You are on page 1of 3

2.1.

Bahan kimia, reagensia dan instrumen


Plasma segar beku manusia (Mfg License No 504) dibeli
dari bank Darah Rotary, New Delhi India. Metanol,
n-heksan, n-butanol dan silika gel G, dinatrium hidrogen fosfat
dan asam o-fosfat yang dibeli dari Merck,
India. Ferri klorida, asam sulfat dan asam asetat glasial
diperoleh dari Qualigens, India. Solusi standar
(0,10 mg mL 1?) Obat ini disusun dalam metanol.
Norethindrone asetat dan dydrogesterone terdeteksi pada
KLT pelat dengan mengembangkan reagen baru. reagen ini disusun
dengan melarutkan 500 mg besi klorida dalam campuran sulfat
asam (20 ml) dan asam asetat glasial (10 ml) diikuti
dengan pengenceran air hingga 50 mL. Pemurnian air siap
menggunakan Millipore Milli-Q (Bedford, MA USA) air
pemurnian sistem, Sep-Pak C18 1 mL ukuran kartrid barel.
mengandung 50 mg sorben (ukuran partikel 55-105 lm dan pori-pori
ukuran 125 ˚ A) yang dibeli dari Perairan Amerika Serikat (Cat.No.
WAT054955). pH meter Dynamics Control (model APX
175 E / C), Spektrofotometer Perkin Elmer (model EZ201),
ekstraksi fase padat unit Varian dan sentrifus (model
C854/49/06) dari Remi digunakan. PyMOL visualisasi alat dan
Autodoc4 perangkat lunak digunakan untuk keperluan pemodelan obat
mengikat dengan reseptor progesteron.
2.2. Ekstraksi obat dari tablet komersial
Norethindrone asetat dan dydrogesterone diekstraksi
dari tablet tersedia secara komersial. Norethindrone asetat
diekstraksi dari lima tablet regestrone (No batch
R67B05D) India Novartis Limited Maharashtra, Mahad, (),
India. Demikian pula, dydrogesterone diekstraksi dari lima
Duphastone perumusan (batch No L7301) dari Solvay Pharma
India Limited, Mumbai, India. Lima tablet obat masing-masing
ditimbang dan dilumatkan untuk bedak secara terpisah, masing-masing. The
tablet bubuk tersebut diekstraksi dengan metanol (100 mL), secara terpisah,
dengan pemanasan pada 80? C. Campuran obat itu disentrifugasi
dan supernatan dipisahkan. Residu diekstraksi dua
lebih kali dengan jumlah yang sama metanol secara terpisah. Semua
fraksi metanol digabungkan bersama-sama untuk mendapatkan 300 mL.
metanol ini diuapkan pada kondisi vakum di air mandi
untuk mL 15, yang diizinkan untuk mengkristal dalam membeku di 10? C.
Larutan induk itu tertuang dan kristal dicuci
dengan jumlah sedikit n-heksana. Kemurnian dari obat itu
dipastikan titik lebur, spektra UV dan IR.
2.3. Persiapan KLT pelat
pelat KLT (10 cm ° 15 cm · 0,5 mm) disusun dalam
laboratorium dengan menyebarkan bubur silika gel G (50 g) dalam
100 mL Millipore air. Lempeng ini dikeringkan semalam di
oven pada 80? C. Untuk pelat KLT diresapi, lumpur silika gel
dibuat dengan air yang mengandung 0,10 g Millipore masing-masing FeSO4Æ7H2O,
CoSO4Æ7H2O, NiCl3Æ6H2O, Cu (CH3COO) 2ÆH2O
dan ZnSO4Æ7H2O dalam 100 mL air Millipore individual dan,
masing. Pelat yang diaktifkan dengan pemanasan dalam oven.
2.4. Solid-tahap ekstraksi (SPE)
Percobaan kosong dilakukan dengan mencampur 1,0 mL
setiap obat (1,0 mg mL 1?) menjadi 5,0 mL air Millipore individual
dan secara terpisah. Sampel berduri itu vortexed untuk
2 menit, terus selama 30 menit, dicampur dengan 15.0 mL aseton dan disentrifugasi
pada 1000 rpm selama 5 menit untuk memisahkan supernatan. The
supernatan diuapkan sampai kering dan residu
kembali dilarutkan dalam 10,0 mL buffer fosfat (50 mM, pH 2.0)
untuk asetat norethindrone dan pH 3,0 untuk dydrogesterone. A
Sep-Pak C18 Vac kartrid (1,0 ml Waters, AS) adalah pra-AC
dengan metanol 2,0 mL diikuti oleh Millipore 5,0 mL
air. sampel Spiked disahkan melalui kartrid dengan
Laju alir 0,1 mL diikuti oleh kartrid mencuci dengan 2.0 mL
Millipore air pada laju alir yang sama. Cartridge dikeringkan
dengan melewatkan udara panas dan obat yang dielusi sebesar 10,0 mL metanol
pada 0,1 mL per menit laju alir. Metanol dielusi adalah
terkonsentrasi di bawah vakum untuk 0,5 mL. Solusi ini digunakan
untuk studi KLT. Prosedur yang sama diadopsi untuk menganalisis
obat ini pada plasma manusia.
2.5. Kromatografi lapisan tipis
kondisi KLT dikembangkan untuk obat-obatan ini pada polos dan
diresapi piring. pelat KLT terlihat oleh obat-obatan ini
pada tingkat 10,0 ng dengan bantuan kapiler lulus
(10,0 LL) dan kromatogram dikembangkan pada KLT
ruang pra-diequilibrasi dengan pelarut selama 30 menit. The kromatogram
dikembangkan sampai dengan 10,0 cm selama 20 menit dengan menggunakan
n-heksan-n-butanol (90:10, v / v) pada 20 ± 2? C. Yang lengkap
Percobaan dilakukan untuk mengoptimalkan kromatografi
kondisi. Sistem pelarut dilaporkan telah dioptimalkan oleh
meningkatkan konsentrasi n-butanol. Setelah pembangunan
piring dikeringkan pada 80? C dan tempat terdeteksi oleh
penyemprotan reagen yang disebutkan di atas diikuti dengan pemanasan pelat
pada 80 C selama 1? h. Pelarut sistem telah dioptimalkan dengan memvariasikan
konsentrasi n-heksan dan n-butanol. Hasil analisis
obat-obatan; setelah ekstraksi oleh SPE, juga dilakukan
dengan KLT menggunakan metode yang dikembangkan yang sama. Kualitatif
penentuan obat ini dalam plasma dipastikan
membandingkan nilai Rf ini dengan yang standar.
Untuk analisis kuantitatif tempat (10 LL) dari lima KLT
piring yang tergores dan dilarutkan dalam metanol (3,0 mL),
yang terkonsentrasi untuk 1,0 mL untuk menentukan mereka konsentrasi oleh UV-Vis.
Spektrofotometer pada 300 nm
dan panjang gelombang 298 nm untuk asetat norethindrone dan dydrogesterone,
masing. Kurva kalibrasi yang linier untuk
kedua obat 0,1-0,01 mg / mL konsentrasi. Untuk validasi,
semua percobaan dilakukan lima kali di bawah
kondisi percobaan yang sama dan data yang divalidasi

You might also like