Amelogenesis dapat dibagi menjadi setidaknya tiga fase:

sekresi, ketika sebagian besar protein enamel gigi adalah disekresikan; transisi, ketika
ameloblasts kehilangan sebagian besar mereka organel sekretori, mempersingkat dan
kehilangan proses Tomes mereka, dan invasi kapiler terjadi ke dalam organ enamel; 1 dan
pematangan, ketika enamel kehilangan air dan organik material, yang digantikan oleh
pertumbuhan kristal, 1 menjadi jaringan paling sangat termineralisasi di body.2 yang
ameloblasts tahap pematangan menutupi matriks enamel di tahap pematangan; Namun, peran
yang dimainkan oleh sel-sel ini dalam proses pematangan tidak sepenuhnya understood.3
antara peran diusulkan untuk sel-sel ini, kita akan menyoroti dua yang mungkin. Yang
pertama adalah bahwa tahap pematangan ameloblast adalah penting untuk penghapusan
matriks organik. Yang kedua adalah bahwa sel menciptakan kondisi untuk enamel untuk
mencapai yang sangat kandungan mineral yang tinggi, dan peran ini akan menjadi
independen penghapusan matriks organik.
ameloblasts tahap pematangan menjalani morfologi siklik transisi antara sel dengan
mengacak-acak dan halus apikal borders4-8 dan beberapa studi telah berkorelasi ameloblast
ini transisi dengan hilangnya content.9,10 organik Karena munculnya kloning molekuler,
karakterisasi beberapa protein enamel telah menunjukkan kehadiran proteinase di enamel,
yang mampu menurunkan sebagian besar protein struktural enamel menjadi chains11
polipeptida kecil yang akan meninggalkan enamel oleh paracellular route.12 normal aktivitas
proteolitik tampaknya diperlukan untuk normal amelogenesis, karena didukung oleh studi
Model sistem gugur. enamel diubah terbentuk di MMP-20 mice.13,14 nol Selanjutnya, ada
keluarga amelogenesis imperfecta di mana fenotipe enamel rusak terkait dengan gen
amelogenin defect15 yang mungkin menyebabkan penurunan hidrolisis amelogenin oleh
MMP-20.16,17 Sebuah mutasi dalam hasil gen MMP-20 di autosomal resesif hypomaturation
amelogenesis imperfecta.18 Sebuah mutasi pada gen yang mengkodekan KLK-4 juga
mengarah
untuk fenotipe enamel manusia yang berhubungan dengan amelogenesis
imperfecta.19 Semua bukti-bukti ini mendukung pandangan bahwa
protein enamel terdegradasi oleh proteinase penduduk di
matriks. Dengan demikian, proteolisis dan penghapusan matriks organik mungkin
acara independen ekstraselular kehadiran
ameloblasts tahap pematangan. Enamelysin, juga dikenal sebagai
MMP-20, merupakan enzim tertentu yang disekresi ke dalam matriks enamel
selama tahap sekretori, dan itu menunjukkan bahwa secara khusus
memotong amelogenin, 20 dan amelogenins terdiri 90% dari
kandungan protein total tahap sekretori enamel.3 gigi

Kallikrein 4 (KLK-4) adalah protease disekresikan ke enamel

dalam fase transisi, aktif dalam tahap pematangan,
ketika aksi katalitik non-spesifik seharusnya
penting untuk menghilangkan akhir protein dari enamel
matrix.11
Mengenai peran kedua yang diusulkan untuk tahap pematangan
ameloblasts, sel-sel ini mungkin menciptakan kondisi yang memadai untuk
curah hujan mineral dalam enamel membentuk atau mengerahkan langsung
kontrol atas masuknya kalsium ke dalam enamel. Kurang dikenal
tentang kemungkinan peran ini, dan tidak ada bukti langsung ada begitu jauh sehingga
ameloblasts tahap pematangan sangat penting untuk enamel untuk
mencapai kandungan mineral yang sangat tinggi. Kandungan mineral enamel
(% Berat) meningkat dari sekitar 30% dan 48% di sekretori yang
dan pematangan awal tahap, masing-masing, menjadi sekitar 95% pada
akhir pematangan stage.3 Kalsium dan fosfat konsentrasi
meningkat dari 17% dan 8%, masing-masing di sekretorik yang
panggung untuk sekitar 37% dan 17,5%, masing-masing pada akhir
pematangan stage.21 Fosfat diambil selama pematangan
Tahap tegas terperangkap di dalam kristal dan menjadi
tidak dapat diakses untuk pertukaran di permukaan. Oleh karena itu, kristal
tumbuh lebar selama stage.22 ini Sebagai kandungan mineral
meningkat, kekerasan enamel juga increases.21 The siklik
modifikasi antara polos dan ruffle-berakhir sel mungkin
terkait dengan masuknya kalsium ke dalam enamel. Dalam ruffle-berakhir
ameloblasts, persimpangan ketat epitel yang terletak di dekat
permukaan enamel dan kalsium seharusnya mengambil transelular sebuah
rute. Dalam ameloblasts halus-berakhir, ada permeabilitas yang

