Copia de AM-PE-02 P ENSAYO COLIFORMES CTCFEC NMP V00

LABORATORIO DE
CONTROL AMBIENTAL
DIGESA
PROCEDIMIENTO
ENSAYO COLIFORMES TOTALES, FECALES Y E. COLI
PROCEDIMIENTO
LABORATORIO DE
CONTROL AMBIENTAL
DIGESA
Cdigo: AM-PE-02
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:
22/03/2010
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Revisin:
00
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00
Fecha
22/03/2010
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PROCEDIMIENTO
ENSAYO COLIFORMES TOTALES,
COLIFORMES FECALES Y E.COLI
Versin: 00
NOMBRE
APROBO
CARGO
Directora del Laboratorio de Control
Ambiental - DIGESA
Blga. Soledad Osorio Alva.

Blga. Edith Villanueva Huamn
REVISO
Blga.
Aydee
Warthon
ELABORO
FIRMA
Valenzuela
Blgo. Rafael Huapaya Porras.
Encargada del rea de calidad

Laboratorio de Control Ambiental
DIGESA.
Encargada del rea de microbiologa.
DIGESA.
Analista I. Area de microbiologia de
DIGESA.
FECHA
22/03/2010
15/03/2010
12/03/2010
10/01/2010
HISTORIAL DE REVISIONES
N
REVISIN
FECHA
SECCIN
MODIFICACIN EFECTUADA
Cualquier copia impresa diferente del original y cualquier archivo electrnico de este documento que se encuentre fuera la red de la de
la DIGESA, ruta CHIMU/LABORATORIO/ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD es considerado como COPIA NO
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CONTROLADA.
OBJETIVO
Describir el mtodo de ensayo para la numeracin de Coliformes totales, Coliformes
Fecales y Escherichia coli - tcnica de fermentacin de tubos mltiples, de acuerdo a lo
indicado en el Standard Mthod for the Examination of Water and Wastewater, 21th
edition, 2005, parte 9221 B. 9221 E1 y 9221 F respectivamente.
II
ALCANCE
Este mtodo se aplica a muestras de aguas de consumo humano, superficiales, de mar y
residual.
III
DOCUMENTOS RELACIONADOS
Instructivo de preparacin de medios de cultivo y diluyentes.
Procedimiento de aseguramiento de la calidad de los resultados.
IV
DEFINICIONES
4.1
Coliformes totales: bacterias que forman parte del grupo coliformes y son definidas como
bacilos Gram negativos, no esporulados que fermentan la lactosa con produccin de
cido y gas a 35 0.5 C dentro de las 48 3 horas.
4.2
Coliformes fecales: bacterias que forman parte del total del grupo coliformes y son
definidas como bacilos Gram negativos, no esporulados que fermentan la lactosa con
produccin de cido y gas a 44.5 0.2 C dentro de las 24 2 horas. La mayor especie
en el grupo de coliformes fecales es la Escherichia coli y en menor grado las especies de
Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter.
4.3
Numero ms probable (NMP): clculo de la densidad probable de bacterias coliformes

basadas en la combinacin de resultados positivos y negativos obtenidos en cada
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dilucin. La precisin de cada prueba depende del nmero de tubos utilizados. Tres
diluciones son necesarias para la obtencin del cdigo del NMP. Las tablas de NMP se
basan en la hiptesis de una distribucin de Poisson (dispersin aleatoria). La densidad
bacteriana se obtiene a travs de tablas en los que se presenta el lmite de confianza de
95% para cada valor determinado y se expresa como NMP de coliformes/100 mL.
V
RESUMEN
La metodologa de anlisis se basa en 2 fases:
Prueba presuntiva: consiste en colocar volmenes determinados de muestra de agua en
una serie de tubos conteniendo caldo lauril triptosa sulfato que luego son incubados a
35 0.5C durante 24 48 horas.
Prueba confirmativa: para la determinacin de coliformes totales, consiste en inocular los
tubos positivos de la prueba presuntiva en el caldo lactosado verde brillante bilis,
incubarlos a 35 0.5 C por 48 horas, para coliformes fecales en caldo EC y para
Escherichia coli en caldo EC con MUG, ambos tubos se incuban a 44.5 0.2 C por un
tiempo de 24 horas.
VI
6.1
La formacin de gas en los tubos de Durham as como la presencia de fermentacin y

turbiedad en los tubos, se considera reaccin positiva. Los resultados se expresan en
trminos de Nmero Ms Probable (NMP) de microorganismos.
DESARROLLO
Medios de cultivo y reactivos
6.1.1
6.1.2
6.1.3
6.1.4
6.1.5
6.1.6
Caldo lauril triptosa o sulfato (CLT).

