ANÁLISIS DE AGUAS

PARÁMETRO: ANALISIS MICROBIOLOGICO III. HOJA Nº:

COLIFORMES FECALES 1

REF.:Standard Methods, pag. 9-109. UNIDADES: RANGO:

Legislacion de agua potable. Nº bacterias/100ml -

CONC. MAX. ADMISIBLE: METODO DE FILTRO DE MEMBRANA NIVEL GUIA:

0 bacterias/100ml. -

1. FUNDAMENTO.

Las bacterias coliformes de origen fecal son aquellas comprendidas en el grupo anterior (coliformes totales),
que además son capaces de fermentar la lactosa, con producción de ácido y de gas a 44ºC, en un tiempo máximo
de 24h.

El método consiste en la determinación del nº de coliformes mediante filtración de volúmenes determinados del
agua a analizar por filtros de membrana e incubación sobre medio de lactosa enriquecido y una temperatura de
44,5ºC (+/-0,2ºC).

2. TOMA DE MUESTRA Y ALMACENAMIENTO.

Se utiliza la muestra de agua tomada para el análisis de coliformes totales que se encontraba guardada en
frigorífico a 4ºC.

3. INTERFERENCIAS.

Para evitar la contaminación por microorganismos aéreos se esteriliza el material en autoclave (pinzas y
elementos del sistema de filtración que vayan a entrar en contacto con el agua) a 121ºC durante 20min.
Todo el proceso de filtración, así como el llenado de las placas de Petri se realizará dentro de la campana de
flujo para evitar el contacto con la atmósfera.

4. MATERIAL.

-2 membranas filtrantes de ésteres de celulosa, de 0,45 micras de porosidad, de 47 a 50 mm de diámetro,

estériles.
-Pinzas flameables de extremos planos.
-Equipo de filtración por vacío.
-2 placas de Petri de 50*12mm
-Estufa regulada a 44ºC (+/-0,5ºC).
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COLIFORMES FECALES 2

5. MEDIO DE CULTIVO.

-Medio M-FC, Agar.

Composición: Triptosa (10g)
Extracto de levadura (3g).
Proteosa Peptona (5g).
Sales Biliares (4,5g).
Cloruro sódico (5g).
Lactosa (12
Azul de amilina (0,1g).
Agar-agar (15g).
* Rehidrátese en agua destilada y calientese hasta punto de ebullicion y añadir ác.rosólico ( al 1% en NaOH 0.2
N, no autoclavar. Dura 2 semanas a 2-10ºC en oscuridad).
*El medio M-FC Agar, tampoco se autoclava.

6. PROCEDIMIENTO

Colocar un filtro de membrana estéril sobre el soporte de filtración, utilizando pinzas estériles.
Adaptar el embudo.
Conectar el matraz a una bomba eléctrica de vacío.
Filtrar 100 ml de muestra si se trata de agua potable, y 0,1 y 1 ml si se trata de aguas no potables, previamente
homogeneizada, efectuando el vacío necesario.
Lavar con unos 30 ml de agua destilada y autoclavar.
Retirar el embudo.
Mediante las pinzas esterilizadas, transferir la membrana filtrante sobre el medio de cultivo contenido en una
placa de Petri, de modo que la superficie de filtración quede hacia arriba.
Cerrar e invertir la placa e incubar a 44ªC (+/-1ºC ) durante 24h ( +/-2h ).

7. LECTURA E INTERPRETACION

La lectura de los resultados requiere el examen de las colonias aparecidas sobre la membrana y el examen de los
halos en la capa de agar subyacente a la membrana.
La fermentación de la lactosa provoca la formación de un halo amarillo. Por ello se considera coliformes
aquellas colonias que presentan color amarillo, amarillo con centro naranja, o rojo ladrillo y halo amarillo.
La densidad se estima como el total de coliformes totales por 100ml, utilizando aquellos filtros de membrana
que tengan 20-80 colonias de coliformes y no más de 200.