pelanggaran, yang memungkinkan kalsium untuk mengambil route.23,24 paracellular

Ameloblasts mulai untuk mengekspresikan penyimpanan kalsium dan transportasi
protein, 25 dan mereka juga menggandakan konten mitokondria
selama maturation.26 Peningkatan jumlah mitokondria
dan di daerah permukaan membran khas dari epitel yang
melaksanakan ion transport.27 aktif demikian, ada biokimia
dan bukti-bukti morfologi menunjukkan bahwa ruffle-berakhir
ameloblasts aktif mengangkut ion. Namun, pertanyaannya
tetap apakah ion ameloblasts ruffle-berakhir transportasi
dari enamel atau enamel. Setelah 45Ca injeksi,
kalsium fosfat terbukti disetorkan langsung ke
matriks enamel dan tidak ada kalsium berlabel terdeteksi di
ameloblasts.28 The afinitas tinggi kalsium protein yang mengikat,
calbindin 28 kDa sangat down-diatur selama pematangan,
bertentangan dengan konsep yang calbindins mungkin bertindak sebagai
feri kalsium transelular selama phase.29 pematangan
Oleh karena itu, masih belum pasti apakah protein dijelaskan
untuk menjadi bagian dari aparat kalsium transportasi pematangan
ameloblasts sangat penting untuk yang kedua untuk secara aktif transportasi
kalsium ke enamel atau apakah mereka adalah evolusi
akuisisi yang memungkinkan sel-sel ini untuk mengatasi dengan kalsium kaya
lingkungan ekstraselular. Selain kalsium aktif
transportasi, pematangan ameloblasts panggung mungkin membuat
penghalang fisik yang akan menciptakan lingkungan mikro yang memadai
untuk presipitasi mineral dalam matriks enamel. Itu juga
mungkin untuk berspekulasi bahwa microenvironments seperti itu ada di
pembentukan enamel karena persimpangan ketat di ameloblasts yang berdekatan

terbentuk dan diciptakan setidaknya tiga kali sehari di

yang model.30,3 tikus insisivus Dalam terang fakta ini, langsung
bukti bahwa ameloblasts tahap pematangan penting untuk
mineralisasi enamel yang tepat akan berkontribusi lebih baik
pemahaman proses mineralisasi enamel.
Kami telah mengembangkan prosedur pembedahan yang menghilangkan
ameloblasts tahap pematangan dan sel-sel organ enamel lainnya
dari gigi seri tikus terus berkembang. Dengan cara seperti
prosedur, enamel terbentuk dengan tidak adanya sel-sel ini dapat
diperoleh dan dipelajari.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menguji apakah bedah
penghapusan ameloblasts tahap pematangan mempengaruhi protein
dan / atau tingkat mineralisasi enamel di
terus berkembang Model gigi seri tikus.
2. Bahan-bahan dan metode-metode
Laki-laki tikus Wistar dengan berat rata-rata 250 g (240-260 g)
telah dipakai. Sepanjang penelitian ini, hewan disimpan di bawah
kondisi yang dikontrol pencahayaan (12-h ringan, 12-h gelap) dan
suhu (25-30 8C), dengan libitum makanan dan air iklan. Itu
protokol eksperimental telah disetujui oleh Universitas
Komite Etik Penelitian Animal (CEEA - IB - UNICAMP,
nomor protokol: 556-1).
Gigi insisivus kiri digunakan sebagai gigi eksperimental dari
yang ameloblasts tahap pematangan yang pembedahan
dihapus. Prosedur bedah digambarkan oleh Merzel
et al.31 Secara singkat, di bawah anestesi dengan ketamin (90 mg / kg)
dan xylasine (8 mg / kg), batas bawah dari hemimandible kiri

