Prctica 4 Hemostasia y Grupo Sanguneo Objetivos:

Valorar en el laboratorio las diversas etapas del proceso de la hemostasia mediante tcnicas in vitro e in vivo. Desencadenar eh inhibir in vitro el proceso de la coagulacin sangunea, modificando variables fisiolgicas tales como la temperatura y la concentracin de calcio en el medio. Observar al microscopio el polmero de fibrina. Observar la reaccin de aglutinacin en muestras de sangre al mezclarlas con antisueros del sistema AB0 y del sistema Rh. Determinar los diferentes tipos sanguneos de las muestras obtenidas de los alumnos. Determinar la frecuencia de los grupos sanguneos en la poblacin estudiada.

Resultados HEMOSTASIA A. FASE VASCULAR Y FASE PLAQUETARIA Cuntas marcas de sangre se lograron hacer sobre el papel filtro? 12 gotas Todas fueron iguales? No, puesto que cada gota fue siendo cada vez ms pequea. Cul fue el tiempo necesario para que se completaran estas fases de la hemostasia? 1:50 min.

B. FASE PLASMTICA EFECTO D ELA TEMPERATURA Cules de los tres tubos de ensayo presentaron coagulacin de la sangre? Inicialmente en el nico tubo que hubo coagulacin fue en el tubo que estaba en bao de 37 C Cunto tiempo paso para que se llevara a cabo la coagulacin? En bao de 37 C pasaron 3: 43 minutos.

Qu sucedi con los tubos que fueron colocados inicialmente en las temperaturas extremas cuando se colocaron en el bao de 37 C? Presentaron coagulacin. El tubo que inicio en bao de 60 en el que duro 10 min sin presentar cambio alguno, al pasarlo al de 37 C presento coagulacin en un tiempo de 3 minutos. Y el tubo que inicio en bao de hielo al pasarlo al bao de 37 C coagulo en tiempo de 1:48 minutos. El proceso de coagulacin fue ms rpido o ms lento? Por qu? En el caso del tubo que se encontraba en el bao de hielo coagulo ms rpido, porque hubo un incremento de temperatura muy drstico y el fibringeno se convirti en fibrina rpidamente. Por otro lado en el tubo que se encontraba inicialmente en el bao de 60 C el proceso fue ms lento, porque la sangre tena que alcanzar nuevamente la temperatura a la cual se lleva el proceso de coagulacin que en es a 37 C debido a que es la temperatura corporal, a la que se encuentra la sangre tambin dentro del cuerpo. Entonces debamos esperar a que se enfriara y esto tarda ms que calentar la muestra que estaba en bao de hielo. 2. EFECTO DEL CALCIO. - cul fue el efecto observado en la coagulacin al utilizar un quelante de calcio (citrato de sodio)? El efecto observado fue que el citrato de sodio actu como un anticoagulante, ya que al haberle agregado esta sustancia a la muestra de sangre y tras haberlo dejado 15 minutos en el bao a 37C, dicha muestra permaneci sin cambios, es decir, segua liquida, el nico cambio observable fue que a los 15 minutos de haber puesto la muestra en el bao, se empez a formar una pequea capa liquida de color amarillo. -Qu sucedi al agregar cloruro de calcio? Tras agregar a la muestra despus de 15 minutos el coluro de calcio, y haberlo agitado suavemente, pudo observarse como sta comenz a coagularse, esto fue tan rpido, que a la segunda vez de sacarlo del bao, es decir, despus de 1 minuto, la sangre estaba completamente coagulada. -se observ alguna diferencia en el proceso de coagulacin con respecto a lo observado en el tubo a 37C de la parte 1? Si, observamos una gran diferencia en el tiempo de coagulacin de ambas muestras; mientras que en la muestra de la parte 1 el tiempo de coagulacin fue de 3 minutos y 43 segundos, en esta parte, es decir, en la muestra a la que le agregamos el cloruro de calcio, obtuvimos un tiempo de coagulacin, de tan solo 1 minuto. FORMACION DE FIBRINA. -Efecte un esquema de las fibras de fibrina observadas al microscopio.

Imagen: Observacin de las redes de fibrina en el microscopio.

