Anlisis Microbiolgico del Agua: Filtracin por

Membrana
(Practica no. 5)
Aragn Mier Fabiola, Corredor Montaez Nilyx Alexandra
Fundacin Universitaria de San Gil - Unisangil, Facultad de Ciencias Bsicas e Ingeniera,
Programa de Ingeniera Ambiental
Yopal, Colombia
fabiolita-888@hotmail.com
nilyx03@hotmail.com

I.

OBJETIVOS

Comprender el fundamento de la tcnica de

filtracin a travs de membrana para la
deteccin de coliformes totales y E.coli en
muestras de agua.

Determinar la cantidad de coliformes totales y

E.coli de una muestra de agua mediante el
mtodo de filtracin a travs de membrana.

II.

RESULTADOS

Tabla 1: CONTEO DE COLONIAS

E-coli
6 UFC/100 ml

Coliformes Totales
18 UFC/100 ml

de organismos fermentadores de la lactosa sin

produccin de gas capaces de crecer en el medio.
Respecto a los resultados obtenidos se pudo observar
claramente una pequea cantidad de colonias de la
E.Coli en el filtro de membrana a diferencia de las
otras coliformes totales que se presentaron en mayor
cantidad, las colonias de coliformes totales son ms
grandes, en mayor nmero, y de color rosado; las
colonias de E.coli son ms pequeas, se presentan en
menor nmero y adems son de color azul, en este
procedimiento fue importante la limpieza o
esterilizacin de los materiales que hacan contacto
directo con la membrana o con las pinzas
especialmente, ya que si hubiese algn otro
microorganismo en estos objetos por motivo de
contaminacin, dependiendo sus caractersticas
habra de crecer tambin en la fibra de membrana
gracias
a
la
agar
nutritivo.

III.

Tabla 2: RESULTADOS Y ASPECTO DE LAS

COLONIAS (Ver anexos)
Discusin de Resultados
En el procedimiento de filtracin por membrana se
destacaron varias ventajas importantes como lo es la
rapidez en la obtencin de los resultados, Ahorro de
mano de obra, medios, materiales de vidrio,
aunque tambin existen desventajas a la hora de
analizar una muestra bastante turbia ya que la
membrana tendera a obstaculizarse con las muchas
partculas de material lodoso en ella y adems las
cantidades grandes de organismos no coliformes
capaces de crecer en el medio pueden interferir en el
crecimiento de los coliformes y no hay indicacin de
formacin de gas ya que algunas tienen gran cantidad
1

La validacin del mtodo de filtracin por

membrana para el anlisis de coliformes totales
y E.coli en muestras de agua para el consumo
humano,
permiti
obtener
resultados
reproducibles y confiables.

Se manejaron condiciones adecuadas de

limpieza y desinfeccin ya que se evidencio baja
presencia de microorganismos presentes en el
ambiente.

El agua analizada en el laboratorio por medio de

filtracin por membrana no es apta para
consumo humano ya que no solo presenta cepas
de E. Coli sino que tambin otras coliformes

Formacin acadmica; Experiencia laboral primer autor

Formacin acadmica; Experiencia laboral segundo autor
3
Formacin acadmica; Experiencia laboral tercer autor
2

CONCLUSIONES

totales que pueden ser patgenos para la salud

en bajo o alto nmero de colonias.

IV.
[1]

BIBLIOGRAFIA

Recuento de Coliformes Totales. Laboratorio de

Tecnologa Educativa. Departamento de Microbiologa
y Gentica. Universidad de Salamanca. [Online]
Disponible
en:
http://virus.usal.es/Web/demo_fundacua/demo2/Filtra
MembColiT_auto.html

2.

En qu consiste la tcnica del nmero ms

probable (NMP) para el anlisis microbiolgico
de aguas?

RTA: Es una forma de obtener datos cuantitativos en

concentraciones de elementos discretos a partir de
datos de incidencia positiva/negativa. Es una
estrategia eficiente para estimar densidades de
poblacin que se emplea cuando una evaluacin
cuantitativa de elementos individuales no es factible.
Este mtodo tambin es conocido con el nombre de
ceros de Poisson.
3.

Qu ventajas y desventajas tiene el mtodo de

filtracin por membrana respecto al NMP?

RTA: Ventajas

[2] ACW UM (2010). Universidad de Murcia. Anlisis

Microbiolgico de Aguas por Filtracin. [Online].
Disponible
en:
http://ocw.um.es/cc.-de-lasalud/higiene-inspeccion-y-controlalimentario/practicas-1/practica-1-analisismicrobiologico-de-aguas-por

[3] SlideShare (2013) Anlisis Microbiolgico del agua.

[Online].
Disponible
en:
http://es.slideshare.net/Hiinataaaa/protocolo-deanalisis-microbiologico-de-agua

[4] Consulta de la Norma (2015) Normas Tcnicas de

Calidad del Agua Potable [Online]. Disponible en:
http://www.alcaldiabogota.gov.co/sisjur/normas/Norma
1.jsp?i=1327

V.
PREGUNTAS
COMPLEMENTARIAS

1.