terkena. Menggunakan osteotome kecil, 4 mm dari

tulang yang dihapus mulai dari penyisipan anterior
perut otot digastrikus sampai ke tingkat akar mesial molar bawah kedua, sehingga
mengekspos permukaan labial dari
gigi seri. Daerah terkena terdiri transisi dan
zona pematangan awal enamel organ.32 enamel The
dimundurkan dengan sepotong kain kasa, untuk menghapus enamelrelated
periodonsium (gigi folikel) dan organ enamel.
Excavator dipekerjakan untuk menghapus jaringan yang sama di
permukaan lateral. Sejumlah 15 berkas endodontik diperkenalkan
ke bagian insisal dari ruang periodontal labial sampai ujungnya
muncul melalui margin gingiva, untuk merusak
jaringan lunak yang sama meliputi enamel-terkait dengan diastema tersebut.
Dua takik dibuat dalam enamel terkena, untuk menandai
perluasan dari lesi utama. Untuk menghindari kemungkinan baru
sel tumbuh untuk terisi kembali enamel terkena, yang odontogenik
area gigi yang direseksi. Sayatan pada kulit
Berikut pesawat antara sudut mulut dan
meatus auditorius eksternal dan sayatan kedua anterior
setengah dari otot masseter, di atas saraf wajah, terkena
elevasi tulang kebiruan terkait dengan organ odontogenik.
Tulang ini telah dihapus dan soket itu benar-benar
dikuret dengan excavator gigi, untuk menghilangkan odontogenik
organ.
Gigi seri bawah tepat tetap utuh dan digunakan sebagai
kontrol. Kedua gigi seri bawah yang ditandai dengan takik di
margin gingiva, sehingga perubahan tingkat letusan bisa

diikuti.
2.1. Histologi
Lima tikus tewas di masing-masing interval waktu berikut: 1, 7,
14 dan 21 hari setelah operasi dan ketika insisal kedudukan dari
gigi seri tersisa muncul di rongga mulut. The hemimandibles
yang dibedah dan, setelah penghapusan semua jaringan lunak eksternal,
mereka tenggelam ke dalam 10% buffer formalin pH 7,4 untuk
48 h. Setelah diradiografi, yang hemimandibles yang
demineral dengan 5% asam nitrat dalam 10% formol. radiografi
membantu untuk melokalisasi daerah gigi insisivus antara
takik, dan dipandu persiapan tiga 4 mm panjang,
blok transversal bernama: tes, antara tanda; insisal,
anterior ke tanda insisal dan terkait dengan diastema; dan basal,
posterior basalmark dan terkait dengan ameloblasts sekretorik.
Tiga blok dari gigi insisivus kontrol yang dipotong sejajar dengan
takik divisualisasikan dalam gigi eksperimental. segmen
yang tertanam dalam Paraplast dan semiserial lintas 5 mm-tebal
bagian yang bernoda dengan hematoksilin dan eosin.
2.2. Pemindaian mikroskop elektron (SEM)
Lima tikus tewas ketika kedudukan insisal terlihat di
rongga mulut hewan. Gigi seri diekstraksi dan
tetap seperti yang dijelaskan untuk histologi. Sebuah garis tipis dicat di
Pesawat midsagittal dari gigi seri, di muka labial gigi,
sehingga gigi bisa dipotong dan dipoles tanpa hilang
pesawat ini. Gigi seri dipotong menggunakan gergaji jaringan keras dan
bagian yang dipoles dengan amplas dengan menurunnya
granulasi, 600-4000, menggunakan air. Setelah membersihkan