Caldo lactosado verde brillante bilis (BRILLA)
Caldo EC
Caldo EC MUG
Agua de dilucin
Tiosulfato de sodio al 3%
6.2
Equipos y Materiales.
6.2.1
6.2.2
6.2.3
6.2.4
6.2.5
Adicionalmente a lo requerido en el Instructivo de preparacin de medios de cultivo y

diluyentes.
Incubadora a 35 0,5 C.
Bao Maria a 44,5 0,2 C.
Frascos de dilucin, capacidad de 100 mL autoclavables.
Pipetas serolgicas de 10 mL tolerancia de 2.5%.
Tubos de ensayos, resistentes al autoclavado, con dimensiones de 16 18 x 150 mm
(para medios de concentracin simple) y 20 x 150 mm (para concentracin doble).
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6.2.6
6.2.7
6.2.8
Tubos (campanas) Durham.

Probetas, matraces, esptulas, vasos de precipitacin, magnetos.
Asas de siembra de nquel-cromo o platino de 3,0 a 3,5 mm de dimetro.
6.3
Dilucin de la muestra
6.3.1
El nmero de diluciones a realizar depender del tipo de muestra; si es agua superficial o

residual.
6.3.2
Agitar vigorosamente aproximadamente 25 veces, para asegurar una buena

homogenizacin de la muestra, transferir con una pipeta estril un volumen de 10 mL de
la muestra a un frasco con 90 2 mL de agua de dilucin. De esta manera se obtiene la
primera dilucin (10-1).
6.3.3
Homogenizar el frasco que contiene la dilucin (10 -1), con una nueva pipeta estril
transferir 10 mL a un nuevo frasco de dilucin, obteniendo as la segunda dilucin (10 -2).
Continuar con este proceso hasta realizar todas las diluciones del caso, dependiendo del
grado de contaminacin de la muestra.
6.4
Prueba presuntiva
6.4.1. Antes de inocular en los tubos estos deben estar a temperatura ambiente.
6.4.2. Colocar los tubos en gradillas y codificarlos anotando el nmero asignado a la muestra y
dilucin a inocular.
6.4.3. Para agua de consumo humano utilizar 10 tubos de 10 mL de CLT a doble concentracin,
agitar el frasco de la muestra vigorosamente unas 25 veces, inocular 10 mL de muestra
en cada uno de los tubos y agitar suavemente antes de incubar.
6.4.4. Para otros tipos de agua, utilizar serie de 5 tubos conteniendo 10 mL de CLT de
concentracin doble y series de 5 tubos con 10 mL de CLT de concentracin simple para
cada dilucin. El nmero de serie de tubos depender del nmero de diluciones que se
haya determinado para cada muestra.
6.4.5. Agitar vigorosamente por unas 25 veces los frascos con las diluciones efectuadas y con
una pipeta estril transferir 1 mL comenzando de la dilucin ms alta, en cada uno de los
tubos con CLT de concentracin simple correspondiente a dicha dilucin, para ello se
puede utilizar la misma pipeta.
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6.4.6. De la muestra original transferir 1 mL a cinco tubos con CLT de concentracin simple y 10
mL en cinco tubos con CLT de doble concentracin. En los casos que se trabaje con
estos volmenes de muestra.
6.4.7. Incubar los tubos inoculados a 35 0.5 C. Despus de 24 2 horas examinar y separar
los tubos con CLT positivos, aquellos que presentan formacin de gas en el tubo Durham
(fermentacin) y turbiedad. Anotar los resultados. Todos los tubos positivos deben pasar
a la siguiente fase, la prueba confirmativa.
6.4.8. Reincubar los tubos negativos por 24 horas ms. Realizar la segunda lectura a las 48
horas. Nuevamente separar y anotar los resultados de los tubos positivos y pasarlos a la
prueba confirmativa y descartar los tubos negativos.
6.5
Prueba confirmativa
6.5.1 Coliformes totales

