LAMPIRAN

BAGAN KERJA
1. Persiapan Bahan Baku
Batang pisang

Dipotong kecil-kecil
Dijemur hingga kering
Dihaluskan menggunakan blender
dikeringkan

Tepung batang pisang

2. Analisis Lignin dan Selulosa

Tepung batang pisang

Filtrat

Residu
-

Ditambahkan 150 mL akuades

Direfluks pada suhu 100 oC selama 1 jam
Disaring

Dikeringkan dalam oven dan ditimbang

Ditambahkan 150 mL H2SO4 1 N
Direfluks dengan water bath selama 1 jam pada suhu 100 oC
Disaring, dicuci dengan akuades dan dikeringkan

Residu
Hasil
-

Ditambahkan 10 mL H2SO4 72%

Direndam pada suhu kamar selama 4 jam
Ditambahkan 150 mL H2SO4 1 N
direfluks pada water bath selama 1 jam pada pendingin balik

disaring dan dicuci dengan akuades

dipanaskan dalam oven pada suhu 105 oC
ditimbang
diabukan dan ditimbang

Hasil

3. Pretreatment
Hasil

Residu

Direndam dengan larutan NaOH 5 %

dalam wadah plastik tertutup

Didiamkan selama 24 jam sambil

sesekali diaduk
Disaring
Filtrat

Residu dicuci dengan akuades sampai jernih dan pH netral

Dimasukkan kembali kedalam wadah plastik
Ditambahkan larutan H2O2 3% sampai semua residu terendam
Diaduk dan didiamkan 24 jam dalam keadaan tertutup
dicuci dengan akuades
dikeringkan di oven pada suhu 110 oC

Hasil

4. Penyiapan Media Untuk Penentuan Kondisi Optimum Fermentasi

4.1 Peremajaan bakteri dengan media agar miring
Glukosa

KH2PO4

ekstrak ragi

Bakto agar

Ditambahkan 100 mL ekstrak daging

Dipanaskan sambil diaduk hingga larut
Disiapkan beberapa tabung reaksi

Ditambahkan larutan ekstrak pada tiap-tiap tabung reaksi

Disumbat dengan kapas dan aluminium foil
Distrilisasi pada suhu 121 oC selama 15 menit
Didingikan dalam keadaan miring
Bakteri Clostridium acetobutylicum digoreskan secara

zig-zag
Dimasukkan kedalam inkubator pada suhu 37 oC selama 7
hari

Hasil

4.2 Pembuatan Media Inokulum

Selulosa batang pisang
-

Ditambahkan 200 mL air

Dipanaskan sambil diaduk hingga membentuk gel
Ditambahkan nutrien
Diaduk hingga larut
Ditambahkan buffer fosfat hingga pH menjadi 5
Dipindahkan ke erlenmeyer 500 mL
Diencerkan dengan akuades hingga volume 300 mL
Ditutup dengan kapas dan aluminium foil
Distrilisasi dalam otoklaf pada suhu 121 oC selama 15 menit
Didinginkan dan ditambahkan stok kultur murni bakteri

Clostridium acetobutylicum
Ditutup dengan kapas dan aluminium foil
Difermentasi pada shaker incubator selama 48 jam pada suhu
37 oC dengan kecepatan 150 rpm

Hasil

4.3 Pembuatan media fermentasi

Selulosa batang pisang

-

Ditambahkan 1500 mL air

Dipanaskan hingga membentuk gel
Ditambahkan nutrient dan diaduk hingga larut
Ditambahkan buffer fosfat hingga pH 5
Diencerkan hingga 2100 mL
Disiapkan 7 buah erlenmeyer 500 mL
Ditambahkan 300 mL larutan kedalam tiap erlenmeyer
Disumbat dengan kapas dan aluminium foil
Distrilisasi dalam otoklaf pada suhu 212 oC selama 15 menit
Erlenmeyer dipindahkan dalam ruang steril
Ditambahkan 30 mL media inokulum kedalam setiap

erlemeyer dengan menggunakan gelas ukur

Erlenmeyer ditutup kembali dengan kapas
Difermentasi pada shaker incubator selama 2,4,6,8,10,12 dan

14 hari pada suhu 29 oC dengan kecepatan 150 rpm

Setelah 2 hari salah satu erlenmeyer pada media fermentasi

diambil
Disaring lalu didestilasi pada suhu 100 oC hingga diperoleh

volume destilat 10 mL
Divariasikan pH terhadap waktu fermentasi

Hasil
5. Penyiapan media fermentasi untuk produksi bioetanol
5.1 Pembuatan media inokulum
Selulosa batang pisang

Ditambahkan 500 mL air

Dipanaskan sambil diaduk hingga membentuk gel
Ditambahkan nutrient dan diaduk hingga merata
Ditambahkan buffer fosfat hingga pH menjadi 6,5
Diencerkan hingga 900 mL
Disiapkan 2 buah erlenmeyer 1000 mL

Sebanyak 450 mL larutan dipindahkan kedalam masing-

masing erlenmeyer ditutup dengan kapas dan aluminium foil

Disterilkan dalam otoklaf pada suhu 121 oC selama 15 menit
Didinginkan
Ditambahkan stok kultur murni bakteri Clostridium

acetobutylicum pada masing-masing erlenmeyer

Ditutup erlenmeyer dengan kapas dan aluminium foil
Difermentasi dalam shaker incubator selama 48 jam pada
suhu 29 oC dengan kecepatan 150 rpm

Hasil

5.2 Pembuatan media produksi bioetanol

Selulosa batang pisang

-

Ditambahkan 5000 mL air

Dipanaskan sambil diaduk hingga membentuk gel
Kedalam gel ditambahkan nutrient dan diaduk hingga larut
Ditambahkan buffer fosfat hingga pH 6,5 lalu diencerekan

hingga 9 liter
Dituankan kedalam beberapa buah botol fermentasi

berkapasitas 2,5 liter

Disumbat dengan kapas dan aluminium foil
Disterilisasi dalam otoklaf pada suhu 121 oC selama 15 menit
Didinginkan
Dimasukkan kedalam tabung fermentor steril yg berkapasitas

10 liter
Ditambahkan 900 mL inokulum kedalam tabung fermentor
Ditutup tabung fermentor lalu difermentasi pada suhu 29 oC
selama 150 rpm

Hasil

Didestilasi pada suhu 78 oC

Dianalisis dengan kromatografi gas