bagian dalam rendaman USG, mereka terukir dengan 37%

asam fosfat selama 30 s, semalam dehidrasi pada 37 8C, dan
ditutupi dengan kulit tipis emas. Analisis wilayah uji adalah
dilakukan dalam JEOL Scanning Electron Microscope, Model JSM5600LV (Tokyo-Jepang).
2.3. Analisis mikroskop cahaya dari enamel mineral
Satu bagian midsagittal (100 mm-tebal) dari 10 tikus tewas ketika
yang insisal kedudukan muncul ke dalam rongga mulut disiapkan sebagai
dijelaskan di atas dan dipasang di dalam air untuk analisis di cerah
lapangan (konvensional), bidang gelap dan terpolarisasi cahaya mikroskop.
Tanda birefringence ditentukan dengan Red Saya Plat
dan warna keterbelakangan terdaftar di photomicrographs.
Tes, insisal dan daerah basal dianalisis.
2.4. pengujian microhardness
Gigi seri bawah dari 12 tikus, tewas ketika tanda insisal
muncul di mulut, dan kelompok lain 10 tikus, tewas
ketika kedua takik yang jelas, yang digunakan untuk enamel
cross-sectional pengujian microhardness, seperti yang dijelaskan untuk tikus
enamel.33 Gigi, tetap seperti dijelaskan di atas, yang tertanam
di resin akrilik dengan wajah mesial diposisikan ke arah
bawah blok. Setiap blok itu tanah sejauh
tengah gigi dan dipoles. Di bawah 10 lensa mata, yang
blok yang berorientasi dengan sumbu panjang indentor (Model
FMA-ARS, Future Tech Corp, Tokyo, Jepang) sejajar dengan
junction dentin-enamel. Lima lekukan, di masing-masing
tiga daerah bernama, dibuat dari luar 30 mm dari
enamel, 100 mm terpisah dari satu sama lain, menggunakan beban 25 g dan

waktu 5 s.
2.5. Fourier transform infrared (FTIR) spektroskopi
Untuk analisis FTIR, sampel enamel dari daerah antara
takik lima tikus tewas ketika insisal kedudukan muncul
di mulut adalah bubuk. Bubuk enamel itu
dipisahkan dari dentin menggunakan bromophorm / aseton
mixture34 dicampur dengan kalium bromida (KBr) dan dipadatkan
menjadi pellet kering 13 mm-lebar. Pelet yang
dianalisis dalam FTIR Spektrometer (Nicolet 380, ThermoNicolet,
USA) menggunakan mode transmisi. Setelah pengukuran,
daerah di bawah pita penyerapan obligasi C-H adalah
dihitung dengan menggunakan software Origin1. Untuk prosedur ini, kami
dikurangi latar belakang dan terintegrasi band C-H dengan
bilangan gelombang berkisar antara 3000 dan 2820 CM1
.
2.6. analisis protein
enamel belum matang itu dikorek dari tes dan basal
daerah eksperimental dan kontrol gigi seri dari lima hewan
menewaskan satu minggu setelah operasi. Protein diekstraksi
dari enamel menggunakan asam trikloroasetat (TCA)
method.35 Singkatnya, sampel disimpan semalam di 0 8C
di TCA mengandung koktail protease inhibitor, dan mereka
kemudian disentrifugasi pada 2500 g dan 4 8C selama 45 menit. Itu
pelet yang dilarutkan kembali dalam 6 M urea. Jumlah protein /
mg enamel ditentukan dengan metode Bradford
(BioRad, Hercules, USA). Untuk evaluasi kualitatif, 25 mg
protein dari empat kontrol dan empat sampel uji yang digunakan untuk

pemisahan dengan elektroforesis menggunakan Laemmli terputus

sistem penyangga SDS-PAGE36 dilakukan di 15% gel.
Sampel dicampur dengan mengurangi buffer sampel dan dipanaskan
100 8C selama 10 menit sebelum elektroforesis. Gel yang bernoda
dengan nitrate.37 perak
Profil protein enamel matang diperoleh
teknik yang sama dijelaskan di atas, tetapi menggunakan enamel keras
sampel yang diambil dari tes dan daerah basal dari
gigi eksperimental lima hewan tewas ketika insisal yang
notch mencapai rongga mulut. Sesuai sampel
enamel dari hewan kontrol yang digunakan. Untuk mendapatkan
sampel enamel mineral untuk analisis protein, labial yang
permukaan gigi bubuk, dan enamel / dentin
pemisahan bubuk dilakukan dengan menggunakan bromophorm a /
aseton mixture.34 Bubuk enamel kemudian digunakan untuk TCA
ekstraksi protein, seperti dijelaskan di atas. Jumlah protein /
enamel mg ditentukan dengan metode fluoresensi, menggunakan
yang NanoOrange protein kuantifikasi kit (Invitrogen, Molecular
Probe, Eugene, Oregon, USA). Untuk evaluasi kualitatif,
0,3 mg protein dari dua kontrol dan dua sampel eksperimental
digunakan untuk pemisahan dengan elektroforesis menggunakan Laemmli
sistem penyangga terputus SDS-PAGE36 dilakukan di 15%
minigels. Sampel dicampur dengan mengurangi buffer sampel
dan dipanaskan sampai 100 8C selama 10 menit sebelum elektroforesis. gel
ternoda dengan Sampel nitrate.37 perak disimpan di atas es
selama semua prosedur ekstraksi. Inhibitor dari semua kelas
proteinase dipekerjakan.

