REACCIONES BIOQUIMICAS DE ESCHERICHIA COLI

PRUEBA SIM ( PRUEBA DE SULFURO, INDOL Y MOVILIDAD])

Este medio se utiliza para comprobar la motilidad, la formacin de H
2
S y la produccin de indol
por parte de la bacteria. Se siembra por picadura
La motilidad se pone de manifiesto por la turbidez difusa del medio de cultivo alrededor del canal
de la picadura. La no motilidad se caracteriza por el crecimiento producido exclusivamente a lo
largo de la lnea de inoculacin.
La produccin de H
2
S se reconoce por el ennegrecimiento de la zona de crecimiento o del medio
debido a la presencia del tiosulfato sdico. Para la demostracin del indol se usa el Reactivo de
Kovac, que manifiesta la degradacin del triptfano por la enzima triptofanasa en indol, que se
combina con el aldehdo presente en el reactivo de Kovacs, para producir un color rojo.

PRUEBA SIM PARA Escherichia Coli







ROJO DE METILO/ VOGES PROSKAUER
Prueba de rojo de metilo (RM): Identifica especies de bacterias que producen cidos a partir de
glucosa. Detecta la fermentacin cido-mixta. Se acumulan cidos (actico, frmico, etc.),
relativamente fuertes y bajan el pH del medio hasta 4-5. Dicho cambio de pH se detecta
aadiendo un indicador (rojo de metilo) al cultivo.
99% de positividad para cepas de E. coli.
Prueba de Voges Proskauer (VP): En esta prueba se detecta la produccin de acetil-
metilcarbinol (acetona), el cual se convierte a diacetilo en presencia de KOH y O2 atmosfrico.
El diacetilo es convertido posteriormente en un complejo rojo en presencia de -naftol y
creatinina. La produccin de acetona es una va alternativa del metabolismo del cido pirvico,
donde se producen cantidades pequeas de cidos mixtos que pueden ser insuficientes para dar
una prueba RM positiva. Por este motivo, la mayora de las especies de la familia
Enterobacteriaceae son VP positivo y RM negativo y viceversa. Esta prueba es negativa para
cepas de E. coli.)












Indol positivo H
2
S (negativo) Movilidad (+)
Presencia de
turbidez difusa
en el medio

MIO MEDIO
Movilidad Esta prueba determina la movilidad de los bacilos fermentadores.95% de positividad
para cepas de E. coli.
Resultado positivo: presencia de turbidez o crecimiento mas alla de la linea de siembra.
Resultado negativo: crecimiento solamente en la lnea de siembra
Ornitina decarboxilasa 5% de positividad para Ornitina.
Resultado positivo: color prpura
Resultado negativo: color amarillo. A veces se puede desarrollar un color vialceo en la
superficie del modelo.
Prueba indol 98% de positividad para esta prueba en E. coli.
Resultado positivo: color rojo.
Resultado negativo: el color del reactivo revelador permanece incoloro-amarillento










CITRATO DE SIMMONS
Esta prueba determina la capacidad de un microorganismo de utilizar el citrato de sodio
como nica fuente de carbono para el metabolismo y crecimiento. El metabolismo del
citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato permeasa, a travs del
ciclo del cido tricarboxlico..
Positivo: crecimiento bacteriano con un intenso color azul en el pico de flauta
Negativo: ausencia de crecimiento y permanencia del color verde del medio de cultivo

1% de positividad para cepas de E. coli.













TSI
Superficie alcalina/profundidad cida (pico rojo/fondo amarrillo): el microorganismo solamente
fermenta la glucosa
Superficie cida/profundidad cida (pico amarillo/fondo amarrillo): el microorganismo
fermenta la glucosa, lactosa y/o sacarosa
Superficie alcalina/profundida alcalina (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo no es
fermentador de azucares.
La presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo indican que el microorganismo
produce gas.

El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce H
2
S










LIA
El color del pico es prpura al igual que el color de la base del tubo (todo el medio es de color
prpura), esto nos indica que no hubo cambio en el medio, por lo tanto la descarboxilacion de la
lisina es positivo. La produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento del
medio debido a la formacin de sulfuro de hierro.
Es negativo en la produccin de cido sulfhdrico y positivo en la lisina descarbosilaxa en E.
Coli.












UREASA
Los microorganismos que hidrolizan la urea a travs de la enzima ureasa, liberan amonaco lo
cual produce un cambio de color rojo en el medio. El agar urea de Christensen permite la
deteccin de menores cantidades de amonaco para aquellos microorganismos que producen
menores cantidades de ureasa se evalan con este mtodo.

1% de positividad para esta prueba de hidrolisis de urea en E. coli.
Prueba de Ureasa: su resultado es Negativo ( color amarillo).

PRUEBA DE FENILALANINA DESAMINASA
La determinacin de la enzima fenilalanina desaminasa es til para diferenciar inicialmente a las
especies de: Proteus, Morganella y Providencia de otros bacilos gram negativos.
Positivo: desarrollo de color verde plido a intenso en el pico de flauta y en el lquido de
condensacin
Negativo: sin cambio de color. El medio permanece amarillo debido al color del reactivo
0% de positividad para cepas de E. coli.











