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TRABAJO PRCTICO N 2

FISIOLOGA LEUCOCITARIA

1. OBJETIVOS
1. A. OBJETIVOS GENERALES
- Relacionar las variaciones fisiolgicas de la concentracin de Leucocitos y de la Frmula Leucocitaria
Relativa con los procesos de defensa involucrados en diferentes situaciones.

1. B. OBJETIVOS ESPECFICOS
-

Diferenciar morfolgicamente los distintos tipos de leucocitos en frotis coloreados.

Conocer el procedimiento para el recuento de leucocitos en cmara de Neubauer.

Desarrollar destreza en la realizacin de frotis sanguneo para posterior observacin microscpica.

Observar una frmula leucocitaria relativa en un frotis teido con coloracin de May Grndwald
Giemsa.

2. CONOCIMIENTOS NECESARIOS
-

Leucopoyesis.

Fisiologa Leucocitaria. Fagocitosis. Mecanismos microbicidas dependientes e independientes de


oxgeno.

Variaciones fisiolgicas de la concentracin de leucocitos.

Variacin fisiolgica de la frmula leucocitaria relativa.

3. DESARROLLO DEL TRABAJO PRCTICO


3.a. FUNDAMENTOS
3.a.1. Recuento de leucocitos en Cmara de Neubauer
El recuento de Leucocitos es la tcnica que permite calcular el nmero de glbulos blancos que se
encuentran en un volumen de sangre. Una forma de expresar el resultado es como el nmero de leucocitos
3

por mm . El recuento orienta en el diagnstico y evolucin de un sujeto en estudio. Los leucocitos protegen
al organismo de las infecciones y colaboran en la respuesta inmunolgica. Si se desarrolla una infeccin, los
leucocitos atacan y destruyen las bacterias, hongos o virus causantes de la infeccin, razn por la cual las
variaciones estn frecuentemente asociadas a la presencia de enfermedad.
Tambin se utiliza para controlar tratamientos antiinfecciosos y/o antiinflamatorios y, entre otros estudios,
para el control de tratamientos quimioterpicos o con radiacin.
Algunos medicamentos que pueden alterar

los

resultados:

Indometacina. Drogas antitiroideas.

Antiinflamatorios no esteroideos. Anticonvulsivantes. Fentona. Antibiticos y quimioterpicos, no obstante

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no debemos olvidar que existen variaciones fisiolgicas del numero de leucocitos tales como: nacimiento,
estrs, ejercicio y digestin.

3.a.2. Frotis coloreado de sangre


Es un examen que permite diferenciar y cuantificar los distintos tipos de leucocitos que se hallan circulando
en sangre como as tambin la observacin de las plaquetas. La observacin microscpica de frotis
coloreados permite reconocer los elementos morfolgicamente normales y en distinto estado de maduracin
y aquellos que presentan formas alteradas.

3.b. MATERIALES
3.b.1. Recuento de leucocitos en cmara de Neubauer
o

Sangre anticoagulada con EDTA

Lquido de Trk: (cido actico glacial 2% V/V, con 5 gotas de azul de metileno 0,3% P/V cada 100
ml de solucin).

Cmara de Neubauer.

Microscopio.

3.b.2. Frotis coloreado de sangre


o

Sangre anticoagulada con EDTA

Portaobjetos Extensores.

Colorantes: May Grndwald Giemsa

Aceite de inmersin

Microscopio

3.b.3. Limpieza (por comisin): Detergente Rejilla alcohol gel Cepillo para lavar tubos de hemlisis
Rollos de cocina.
3.c. TCNICA
3.c.1. Recuento de leucocitos en cmara de Neubauer
Realizar una dilucin 1/20 de sangre entera anticoagulada con EDTA, en solucin o lquido de Trk. Este
ltimo, destruye los eritrocitos por hemlisis y deja intactos a los glbulos blancos. Proporcin sugerida: 20
l de sangre y 0,38 ml de Trk.
Luego de cargar la sangre en la pipeta, limpie su exterior con papel absorbente y verifique que la sangre
contina en el mismo nivel. Cuando descargue la sangre sobre el lquido diluyente, enjuague la pipeta
aspirando y expulsando este lquido tres veces.