2.7. Analisis statistik

Perbandingan antara eksperimen dan kontrol data dilakukan
dengan t-test. Tingkat diterima signifikansi adalah 5%.
3. Hasil
gigi seri eksperimental meletus pada tingkat yang jauh lebih lambat dari
yang kontrol, membenarkan observations.32 sebelumnya Ketika
daerah uji terlihat (setelah munculnya tanda basal),
enamel itu sulit tapi keputihan bukannya kuning seperti di
gigi kontrol, karena tidak adanya ameloblasts pematangan
yang deposito besi pada permukaan enamel pada akhir
maturation.38 yang
Enamel organ dan folikel gigi yang benar
dihapus dari wilayah tes seperti yang terlihat di bagian tikus
membunuh 1 hari setelah operasi (Gbr. 1A). Di wilayah ini, satu minggu setelah
operasi, tulang alveolar dan folikel gigi yang
regenerasi, tetapi bukan organ enamel. enamel itu tidak
benar-benar dihapus oleh asam dan beberapa sisa-sisa
enamel matriks ditemukan (Gambar. 1B). Hasil yang sama adalah
diamati pada dua (Gambar. 1C) dan tiga minggu (Gambar. 1D) setelah
operasi. Kontrol bagian gigi seri menunjukkan kematangan yang normal
ameloblasts tahap meliputi ruang enamel (Gambar. 1F). Pengembangan
dari lapisan tipis sementum menutupi enamel di
wilayah uji diamati di beberapa gigi seri eksperimental
(Gambar. 1E). The insisal notch dari gigi seri tersisa muncul di
rongga mulut dalam waktu yang berbeda, berkisar antara 21 sampai 60 hari setelah
operasi.
Orientasi dan ketebalan batang enamel yang

serupa di wilayah uji dari eksperimen dan kontrol

gigi seri, seperti yang diungkapkan oleh SEM (Gambar. 2A dan B).
lapangan terang, lapangan gelap, dan polarisasi cahaya mikroskop
mengungkapkan heterogenitas dalam pola mineralisasi dari
wilayah tes di bagian dianalisis. Beberapa bagian (2/5) dari
gigi eksperimental yang normal (Gambar. 3J-L), menjadi
mirip dengan gigi seri control (Gambar. 3A-C) dengan keterbelakangan
warna dekat dengan yang dari Red I piring. Hal ini menunjukkan positif rendah
birefringence. Namun, beberapa bagian (3/5) memberi bukti
enamel mineral kurang, dipandang sebagai enamel buram dengan gelap
bidang mikroskop dan enamel lebih positif birefringent oleh
mikroskop polarisasi, diidentifikasi oleh warna keterbelakangan lebih tinggi
(Gambar. 3D-I).
Sebuah penurunan yang signifikan (P <0,001) di microhardness adalah
diamati di seluruh wilayah uji insisivus eksperimental
dibandingkan dengan gigi seri kontrol (Gambar. 4).
Dibandingkan dengan kontrol, sinyal FTIR untuk obligasi C-H
lebih tinggi di wilayah uji semua lima eksperimental
gigi seri. Namun, perbedaan sedikit diamati sebagai
waktu gigi seri mengambil meletus meningkat (Gambar. 5A). peningkatan
jumlah protein dalam enamel gigi seri eksperimental
diamati (Gambar. 5B) (P = 0,03). obligasi C-H yang spesifik untuk
bahan organik, yang sangat tinggi di aminoacids dan
rantai hidrokarbon. Karena tidak diharapkan untuk menemukan hidrokarbon
dalam jumlah yang lebih tinggi dari 1,97 lipid mg / 100 g enamel, 39
sebagian besar sinyal C-H mungkin berasal dari protein.
Satu minggu setelah operasi, tidak ada perbedaan yang diamati

