Germinacién de semillas y su establecimiento in vitro de Laelia rubescens Lindley y Epidendrum stamfordianum Batem 7 Maria del C.Potisek*, Manuel Sarmiento™, Leidy N. Puc*** Los objetivos de esta investigacién fueron conocer el comportamiento de la germinacién in vitro de Laelia rubescens Lindley y Epidendrum stamfordianum Batem.y evaluar cl desarrollo de las plintulas en dos medios de cultivo de composicion diferente La coleeta de las eipsulas de L. rubescens L. y de E. stamfordianum B. se realiz6 en el orquidario del Campo Experimental Eduardo Sangri Serrano, en los meses de febrero a marzo de 1994. Se ‘rasladaron al laboratorio, en donde se efectus et proceso de desinfecci6n de ambas eapsulas yla siembra de Ia semilla encapsulada de orquideas en el medio Murashigue y Skoog . A los '57 dias se manifiest el estadio de protocormo més primordio de hojas en E. stamfordianum B,,y a los 62 en L. rubescens L., la planta completa en E. stamfordianum B., se manifest6 a los 130 dias después de ta siembra y en L. rubescens L., a los 140 dias. Los porcentajes de germinaci6n fueron del 62.5% en L.rubescens Ly del 100% en E. stamfordianum B. Con el empleo de medio basal o medio adicionado con hormonas, se encontré diferencia significativa en la especie E. stamfordianum B., induciendose ta formacién de callos para la especie L. rrubescens 1, no se encontré diferencia significativa en cl uso de medio basal y medio basal con hhormonas. Introduccién México es uno de los cinco paises con mayor biodiversidad en el mundo, uno de los factores que més han afectado esta diversidad es la deforestacién, la cual ha degradado alarmantemente los ecosistemas forestales. Fl estado de Campeche, como parte del trépico mexicano, es el habitat de muchas especies de la familia orquidaceae, por afios éste ha sido el centro de atencién de extranjeros y especialistas en orquideas, por sus diferentes formas, colores, aromas, cle, por lo que tienen una diversidad de usos principalmente el ornamental, con un alto valor potencial econémico y cient La explotacién de los bosques, nicho en el que se sustenta dicha familia; los sistemas de produccién como la roza-tumba-quema (RTQ) que causan pérdida de habitats, asi como las sobrecolectas y saqueos en zonas bien definidas, han provocado que muchas especies de esta familia permanez en alto riesgo de supervivencia La muttiplicaci6n de las orquideas se ha visto limitada por la germinaci6n de Ia semilla en forma natural, considerdndolas como estériles o no viables. Tal como sucede con la especie Laelia speciosa, que es ampliamente colectada y est colocada dentro de la categoria de riesgo vulnerable, ya que en un drea de 1500 m? se establecen tinicamente 4.8 E-5% semillas y en dreas sobreexplotadas se tiene cero establecimientos (Hernindez 1993). Las semillas de orquideas son muy pequefias, miden de 0,250 a 1.2 mm de longitud y de 0.90 a 0.270 mm de didmetro, son muy ligeras, se producen desde 1300 hasta cuatro millones o mas por capsula (Pierick 1990), En las orquideas, el INIFAP. CIR-SURESTE. Campeche, Camp. México “+ INIFAP. CIRSURESTE: Bscircega, Camp, Mésicr * neu de Laboratorio, INTFAR. CIR-SURESTE, Campeche, Camp. Méxioo chadembrién no esté diferenciado dentro de los distintos Srganos como en la gran mayoria de los embriones vegetales (Dressler 1981 citado por Montalvo 1995), por lo tanto, la geminacién solamente ocurre cuando éste se desarrolla en un ambiente bajo condiciones favorables (Devlin 1980, citado por Montalvo 1995). Los géneros Cattleya, Laelia y Epidendrum fueron germinados en forma asimbidtica (Knudson 1922, citado por Lee y Lee 1991), en un medio de cultivo con aziicares y minerales, Estos mismos autores realizaron la germinacién in vitro de los géneros Cattleya y Phalaenopsis empleando para la etapa de germinacidn, el medio modificado Knudson (1946), adicionado con écido naftalenacético y cinetina, peptona, plétano verde y manzana, En el desarrollo de plantulas emplearon el mismo medio, sustituyendo los reguladores de crecimiento por 2.4-D y cinetina, Quiroz et al (1993), evaluaron la respuesta de semilla de Myrmecophila sp germinadas en el medio basal Vacin y Went, con diferentes combinaciones de bencil-amino-purina y giberelinas, obteniendo porcentajes del 75% de germinacién en los medios suplementados con bencil Purina y en ausencia de giberelinas, demostrando que las giberelinas no tienen efecto algun sobre la germinacién