ESPECTROFOTMETRO ULTRAVIOLETA VISIBLE (UV-VIS)

INSTRUCTIVO DE ALISTAMIENTO Y OPERACIN.

JESUS ANDRES RICARDO GONZALEZ














SENA
CENTRO DE GESTION INDUSTRIAL C.G.I
FICHA SOFIA: 575472
BOGOTA D.C.
2014
CONTENIDO


Pg.

1. PRINCIPIO DE FUNCIONAMIENTO. ................................................................................... 3
2. APLICACIONES Y USOS INDUSTRIALES. ........................................................................ 4
3. PARTES Y FUNCIONES. ....................................................................................................... 5
4. OPERACIONES DE ALISTAMIENTO. ................................................................................. 7
5. LIMPIEZA Y CUIDADOS GENERALES DE UN ESPECTROFOTOMETRO UV-Vis. . 8

































1. PRINCIPIO DE FUNCIONAMIENTO.

Es necesario recordar algunos trminos a la hora de saber cmo funciona un
espectroscopio. Pues bien, mencionadas definiciones son las siguientes:
Energa radiante. Propagacin de la energa a travs del espacio sin el
soporte de la materia.
Transmitancia. Magnitud que relaciona la energa radiante que atraviesa
una muestra y la energa que incide sobre ella. Es el paso de la radiacin a
travs de un medio sin cambio en su frecuencia y se simboliza .
Absorbancia. Magnitud que representa la cantidad de energa radiante que
es absorbida por un cuerpo o sustancia y se simboliza .
Longitud de onda. Distancia entre las crestas de una onda peridica, se
simboliza .
Ancho de banda espectral (ABE).

Ahora bien, se conoce como espectrofotometra ultravioleta visible (UV-Vis) al
mtodo ptico de anlisis que tiene como principio de medicin la absorcin y/o
transmisin de la energa radiante emitida por una fuente de luz, que atraviesa una
sustancia. El mtodo es espectroscpico porque se basa en la medida de la
intensidad y de la longitud de onda de la energa radiante. La regin del
espectro electromagntico aplicada es la ultravioleta visible que esta entre 10 nm
y 780 nm., as como se muestra en la siguiente figura.



El principio de la espectroscopia ultravioleta-visible involucra la absorcin
de radiacin ultravioleta visible por una molcula, causando la promocin de
un electrn de un estado basal a un estado excitado, liberndose el exceso de
energa en forma de calor. La luz visible o UV es absorbida por los electrones de
valencia, stos son promovidos a estados excitados (de energa mayor). Al
absorber radiacin electromagntica de una frecuencia correcta, ocurre una
transicin desde uno de estos orbitales a un orbital vaco. Las diferencias entre
energas varan entre los diversos orbitales. Algunos enlaces, como los dobles,
provocan coloracin en las molculas ya que absorben energa en el visible as
como en el UV.
Cuando un haz de radiacin UV-Vis atraviesa una disolucin conteniendo
un analito absorbente, la intensidad incidente del haz (Io), o rango de luz que sale
del tubo de fotocolorimetra y que va a llegar a la celda fotoelctrica es atenuada
hasta I que sera el rango de luz captado por el tubo de fotocolorimetra. Esta
fraccin de radiacin que ha logrado traspasar la muestra es
denominada transmitancia () ( = I/Io). Por aspectos prcticos, se utilizar
la absorbancia () en lugar de la transmitancia ( = -log ), por estar
relacionada linealmente con la concentracin de la especie absorbente segn
la Ley de Beer-Lambert: = lc ( : coeficiente de absorbitividad molar
caracterstico de cada sustancia, l: camino ptico o largo del paso de la cuba y c:
concentracin de la especie absorbente).

El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin
absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida
de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia; ste
muestra las longitudes de onda donde se registra absorcin y cuantifica dicha
absorcin.
2. APLICACIONES Y USOS INDUSTRIALES.

