ESCUELA POLITECNICA DEL EJRCITO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA VIDA

INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA
INFORME DE LABORATORIO

INTEGRANTES: Lizeth Guerrero, Gabriela Sevillano y Carolina Varela.

ASIGNATURA: Fitoqumica
CURSO/PARALELO: A-302
NRC: 3367
FECHA: 03/12/2013
PRCTICA N 1-3-1
TITULO DE LA PRCTICA:

EXTRACCION, SEPARACION E IDENTIFICACION DE LOS ALCALOIDES DE LA GUAYUSA

(Ilex guayusa Loes) Y GUANTO (Brugmansia sanguinea)

OBJETIVOS:

General:

Extraer, separar e identificar los alcaloides de muestras vegetales de guayusa (Ilex

guayusa loes) y guanto (Brugmansia sanguinea).

Especficos:
Desengrasar las muestras vegetales que contengan alcaloides con un
solvente adecuado.
Purificar las muestras a travs de un proceso cido-base.
Determinar la presencia de alcaloides en las muestras a travs de pruebas
cualitativas de coloracin (Dragendorff, Mayer, Wagner)
Identificar la presencia de alcaloides a travs de la cromatografa en capa
fina con un solvente de Metanol-NH4OH (200:3) y (100:1,5).

OBSERVACIONES:
Originalmente utilizamos una muestra de chilca (Baccharis latifolia), en la cual en la
primer fase de acidificacin se obtuvieron resultados positivos debido a la presencia de
impurezas; despus de un proceso de eliminacin del marco se obtuvieron resultados

negativos con respecto a la presencia de alcaloides, por lo tanto se procedi a cambiar

la muestra a guanto y guayusa.
En las muestras utilizadas para la extraccin de alcaloides se obtuvieron las siguientes
observaciones:

Imagen 1: A. embudo de separacin, en el cual se encuentra la muestra (guanto), para

ser purificada en presencia de cloroformo. B. prueba de Wagner positiva para
alcaloides en guayusa (presencia de precipitado). C. prueba de Mayer positiva para
alcaloides en guayusa (presencia de precipitado). D. prueba de Dragendorff positiva
para alcaloides en guayusa (presencia de precipitado). E. Cromatografa realizada con
todas las muestras elaboradas en el laboratorio, en la cual, la posicin 3 es ocupada
por la muestra de guayusa que presenta una fluorescencia color meln y la posicin 4
por la muestra de guanto que presenta una fluorescencia color azul. F. pruebas de
Dragendorff (D), Mayer (M) y Wagner (W) positivas para la muestra de guanto.

RESULTADOS:
Mtodo de obtencin de alcaloides

Maceracin por 8 das

en etanol

Muestra seca, triturada y desengrasada

Acidificacin de la muestra con HCl

Eliminacin del marco

Pruebas
Wagner
(amarillento)
Mayer (blanco)
Dragendorff
(naranja rojizo)

guanto
++

guayusa
++

++
+++

++
+++

Filtrado ms alcaloides
Alcalinizar NH4OH (pH alcalino)
Extraer CHCl3

Fase acuosa alcaloides

(realizacin de pruebas de
presencia de alcaloides).

Fase orgnica

Alcaloides bases

Pruebas
Wagner
(amarillento)
Mayer (blanco)
Dragendorff
(naranja rojizo)

Acidificacin pH acido

Fase acuosa
Alcaloides positivos
(en forma de sales)

FASE ACUOSA
guanto guayusa
-

++
+++

++
+++

Fase orgnica
Alcaloides negativos
(impurezas)

Alcalinizar NH4OH (pH

alcalino)
Extraer CHCl3
Fase acuosa alcalina
Alcaloides negativo
(impurezas)

FASE ORGANICA
guanto guayusa
++
++

Fase orgnica
Alcaloides positivo (en
forma de bases)

Evaporacin
Alcaloides totales

Pruebas
Wagner
(amarillento)
Mayer (blanco)
Dragendorff
(naranja rojizo)

FASE ORGANICA
guanto guayusa
++
++

FASE ACUOSA
guanto guayusa
-

++
+++

++
+++

Reporte de resultados:
GUANTO (Brugmansia sanguinea)

GUAYUSA (Ilex guayusa Loes)

