DI SUSUN OLEH :

SI STYA ANDHI NI 2601 1 0600

FANNI SYAWLI 2601 1 0090001
YOKANI ZA 2601 1 0090004
BI NTAN I MAWHATI 2601 1 0090005
MI SKI AGHNI A 2601 1 0090008
NI CKY NI KEN 2601 1 0090009
M. I RFAN H 2601 1 009001 0
RATNA AYU 2601 1 009001 2
DI ASTRY WI NANDA 2601 1 009001 3
I SMI L I MAMA 2601 1 009001 4
DANI EL HAPOSAN 2601 1 009001 5
ASPEK KUANTITATIF
FLUORESENSI
Pendahuluan
Kimia Analitik
Kualitatif
Identifikasi zat
kimia
Kuantitatif
Berapa banyak
suatu zat dalam
suatu sampel
R.A Day and Underwood, 1998
...lanjutan
Metode Analisis
Kuantitatif
Titrimetri
pemeriksaan jumlah zat
berdasarkan pengukuran
volume larutan pereaksi yg
dibutuhkan utk bereaksi
dgn zat yg ditentukan
Gravimetri
analisa yangmenyangkut
pengukuran berat
Instumental
didasarkan pada interaksi
energi dengan materi
R.A Day and Underwood, 1998
...lanjutan
Instrumental
Spektrofotometri
UV/Vis
Spektroskopi
massa
HPLC
Spektroskopi
Fluoresensi
R.A Day and Underwood, 1998
Spektroskopi Fluoresensi
ilmu yang mempelajari materi
berdasarkan cahaya, suara / partikel yg
dipancarkan, diserap / dipantulkan oleh
materi tsb
Spektroskopi
emisi cahaya setelah penyerapan sinar
ultraviolet (UV) / cahaya tampak oleh
molekul fluoresensi / substruktur disebut
fluorophore
fluorophore menyerap energi dlm bentuk
cahaya pada panjang gelombang spesifik &
membebaskan energi dlm bentuk cahaya yg
dipancarkan pada panjang gelombang yg
lebih tinggi
Fluoresensi
...lanjutan
Emisi cahaya terjadi karena proses absorbsi cahaya
oleh atom yang mengakibatkan keadaan atom
tereksitasi. Keadaan atom yang tereksitasi akan
kembali keadaan semula dengan melepaskan energi
yang berupa cahaya (deeksitasi). Fluoresensi
merupakan proses perpindahan tingkat energi dari
keadaan atom tereksitasi (S1 atau S2) menuju ke
keadaan stabil (ground states)
..lanjutan
Terdiri dari sumber cahaya (biasanya xenon atau lampu merkuri), sebuah
monokromator / atau filter untuk memilih panjang gelombang eksitasi; tempat
sampel; detektor, yang mengubah cahaya yang dipancarkan ke listrik sinyal, dan
unit untuk pembacaan data dan analisis.
Prinsip Spektroskopi Fluoresensi
Menurut diagram Jablonski diatas, energi emisi lebih rendah dibandingkan
dengan eksitasi. Ini berarti bahwa emisi fluoresensi yang lebih tinggi terjadi
pada panjang gelombang dari penyerapan (eksitasi). Perbedaan antara
eksitasi dan panjang gelombang emisi dikenal sebagai pergeseran Stoke.
...lanjutan
Eksitasi = cahaya
diserap oleh
molekul, yang
ditransfer ke
keadaan tereksitasi
secara elektronik
Relaksasi Getaran
= molekul
mengalami transisi
dari elektronik atas
ke yang lebih
rendah tanpa
radiasi apapun
Emisi = elektron
kembali ke
keadaan dasar ke
keadaan lebih
stabil, S0,
memancarkan
cahaya pada
panjang
gelombang yang
sesuai dengan
perbedaan energi
...lanjutan
Dalam molekul, masing-masing kondisi elektronik
memiliki beberapa kondisi bagian getaran terkait. Dalam
keadaan dasar, hampir semua molekul menempati tingkat
vibrasi terendah. Eksitasi dengan sinar UV adalah mungkin
untuk mempromosikan molekul yang tertarik ke salah satu
tingkat getaran beberapa tingkat tereksitasi secara
elektronik yang diberikan.