MOELLER MEDIO BASE PARA DECARBOXILASAS
Muchas especies bacterianas poseen enzimas que tienen la capacidad de descarboxilar o de
hidrolizar aminocidos especficos entre ellos la arginina, lisina, ornitina en pruebas especficas,
liberando animas de reaccin alcalina y CO
2
.
17% de positividad para Arginina.
90% de positividad para Lisina.
65% de positividad para Ornitina.
Resultado positivo: tubo prueba: color prpura o violeta y tubo control: color amarillo.
Resultado negativo: tubo prueba y tubo control: color amarillo.
Resultado invlido: tubo control prpura o violeta.


















PRUEBA DE GELATINASA
Determina la produccin de la enzima gelatinasa, la cual produce la hidrlisis de la gelatina.
Positivo: la gelatina se mantiene liquida al sacarla de la nevera, negativo: la gelatina se
solidifica









PRUEBA DE FERMENTACIN DE CARBOHIDRATOS:
Uso del caldo de base prpura de bromocresol conteniendo un determinado sustrato a una
concentracin del 1% para la determinacin de la fermentacin de carbohidratos y alcoholes
para especies de la familia Enterobacteriaceae.
Arginina
deshidrolasa (-)
Ornitina
descarboxilasa (+)

Lisina
descarboxilasa (+)

E. coli es negativa para esta
prueba

D-Sorbitol 94% de positividad.
Lactosa 95% de positividad.
Sacarosa 50% de positividad.
D-Manitol 98% de positividad.
D-Adonitol 5% de positividad.
L-Arabinosa 99% de positividad.
Maltosa 96% de positividad.
Positivo: el medio se ve amarillo, igual a la produccin de cidos a partir de la fermentacin,
igual a la utilizacin de carbohidratos. Puede haber una produccin de gases (acumulacin de
gases en el tubo de Durham)
Negativo El medio se me rojo (pH se qued igual o aument). Se producen sustancias alcalinas.
LA bacteria utilizo peptonas.







CALDO ROJO DE FENOL CON DULCITOL
Para identificacin bioqumica de microorganismos en base a su capacidad de fermentar el
dulcitol.El dulcitol es el carbohidrato de prueba y su fermentacin se manifiesta por un cambio de
color del indicador rojo de fenol, que vira de rojo a amarillo

Escherichia coli Positivo +, en la fermentacin de dulcitol

CALDO DE ROJO FENOL CON ADONITOL FERMENTACIN DE CARBOHIDRATOS
Adonitol Escherichia coli crece en caldo de rojo fenol con Adonitol .Se incubaron
aerbicamente durante 24 horas a 35 grados. C. El crecimiento y un cambio de color
amarillo era indicativa como positivo para fermentacin de adonitol. La burbuja en el tubo
Durham era indicativa de la produccin de gas









KLIGLER HIERRO AGAR

Superficie alcalina/profundidad cida (pico rojo/fondo amarrillo): el microorganismo solamente
fermenta la glucosa
D-Adonitol 5% de positividad
microoganismos de E. Coli.
Superficie cida/profundidad cida (pico amarillo/fondo amarrillo): el microorganismo fermenta
la glucosa y lactosa
Superficie alcalina/profundidad alcalina (pico rojo/fondo rojo): el microorganismo no es
fermentador de azucares.
La presencia de burbujas o la ruptura del medio de cultivo indican que el microorganismo
produce gas.
el ennegrecimiento del medio indica que el microorganismo produce H
2
S








CALDO BSICO ROJO DE FENOL Y CARBOHIDRATOS
Se pueden utilizar principalmente rafinosa .Esta prueba determina la capacidad de un
organismo de fermentar (degradar) un carbohidrato especifico incorporado a un medio
basico. Las bacterias que fermentan un hidrato de carbono son por lo general
anaerobios facultativos. Este proceso se detecta observando cambios de color en
indicadores de pH a medida que se forman productos cidos
Acido: color amarillo
Alcalino: color rojo









FERMENTACIN DE RAMINOSA
Fermentacin de carbohidratos, con medio de cultivo base rojo de fenol y el
carbohidrato manitol
*tubo Durham
Determina si la bacteria puede usar ese carbohidrato especfico.
Positivo. Amarillo puede haber produccin de gases (tubo Durham)
Negativo. El medio se ve rojo
80% positivo para E.coli






Escherichia coli es 80%
(+) en fermentacin de
raminosa
presencia de lactosa y ausencia de glucosa. Por lo tanto, se requiere que las bacterias
hayan sido crecidas en un medio con lactosa como el Agar TSI o el Agar MacConkey.
Positivo: observacin de color amarillo en la suspensin.
Negativo: la suspensin permanece sin cambio de color.













Escherichia Coli es positiva para esta prueba