Universidad Nacional

Jorge Basadre Grohmann

BIOQUMICA
Informe N

CINETICA ENZIMATICA
II
ESCUELA PROFESIONAL
Industrias Alimentarias
DOCENTE DEL CURSO

ESTUDIANTE
Diego Andr Zambrano Coyla
CODIGO
2013 - 39007
Segundo Ao | Lunes 12:00pm - 2:00pm
Tacna, Septiembre de 2013

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CINETICA ENZIMTICA II

I OBJETIVOS
Determinar la actividad enzimtica en determinados niveles de concentracin
de sustrato o de enzima
II FUNDAMENTO TEORICO
Concentracin del sustrato
En toda reaccin catalizada por un enzima, si se mantiene constante la
concentracin del E, la velocidad de la reaccin aumenta exponencialmente al
incrementarse la concentracin del sustrato, ya que al existir ms molculas de
sustrato es ms probable el encuentro con el enzima y la formacin del
complejo
E-S.
Este aumento de velocidad es rpido para concentraciones bajas de sustrato y,
a medida que este aumenta, se va haciendo ms lento hasta que la
concentracin del sustrato alcanza un cierto valor, a partir del cual, aunque
aumente la concentracin del mismo, no aumenta la velocidad de la reaccin.
Esto es debido a que el enzima est saturada por el sustrato; es decir, todas
las molculas del enzima estn unidas al sustrato formando el complejo E-S.
Cuando ocurre esto, se dice que la reaccin ha alcanzado la velocidad mxima.
En 1913 Leonor Michaelis y a Maud Menten estudiaron la variacin de la
velocidad de una reaccin enzimtica en funcin de la concentracin del
sustrato y propusieron la siguiente ecuacin, que es vlida para
concentraciones de sustrato no saturante.

Donde:
V es la velocidad de la reaccin para una determinada concentracin de
sustrato.
Vmax
es
la
velocidad
mxima
de
la
reaccin.
[S]
es
la
concentracin
del
sustrato.
Km es una constante denominada constante de Michaelis-Menten, es
caracterstica de cada enzima.
Si en la ecuacin (1) hacemos V = Vmax y despejamos Km obtenemos que
Km = [S]
Km. Se puede definir como la concentracin de sustrato necesario para que la
velocidad de la reaccin sea la mitad de la velocidad mxima. Se mide en
unidades de concentracin. La Km nos indica la afinidad de un enzima por su
sustrato:

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CINETICA ENZIMTICA II

Si Km es alta indica que el enzima tiene poca afinidad por el sustrato ya que
se necesita una concentracin de sustrato elevada para alcanzar la mitad de la
velocidad mxima.
Si Km es baja indica que el enzima tiene mucha afinidad por el sustrato ya que
se necesita una concentracin de sustrato baja para alcanzar la mitad de la
velocidad mxima.
Concentracin de la enzima
La concentracin de la enzima [E] tiene efecto sobre la velocidad inicial ( ) de
una reaccin catalizada a una [S] fija de saturacin.
La velocidad de la reaccin est influida por la concentracin de enzima, pero
no por la concentracin de otro reactante
La actividad de una enzima se puede estudiar in vitro, bajo condiciones
controladas. Si se trabaja a pH y T constante y bajo unas concentraciones de
sustrato saturantes, al variar la concentracin de enzima, podremos observar
como aumenta la velocidad de reaccin.

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CINETICA ENZIMTICA II

III MARCO EXPERIMENTAL

MATERIALES Y REACTIVOS

Muestra de ovoalbmina
Acido clorhidrico (HCL) al 1N
Agua destilada
Pepsina 1%

PROCEDIMIENTO
Efecto de la concentracin de enzima
Paso 1: Preparar 5 tubos de ensayo de acuerdo a la siguiente tabla:
REACTIVOS
Sol. de
ovoalbmina
HCL 1N
Agua
destilada
Pepsina

Tubo
1(ml)
2,50

Tubo
2(ml)
2,50

Tubo
3(ml)
2,50

Tubo
4(ml)
2,50

Tubo
5(ml)
2,50

0,25
0,75

0,25
1,25

0,25
1,75

0,25
2,00

0,25
2,25

1,50

1,00

0,50

0,25

Paso 2: Mezclar bien cada tubo y llevarlos a bao Mara a 37C por 5 minutos
Efecto de la concentracin de sustrato
Paso 1: Preparar 5 tubos de ensayo de acuerdo a la siguiente tabla
REACTIVOS

Tubo
1(ml)
Sol.
de 1.00
ovoalbmina
HCL 1N
0.25
Agua
3.50
destilada

Tubo
2(ml)
1.50

Tubo
3(ml)
2.00

Tubo
4(ml)
2.50

Tubo
5(ml)
3.00

0.25
3.00

0.25
2.50

0.25
2.00

0.25
1.50

Paso 2: Mezclar bien cada tubo

Paso 3: Realizar una primera lectura con el espectrofotmetro
Paso 4: Llevar las muestras a incubacin a 37C por 5 minutos
Paso 5: Cumplido el tiempo de incubacin agregue a cada tubo 0.25 ml de
pepsina al 1 %
Paso 6: De inmediato volver a incubar a 37C por 10 minutos.