de las semillas en las primeras etapas. El patrén de germinacién in vitro que mencionan para la especie Laelia speciosa (H:B:K:) consta de seis etapas, observando que el desarrollo de la primera hoja es a los 40 dias y la pléntula completa es a los 90 dias (Luna y Barba 1993); la kinetina en concentraciones de 12 10 ppm con o sin dcido indol acético, retrasa la germinacién de Dacylorhiza (orchis) pupurelta y otras especies terrestres, aunque las mismas hormonas aumentan el crecimiento de los protocormos al empezar a formar hojas (Hardleys 1970: citado por Withner 1985). nino- Los objetivos de este trabajo fueron conocer el comportamiento de la germinacién in vitro de Laelia rubescens L y Epidendrum stamfordianum B y evaluar el desarrollo de las plantulas en dos medios de composicién diferentes, Materiales y métodos El trabajo de investigacién se realiz6 a cabo en el Campo Experimental China, Campeche, México, del Instituto de Investigaciones Forestales y Agropecuarias (INIFAP). La colecta de las capsulas se realizé en el orquidario del Campo Experimental Eduardo Sangri Serrano, (INIFAP) en el municipio de Escércega, Campeche, México, en febrero y marzo de 1994, Las cépsul consistié en lo se llevaron al laboratorio en donde se efectus el proceso de desinfeccién que wwiente: se lavaron las edpstlas con una solucién de detergente comercial, enjuagéndose cuatro veces con agua destilada y esterilizada. Bajo la campana de flujo laminar, se remojaron por separado en solucién de alcohol al 70% v/v, con agitacién durante un minuto, enjuagandolas cuatro veces con agua destilada y esterilizada. Se hizo un corte longitudinal con ayuda de un bisturf en cada una de las cépsulas . quedando las semillas expuestas y depositindolas en cantidades no determinadas sobre los medios de cultivo en los frascos, tratando de que la cantidad de semilla cubriera el drea completa en cada uno de los frascos Se sembraron ocho frascos con la especie L. rubescens L.. y seis frascos con E. stamjordianum B. Al cuarto dia de realizada la siembra se contaminaron tres frascos correspondientes a la especie 138L. rubescens L. El medio de cultive empleado para la germinacién en ambas especies fue el Murashigue y Skoog (1962), suplementado con 40 g/l de sacarosa y 10 g/l de agar (medio basal); el pH fue ajustado a 5.7 + 0.1, dosificdndose 25 mi /trasco; tapandose con papel aluminio y sellandose con ligas. Se esterilizaron en autoclave a 120 °C durante 20 minutos. Se incubaron a 25 °C + 1 de temperatura y un fotoperiodo de 16 hora luz. El porcentaje de germinacién se evalué tomando como base el 100% de la semila sembrada, en el total de frascos por especie y considerando el porcentaje correspondiente de material no germinado en los frascos e minados por contaminacién. Para conocer el comportamiento de la germinacién in vitro de ambas especies, se considers el patrén de germinacién in vitro mencionado por ( Luna y Barba 1993), registrando cambios visibles yal microscopio estereoscépico en tiempos no definidos, hasta la manifestacién en tiempo del ultimo estadio. El primer subcultivo se efectué a los 64 dias después de la siembra con la finalidad de separar la semilta, utilizando el mismo medio basal. Al realizar el segundo subcultivo a los 103 dias después de la siembra, se probaron dos medios de cultivo de composicién diferente, para evaluar el desarrollo de las plintulas: et medio basal y el medio basal suplementado con hormonas (Beneil-Amino-Purina 1.0 mg/Vacido naftalenacético 0.1 mg/l). Los tratamientos se analizaron mediante el método de Sotres, citado por (Villalobos}985), para comparacién de tratamientos en forma cualitativa al 5% de significancia, Resultados y discus En la Fig. 1 se muestran los estadfos de germinacién de L. rubescens L. y E. stamfordianum B. y su manifestacién en dias después de la siembra, donde se observ6, a los 12 dias en la especie L. rubescens L. e! primer estadio; a diferencia de E. stamfordianum B. que ocurtié hasta los 27 dias después de la siembra. El comportamiento de manifestacién de los tres primeros estadios difiere en aproximadamente 16 dias entre una especie y la otra, debido a que la capsula de E. stamfordianum B. no estaba completamente madura (color amarillenta) y la solucién de alcoho! probablemente haya quemado la semilla, ya que desde que se sembré adquirié un color café y esto haya retardado en dias Ja aparici6n de Jos tres primeros estad