6.5.1.1 Antes de inocular en los tubos estos deben estar a temperatura ambiente.
6.5.1.2 Agitar los tubos positivos de la prueba presuntiva antes de ser inoculados en los tubos de
caldo BRILLA.
6.5.1.3 Con el asa de siembra estril, transferir una o mas asadas de un cultivo positivo de CLT a
un tubo con caldo BRILLA. Repetir el procedimiento para todos los tubos presuntivos.
6.5.1.4 Incubar los tubos inoculados a 35 0.5 C por 24 3 horas.
6.5.1.5 Despus de 24 3 horas de incubacin, retirar los tubos, agitarlos y observar la
produccin de gas, proceder a realizar la lectura considerando positiva toda formacin de
gas en los tubos Durham (Fermentacin) y turbiedad en los tubos. Anotar los resultados.
Reincubar los tubos negativos por otras 24 3 horas.
6.5.1.6 A las 48 horas, retirar los tubos, agitarlos y observar la produccin de gas, proceder a
realizar la lectura considerando positiva toda formacin de gas en los tubos Durham
(Fermentacin) y turbiedad en los tubos. Anotar los resultados.
6.5.1.7 Con las lecturas obtenidas a las 24 y 48 horas calcular el NMP de acuerdo a la frmula y
las porciones y combinaciones empleadas (vase anexo 2 o 3).
6.5.2 Coliformes fecales
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6.5.2.1 Antes de inocular en los tubos estos deben estar a temperatura ambiente.
6.5.2.2 Agitar los tubos positivos de la prueba presuntiva antes de ser inoculados en los tubos de
caldo EC.
un tubo con caldo EC. Repetir el procedimiento para todos los tubos presuntivos.
6.5.2.4 Incubar los tubos inoculados a 44.5 0.2 C en Bao Mara por 24 2 horas.
6.5.2.5 Luego de la incubacin, retirar los tubos, observar la produccin de gas y proceder a
realizar la lectura, considerando positiva toda formacin de gas en los tubos Durham
(Fermentacin) y turbiedad en los tubos. Anotar los resultados.
6.5.2.6 Con las lecturas obtenidos calcular el NMP de acuerdo a las porciones y combinaciones
empleadas (vase anexo 2 o 3).
6.5.3 Escherichia coli
un tubo con caldo EC con MUG. Repetir el procedimiento para todos los tubos
presuntivos.
6.5.3.2 Incubar los tubos inoculados a 44.5 0.2 C en Bao Mara por 24 2 horas.
6.5.3.3 Los tubos positivos (que presenten gas y turbiedad), se exponen a una lmpara de luz
UV de 365 nm, la presencia de una fluorescencia azul se considera como una reaccin
positiva para E. coli. Anotar los resultados.
6.5.3.4 Paralelo a los anlisis de las muestras, analizar los controles positivos de la
cepa de E. coli (MUG positiva), un control negativo cepa termotolerante de Klebsiella
pneumoniae (MUG negativa) y un medio de cultivo sin inocular.
6.5.3.5 Anotar los resultados obtenidos y calcular el NMP de acuerdo
porciones y combinaciones empleadas (vase anexo 2 o 3).
a la frmula y las
6.6
Determinacin del Nmero Mas probable (NMP)
6.6.1
El clculo de la densidad probable de bacterias Coliformes totales, fecales y E. coli est

basado en la combinacin de los resultados positivos y negativos obtenidos en cada
dilucin. La densidad de coliformes se expresa como NMP de coliformes por 100 mL y se
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obtiene a travs de la tabla en la que se presenta el lmite de confianza de 95% para

cada valor de NMP determinado.
6.6.2
Los valores de NMP, para una variedad de combinaciones de tubos positivos y negativos
se presentan en el anexo 2 y 3.
6.6.3
Los valores de NMP presentados en el anexo 2 se refieren especficamente a la

combinacin de resultados positivos obtenidos cuando son inoculados una serie de 10
tubos con volmenes de 10 mL de muestra.
6.6.4
Los valores de NMP presentados en el anexo 3 se refieren especficamente a la

combinacin de resultados positivos obtenidos cuando son inoculados series de 5 tubos
con volmenes de 10 mL, 1 mL, 0,1 mL de muestra.
6.6.5
Cuando se inoculan ms de tres series de diluciones decimales, seleccionar las tres

