ADN RECOMBINATE

Nos permite obtener fragmentos de ADN en cantidades ilimitadas el cual llevará

los genes que deseemos. Los cortes de ADN se realizarán mediante los enzimas
de restricción.
Enzimas de restricción
Son enzimas que cortan los enlaces fosfodiester del material genético a partir de
una secuencia que reconocen
Las endonucleasas, son enzimas de bacterias que actúan como tijeras moleculares
reconociendo secuencias de pares de bases especificas de moléculas de ADN y cortando
en esos puntos.
Cada tipo de enzima reconoce y corta una determinada secuencia del nucleótido
Los extremos que quedan libre de la hebra se unen mediante puentes de hidrogeno
dando lugar a una nueva formación de ADN.
El fago lambda es un virus que infecta a la bacteria Escherichia coli. Se trata de un virus
complejo de DNA lineal bicatenario.
El fago lambda infecta ala célula E.coli mediante su cola.
Después que el fago infecta ala bacteria permanece allí hasta que crece y se divide.
El ADN vírico se activa y se divide del cromosoma que lo alberga e inicia un ciclo viríco
lítico que da como resultado la producción de nuevos viriones.
Utilizamos la electroforesis en gel de agorosa para visualizar el ADN de fago lambda
La electroforesis en gel es un grupo de técnicas empleadas por los científicos
para separar moléculas basándose en propiedades como el tamaño, la forma o
el punto isoeléctrico.
La agarosa es un polvo que se disuelve con calor y se prepara a X concentración en un
buffer
Una vez líquido se vuelca en la cama de electroforesis, que lleva dos peines que harán
de pocillos para sembrar las muestras de ADN
La sacarosa al enfriarse se gelifica y se pone de color blanco. Luego lo meteremos en un
colorante de ADN el cual se intercala con las bases de ADN y se ve con UV
Preparamos las muestras de ADN
El ADN tranparente se mezcla se mezcla con el buffer de color azul y se siembra en cada
pocillo de gel.
Una vez sembrado se coloca la cama en la cuba de electroforesis la cual se llena de un
buffer que conduce la electricidad y se cierra la cuba.
Los fragmentos de ADN migrarán al polo positivo por tamaño, los más pequeños
migrarán más rápido que los largos.
Retiramos la corriente y observamos el ADN con una fuente de luz UV