Discusin:
Sharapin, 2000, afirma que los alcaloides estn presentes en vegetales, tanto en su
forma libre como en su forma de sales, razn por la cual los vegetales deben ser
sometidos un pretratamiento con solventes no miscibles con el agua, es decir aquellos
que son de baja polaridad, como el ter etlico, diclorometano, etc., para liberar los
alcaloides presentes en forma de bases, mientras que para liberar los alcaloides de sus
sales, se usa como solventes el metanol y el etanol, del alta polaridad, los cuales
permiten obtener los alcaloides tanto en la forma libre, como en la forma de sus sales.
Este proceso extrae a ms de los alcaloides, otras sustancias bsicas, cidas y neutras,
as como pigmentos, taninos y otras impurezas.
Es por esta razn que es importante someter las muestras a un proceso de
desengrasado previo con ter, con el fin de extraer todos los alcaloides presentes en la
planta en forma de bases libres y luego realizar una maceracin con alcohol al 70%,
obteniendo de esta manera los alcaloides presentes tanto de su forma libre, como en
forma de sales.
Climent, 2005, indica que el etanol al ser un disolvente universal extrae de la planta no
solo los alcaloides, sino tambin, una gama de otras sustancias, es por esta razn que
se debe someter a la muestra a un proceso de purificacin, antes de extraer el
alcaloide, la alcalinizacin del medio y la adicin de solventes clorados, hace que estas
sustancias formen emulsiones estables, que difcilmente pueden ser separadas por
procesos mecnicos. Esto nos indica que el proceso que llevamos a cabo en la prctica
fue el correcto ya que, adicionamos NH4OH y CHCl3, obteniendo as tres fases: acuosa,
emulsin y orgnica en la cual se evidenci la presencia de alcaloides.
Segn Roca y Mroginski, 1991, la planta de guanto contiene varios alcaloides, uno de
los cuales es la escopolamina. Mientras Radice y Vidari, 2007, afirman que las especie
Ilex guayusa Loes (guayusa) es fuente de varios alcaloides entre los cuales se destacan
la cafena, teobromina y harmina. Segn Primo, 2007, el reactivo de Dragendorff,
produce un precipitado naranja rojizo, cuando se pone en contacto con la solucin
cida de alcaloides, el reactivo de Wagner produce un precipitado amarillento, y el
reactivo Meyer, un precipitado blanco, lo cual indica la presencia de alcaloides en la
muestra. Nuestras muestras de guanto y guayusa, dieron positivo para estos tres tipos
de reactivos, lo cual afirma que el guanto presenta escopolamina, y la guayusa,
harmina, la cafena y teobromina son alcaloides imperfectos por lo tanto no dan
positivo con estas pruebas.
Para la cromatografa de columna es conveniente disminuir la polaridad de la muestra
mediante metilacin de los OH libres, con diazometano o yoduro de metilo, amoniaco,
etc. La fase fija a utilizar es slica gel y el solvente de corrida habitual es la mezcla
metanol: amonaco (99/1) (Primo, 2007). Todos los alcaloides son activos a la luz
polarizada. Presentan una fluorescencia caracterstica bajo la luz UV. Esto confirma
que en nuestro ensayo la fluorescencia que presento la guayusa, color meln, y el
guanto, color azul, sean diferentes, ya que es caracterstica para cada alcaloide.

Conclusiones:

El alcaloide presente en la plana de guanto es la escopolamina, mientras que la

de la guayusa es la harmina.
Mediante los reactivos de identificacin usados se pudo concluir que tanto la
guayusa como el guanto presentan alcaloides, ya que dieron positivo para estas
pruebas.
El mtodo de desengrasado, purificacin y extraccin que llevamos a cabo fue
el correcto ya que se logr obtener alcaloides en las dos muestras.
Las muestra vegetales en la cromatografa presentan diferente fluorescencia,
con lo que se concluye que sta es especfica para cada alcaloide.

ANEXOS
CUESTIONARIO:
1. Cules son las principales caractersticas de los alcaloides?
Los alcaloides en su estructura qumica tienen una molcula de nitrgeno que presenta
carcter bsico, puede tener una estructura compleja con varios ciclos. Son
estupefacientes y txicos, producen habituacin, otros se usan como medicamentos.
En las plantas los alcaloides se encuentran en forma de sales de las bases alcaloideas,
estas sales son solubles en agua mientras que las bases libres son insolubles en agua y
solubles en disolventes orgnicos no polares (Primo, 1995).
2. Cmo se los puede clasificar?
Para clasificar alcaloides existen diferentes maneras, una de ellas considera los ncleos
que lo forman.

Tomado de: Remington, 2003.

3. Cul es su rol en la naturaleza?

En servir de reserva para la sntesis de protenas
De materiales de proteccin contra ataques de insectos u otros animales herbvoros.
De estimulantes o reguladores de crecimiento o metabolismo interno o de
reproduccin.
De agentes finales de desintoxicacin por transformaciones simples de otras sustancias
cuya acumulacin puede resultar nociva para la planta.
4. Cul es el objetivo por el que un organismo vegetal la produce?
El principal objetivo por una planta produce este tipo de sustancias es como medio
defensa a otros insectos y plagas que afecten o alteren su metabolismo.
Bibliografa:
Primo, E. (1995). Qumica Orgnica bsica y aplicada: de la molcula a la
industria. Volumen 2. Editorial Reverte. Mxico. Pgs. 245, 678,873.
Remington. (2003). Farmacia. Tomo I. Edicin 20. Editorial Panamericana.
Argentina-Buenas Aires. Pgs.235, 489.
Climent Olmedo. Mara Jos. (2005). Experimentacin en qumica: qumica
orgnica. Ed. Univ. Politc. Valencia. Pg. 117.
Sharapin Nikolai. (2000). Fundamentos de tecnologa de productos Fitoteraputicos. Volumen 78 de Ciencia y Tecnologa. Editor Convenio Andrs
Bello. Ps.76
Radice Matteo y Vidari Giovanni. (2007). Caracterizacin Fitoqumica de la
especie Ilex guayusa Loes y elaboracin de un prototipo de fitofrmaco de
inters comercial. Universidad di Pavia. Italia. Pg.3
Roca William y Mroginski Luis. (1991). Cultivo de tejidos en la agricultura:
fundamentos y aplicaciones. Nmero 151. Editor CIAT. Pg. 659