diluciones segn los ejemplos que se detallan: (ver cuadro 1 )
a) Como primer nmero del cdigo seleccionar la lectura correspondiente a la dilucin
ms alta que de resultados positivo en los 5 tubos y la lectura de las dos diluciones
subsiguientes para completar el cdigo. (Ejemplo 1).
b) Si la dilucin ms baja examinada tiene menos de cinco porciones con resultados
positivos, seleccinela y las siguientes dos diluciones mayores (Ejemplo 2 y 3).
c) Cuando ocurra un resultado positivo en una dilucin ms alta que en las tres
seleccionadas de acuerdo con las reglas aqu dadas, cambie la seleccin a la
dilucin ms baja que tenga menos de cinco resultados positivos y las siguientes dos
diluciones mayores (Ejemplo 4).
d) Cuando todas las reglas de seleccin dadas aqu hayan dejado sin seleccionar
cualquier dilucin mayor con resultados positivos, aada el resultado de aquellas
diluciones mayores con resultados positivos al resultado de la dilucin anterior.
(Ejemplo 5).
e) Si no hubieran suficientes diluciones mayores examinadas para seleccionar tres
diluciones, entonces seleccione la siguiente dilucin menor (anterior) (Ejemplo 6).
Tabla N 1: Valores para la seleccin del cdigo
Ejemplos
Tubos positivos / mL y volumen de muestra

10
0.1
0.01
0.001
Cdigo
NMP /100 mL
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5-1-0
330
4-5-1
48
0-0-1
1,8
4-4-1
400
4-4-1
400
5-5-2
54 000
6.6.6 Calcular el valor de NMP de acuerdo a la siguiente formula:

NMP / 100 mL = Valor de la tabla X
10
V (*)
(*) Volumen de muestra inoculada en la primera dilucin seleccionada.
6.7
Control de calidad
6.7.1
Por cada muestra o lote de muestras que se analice, realizar controles positivos y
negativos utilizando las cepas de trabajo de acuerdo a la siguiente tabla:
Tabla 2: Cepas utilizadas como control para los ensayos microbiolgicos de
Coliformes totales, Coliformes fecales y E. coli.
GRUPO
CONTROL POSITIVO
Coliformes totales
Escherichia coli
Enterobacter aerogenes
Coliformes fecales
Escherichia coli
Escherichia coli
Escherichia coli
(MUG positiva)
CONTROL NEGATIVO
Staphylococcus aureus
Pseudomonas sp.
Enterobacter aerogenes
Klebsiella pneumoniae
(MUG negativa)
6.7.2
Ver Procedimiento de aseguramiento de la calidad de los resultados (AM-PT-02)
VII
FORMATOS / REGISTROS
F01-AM-PE-01 Reporte de ensayos microbiolgicos de aguas
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REFERENCIAS
8.1 Standard Methods for the Examination of water and wastewater, 21 th Edition 2005, parte
9221 B. 9221 E1 y 922.
IX
ANEXOS
N ANEXO
TITULO
Diagrama de flujo del procedimiento.

ndice de NMP al 95% de confianza para resultados de combinaciones de
tubos positivos y negativos cuando se usan 10 tubos inoculados con 10 mL
de muestra.
ndice de NMP al 95% de confianza para varias combinaciones de
resultados positivos cuando se usan 5 tubos por dilucin (10mL, 1,0mL, 0,1
mL).
Composicin y preparacin de los medios de cultivos y reactivos.
3
4
ANEXO 1: Diagrama de flujo del procedimiento
PR
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E
S
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T
I
C
O
N
F
I
R
M
A
T
I
VA
AD: Agua de dilucin