Fisiologa Leucocitaria

Monte la laminilla de vidrio (cubrecmara) en la cmara para recuento (Fig. 1), presionndola
cuidadosamente para colocarla en su sitio. Cuando ha sido montada adecuadamente, entre las dos
superficies del vidrio se observan unas bandas de color, llamadas anillos de Newton.
Con la micropipeta cargue la cmara por capilaridad para el recuento. Evite llenarla ms all del rea
cuadriculada (Fig. 2). Si el lquido se derramar en el canal que se encuentra entre las dos cmaras, o a los
lados, la operacin se deber repetir (quite y limpie la laminilla de vidrio y la cmara).

Fig. 1

Fig. 2

Deje reposar la cmara sobre la mesa de trabajo durante 3 minutos a fin de que las clulas se asienten y
sedimenten por su mayor densidad con respecto al solvente.
Coloque la cmara en la platina del microscopio y obsrvela con el objetivo de 10X.

Cmara de Neubauer:
2

rea de la cmara = 9 mm

profundidad de la cmara = 0,1 mm


2

Contar las clulas en un rea de 4 mm utilizando los cuadros numerados 1, 3, 7 y 9,


(cuadrados secundarios) como se indica en la figura. Incluir en este recuento las clulas que se observen
sobre las lneas de dos lados de cada cuadro revisados, por ej.: incluya a los leucocitos sobre las lneas de
arriba y a la derecha, y no cuente los que estn sobre las lneas de abajo y a la izquierda; as evita contar
dos veces a la misma clula.

Clculo del nmero de clulas en un litro de sangre:


3

Clulas por mm = clulas contadas x 10 x 20 = clulas contadas x 50


4
2

Cada uno de los cuatro cuadrados primarios tiene un rea de 1 mm ; como se cuentan 4 de ellos el rea
2

mide 4 mm . La profundidad de la cmara es de 0,1 mm; en consecuencia, el volumen en que se cuentan


3

las clulas es 0,4 mm . De este modo la divisin por 4 y la multiplicacin por 10, dar el nmero de

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leucocitos que haya en 1 mm de sangre diluida. Ya que la dilucin es 1/20, la multiplicacin por 20 dar el
3

nmero de clulas en 1 mm de sangre sin diluir.

Valor de referencia para hombres y mujeres adultos: 4.500 a 11.000 clulas/mm

En el caso de encontrar leucocitosis, se realizar una nueva dilucin de 1/40; y en el caso de leucopenia, de
1/10. Esto permitir contar las clulas de manera ms clara y aumentar la precisin.

3.c.2. Frotis coloreado de sangre


Se realizar el extendido, colocando una gota de sangre directamente de la jeringa sobre un portaobjetos
limpio y seco; luego con un extensor apoyado sobre la gota, en un ngulo de 45 se procede a realizar la
extensin de sangre. Dejarlo secar a temperatura ambiente y una vez seco el portaobjetos se lo puede
identificar

escribiendo

sobre

el

extendido con lpiz (N de orden o el


apellido del paciente). Identificados los
extendidos se procede a su coloracin.
Un frotis bien confeccionado debe
constar de una zona inicial gruesa
(cabeza), una zona central (cuerpo) de mediano espesor (zona ideal para la
lectura) y la zona final (cola) delgada que termina en un borde convexo en
forma de serrucho.
El recuento diferencial se realiza preferentemente en el cuerpo del expendido,
contando 100 leucocitos siguiendo un desplazamiento como indica la figura.
Se elige un campo microscpico, se registra los diferentes tipos de leucocitos observados y se pasa al
siguiente hasta completar los 100 elementos. Los resultados obtenidos se expresan en porcentaje.
Coloracin de May- Grundwald- Giemsa.