Anlisis: Respecto a la primera parte, de la fase vascular y plaquetara, tenemos que obtuvimos 12 gotas de sangre en el papel, las cuales fueron reduciendo su tamao de una a otra gota, todo se dio en un lapso de 1:50 min; este tiempo corresponde al que se necesita para que se realice la vasoconstriccin y la formacin del tapn en el vaso, el tiempo normal para que se de la coagulacin en una persona normal va de 1 a 6 minutos en heridas superficiales como la que se realizo con la lanceta, aunque es muy variable, en la sangre de nuestro sujeto se tiene un valor normal aceptado. Como anexo agregamos que en la herida causada por la toma de sangre por puncin venosa, el tiempo de coagulacin va de los 5 10 min, el sujeto al cual se le realizo este proceso estuvo en este intervalo, pues alrededor de 6 min fueron suficientes para que dejara de sangrar. Posteriormente se trato de observar la fase plasmtica, y como se ve afectada por distintos factores, el primero de ellos fue la temperatura. El tubo que se coloco en bao a 37C, tardo en coagular 3 minutos con 43 segundos, lo cual es lo esperado, pues la temperatura del bao, es la temperatura corporal y por consiguiente de la sangre, pues esta a la temperatura a la que las plaquetas aun pueden llevar a cabo el proceso de hemostasia. El tubo en el bao que contena el hielo no se dio coagulacin, lo cual tiene sentido, pues para transportar sangre o almacenarla se utiliza hielo para que esta sea funcional, es decir, que no se coagule. Esto se debe a que a bajas temperaturas, la enzima trombina, que no es parte de la sangre, sino que se forma como parte del proceso de coagulacin sangunea, ayuda a la degradacin del fibringeno a monmeros de fibrina. Esta enzima, a bajas temperaturas no participa en la coagulacin, por lo que no hay fibrina. Despues de un tiempo se paso al bao de 37 C y coagulo rpidamente a un tiempo de 1:48.

Por ltimo el tubo a bao de 60C tampoco coagulo, esto debido a que las altas temperaturas afectan la accin enzimtica, las protenas, que son un factor importante en la coagulacin, muchas de ellas se desnaturalizan y pierden su efecto. Despues al pasarlo al bao de 37 C coagulo a los 3 minutos. Ahora bien, analizan la parte del efecto del calcio, se observo como el citrato de sodio no permiti la coagulacin, al ser este un anticoagulante ideal usado en laboratorios, puesto que tiene un efecto quelante con el calcio de la sangre, reacciona con el inhibiendo que este entre en la cascada de reacciones que permiten la coagulacin. Sin embargo al adicionar el cloruro de calcio, entonces hubo otra vez ms calcio en la sangre, ahora estaba en mayor concentracin pues de este se agregaron 3 gotas por 1 gota de citrato, al haber calcio y tal vez en demasa, la coagulacin se dio y rpidamente, pues se dio en 1 minuto, y en comparacin con la primera muestra en el bao de 37 C que coagulo a los casi 4 minutos, pues se nota una gran diferencia, y en concreto el calcio es uno de los factores ms importantes en la coagulacin. Por ltimo se trato de observar la formacin de fibrina, hay que aclarar que por cuestiones de tiempo no pudimos realizar esta prueba; pero se observo el resultado de otro equipo. En el microscopio se pudo observar las redes de fibrina de un color azul devino a la tincin con la solucin de azul de metileno, estas redes no eran muy gruesas sino un poco delgadas. Estas estaban presentes en gran nmero y no tenan un arreglo ordenado sino que estaban por doquier y unidas unas con otras, lo que es normal, pues se trata de protenas. Es de gran importancia poder observar esta red, porque nos da razn de que la fase plasmtica se llevo a cabo, por algo es la reaccin fundamental de la coagulacin sangunea, el pasar de fibringeno a fibrina. Grupos sanguneos Resultados grupales Nombre Tipo de sangre 0+ 0+ 0+ 00+ 0+ A0+ A+ 0+ A+ A+ 0+ A+ A+ 0+ Nombre Tipo de sangre 0+ 000+ 0+ A+ AB+ 0+ A+ 0+ 0+ 00+ 0+ 0-

Resultados por equipo A+ A+ 0+ A+ A+

Realice un esquema representando lo que se observo al mezclar las gotas de sangre con las gotas de los diferentes sueros.

Cuatro de los integrantes tuvieron este esquema al realizarse la prueba de grupo sanguneo Tipo A+

Anti-B

anti-A

anti-AB

Rh

Nuestra compaera Leticia tuvo un resultado similar al del esquema de abajo ya que su grupo sanguneo fue Tipo O+

Cul es tu tipo de sangre?

Abigail Tania Leticia Rodolfo Elimar

A+ A+ 0+ A+ A+

Cul fue la frecuencia de tipos sanguneos que se encontr en la poblacin muestreada?