dalam jumlah protein / mg matriks enamel (100 mg protein /

matriks enamel mg di daerah uji eksperimental
insisivus dan 112 mg protein / matriks enamel mg dalam kontrol
gigi seri) atau di profil protein terungkap dalam gel SDS-PAGE
ketika enamel eksperimental dari daerah uji adalah
dibandingkan dengan yang sesuai enamel dari gigi kontrol.
Pada kedua kelompok, sebagian besar protein memiliki molekul
massa berkisar antara 30 dan 15 kDa (Gambar. 6). Ketika kita
berusaha untuk memulihkan protein dari enamel matang, banyak
kurang pulih, seperti yang diharapkan. Protein tekad itu
dilakukan dengan metode yang dapat menentukan 10 ng / mL
protein dan semua sampel kami memiliki tingkat protein dalam
kurva direkomendasikan. Ketika kita diterapkan 0,3 mg protein per
lane, bagaimanapun, tidak ada profil band yang dapat diamati, menyarankan
bahwa sebagian besar protein yang dalam bentuk kecil
polipeptida yang tidak bisa diselesaikan dalam 15% gel (Gbr. 7).
Tidak ada band yang kompatibel dengan rantai kolagen I alpha,
menunjukkan pemisahan efektif dentin dan enamel
protein. Hal ini juga dikonfirmasi dengan pewarnaan bubuk
(Enamel, dentin dan seluruh bubuk gigi seri mahkota) yang tersebar di gelas
geser dengan Haematoxylin dan Sirius Red (noda baik untuk
kolagen).
4. Diskusi
Hasil ditampilkan di sini adalah konsisten dengan hipotesis
bahwa ameloblasts tahap pematangan penting untuk tepat
enamel mineralisasi, mungkin mengendalikan masuknya mineral atau
menciptakan kondisi fisik untuk pengendapan hidroksiapatit

dalam cara yang sangat terkendali. Kapiler invasi

organ enamel selama tahap transisi membentuk papiler yang
layer1 juga akan memfasilitasi masuknya mineral dalam enamel.
Enamel dibentuk tanpa adanya tahap pematangan
ameloblasts dan lapisan papiler ditampilkan menurun microhardness
(2/3 kontrol enamel), dan microhardness digunakan
sebagai ukuran dari content.40,41 enamel mineral Meskipun rendah
untuk enamel, nilai-nilai microhardness diperoleh untuk
enamel eksperimental yang lebih tinggi dari nilai yang microhardness dijelaskan untuk dentin
(Knoop nilai microhardness
dijelaskan untuk dentin manusia sekitar 70), 42 menunjukkan
bahwa beberapa mineralisasi tidak terjadi. Kita bisa berspekulasi bahwa pada
titik ketika ameloblasts dan sel-sel organ enamel lain
dihapus, berat mineral% mungkin sekitar 50%, 3 dan pada
titik ketika enamel eksperimental mencapai mulut,
di sebagian besar gigi, enamel harus mineralisasi untuk lebih dari 70%,
yang sama dengan konten dentin mineral. Oleh karena itu,
menarik untuk dicatat bahwa matriks enamel itu sendiri mampu
mendapatkan mineral, tetapi dengan tidak adanya sel-sel organ enamel ini
gain mineral tidak mencapai kandungan mineral yang sangat tinggi
ditemukan dalam enamel normal (95%).
Penelitian sebelumnya juga menunjukkan bahwa penyerapan Ca45was rendah
di gigi hewan pengerat pada organ enamel itu dihapus dari
permukaan labial dan disimpan dalam kondisi in vitro dibandingkan dengan
kontrol gigi selama pematangan stage.43-45 Baru-baru ini, sebuah
Penurunan kandungan enamel mineral telah dijelaskan dalam
tikus dengan mutasi autosomal resesif yang menyebabkan cacat

menyerupai orang-orang dari amelogenesis imperfecta. Pada hewan tersebut,

pematangan ameloblasts tahap yang terpisah dari enamel
matriks, membentuk kista antara ameloblasts dan enamel
matrix.46 Namun, tidak ada penelitian sebelumnya telah menguji in vivo bedah
penghapusan ameloblasts dan dampaknya pada sifat fisik
enamel to date.