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Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia do Cear.

Graduao Tecnolgica em Gesto Ambiental.
Disciplina: Microbiologia Bsica
Professora: Smara Sales

Relatrio de Praticas Microbiolgicas 01

Alunos:
David Nobre de Menezes
Danielle Alves Fonseca
Daniel de Souza Raulino

Fortaleza - CE
17/Maro/2015

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SUMRIO
1 Introduo .......3
2 Objetivos ......5
3 Materiais ......5
4 Mtodos

......6

5 Resultados e Discusses

.....8

6 Concluses ....11
Referncias .....12

1 Introduo
A microbiologia como defente Trabulsi e Alterthum(2004) a cincia que
estuda as formas de vida microscpicas no tocante a morfologia, a hereditariedade,
os processos reprodutivos, a taxonomia e a funo destes microrganismos no meio
ambiente. Dada a limitao do olho humano para conseguir visualizar os
microrganismos um dos primeiros passos no aprendizado em microbiologia foi
familiarizao com o microscpio ptico, apesar de se ter ministrado a teoria de
outros mtodos de microscopia como o conceito e aplicao do microscpio
eletrnico, por exemplo.
O microscpio ptico ou luminoso foi o principal recurso, nesta prtica,
nas anlises dos microrganismos e sua a ampliao total como mostra Pelczar Jr.
(1997) o produto das lentes objetivas pela s oculares, chegando a 1000 vezes se
auxiliado com o leo de imerso. O poder de resoluo informa Soares, Casimiro e
Albuquerque(1987) o menor segmento possvel de ser distinguido de outro e
tambm est relacionado diretamente com a abertura numrica e o comprimento de
onda. Por fim, o microscpio ptico tem como fator limitante de resoluo o ndice de
refrao e o comprimento de onda.
A visualizao dos microrganismos nos microscpios luminosos podem
ser melhoradas pelo uso lminas afresco e coradas. Explica Pelczar Jr. (1997) que
as tcnicas de Lmina e Lamnula consiste em na deposio do microrganismo em
meio fludo em uma lmina de vidro e pressionada por uma lamnula e depois vedase a as extremidades da lamnula com vaselina, j o uso da gota pendente
diferencia-se que ao invs do uso de uma lmina reta tem-se uma lmina com uma
concavidade ao centro. Recomenda-se o uso de preparao afresco quando a
morfologia do microrganismo sofrer influncia do calor ou agentes qumicos, alm
disso a tcnica tem eficacia em caso da forma de vida no se corar facilmente ou
quando pretende-se analisar comportamentos como motilidade ou ingesto de
alimentos.
Quanto aos mtodos de colorao Tortora, Funke e Case(2012) a define

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como a aplicao de corantes aos micrbios com intudo de realar determinadas
estruturas, todavia causando a morte do ser vivo, divide-se em colorao simples e
diferencial, destacando-se a colorao de Gram. A simples normalmente baseia-se
em uma soluo aquosa ou alcolica que primariamente visa destacar todo
organismo, podendo ser ou no ser adicionado uma substncia aditiva que tem a
funo de mordente, ou seja, aumentar o grau colorao no organismo.
A colorao diferencial como explana Pelczar Jr (1997) vai colorir
diferentes componentes dos microrganismos em tons diferentes, devido a uma
sequncia de aplicao de corantes em especial a colorao de Gram consiste
respetivamente: na aplicao de corante purpura

cristal violeta, aplicao de

soluo de iodo (mordente), lcool(descorante) e, por fim, aplicao do corante

vermelho a safranina. Os resultados: se o microrganismo reter o cristal violeta, ele
no ser descorado pelo lcool e tampouco ser contra corado pela safranina e ser
Gram-positivo com aspecto violeta escuro, todavia casa no consiga reter o cristal
violeta, o descorante ter xito e o contra corante vai tingi-lo de vermelho,
caracterizando-o como Gram negativo.
Acrescenta-se

que

Gram

positivo

negativo

so

reflexo

de

caractersticas da parede celular sobretudo relacionada ao componente peptoglicano

indicam uma predisposio em reter o cristal violeta, alm disso clulas jovens tm
maior facilidades em tingir-se de violeta como bem ilustra Soares, Casimiro e
Albuquerque (1987).

2 Objetivos
Analisar microrganismos com as tcnicas de microcopia optica aliada a
preparao de Lmicas a frescos e coradas (Colorao simples e diferencial).
3 Materiais
3.1 Microorganismos:
Scenedesmus sp
Candida krusei
Bacillus subtilis
3.2 Corantes e Reagentes:
Cristal violeta
Fucsina
Azul metileno
Safranina
Lugol
lcool etlico
3.3 Equipamentos:
Microscpio ptico
Bico de busen
3.4 Diversos:
Lmina
Lamnula
Ala e agulha de inoculao
Pina
leo de imerso
Leno de papel absorvente

4 Mtodos
A prtica consistiu na preparao de lminas afresco para Scenedesmus
sp e coradas respetivamente para a Candida krusei (colorao simples) e Bacillus
subtilis