De qu forma funciona el agar Chromocult?, es

decir, por qu unas bacterias se observan de
color rosadas y otras moradas?

RTA: La formacin simultanea de coliformes totales

y E.coli se hace posible por la formacin de dos
sustratos cromgenos: el sustrato Salmon Gal es
separado por la enzima -D-galactosidasa
caracterstico de coliformes y provoca una coloracin
roja de las colonias de coliformes. La formacin de
la -D-Glucoronidasa caracterstica para E.coli tiene
lugar mediante el sustrato X-Glucornido, que al ser
cortado por la encima produce una coloracin azul
para las colonias positivas. Ya que E. Coli separa
tanto Salmon-Gal como X-Glucornido, las colonias
se tien de violeta azul oscuro y debido a ellos se
pueden diferenciar de los coliformes restantes que se
presentan de color rojo.

La capacidad de estimar tamaos

poblacionales
basados
en
atributos
relacionados a un proceso de selectividad.
Provee una recuperacin uniforme de las
poblaciones
microbianas
de
suelos
diversificados.
Determina solo organismos vivos y activos
metablicamente.
Suele ser ms rpido e igual de confiable
que los mtodos tradicionales de
esparcimiento en platos de cultivo, entre
otros.
Determina cargas microbianas bajas, pero
tambin puede emplearse para determinar
cargas mayores utilizando las diluciones
apropiadas.
Presenta ventajas frente a otros mtodos
para el caso de muestras de polvos
insolubles.
El mtodo de filtracin por membrana es
rpido ya que los resultados se dan en un
periodo de 24 horas.
Se puede utilizar en pruebas de campo.

Desventajas

4.

El anlisis se dificulta en muestras de aguas

muy turbias y es difcil determinar la
cantidad de microorganismos que se quieren
encontrar.
No detectan las poblaciones con menos de
una clula por mililitro, solo permite
microorganismos viables.

Cul es la diferencia entre coliformes totales y

coliformes fecales, que tipo de medios de cultivo
se emplean para su identificacin y crecimiento,
en qu consisten estos medios?

RTA: Las bacterias coliformes son un grupo de

bacterias que se utilizan como indicadoras de
contaminacin. El grupo est compuesto por
Escherichia coli, Enterobacter, Citrobacter y
Klebsiella. Esas son las bacterias coliformes "totales"
que se definen como "bacterias que fermentan la
lactosa con produccin de cido y gas". Dentro de
ese grupo la nica bacteria que es de origen fecal
(intestino de hombre y animales) es la Escherichia
coli, que compone las "coliformes fecales" que son
capaces de crecer a 44C a diferencia de las otras
coliformes que no resisten esa temperatura.
Las coliformes totales crecen en medios lactosados
con inhibidores de Gram positivos como Caldo Mac
Conkey, este consiste en indicar visualmente el pH
distinguiendo as las bacterias Gram negativas que
pueden fermentar la lactosa y las que no lo pueden
hacer; las coliformes totales y fecales tambin crecen
en Caldo Lauril triptosa a 37C, este es un medio
selectivo ya que el lauril sulfato de sodio inhibe el
desarrollo de la flora acompaante. Por la
fermentacin de la lactosa se produce cido y gas,
este ltimo se evidencia al utilizar las campanas
Durham; es rico en nutrientes que permiten un rpido
desarrollo de los microorganismos fermentadores de
la lactosa.
5.

Consultar la normatividad ambiental vigente que

establece las caractersticas microbiolgicas
permisibles para aguas de consumo humano en
Colombia

RTA: Decreto 475 de 1998 Nivel Nacional

Captulo I Definiciones
Artculo 1: Para los efectos del presente decreto,
adptense las siguientes definiciones:
Agua cruda: Es aquella que no ha sido sometida a
proceso de tratamiento.
Agua para consumo humano: Es aquella que se
utiliza en bebida directa y preparacin de alimentos
para consumo.
Agua potable: Es aquella que, por reunir los
requisitos organolpticos, fsicos, qumicos y
microbiolgicos, en las condiciones sealadas en el
presente decreto, puede ser consumida por la
poblacin humana sin producir efectos adversos a su
salud.
Calidad del agua: Es el conjunto de caractersticas
organolpticas, fsicas, qumicas y microbiolgicas
propias del agua.
Escherichia Coli, (E-coli): Bacilo aerobio Gramnegativo que no produce esporas, pertenece a la
familia de los enterobactericeas y se caracteriza por
poseer las enzimas b - Galactosidasa y b -