1. Sobre el extendido seco e identificado colocar una pelcula del colorante May- Grndwald (que cubra toda
la superficie del portaobjetos) durante 3 minutos. Fase de fijacin.
2. Sin volcar agregar igual cantidad de agua corriente, dejando por el lapso de 2 minutos una pelcula de
agua y colorante. Luego lavar con agua.
3. Colocar por ltimo una solucin acuosa de Giemnsa a razn de 2 gotas del colorante por cada ml de
agua, durante 15 minutos. Lavar con agua corriente.
4. Escurrir y dejar secar.
5. Observar al microscopio, con un objetivo de 40X y luego con uno de 100X utilizando aceite de inmersin.
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Posibles causas de error en la confeccin del extendido


-

Portaobjetos sucios, hmedos, viejos.

Excesiva cantidad de sangre, extensiones gruesas.

No esperar a que se seque completamente.

Prolongado tiempo de tincin.

Lavado inadecuado.
Valores de Referencia de frmula leucocitaria relativa para un adulto

LEUCOCITOS

Valor Porcentual (%)

Valor absoluto /mm

55 65

3000 - 5000

0-3

0 -150

Eosinfilo

0.5 4

20 - 350

Basfilo

0 0.5

10 - 60

Linfocitos

25 35

1500 - 4000

Monocitos

48

100 500

Neutrfilo Segmentado
Neutrfilo en Cayado

Fuente: Manual de Tcnicas Bsicas para un Laboratorio de Salud


OPS N2 2007 -

Morfologa:
Neutrfilos: El citoplasma es abundante y se tie de color rosado. En l hay numerosas granulaciones
neutrfilas que se tien de color rosa-azulado y son de pequeo tamao.
El ncleo se tie intensamente de azul, es irregular y polisegmentado, variando el nmero de lbulos de 2 a
5.
Eosinfilos: se llaman as por el color rojo con el que aparecen al microscopio por una tincin con eosina.
La estructura de estas clulas se parece a la de los neutrfilos segmentados, pero con algunas diferencias.
El ncleo se tie algo menos y tiene 2 lbulos, normalmente dispuestos en forma de anteojos. Las
granulaciones citoplasmticas son de mayor tamao, redondo u ovalado.
Basfilos: Poseen un ncleo con forma de S. Contienen grnulos gruesos Basfilos de color azul-violeta
intenso que se ubican sobre el ncleo cubrindolo por completo.
Linfocitos: Tienen un ncleo celular nico. El ncleo del linfocito se tie de color azul oscuro. El citoplasma
es escaso y se tie de un color azul plido.
Monocito: Es la clula de mayor tamao de la sangre normal. Contiene un nico ncleo, generalmente
excntrico y con forma redondeada, lobulada o en forma de herradura. Se tie de un azul ms dbil que los
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linfocitos. El citoplasma es abundante y se tie de un color azul grisceo conteniendo a veces grnulos finos
de color entre rojo y prpura, menos diferenciados y pequeos que los grnulos de los neutrfilos.

3.d. Experiencia
3.d.1. Recuento de Leucocitos en cmara de Neubauer
o

Preparar la dilucin para el recuento de leucocitos segn tcnica indicada previamente.

Observar al microscopio con aumento de 10X.

3.d.2. Frotis de sangre coloreado


o

Realizar un frotis sanguneo segn tcnica indicada previamente.

Colorear el frotis realizado.

Observar al microscopio con aumento de 40x y 100x (objetivo).

3.e. Informe y Resultados


3.e.1. Recuento de Leucocitos en cmara de Neubauer
o

Calcular el recuento absoluto de leucocitos en muestra procesada.

Indicar si los valores hallados estn dentro del intervalo de referencia para le edad y el sexo.

Interpretar los valores del Recuento Leucocitario del caso proporcionado en el presente TP.