(colorao diferencial de Gram). Alm disso buscou-se o exerccio das

prticas asspticas que tinham o objetivo de isolar interferncias externas nas

anlises dos microrganismos como a introduo inadvertidamente de organismos do
meio externo nas amostras.
4.1 Lminas a fresco
A) Usou-se o microrganismo Scenedesmus sp.
B) Com a pipeta de Pasteur foi depositado na Lmina o organismo e logo aps a
lamnula foi colocada visando isolar o organismo de evoparao e correntes
de ar.
C) Observou-se o organismo no microscpio.
4.2 Lminas coradas Simples
A) Usou-se o microrganismo Candida krusei.
B) Com auxlio de um pegador aqueceu-se sem permanncia excessiva,
flambagem, no bico de busen, uma Lamina esterilizada com lcool e
posteriormente aguardou-se o resfriamento em temperatura ambiente.
C) Com uma ala aquecida no bico busen e resfriada, tranferiu-se do tubo de
ensaio para a lmina o microrganismo na parte central em uma area de
aproximada mente 1cm(esfregao), aguarda-se secagem em temperatura
ambiente.
D) Flamba-se o organismo sem superaquecimento.
E) Aplica-se o corante azul metileno com permanncia de um minuto, retira-se o
excesso com agua corrente e seca-se com papel absorvente.
F) Visualiza-se ao microscopio com a objetiva de 40X e aps com 100x com o
uso do leo de imerso.
Obs: no foi possvel usar a tcnica de gota pendente devido a problemas
relacionados a reforma do laboratrio o que impediu o acesso a esse material.

4.3 Lamina Corada Diferencial de Gram.

A) Usou-se o microrganismo Bacillus subtilis .
B) Com auxlio de um pegador aqueceu-se sem permanncia excessiva,
flambagem, no bico de busen, uma Lamina esterilizada com lcool e
posteriormente aguardou-se o resfriamento em temperatura ambiente.
C) Com uma ala aquecida no bico busen e resfriada, transferiu-se do tubo de
ensaio para a lmina o microrganismo na parte central em uma rea de
aproximada mente 1 cm(esfregao), aguarda-se secagem em temperatura
ambiente.
D) Flamba-se o organismo sem superaquecimento.
E) Aplica-se o cristal violeta com permanncia de um minuto, retira-o com gua
corrente.
F) Aplica-se o lugol com permanecia de 1 minuto, lava-se com lcool 95% e
depois com gua.
G) Aplica-se a Fucsina com permanncia de 20 segundos, lava-se com gua e
seca-se a lmina com papel absorvente.
H) Visualiza-se ao microscpio com a objetiva de 40X e aps com 100x com o
uso do leo de imerso.

5 Resultados e Discusses
5.1 Scenedesmus sp
O microrganismo foi submetido a visualizao somente em lmina a fresco, at
mesmo porque a amostra possui uma colorao prpria um verde suave que
dispensa o uso de corantes. A visualizao

no microscpio foi feito com xito,

contudo no foi possvel obter-se imagens devido a reforma do laboratrio o que

impediu o acesso ao suporte para cmera fotogrfica, contudo foi possvel at
mesmo visualizar os componentes internos de cada unidade e tambm sua
organizao: as vezes isolados, outras vezes em quatro unidades semelhante a
Figura 1, que no de nossa autoria.
Figura 1 - Scenedesmus sp

Fonte:Oliveira, 2013.

5.2 Candida krusei

Os organismos tingido com colorao simples azul metileno apresentava
forma de bacilo individualizados como mostra a Figura 2.
Figura 2 Candida Krusei.

Fonte: MENEZES, 2015.

5.3 Bacillus subtilis

A bactria sofreu colorao diferencial de gram apresentado cor rosa,
logo gram negativa. A foma de bacilo possvel ver arranjos em paliada.

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Figura 3 - Bacillus subtilis .

Fonte: MENEZES, 2015.

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6 Concluses
A prtica demostrou a necessidade da microscopia no estudo dos
microrganismos, com nfase a microscopia ptica, alm da importncia do manuseio
correto do instrumento (conhecer os componentes, os ajustes e as limitaes). O
outro tpico relevante foi manipulao adequada de materiais como alas, lminas,
lamnulas, bico de busen para que se conduza as anlises sem interferncias, alm
de proporcionar a melhor assimilao da teoria dada em sala de aula.

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Referncias
PELCZAR Jr, J.M., et al. Microbiologia; conceitos e aplicaes. 2. ed., So Paulo:
Makron Books, 1997.
SOARES, J. B; CASIMIRO, A. R. S.; ALBUQUERQUE, L. M. B. Microbiologia
bsica. Fortaleza : Edies UFC, 1987.
TRABULSI, L. R.; ALTERTHUM, F. Microbiologia. 4 ed. So Paulo: Atheneu, 2004.
TORTORA, G.J.; FUNKE, B.R. & CASE, C.L. Microbiologia. 10 Ed., Editora
Artmed. 2012.