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  • A29 - Precipitacao de Acidos Nucleicos

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    Anderson K. Santos
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    a29- Precipitacao de Acidos Nucleicos

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    PRECIPITAO DE CIDOS NUCLICOS

    PRECIPITAO DE DNA I
    1. Adicionar 1/10 volume de NaAc 3M, pH5,2 e 2-2,5 volumes de etanol absoluto. Misturar por inverso e colocar a -20C por 30 minutos. 2. Centrifugar a 12.000xg por 5 minutos e descartar o sobrenadante. 3. Lavar o precipitado 2 vezes com etanol 75% gelado. 4. Secar o precipitado e suspender o DNA em H2O Milli-Q ou TE. Obs.: Se a molcula de DNA for 200pb, utilizar etanol 95% nas lavagens.

    PRECIPITAO DE DNA II
    1. Adicionar 1/2 volume de NH4Ac 7,5M, pH4,8 e 2,5 volumes de etanol absoluto. Misturar por inverso e colocar a -20C por 20 minutos. 2. Centrifugar a 12.000xg por 5 minutos e descartar o sobrenadante. 3. Lavar o precipitado 2 vezes com etanol 75% gelado. 4. Secar o precipitado e suspender o DNA em H2O Milli-Q ou TE.

    PRECIPITAO DE DNA III


    1. Adicionar 1 volume de isopropanol e agitar por inverso. 2. Incubar a 37C por 5 minutos. 3. Centrifugar a 12.000xg por 5 minutos e descartar o sobrenadante. 4. Lavar o precipitado 2 vezes com etanol 75% gelado. 5. Secar o precipitado e suspender o DNA em H2O Milli-Q ou TE.

    PRECIPITAO DE RNA
    1. Adicionar 1/10 volume de NaAc 3M, pH5,2 e 2,5 volumes de etanol absoluto. Agitar em Vortex e colocar a -20C por 30 minutos (ou -80C por 15 minutos). 2. Centrifugar a 12.000xg por 5 minutos e descartar o sobrenadante. 3. Lavar o precipitado 2 vezes com etanol 75% gelado. 4. Secar o precipitado e suspender o DNA em H2O Milli-Q ou TE. Obs.: A gua utilizada na preparao das solues deve ser tratada com DEPC.

    Protocolos Sandro R. Valentini

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