El espectrofotmetro es utilizado en los laboratorios de qumica sobre todo para la
cuantificacin de sustancias y microrganismos; permite al operador realizar dos
funciones como son dar informacin sobre la naturaleza de la sustancia en la
muestra, as como tambin poder indicar indirectamente la cantidad de una
sustancia que interesa y est presente en la muestra.
El espectrofotmetro UV/Vis puede utilizarse como detector para la Cromatografa
Lquida de Alta Resolucin (CLAR). La presencia de un analito da una respuesta
que puede ser proporcional a la concentracin. Para resultados precisos, la
respuesta del instrumento al analito debe compararse con la respuesta a un
estndar, lo que es muy similar al uso de curvas de calibracin. La respuesta (por
ejemplo, el pico de altura) para una concentracin particular se conoce como
factor de respuesta.
3. PARTES Y FUNCIONES.

Existen dos tipos de espectrofotmetros, siendo de simple o doble haz. En un
instrumento de un solo haz, toda la luz pasa a travs de la clula muestra. La Io
debe medirse retirando la muestra.

En un instrumento de doble haz, la luz se divide en dos haces antes de llegar a la
muestra. Un haz se utiliza como referencia, y el otro haz de luz pasa a travs de la
muestra. Algunos instrumentos de doble haz tienen dos detectores (fotodiodos), y
el haz de referencia y el de la muestra se miden al mismo tiempo. En otros
instrumentos, los dos haces pasan a travs de un bloqueador que impide el paso
de un haz. El detector alterna entre la medida del haz de muestra y la del haz de
referencia.

Ahora bien, los componentes de un espectrofotmetro son:
Cubetas de espectrofotometra:
En un primer plano, dos de cuarzo aptas para el trabajo con luz ultravioleta; en
segundo plano, de plstico, para colorimetra (es decir, empleando luz visible).

Fuente de luz:
La fuente de luz que ilumina la muestra debe cumplir con las condiciones de
estabilidad, direccionalidad, distribucin de energa espectral continua y larga vida.
Las fuentes empleadas son lmparas de wolframio (tambin llamado tungsteno),
lmpara de arco de xenn y lmpara de deuterio que es utilizada en los
laboratorios atmicos.

Monocromador:
Asla las radiaciones de longitud de onda deseada que inciden o se reflejan desde
el conjunto, se usa para obtener luz monocromtica. Est constituido por las
rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de dispersin. El colimador
se ubica entre la rendija de entrada y salida. Es un lente que lleva el haz de luz
que entra con una determinada longitud de onda hacia un prisma el cual separa
todas las longitudes de onda de ese haz y la longitud deseada se dirige hacia otra
lente que direcciona ese haz hacia la rendija de salida.

Compartimiento de Muestra:
Es donde tiene lugar la interaccin, con la materia (debe producirse donde no
haya absorcin ni dispersin de las longitudes de onda). Es importante destacar,
que durante este proceso, se aplica la ley de Lambert-Beer en su mxima
expresin, en base a sus leyes de absorcin, en lo que concierne al paso de la
molcula de fundamental-excitado.

Detector:
Es quien detecta una radiacin y a su vez lo deja en evidencia, para posterior
estudio. Hay de dos tipos:

a) los que responden a fotones
b) los que responden al calor.


Registrador:
Convierte el fenmeno fsico, en nmeros proporcionales al analito en cuestin.

Foto detectores:
En los instrumentos modernos se encuentra una serie de 16 foto detectores para
percibir la seal en forma simultnea en 16 longitudes de onda, cubriendo el
espectro visible. Esto reduce el tiempo de medida, y minimiza las partes mviles
del equipo.
4. OPERACIONES DE ALISTAMIENTO.

Para el correcto uso y operacin del espectrofotmetro es necesario seguir los
pasos que a continuacin de describen:
I. Enchufar el equipo a la toma-corriente.
II. En la parte de atrs encender el equipo.
III. Encender lmpara en los botones (UV on) y (Vis on).
IV. Permitir y dejar encendido el equipo por un tiempo de 15 a 30 minutos.
V. Calibrar el equipo: Hacer la correccin de fondo con un blanco de agua
destilada en la cubeta.
VI. Presionar la tecla SAFE MEN, hasta que el display indique C.
VII. Presionar la tecla RUN.