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Paso 7: Cumplido este segundo tiempo de incubacin realice una nueva

lectura al espectrofotmetro de cada uno de los tubos.

IV RESULTADOS
Efecto de la concentracin de enzima
Obtencin de la concentracin de pepsina [E]
PARA EL TUBO 1:
1 100
1,5

= 0,015
Ahora...
0,015 5
1

= 0,003
Pasando de gramos a miligramos...
0,003 1000 = 3

PARA EL TUBO 2:
1 100
1

= 0,01
Ahora...
0,01 5
1

= 0,002

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Pasando de gramos a miligramos...

0,002 1000 = 2

PARA EL TUBO 3:
1 100
0,5

= 0,005
Ahora...
0,005 5
1

= 0,001
Pasando de gramos a miligramos...
0,001 1000 = 1

PARA EL TUBO 4:
1 100
0,25

= 0,0025
Ahora...
0,0025 5
1

= 0,0005
Pasando de gramos a miligramos...
0,0005 1000 = 0,5

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CINETICA ENZIMTICA II

Con los datos obtenidos en el ensayo y los clculos anteriores se procede

a elaborar el siguiente cuadro de resultados y su respectivo grafico [E] vs
A.E
Solucin
de
Pepsina
[Pepsina]
Turbidez

Tubo 1

Tubo 2

Tubo 3

Tubo 4

Tubo 5

1.50

1.00

0.50

0.25

3
+
1
1

2
++
1/2
0,5

1
+++
1/3
0,333

0,5
++++
1/4
0,25

+++++
-

Efecto de la [E] sobre la A.E

Actividad Enzimatica (AE)

3.5
y = 3.1486x - 0.0098
R = 0.9506

3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
-0.5

0.2

0.4
0.6
0.8
Concentracion enzimatica [E]

Efecto de la concentracin de Sustrato

Obtencin de la concentracin de sustrato [Ovoalbmina]
PARA EL TUBO 1:
1 100
1

= 0,01

Ahora...
0,01 5

1.2

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= 0,002
Pasando de gramos a miligramos...
0,002 1000 = 2

PARA EL TUBO 2:
1 100
1,5

= 0,015
Ahora...
0,015 5
1

= 0,003
Pasando de gramos a miligramos...
0,003 1000 = 3
PARA EL TUBO 3:
1 100
2

= 0,02
Ahora...
0,02 5
1

= 0,004

Pasando de gramos a miligramos...

0,004 1000 = 4

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CINETICA ENZIMTICA II

PARA EL TUBO 4:
1 100
2,5

= 0,025
Ahora...
0,025 5
1

= 0,005
Pasando de gramos a miligramos...
0,005 1000 = 5

PARA EL TUBO 5:
1 100
3

= 0,03
Ahora...
0,03 5
1

= 0,006
Pasando de gramos a miligramos...
0,006 1000 = 6

Con los datos obtenidos en el ensayo y los clculos anteriores se procede

a elaborar el siguiente cuadro de resultados y su respectivo grafico [S] vs
A.E

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CINETICA ENZIMTICA II

Tubo 1
Solucin
de 1
Ovoalbmina
Concentracin 2
[Ovoalbmina]
Abs. Inicial
1.280
Abs. Final
0.673
A.E
0.607

Tubo 2
1,5

Tubo 3
2

Tubo 4
2,5

Tubo 5
3,0

1.578
0.961
0.617

1.851
1.279
0.572

1.985
1.464
0.521

2.032
1.675
0.357

Efecto de la [S] sobre la A.E

Actividad Enzimatica (AE)

0.7
0.6
0.5

y = -0.0596x + 0.7732
R = 0.7866

0.4
0.3
0.2
0.1
0
0

Concentracion de sustrato [S]

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CINETICA ENZIMTICA II

V. CONCLUSIONES
Se determino la actividad enzimtica en 5 diferentes concentraciones de
sustrato y enzima para cada uno.

VI. BIBLIOGRAFIA
Carrasco, J. J. (s.f.). Slideshare. Recuperado el 06 de 07 de 2014, de
http://es.slideshare.net/usfisioterapialuisfernandez/tema-6-cintica-enzimtica-y-regulacin
docencia.izt.uam.mx. (s.f.). Recuperado el 06 de 07 de 2014, de
http://docencia.izt.uam.mx/japg/RedVirtualJAP/CursoDRosado/3_EnzimologiayBioenergetica/
2CineticaEnzimatica.pdf
EHU. (s.f.). ehu.es. Recuperado el 06 de 07 de 2014, de
http://www.ehu.es/biomoleculas/enzimas/enz3.htm
Hernandez, S. (s.f.). 2Bachillerato.com. Recuperado el 06 de 07 de 2014, de
http://www.2bachillerato.es/biologia/tema5/p5.html
Plummer. (s.f.). bioquimica.dogsleep.net. Recuperado el 06 de 07 de 2014, de
http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plummer/Chp09.pdf
Universidad Nacional de trujillo. (s.f.). Recuperado el 06 de 07 de 2014, de
http://es.slideshare.net/yuricomartinez/determinacion-cuantitativa-de-la-actividadenzimatica-del-preparado