gluoroanidasa. Se desarrolla a 44 0.5 C en medios

complejos, fermenta la lactosa liberando cido y gas,
produce indol a partir del triptfano y no produce
oxidasa.
Capitulo III Normas organolpticas, fsicas,
qumicas y microbiolgicas de la calidad del agua
potable
Artculo 6: Las normas organolpticas, fsicas,
qumicas y microbiolgicas de la calidad del agua
potable establecidas en el presente decreto rigen para
todo el territorio nacional y deben cumplirse en
cualquier punto de la red de distribucin de un
sistema de suministro de agua potable.
Artculo 24. Los mtodos aceptados para anlisis
microbiolgico del agua son los siguientes:
Para Escherichia Coli: Filtracin por membrana y
sustrato definido.
Para Coliformes Totales: Filtracin por membrana y
sustrato definido.
Pargrafo. Mtodo de tubos mltiples de
fermentacin y recuento en placa (siembra en
profundidad) se seguir empleando hasta el ao
2000; por lo tanto, a partir de la entrada en vigencia
del presente decreto los laboratorios que no empleen
los mtodos aceptados para anlisis microbiolgico,
debern
implementarlos
y
estandarizarlos;
igualmente se adoptarn otras metodologas
debidamente validadas por el Instituto Nacional de
Salud y aprobadas por el Ministerio de Salud,
mediante el correspondiente acto administrativo.
Artculo 25. El agua para consumo humano debe
cumplir con los siguientes valores admisibles desde
el punto de vista microbiolgico:
Tabla 3: VALORES ADMISIBLES PUNTO DE
VISTA MICROBIOLOGICO
Tcnica
Utilizada
Microorganism
os Indicadores

Filtracin
por
Membran
a

Coliformes
Totales

0 UFC/100
cm3

E.Coli

0 UFC/100
cm3

Sustrato
Definido

Tubos mltiples
de fermentacin

0
microorganis
mos/100 cm3
0
microorganis
mos/100 cm3

<2microorganism
os/100 cm3
negativo

Pargrafo primero. Los resultados de los anlisis

microbiolgicos se deben reportar en las unidades de
NMP/100 cm3 (nmero ms probable), si se utiliza la
tcnica del nmero ms probable o la tcnica

enzimtica de sustrato definido y en UFC/100

cm3 (unidades formadoras de colonia), si se utiliza la
tcnica de filtracin por membrana.
Pargrafo segundo. Se recomienda un valor mximo
admisible de 100 Unidades Formadoras de Colonias
(U.F.C.) por 100 centmetros cbicos (cm 3), para
microorganismos
mesfilos,
como
prueba
complementaria de la calidad del agua desde el punto
de vista microbiolgico.
Artculo 26. Ninguna muestra de agua potable debe
contener
E-coli
en
100
cm3 de
agua,
independientemente del mtodo de anlisis utilizado.
6.

De acuerdo a sus resultados y a la pregunta

anterior discuta la calidad microbiolgica del
agua procesada.

RTA: Teniendo en cuenta el decreto 475 de 1998

Nivel Nacional y el decreto 1575 de 2007, el agua

que se proces no es apta para el consumo humano,

porque presenta coliformes totales y fecales aun
cuando esta proviene del grifo; en la norma se indica
que un agua potable es aquella que rene los
requisitos organolpticos, fsicos, qumicos y
microbiolgicos, en las condiciones sealadas en el
presente decreto, puede ser consumida por la
poblacin humana sin producir efectos adversos a su
salud, es decir, que no estn presentes estos
microorganismos ni en baja ni en alta cantidad, sino
que en el agua no haya presencia alguna de ellos. La
muestra analizada a pesar de que no mostro niveles
incontables de E.coli y coliformes totales, muestras
ambas colonias y aun si hubiese mostrado tan solo
una o una de cada una, esto la considerara no apta
para el consumo humano.

VI.

ANEXOS

Registro Fotogrfico General

Figura 1. Montaje el Sistema de Filtracin por Membrana

Fuente: Gua de Laboratorio

Figura 2. Mquina de sistema de filtracin y fuente de vaco

Fuente: Autores

Figura 4. Esterilizacin de las pinzas con alcohol y flameado con

mechero de Bunsen
Fuente: Autores

Figura 5. Fijacin del embudo sobre el soporte

Fuente: Autores

Figura 3. Filtro de membrana

Fuente: Autores
Figura 6. Fijacin del embudo sobre el soporte
Fuente: Autores

Figura 7. Vertimiento de la muestra de agua a travs de filtro y

mediante accin de la mquina.
Fuente: Autores

Figura 10. Observacin de las colonias 24 horas despus de la

incubacin.
Fuente: Autores

Figura 8. Aislamiento de la membrana a la caja de Petri con agar

Chromoult
Fuente: Autores
Figura 11. Observacin de las colonias 24 horas despus de la
incubacin.
Fuente: Autores

Figura 9. Se adhiere la membrana al agar en la caja de Petri

procurando que no queden burbujas de aire entre la membrana y la
gelatina de agar.
Fuente: Autores

Tabla 2 RESULTADOS Y ASPECTO DE LAS COLONIAS

Origen de la
muestra de
agua

(UFC)
Coliformes
promedio

Aspecto de
las colonias

Agua del grifo

18
UFC/100
mL

Redondas y
de color
rosado.

(UFC)
E. Coli
promedio

Aspecto de las
colonias

Registro Fotogrfico

Figura 12
Observacin detallada de las colonias de coliformes
totales 24 horas despus de la incubacin.
Fuente: Autores

Agua del grifo

6 UFC/100 mL

Redondas, ms
pequeas que las
coliformes totales
rosadas, estas son
azules.

Figura 13
Observacin detallada de las colonias de E. Coli 24
horas despus de la incubacin.
Fuente: Autores