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DILUCIONES Si se sospecha que una muestra tiene una gran cantidad de microorganismos por mL o gm, la muestra se diluye.

Al diluir lamuestra antes de hacer la prueba, se evita que las placas tengan exceso de colonias, permitiendo obtener diluciones con un nmero de colonias entre 25 y 250 !"#ml o gm. $l plan de diluci%n que m&s 'recuentemente se utili(a envuelve diluir la muestra por un 'actor de )0. La muestra se diluye con una soluci%n salina est*ril, 0.+5, -a l o' 0.), peptona. "sualmente en este laboratorio se utili(an botellas de diluci%n con un volumen de .0 % .. ml.

). La muestra ya sea s%lida o l/quida se considera que tiene un 'actor de diluci%n de )00 % ) 0no1dilu/da2. 2. Si el diluyente tiene .0 ml de soluci%n est*ril, para hacer una diluci%n )#)0, trans'iera )0 ml % )0 gm al blanco. $sta es la diluci%n )01). 3. ontinue haciendo las diluciones necesarias. Para diluciones utilizando un volumen de 99 ml de diluyente, puede aadir para !acer soluci"n de #$ " ml para !acer diluci"n #$%& ml

$l mismo procedimiento aplica al poner la muestra en placa. Si se toma ) ml de muestra del la diluci%n )013 y se a4ade agar, tienes la misma diluci%n en la placa que tienes en el tubo. Si trans'ieres 0.) ml de la muestra de la botella de diluci%n y le viertes agar, has procedido a hacer una pr%xima diluci%n 00.) ml de la diluci%n )013 en la placa se convierte en la diluci%n )0152. 'EPO'(E DE 'ESUL()DOS uando se contabili(an las placas, es importante seguir las siguientes reglas. 6ebes incluir7 6os ci'ras signi'icativas !actor de diluci%n !" # ml % !" # gm onta8e est&ndar de placa 0S9 2 % conta8e estimado est&ndar de placa 0$S9 2

SOLO SE 'EPO'() UN CON()*E PO' +UES('), NO PO' DILUCION& Cuando se calculan los resultador de placas en duplicado se reporta la media ,eom-trica .promedio/& En la pr0ctica, se utiliza el promedio para reducir estad1sticamente las muestras 2ue se salen del centro as1 como para encontrar el conta3e de placa promedio cuando se tra4a3a con un ,ran n5mero de placas& PL)C)S NO'+)LES6 CON()*E ES()ND)' DE PL)C)S .SPC/ 9rimero, anote la diluci%n de la placa que est& contando. Luego cuente las colonias que aparecen en la placa. Anote los resultados de las placas que tengan entre 25 a 250 colonias. :ncluya las colonias peque4as cuanto reporte sus resultados. 9ara reportar los resultados, promedie los conta8es de placas en duplicado. A8uste para 2 ci'ras signi'icativas. :ncluya el 'actor de diluci%n y reporte como ; !"#gm % !"#ml< S9 . +uestra Leche pausteri(ada Placa A > ## =-= =-= #$ %78 %89 #$% 22 )+ Conta3e reportado 2.5 x )03 !"#ml S9

$n el e8emplo anterior, no puedes utili(ar los resultados de la diluci%n )012 porque el nmero de colonias en una de las placas est& 'uera del rango 251250. Sin embargo ser/a acceptable reportarlos como estimado 02.0 x )05 !"#ml $S9 2. PL)C)S CON +UC:)S COLONI)S6 CON()*E ES(I+)DO DE PL)C) ES()ND)' 9uedes estimar el conta8e de varias 'ormas. Si utili(as un contador de colonias, el sistema de re8illas divide la placa en 5? &reas iguales. $scoge un area representativa de la placa y ha( un estimado contando por lo menos ? cuadrados. Saca el promedio de los cuadrados y multiplica por el 'actor de diluci%n. 6e nuevo, promedia los resultados de las placas duplicadas y a8usta a dos ci'ras signi'icativas. :ncluye el 'actor de diluci%n y reporta los resultados como ; !"#g % !"#ml<$S9 . +uestra $nsalada de papas Placa A > ## =-= =-= #$ =-= =-= #$% (N(C (N(C Estimado Conta3e reportado De #$% 7 % 5.5 x )05 !"#ml $S9 7;<

PL)C)S CON POC) DENSID)D6 CON()*E ES(I+)DO DE PL)C) ES()ND)' 9ara placas con conta8es ba8os, existen dos opciones al reportar los resultados. $l primero es contar las colonias y reportarlas como $S9 . La otra situaci%n es cuando no hay colonias en una placa. $n este caso el conta8e se reporta como ;@<que la diluci%n m&s ba8a. CON()*ES =)*OS +uestra $nsalada de papas Placa A > NO$C'ECI+IEN(O +uestra $nsalada de pasta Placa A > ## 0 0 0 0 #$ 0 0 #$% Conta3e reportado @).0 A )02 !"#ml $S9 ## )2 ? #$ 0 # # # #$% Conta3e reportado ..0 x )00 !"#ml $S9

O('OS C)SOS recimiento esparcido7 com8o S9B. uando ambas placas tienen crecimiento esparcido, reporte

Accidente de laboratorio7 $n el caso de accidentes de laboratorio reporte como tal7 LA. "niversidad de 9uerto Bico Becinto "niversitario de Cumacao 6epartamento de >iolog/a 6ra. $sther D. Eega 9roblemas de pr&ctica de diluciones ). ) ml de cultivo de bacterias se diluye con . ml de peptona. )#)0 de ml de est& diluci%n se diluye en ... ml de peptona. 6e *sta diluci%n )#)0 de ml se pone en una placa con 25 ml de medio. Luego de 25 horas de incubaci%n se contaron 2). colonias. F u&ntas c*lulas hab/a en el cultivo originalG Huestra todo tu traba8o. F=endr& e'ecto la cantidad de medio de la placaG 2. inco gramos de yogurt se me(clan con 55 ml de agua de peptona. Se hacen dos diluciones sucesivas de )#)00. )#)0 de ml se pone en placa de la ltima diluci%n. $sto se hace en duplicado. Luego de incubar se obtienen los siguientes resultados7 I5 !" y I3 !". alcula el nmero de !"#gm de yogurt.

3. a. La muestra consiste de )0 ml de una diluci%n de )01) de 8ugo de repollo. La asignaci%n es hacer conta8e total de placa aer%bica, tal que cada placa es inoculada con 0.) ml. Se hacen en placa las siguientes diluciones7 )012, )013, )015 y )015. Ca( un diagrama del procedimiento indicando las cantidades de diluyentes e in%culo a utili(ar. b. Si se obtienen )20 colonias en la placa inoculada con 0.) ml de la diluci%n )012, Fcu&l sera el !"#ml en el 8ugo de repollo sin diluirG 5. Se esperar/a el mismo J de !" en )0 ml de la diluci%n )012 de hamberguer que en KKKKKKK gm de la muestra sin diluir.

5. "n gramo de yogurt se a4ade a .. ml de agua de diluci%n. Se hacen cuatro diluciones de )#)0 y se pone en duplicado en placa > # de ml en 9 A. Luego de inucuban y se obtiene los siguientes resultados7 Diluci"n !ec!a de yo,urt 6iluci%n inicial 9rimera diluci%n )#)0 Segunda diluci%n )#)0 =ercera diluci%n )#)0 uarta diluci%n )#)0 C?U>ml =-= , =-= =-= , =-= 552, 532 52, 5+ I, 3

"tili(ando estos datos, calcula el nmero de !"#gm de yogurt.

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