3.e.2. Frotis de sangre coloreado


o

Realizar el recuento diferencial de leucocitos en el frotis coloreado y calcular su concentracin


absoluta teniendo en cuenta el valor hallado de la concentracin de leucocitos en el recuento en
cmara de Neubauer.

Dibujar los leucocitos observados con los diferentes aumentos y relacionarlos con los eritrocitos.

Interpretar los valores de la Frmula Leucocitaria Relativa del caso proporcionado en el presente TP
y calcular los correspondientes Valores Absolutos para cada tipo de leucocito.

3.f. Conclusiones
En base a los conocimientos previos, indique cmo espera encontrar un recuento absoluto de leucocitos y
su frmula relativa en los siguientes casos:
a. Infestacin por larva migrans:
b. Embarazo tercer trimestre:
c.

Inmediatamente luego de hacer un ejercicio fsico intenso:

Justifique cada respuesta.

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4. GUA DE ESTUDIO
1. Qu muestra se utiliza para realizar un recuento de glbulos blancos?
2. Qu anticoagulante se emplea para realizar un recuento de Glbulos Blancos?
3. Utiliza anticoagulante en la muestra para realizar el frotis? Explique brevemente.
4. Cules son las posibles causas de error analtico que se puede cometer en el desarrollo de las tcnicas
del recuento de glbulos blancos y frotis sanguneos?
7. Teniendo en cuenta los valores de referencia citados en ambos casos, haga un listado de las variaciones
fisiolgicas y por lo menos dos fisiopatolgicas en cada determinacin y explique brevemente.

5. BIBLIOGRAFA
Textos de cabecera

Cingolani, H. E.; Houssay, A. B. y Col: Fisiologa Humana de Houssay. 7 Edicin. Editorial El Ateneo.
Buenos Aires. 2006.

Dvorkin, M. A.; Cardinali, D. P.; Iermoli, R. H.: Best & Taylor. Bases Fisiolgicas de la Prctica
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Guyton, A. C.: Tratado de Fisiologa Mdica. 11 Edicin. Editorial Elsevier. Madrid. 2006.

Koeppen, B.M.; Stanton, B.A.: Berne & Levy. Fisiologa. 6 Edicin. Editorial Elsevier Mosby. Madrid,
2009.

Silvernagl, S; Despopoulos, A.: Fisiologa. Texto y Atlas. 7 Edicin. Editorial Mdica Panamericana.
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Silverthorn, D. U.: Fisiologa Humana. Un Enfoque Integrado; 4 Edicin. Editorial Mdica


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Coppo, J. A.: Fisiologa Comparada del Medio Interno. 2 Edicin corregida y aumentada. Editorial
Universidad Catlica de Salta. Departamento Editorial EUCASA. Salta. 2008.

Textos de consulta

Henry, J.B.: El Laboratorio en el Diagnstico Clnico: Homenaje a Todd-Stanford & Davidsohn.


Tomos I y II. Editorial Marbn. 2005.

Cristaldo, Daniel Osmar: Pruebas que Conforman el Hemograma. Curso PARMETROS DEL
HEMOGRAMA. UTILIDAD E INTERPRETACIN. Resolucin 811/08 C.D. Corrientes, 16 de octubre de
2008.

Fisiologa Leucocitaria

Gauna Pereira, Mara del Carmen: Bioseguridad en el Laboratorio. Curso PARMETROS DEL
HEMOGRAMA. UTILIDAD E INTERPRETACIN. Resolucin 811/08 C.D. Corrientes, 16 de octubre de
2008.

Ivine, E.; Atilio SeIva, A.: El Laboratorio en la Clnica. 3 Edicin. Editorial Mdica Panamericana.
1985.

Levy-Lambert: Manual de tcnicas Bsicas para un Laboratorio de Salud. Organizacin


Panamericana de la Salud. 1983.

Fisiologa Leucocitaria

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