FUNDAMENTO Y PRINCIPIOS

DEL METODO DE ELISA

Que es ELISA
La tcnica ELISA (Enzyme Linked Inmunoabsorvent Assay) se basa en la
deteccin de un antgeno inmovilizado sobre una fase slida mediante
anticuerpos que directa o indirectamente producen una reaccin cuyo
producto,
por
ejemplo
un
colorante,
puede
ser
medido
espectofotomtricamente

Dispositivos empleados en
ELISA
Fase solida
Los lectores ELISA son espectrofotmetros

Fases de un ensayo ELISA

Tipos de ELISA
Directo
Indirecto
Sandwich

Elisa.
1. Generacin: Primeros ensayos usaban lisados
de VIH
purificado, a menudo les faltaba sensibilidad y
especificidad.
2. Generacin: Los ensayos mejorados basados
en
protenas recombinantes y/o los peptidos sintticos,
que
tambin permitieron la produccin de VIH 1 y 2
combinado.
3. Generacin: tipo sndwich, usan un antgeno
marcado como conjugado, muy sensibles.
4. Generacin: detectan antgenos y
anticuerpos,
reducen el perodo de ventana.

p55

gp160
Enzimas p51/p66/p32/p10

gp41
Ncleo capsideo
p17/p24/p6/p7

Glicoproteinas

Capsideo p24

gp120

Substrato
HIV-1y HIV-2Antigeno conjugado
Anti-HIV-1 p24 conjugado
Anti-1/ Anti-2 en la muestra de Px.
HIV-1 p24 en muestra de pacientes
Anticuerpos monoclonales anti-p24

HIV-2 antgeno unido a los

micropososo
HIV-1 antgeno unido a los
micropososo