X: Concentracin medio de cultivo
ANEXO II: ndice de NMP al 95% de confianza para resultados de combinaciones de tubos positivos y
negativos cuando se usan 10 tubos inoculados con 10 mL de muestra.
N de tubos positivos de
ndice de NMP/100 mL
Lmite de confianza al 95%
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Bajo
Alto
(volumen de 10 mL c/u)
0
< 1,1
----
3,4
1,1
0,051
5,9
2,2
0,37
8,2
3,6
0,91
9,7
5,1
1,6
13
6,9
2,5
15
9,2
3,3
19
12
4,8
24
16
5,8
34
23
8,1
53
10
> 23
13
----
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ANEXO III: ndice de NMP al 95% de confianza para varias combinaciones de resultados positivos cuando
se usan 5 tubos por dilucin (10mL, 1,0mL, 0,1 mL).
Combinaci
n de
positivos
000
NMP /
100 mL
001
010
011
020
021
030
100
101
102
110
111
112
120
121
130
131
140
200
201
202
210
211
212
220
221
222
1.8
1.8
3.6
3.7
5.5
5.6
2
4
6
4
6.1
8.1
6.1
8.2
8.3
10
10
4.5
6.8
9.1
6.8
9.2
12
9.3
12
14
Lmite de Confiabilidad
Bajo
Alto
< 1.8
0.09
0.09
0.7
0.7
1.8
1.8
0.1
0.7
1.8
0.71
1.8
3.4
1.8
3.4
3.4
3.5
3.5
0.79
1.8
3.4
1.8
3.4
4.1
3.4
4.1
5.9
Combinacin
de positivos
6.8
403
NMP /
100
mL
25
6.8
6.9
10
10
15
15
10
10
15
12
15
22
15
22
22
22
22
15
15
22
17
22
26
22
26
36
410
411
412
413
420
421
422
423
430
431
432
440
441
442
450
451
500
501
502
503
510
511
512
513
520
521
17
21
26
31
22
26
32
38
27
33
39
34
40
47
41
48
23
31
43
58
33
46
63
84
49
70
Lmite de Confiabilidad
Bajo
Alto
9.8
6
70
40
6.8
9.8
10
6.8
9.8
10
14
9.9
10
14
14
14
15
14
15
6.8
10
14
22
10
14
22
34
15
22
42
70
70
50
70
70
100
70
70
100
100
100
120
100
120
70
70
100
150
100
120
150
220
150
170
CONTROLADA.
LABORATORIO DE
CONTROL AMBIENTAL
DIGESA
230
231
240
300
301
302
310
311
312
320
321
322
330
331
332
340
341
350
400
401
402
PROCEDIMIENTO
12
14
15
7.8
11
13
11
14
17
14
17
20
17
21
24
21
24
25
13
17
21
4.1
5.9
5.9
2.1
3.5
5.6
3.5
5.6
6
5.7
6.8
6.8
6.8
6.8
9.8
6.8
9.8
9.8
4.1
5.9
6.8
26
36
36
22
23
35
26
36
36
36
40
40
40
40
70
40
70
70
35
36
40
522
523
524
530
531
532
533
534
540
541
542
543
544
545
550
551
552
553
554
555
94
120
150
79
110
140
170
210
130
170
220
280
350
430
240
350
540
920
1600
>1600
Cdigo: AM-PE-02
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Fecha
:
22/03/2010
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34
36
58
22
34
52
70
70
36
58
70
100
100
150
70
100
150
220
400
700
230
250
400
220
250
400
400
400
400
400
440
710
710
1100
710
1100
1700
2600
4600
ANEXO IV: Composicin y preparacin de los medios de cultivos y reactivos.
1. Caldo lauril triptosa. Composicin:

Tryptosa
Lactosa
Dipotasio hidrogeno fosfato K2HPO4
Potasio dihidrogeno fosfato, KH2PO4
Cloruro de sodio
Lauril sulfato de sodio
Agua destilada
20.0
g
5,0
g
2,75
g
2,75
g
5,0
g
0,1
g
1L
CONTROLADA.
LABORATORIO DE
CONTROL AMBIENTAL
DIGESA
Cdigo: AM-PE-02
Revisin: 00
Fecha
:
22/03/2010
Pgina : 15 de 17
PROCEDIMIENTO
Preparacin:
Disolver 35.6 g del medio deshidratado por litro de agua destilada (caldo simple). Ajustar el pH a
6.8 0.2 y distribuir 10 mL del medio en tubos de ensayo de 16 18 x 150 mm provisto en su
interior con un tubo de fermentacin invertido (Durham), tapar y esterilizar a 121C durante 15
minutos. Para caldo de doble concentracin, (vase el cuadro 1) disolver 71.2 g del medio
deshidratado por litro de agua destilada. Ajustar el pH a 6.8 0.2 Distribuir 10 mL Del medio en
tubos de ensayo de 20 x 150 mm provistos tambin en su interior con tubos Durham y proceder
como en el caso anterior.
Tabla 1: Concentracin de caldo lauril triptosa en funcin al volumen de muestra adecuado
Tubos con
CLT
Volumen de
Muestra mL
Concentracin del
Medio
CLT
g/L
mL
10
0.1 a 1.0
10
10
1 x (simple)
35.6
2 x (doble)
71.2
2. Caldo lactosado verde brillante bilis lactosa (BRILLA): Composicin:

Peptona 10,0 g Lactosa 10,0 g Oxgall
20,0 g
Verde brillante
1 L.
Preparacin:
Disolver 40 g de medio BRILLA en un litro de agua destilada. Distribuir 10 mL. En tubos de ensayo
provisto con tubos Durham invertidos. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121 C.
3. Caldo EC
Composicin:
Triptosa o tripticasa
Lactosa
Mezcla de sales biliares N 3
Potasio dihidrogeno fosfato, KH2PO4
Cloruro de sodio
20,0
g
5,0
g
1,5
g
2,75
g
2,75
g
5,0
CONTROLADA.
LABORATORIO DE
CONTROL AMBIENTAL
DIGESA
PROCEDIMIENTO
Agua destilada
Cdigo: AM-PE-02
Revisin: 00
Fecha
:
22/03/2010
Pgina : 16 de 17
g
1L
Preparacin:
Disolver 37 g de medio EC - MUG en un litro de agua destilada. Distribuir 10 mL. En tubos de
ensayo provisto con tubos Durham invertidos. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121
C.
4. Caldo EC - MUG.
Composicin:
Triptosa o tripticasa
Lactosa
Mezcla de sales biliares N 3
dihidrogeno fosfato, KH2PO4 2,75g
Cloruro de sodio
4-metylumberiferil--D-glucoronido (MUG)
Agua destilada
20,0 g
5,0 g
1,5 g
2,75 g Potasio
5,0 g
0,05 g
1L
Preparacin:
Disolver 37 g de medio EC - MUG en un litro de agua destilada. Distribuir 10 mL En tubos de
ensayo provisto con tubos Durham invertidos. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121
C.
5. Agua de dilucin
Para el agua de dilucin, es necesaria la preparacin de soluciones Stock A y B.
Solucin Stock A: Disolver 34 g de fosfato monopotsico (KH2PO4) en 500 mL. De agua destilada,
al ajustar el pH a 7.2 0.5 con hidrxido de sodio (NaOH 1N), y completar el volumen a un litro
con agua destilada. Autoclavar por 15 minutos a 121C.
Solucin Stock B: Disolver 81.1 g de cloruro de magnesio (MgCl 26H2O) en un litro de agua
destilada. Autoclavar por 15 minutos a 121C.
Agregar 1.25 mL. De la dilucin Stock A y 5 mL de la solucin Stock B a un litro de agua
destilada. Distribuir en frascos en cantidades que aseguren, luego de llevarlo a la autoclave por 15
minutos a 121C, un volumen de 90 2 mL
6. Tiosulfato de sodio
Disolver 3 g de tiosulfato de sodio en 100 mL de agua destilada para obtener una concentracin
del 3%. Para agua potable, agua clorada, colocar en los frascos de muestreo 0,1 mL de esta
solucin (antes de su esterilizacin), por cada 100 mL de capacidad del frasco.
CONTROLADA.
PROCEDIMIENTO
LABORATORIO DE
CONTROL AMBIENTAL
DIGESA
Cdigo: AM-PE-02
Revisin: 00
Fecha
:
22/03/2010
Pgina : 17 de 17
CONTROLADA.

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LABORATORIO DE

Blga. Soledad Osorio Alva.

Blgo. Rafael Huapaya Porras.

Encargada del rea de calidad

Numero ms probable (NMP): clculo de la densidad probable de bacterias coliformes

La formacin de gas en los tubos de Durham as como la presencia de fermentacin y

Caldo lauril triptosa o sulfato (CLT).

Adicionalmente a lo requerido en el Instructivo de preparacin de medios de cultivo y

Tubos (campanas) Durham.

El nmero de diluciones a realizar depender del tipo de muestra; si es agua superficial o

Agitar vigorosamente aproximadamente 25 veces, para asegurar una buena

6.5.1 Coliformes totales

Determinacin del Nmero Mas probable (NMP)

El clculo de la densidad probable de bacterias Coliformes totales, fecales y E. coli est

obtiene a travs de la tabla en la que se presenta el lmite de confianza de 95% para

Los valores de NMP presentados en el anexo 2 se refieren especficamente a la

Los valores de NMP presentados en el anexo 3 se refieren especficamente a la

Cuando se inoculan ms de tres series de diluciones decimales, seleccionar las tres

Tubos positivos / mL y volumen de muestra

6.6.6 Calcular el valor de NMP de acuerdo a la siguiente formula:

(*) Volumen de muestra inoculada en la primera dilucin seleccionada.

Ver Procedimiento de aseguramiento de la calidad de los resultados (AM-PT-02)

Diagrama de flujo del procedimiento.

ANEXO 1: Diagrama de flujo del procedimiento

AD: Agua de dilucin

Lmite de confianza al 95%

ANEXO IV: Composicin y preparacin de los medios de cultivos y reactivos.

1. Caldo lauril triptosa. Composicin:

2. Caldo lactosado verde brillante bilis lactosa (BRILLA): Composicin:

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