Plasma segar beku manusia (Mfg License No 504) dibeli dari bank Darah Rotary, New Delhi India. Metanol, n-heksan, n-butanol dan silika gel G, dinatrium hidrogen fosfat dan asam o-fosfat yang dibeli dari Merck, India. Ferri klorida, asam sulfat dan asam asetat glasial diperoleh dari Qualigens, India. Solusi standar (0,10 mg mL 1?) Obat ini disusun dalam metanol. Norethindrone asetat dan dydrogesterone terdeteksi pada KLT pelat dengan mengembangkan reagen baru. reagen ini disusun dengan melarutkan 500 mg besi klorida dalam campuran sulfat asam (20 ml) dan asam asetat glasial (10 ml) diikuti dengan pengenceran air hingga 50 mL. Pemurnian air siap menggunakan Millipore Milli-Q (Bedford, MA USA) air pemurnian sistem, Sep-Pak C18 1 mL ukuran kartrid barel. mengandung 50 mg sorben (ukuran partikel 55-105 lm dan pori-pori ukuran 125 ˚ A) yang dibeli dari Perairan Amerika Serikat (Cat.No. WAT054955). pH meter Dynamics Control (model APX 175 E / C), Spektrofotometer Perkin Elmer (model EZ201), ekstraksi fase padat unit Varian dan sentrifus (model C854/49/06) dari Remi digunakan. PyMOL visualisasi alat dan Autodoc4 perangkat lunak digunakan untuk keperluan pemodelan obat mengikat dengan reseptor progesteron. 2.2. Ekstraksi obat dari tablet komersial Norethindrone asetat dan dydrogesterone diekstraksi dari tablet tersedia secara komersial. Norethindrone asetat diekstraksi dari lima tablet regestrone (No batch R67B05D) India Novartis Limited Maharashtra, Mahad, (), India. Demikian pula, dydrogesterone diekstraksi dari lima Duphastone perumusan (batch No L7301) dari Solvay Pharma India Limited, Mumbai, India. Lima tablet obat masing-masing ditimbang dan dilumatkan untuk bedak secara terpisah, masing-masing. The tablet bubuk tersebut diekstraksi dengan metanol (100 mL), secara terpisah, dengan pemanasan pada 80? C. Campuran obat itu disentrifugasi dan supernatan dipisahkan. Residu diekstraksi dua lebih kali dengan jumlah yang sama metanol secara terpisah. Semua fraksi metanol digabungkan bersama-sama untuk mendapatkan 300 mL. metanol ini diuapkan pada kondisi vakum di air mandi untuk mL 15, yang diizinkan untuk mengkristal dalam membeku di 10? C. Larutan induk itu tertuang dan kristal dicuci dengan jumlah sedikit n-heksana. Kemurnian dari obat itu dipastikan titik lebur, spektra UV dan IR. 2.3. Persiapan KLT pelat pelat KLT (10 cm ° 15 cm · 0,5 mm) disusun dalam laboratorium dengan menyebarkan bubur silika gel G (50 g) dalam 100 mL Millipore air. Lempeng ini dikeringkan semalam di oven pada 80? C. Untuk pelat KLT diresapi, lumpur silika gel dibuat dengan air yang mengandung 0,10 g Millipore masing-masing FeSO4Æ7H2O, CoSO4Æ7H2O, NiCl3Æ6H2O, Cu (CH3COO) 2ÆH2O dan ZnSO4Æ7H2O dalam 100 mL air Millipore individual dan, masing. Pelat yang diaktifkan dengan pemanasan dalam oven. 2.4. Solid-tahap ekstraksi (SPE) Percobaan kosong dilakukan dengan mencampur 1,0 mL setiap obat (1,0 mg mL 1?) menjadi 5,0 mL air Millipore individual dan secara terpisah. Sampel berduri itu vortexed untuk 2 menit, terus selama 30 menit, dicampur dengan 15.0 mL aseton dan disentrifugasi pada 1000 rpm selama 5 menit untuk memisahkan supernatan. The supernatan diuapkan sampai kering dan residu kembali dilarutkan dalam 10,0 mL buffer fosfat (50 mM, pH 2.0) untuk asetat norethindrone dan pH 3,0 untuk dydrogesterone. A Sep-Pak C18 Vac kartrid (1,0 ml Waters, AS) adalah pra-AC dengan metanol 2,0 mL diikuti oleh Millipore 5,0 mL air. sampel Spiked disahkan melalui kartrid dengan Laju alir 0,1 mL diikuti oleh kartrid mencuci dengan 2.0 mL Millipore air pada laju alir yang sama. Cartridge dikeringkan dengan melewatkan udara panas dan obat yang dielusi sebesar 10,0 mL metanol pada 0,1 mL per menit laju alir. Metanol dielusi adalah terkonsentrasi di bawah vakum untuk 0,5 mL. Solusi ini digunakan untuk studi KLT. Prosedur yang sama diadopsi untuk menganalisis obat ini pada plasma manusia. 2.5. Kromatografi lapisan tipis kondisi KLT dikembangkan untuk obat-obatan ini pada polos dan diresapi piring. pelat KLT terlihat oleh obat-obatan ini pada tingkat 10,0 ng dengan bantuan kapiler lulus (10,0 LL) dan kromatogram dikembangkan pada KLT ruang pra-diequilibrasi dengan pelarut selama 30 menit. The kromatogram dikembangkan sampai dengan 10,0 cm selama 20 menit dengan menggunakan n-heksan-n-butanol (90:10, v / v) pada 20 ± 2? C. Yang lengkap Percobaan dilakukan untuk mengoptimalkan kromatografi kondisi. Sistem pelarut dilaporkan telah dioptimalkan oleh meningkatkan konsentrasi n-butanol. Setelah pembangunan piring dikeringkan pada 80? C dan tempat terdeteksi oleh penyemprotan reagen yang disebutkan di atas diikuti dengan pemanasan pelat pada 80 C selama 1? h. Pelarut sistem telah dioptimalkan dengan memvariasikan konsentrasi n-heksan dan n-butanol. Hasil analisis obat-obatan; setelah ekstraksi oleh SPE, juga dilakukan dengan KLT menggunakan metode yang dikembangkan yang sama. Kualitatif penentuan obat ini dalam plasma dipastikan membandingkan nilai Rf ini dengan yang standar. Untuk analisis kuantitatif tempat (10 LL) dari lima KLT piring yang tergores dan dilarutkan dalam metanol (3,0 mL), yang terkonsentrasi untuk 1,0 mL untuk menentukan mereka konsentrasi oleh UV-Vis. Spektrofotometer pada 300 nm dan panjang gelombang 298 nm untuk asetat norethindrone dan dydrogesterone, masing. Kurva kalibrasi yang linier untuk kedua obat 0,1-0,01 mg / mL konsentrasi. Untuk validasi, semua percobaan dilakukan lima kali di bawah kondisi percobaan yang sama dan data yang divalidasi