lanjutan
Ini berarti bahwa emisi fluoresensi tidak hanya
terjadi pada satu panjang gelombang tunggal,
melainkan melalui distribusi panjang gelombang
yang sesuai untuk transisi vibrasi beberapa sebagai
komponen dari transisi elektronik tunggal. Inilah
sebabnya mengapa eksitasi dan spektrum emisi
diperoleh untuk menggambarkan secara rinci
karakteristik molekul fluoresensi.
Penerapan Spektroskopi Fluoresensi
Beberapa vitamin dapat ditetapkan secara fluorometrik. Oksidasi
lembut tiamina (vitamin B1) oleh Fe(CN)63-, misalnya akan
menghasilkan suatu produk yang disebut tiokrom yang
memperagakan fluoresens biru pada kondisi yang tepat. Jika
pancaran pendaran itu diukur terhadap dua porsi sampel, satu
diolah dengan ferisianida dan yang lain tidak, orang dapat
mengurangi kontribusi pengganggu non-tiamina yang berpendar
untuk meningkatkan selektivitas. Riboflavin (vitamin B1) dan
piridoksin (B6) merupakan vitamin lain yang dapat ditetapkan
oleh fluoresensi.
Kelebihan dan Kekurangan Spektroskopi Fluoresensi
Sensitivitas tinggi
Fluorometri dapat menerima limit
deteksi dengan kekuatan sinyal lebih
rendah dari teknik lain. Limit deteksi
sekitar 10-10 M atau lebih rendah bisa
saja diukur dari sebuah molekul.
Kelebihan
polaritas, ion-ion, potensial listrik,
suhu, tekanan, derajat keasaman
(pH), jenis ikatan hidrogen,viskositas
dan quencher (penghambat de-
eksitasi) mempengaruhi proses
absorbsi energi cahaya eksitasi
Kekurangan
Aspek kuantitatif Fluoresensi
Supaya suatu molekul berfluoresensi, maka molekul
tersebut harus menyerap radiasi
Konsentrasi senyawa menyerap radiasi sinar
akan diabsorpsi oleh lapisan pertama hanya
sedikit radiasi yg diserap pada bagian lain
fluoresensi sampel tidak seragam dan tidak akan
proporsional dgn konsentrasi konsentrasi larutan
harus dijaga dalam konsentrasi rendah

f
(hasil kuantum fluoresensi)

f
< 1
I
f
=
f
.I
a
=
f
(I
0
- I
t
) I
t
= I
0
.10
-ecd
I
f
=
f
.I
0
(1- 10
-ecd
)
ecd < 0,01 10
-ecd
ln10.(1- ecd)
I
f
= 2,3.
f
.e.d.c = .c

Intensitas fluoresensi ~ konsentrasi
F ~ I0, sehingga sensitivitas yang meningkat pada
suatu sampel tertentu dapat diperoleh dengan
meningkatkan intensitas radiasi eksitasi
Pada teknik fluorometri, digunakan lambda max

Prosedur analisis Kuantitatif
1. Kurva baku yang menyatakan hubungan antara
intensitas fluoresensi dgn konsentrasi baku
tertentu vs larutan baku murni yang sudah
diketahui konsentrasinya
* Besarnya konsentrasi dapat dihitung dgn
memasukkan intensitas fluoresensi sampel ke dalam
kurva baku.
Cont.
2. Membandingkan secara langsung intensitas
fluoresensi baku dgn intensitas fluoresensi
sampel
*kondisi analisis untuk baku dan sampel harus sama
(sumber eksitasi, pelarut, pH, dan suhu)
*beberapa senyawa asing dapat menurunkan nilai
kuantum fluoresensi shg sensitifitas senyawa juga
turun
Daftar Pustaka
Gandjar, Ibnu dan Abdul Rohman. 2010. Kimia
Farmasi Analisis. Pustaka Pelajar. Yogyakarta.
R.A Day, JR & A.L Underwood, 1998.Copyright
2001. Analisis Kimia Kuantitatif Edisi Keenam. Hak
Terjemahan dalam Bahasa Indonesia, Penerbit
Erlangga. Jakarta