe una terapia modificadora de la enfermedad. Varios candidatos teraputicos con el potencial de alterar la progresin subyacente han sido evaluados en ensayos clnicos. Estos agentes incluyen esquemas neuroprotectores para contrarrestar los efectos txicos

celulares de la protena mutante y estrategias celulares de reemplazo para compensar la prdida de neuronas en el estriado. En el mejor de los casos, tales enfoques reparan el dao despus de ocurrido. Adems, la protena huntingtina mutante tiene mltiples consecuencias deletreas moleculares y celulares, cada una de las cuales podra ser la base de un enfoque teraputico diferente.

Huntingtina y la enfermedad de Huntington La enfermedad de Huntington corresponde a una alteracin autosmica dominante, causada por la expansin de una repeticin en serie de CAG cerca del comienzo de la regin codificadora en el gen de la protena huntingtina. Los resultados de la mutacin generan un ARN mensajero (ARNm) con ms de 36 repeticiones y una protena con ms de 36 glutaminas en tndem. Eliminar el alelo mutante huntingtina por silenciamiento de ARN podra ser teraputico, de hecho, un estudio realizado por Holly B. Kordasiewicz y colegas es compatible con una estrategia para su puesta en prctica.

Se han descrito dos tecnologas de silenciamiento de ARN: el uso de oligonucletidos antisentido y el ARN de interferencia. En el primero, regiones de ADN de un oligonucletido antisentido se unen con el ARNm objetivo, y luego una enzima intracelular, la ARNasa H, escinde la cadena dplex de ARN, degradando as el ARNm. El grupo de Holly B. Kordasiewicz utiliz oligonucletidos antisentido para silenciar la huntingtina mutante en varios modelos de ratn para la enfermedad de Huntington. El tratamiento redujo los niveles de huntingtina mutante y mejor una variedad de comportamientos aberrantes. Reducir la cantidad de huntingtina mutante fue un gran hallazgo. Adems, el efecto saludable dur durante muchos meses despus de haber dejado de aplicar los oligonucletidos antisentido.

Cmo podran 2 semanas de infusin de oligonucletidos antisentido en lquido cefalorraqudeo (LCR) revertir o prevenir la afeccin durante tanto tiempo? Una posibilidad es que stos sean resistentes y que los niveles teraputicos duren meses. Sin embargo, la concentracin de oligonucletidos antisentido disminuy mucho antes que los efectos saludables decayeran. Tal vez se requieran slo unas pocas molculas para reclutar la ARNasa H del ARNm mutante. Esto es una explicacin intrigante para la terapia con oligonucletidos antisentido y el ARN de interferencia. Ambos procesos pueden atacar libremente a muchas molculas de ARNm en el tiempo.

Si bien el ARNm de la huntingtina se expresa en el cerebro fetal, muchas veces la

enfermedad de Huntington se vuelve clnicamente detectable entre los 30 y 40 aos de edad. La huntingtina mutada (o su ARNm) preserva alguna funcin normal; los individuos que son homocigotos para el gen mutado no tienen una enfermedad ms grave que aquellos con un nico alelo mutante con la misma longitud de repeticin de trinucletidos CAG. Por lo tanto, los cambios producidos por la huntingtina mutante son sutiles y aumentan en el tiempo. Se cree que hay un efecto umbral. Antes de la aparicin de la enfermedad, los sistemas de supervivencia celular mantienen el contenido celular de la huntingtina mutante por debajo del umbral para la enfermedad. Una vez que se supera, se produce la progresin de la condicin. As, en teora, cualquier tratamiento que reduzca los niveles de ARN mutante lograra el mismo efecto teraputico.