You are on page 1of 2

\

    1                2                 3               4               5             6            7               8             9           10               11              12

A 0.0ug/ml
HRP
0.0312ug/ml
B

0.0625/ml

C
0.125ug/ml

D 0.25ug/ml

0.5ug/ml
E

1.0ug/ml

F
2.0ug/ml
500ulof 4ug/ml 
+500ul MEM

3rd assay do 25ul/well each of curve and sample , all dilutions made up in dMEM sans Phenol red.HRP is from Nyall’s frozen stock.
Nyall’s HRP stock = 1mg/ml
Substrate will be 100ul/well (0.5mM Guaiacol in 50mM Phosphate buffer ) (PO Buffer will be 50mM each PO ­ mono basic, Dibasic.mixed 50:50 with 
1mM Guaiacol) – make 50ml.Guaiacol, stock =8M, so 1/8000 =0.000125 x 50,000ul = 6.25ul of 8M for 50ml of 1mM solution.
Developer will be 50ul/well of 0.06uM H2O2 (3.3ul of 30% H2O2in 50ml H2O.)