Barrido de Longitudes de Onda.

VIII. Encender la computadora y el monitor.
IX. Teclear la clave PECSS + Enter.
X. Teclear (F10).
XI. Teclear SCAN.
XII. Se hace un barrido con agua, da una lnea continua en cero absorbancia.
XIII. Colocar el rango de longitudes de onda 850 a 350nm, teclear enter.
XIV. Colocar el rango de las absorbancias 0,1 a 0,1, teclear (enter)
XV. Luego hacer el barrido de longitudes de onda del patrn, para realizar un
nuevo barrido
XVI. Teclear (ESCAPE) (F10).
XVII. Colocar el rango de longitudes de onda, dependiendo del color reflejado,
teclear (enter)
XVIII. Colocar el rango de las absorbancias, teclear (enter).
XIX. Una vez realizado el barrido, presione las teclas (ESC) (HOME)
XX. SI EL ESPECTRO NO QUEDO BIEN PRESIONAR LAS TECLAS
(F9), (X) Y (ENTER)

Modo absorbancia.

I. Seleccione ABS oprimiendo la tecla del modo.
II. Seleccione la longitud de onda deseada y oprima la tecla de GO TO .
III. Inserte la muestra del blanco y la referencia apropiada y presione la tecla
AUTOZERO.
IV. Luego medir la absorbancia del patrn.


5. LIMPIEZA Y CUIDADOS GENERALES DE UN ESPECTROFOTOMETRO
UV-Vis.

1. Limpiar externamente el espectrofotmetro, incluyendo los controles,
pantallas o metros de medicin. Esto se puede realizar con una pieza de
tela fina similar a la textura de los pauelos humedecida con
agua destilada.
2. Inspeccionar y limpiar el cable de alimentacin elctrica.
3. Verificar que la lmpara est limpia y en buen estado. Si no funciona,
instalar una nueva, con las mismas especificaciones de la original. En los
espectrofotmetros modernos, el estado de la lmpara es detectado
automticamente mediante el software que controla el estado y el
funcionamiento del equipo, por lo que es fcil determinar en qu momento
es necesario cambiar la lmpara. Efectuar el cambio de la lmpara y
realizar el ajuste posterior siguiendo el procedimiento recomendado por el
fabricante.
4. Efectuar la calibracin del espectrofotmetro, cada vez que se realiza el
anlisis de un grupo de muestras.
5. Mantener cerrada la tapa del porta muestras durante el proceso de
medicin, para asegurar una lectura adecuada.
6. Evitar reutilizar las cubetas desechables
7. Utilizar nicamente cubetas de cuarzo, para efectuar anlisis por debajo de
los 310 nm.
8. Evitar el uso de cubetas plsticas, si se utilizan
solventes orgnicos.
9. Limpiar cuidadosamente las cubetas de vidrio despus de utilizarlas.
Desechar aquellas que presenten rayones en la superficie pulida.
10. Utilizar en lo posible reactivos de alta calidad. Reactivos de baja calidad
pueden causar contaminacin incluso en concentraciones muy bajas. Los
diluyentes utilizados agua o solventes debern estar libres de impurezas.
11. Verificar que las muestras o estndares no se han des gasificado dentro de
las cubetas, ya que este fenmeno produce burbujas sobre la superficie
interna de las cubetas y errores en las lecturas.
12. Tener en cuenta, cuando se pretenda utilizar nuevos procedimientos, que
no todas las sustancias cumplen con la ley de Beer. Efectuar pruebas de
linealidad sobre el rango de concentraciones a ser utilizadas. Se
recomienda preparar un grupo de soluciones fuertes conocidas y verificar
los
Espectrofotmetro.
13. Los fenmenos que afectan la ley de Beer son los siguientes:
a) Las altas concentraciones por asociacin molecular de especies inicas.
b) Variaciones en la hidratacin a bajas concentraciones producen cambios
en la naturaleza de los iones complejos