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BIBLIOGRAFA.
http://repositorio.utp.edu.co/dspace/bitstream/11059/3825/1/58117A949.pdf
http://www.porquebiotecnologia.com.ar/index.php?
action=cuaderno&opt=5&tipo=1¬e=49
http://www.tuotromedico.com/temas/albumina_en_sangre.htm
https://bqexperimental.files.wordpress.com/2010/01/seccion2_815221.pdf
http://www.ehu.eus/biomoleculas/proteinas/desnaturalizacion.htm
Cuestionario
PARTE II. PURIFICACIN POR CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO
INICO Y DE AFINIDAD
1. Por qu es necesario llevar a cabo el proceso de desalado de la o las fracciones con
alto contenido de sal en protocolo experimental antes de someterla a cromatografa de
afinidad o de intercambio inico?
Debido que en el proceso de desalado se retienen las sales, y la protena sale ms rpido
debido a su tamao as separndolas, tambin ayuda tener a la protena en condiciones
ptimas.
2. Cules otros usos tiene la cromatografa de exclusin molecular que no sea la de
ayudar a desalar una suspensin de protenas?
Cambios de buffers. Despus de cromatografas de intercambio inico, afinidad o
de interaccin hidrofbica.
Eliminacin de fenol de las preparaciones de cidos nuclicos.
Eliminacin de compuestos de bajo peso molecular marcados. I125, FITC de las
soluciones de marcaje de protenas.
Para reacciones entre macromolculas y reactivos de bajo peso molecular.
Eliminacin de productos, cofactores, inhibidores, etc. De las enzimas.
Purificacin de macromolculas.
Determinacin del peso molecular de las protenas.
http://www.reallaboratory.com/protocols/Molecular%20Biology
%20Protocols/RBMS02_03.pdf
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/g2580?
lang=en®ion=US&gclid=CPPy3Zyfw8sCFVBffgodzusHuw
Cuestionario
Parte III. Monitoreo del proceso de purificacin.
A. Determinacin de la concentracin de protenas
1. Compara ambos mtodos de cuantificacin de protenas utilizados en la prctica y
enlista sus diferencias. Considera tanto el fundamento de las tcnicas como la
metodologa para llevarlas a cabo.
Destructivo
Absorbancia a
280nm
No
Interferencias
DNA, RNA
Absorvancia
280
50g/mL a
2mg/mL
sensibilidad
Cuantificacin mezcla de
proteinas
Bradford
Si
Flavonoides, Detergentes,
Sulfato de amonio
595
1g/mL a 1.5 mg/mL
No
Si
Sulfato de amonio
Cuestionario
Separacin de las protenas en gel de poliacrilamida-SDS
1En cul de los pasos de la purificacin se obtuvo una mayor cantidad de LDH?
En la fraccin purificada C mediante la cromatografa de afinidad.
2. Cul de los dos mtodos de purificacin cromatogrfica produce una mayor
cantidad de LDH, la cromatografa de afinidad o la de intercambio inico?
La cromatografa de afinidad ya que en la cromatografa de intercambio inico presentaron
varios contaminantes.
3. Usualmente, en una purificacin se utilizan la cromatografa de intercambio inico
y la de afinidad como pasos secuenciales, una despus de otra, pero por costos hemos
utilizado slo una de ellas. Con los resultados que obtuvo tu equipo y los otros
equipos, predice cul sera el resultado si primero se realizara la cromatografa de
intercambio catinico y luego la cromatografa de afinidad.
Se mejorara la purificacin de la LDH ya que por la cromatografa por intercambio inico
se podran eliminar las dos bandas que se observan en la parte superior del gel (presentes al
usar solo la cromatografa por afinidad) y con la cromatografa por afinidad se eliminaran
todos los contaminantes que se observo dejo la cromatografa por intercambio inico.
4. Cuntos contaminantes se tienen en la mezcla de protenas obtenida en el proceso
cromatogrfico final?
Se puede inferir que existen dos contaminantes por la presencia de dos bandas en la parte
superior del gel.
5. Elabora un esquema de purificacin para la protena malato sintasa a partir de
semillas de girasol. Para ello busca:
A) Cul es la funcin de la protena
Cataliza la condensacin y posterior hidrlisis de la Acetil-CoA y glicoxilato para formar
malato y CoA
B) En qu material biolgico se encuentra
Organismo.- Escherichia coli (strain K12)
C) En qu compartimento subcelular se encuentra
Locacin.- Citoplasma
D) Busca la informacin estructural y/o fisicoqumica de la protena.