TIPO DE SANGRE + O OA+ A+ B B+ AB ABTOTAL FRECUENCIA 17 5 7 1 0 0 1 0 31

Anlisis: Por equipo: De los resultados que se obtuvieron en el equipo se puede notar una predominancia en el tipo A y sobre todo en el Factor Rh+ esto nos habla de que las 5 personas que conformamos al equipo tenemos presentes anticuerpos tipo B ya que nadie dio como resultado este sistema, sin embargo hay una persona que sali 0+ y esto se debe a que tiene anticuerpos en el plasma anti-A as como anti-B. Por el contrario todo el equipo, tenemos presente al antgeno Rh denominado D es por ello que todos tenemos un carcter positivo en el factor Rh Si en un determinado caso alguno de los 5 integrantes necesitara una transfusin el tipo 0+ seria el adecuado para a todos en general, sin embargo si no se contara con este grupo sanguneo l A+ sera viable para 4 de nosotros Grupales: En la tabla de resultados grupales se puede observar que el grupo sanguneo con mayor frecuencia es el 0+ teniendo una frecuencia de 17 Despus tenemos al grupo A+ el cual nos presenta una frecuencia de 7 Con menor cantidad se presento el grupo 0- con una frecuencia de 5

Estas frecuencias respecto a los resultados obtenidos nos muestran que la mayora de los integrantes del grupo, tenemos presentes el anticuerpo tipo B o bien el antgeno tipo A porque lo mencionamos como la mayora?, por una persona que nos arrojo un resultado de un grupo sanguneo de tipo AB+, y otra que nos presento un grupo sanguneo A- esto nos habla de una barrera para poder generalizar que todos tenemos presentes al antgeno B. Respecto al factor Rh el 20% de la poblacin muestreada son negativos, esto nos indica que estas personas tienen ausente al antgeno Rh denominado D, es por esto que presentan un carcter negativo en el factor Rh. De las 6 personas que presentan esta caracterstica negativa en su grupo sanguneo 5 de 6 son mujeres, estos resultados nos ayudan a ver que las 5 mujeres que resultaron con este grupo sanguneo deben de tomar muchas precauciones al momento de llevar a cabo un embarazo, ya que si no toman en consideracin su grupo sanguneo podran estar en riesgo de provocar eritroblastosis fetal en su producto. Sin embargo el otro 80% somos de carcter positivo ya que contamos con el antgeno D , la teora nos marca respecto a los dos parmetros que conforman el factor Rh que el carcter positivo es el ms comn de los dos y es as como nuestro muestreo nos lo arroja.

Cuestionario Qu importancia tiene conocer el tiempo de coagulacin en un individuo? Cul es el valor que se considera normal? Se debe saber el tiempo de coagulacin de un individuo para poder comparar con el tiempo normal de coagulacin y as determinar si el individuo est sano o posee alguna enfermedad. Es decir, si el valor de tiempo de individuo es ms bajo al normal posiblemente tenga la enfermedad de hipercoagulacin, que es la tendencia a formas demasiados cogulos incluso hasta en los vasos sanguneos, cuando uno tiene alguna herida. Por otro lado si el valor de tiempo del individuo es alto en comparacin con el valor normal, posiblemente sufra de hemofilia, que se caracteriza en que se tienen hemorragias excesivas, ya que el proceso de coagulacin es muy tardado, cuando uno sufre alguna herida. El valor que se considera normal en la coagulacin de un individuo es de 5-11 minutos. Cul es la explicacin de lo ocurrido con la sangre colocada en hielo y con la mantenida a 60 C

Qu es la fibrina? Es una protena insoluble que participa en la coagulacin de la sangre, formada a partir de fibringeno por accin de la trombina. La fibrina es inicialmente una malla laxa de fibras entrelazadas. En qu consiste la enfermedad llamada Hemofilia, cual es su origen y como se transmite?

La Hemofilia en general, se caracteriza por manifestaciones hemorrgicas espontneas o bien por un sangrado excesivo cuando se produce algn tipo de traumatismo. Esta enfermedad se caracteriza por una anomala en alguno de los factores que participan en el mecanismo llamado cascada , que se efecta para la formacin de fibrina a partir de fibringeno y que se lleve con xito la coagulacin de la sangre. Existen dos tipos de Hemofilia: Hemofilia A, se produce por que no es del todo funcional el factor VIII y la Hemofilia B cuando no lo es el factor IX. Esto puede ser porque no hay nada de factor o bien porque el que hay no funciona adecuadamente. La Hemofilia es una enfermedad hereditaria cuyo defecto se encuentra en el cromosoma X, es decir, el cromosoma que se relaciona con el sexo por lo que es una enfermedad hereditaria pero adems ligada al sexo, lo que significa que en el caso concreto de la Hemofilia la transmiten las mujeres (portadoras) y la padecen los hombres debido a la dotacin de dos cromosomas X (XX) de la mujer y una dotacin XY en el hombre. La causa de que un factor no funcione es que el organismo lo sintetice defectuoso y como
se trata de una enfermedad hereditaria esto significa que el defecto se encuentra en una regin del ADN (gen) que da lugar a una protena que es el factor.

Qu diferencia existe entre el suero y el plasma? El plasma es la porcin liquida de la sangre, en la cual se encuentra un inmenso numero de iones, molculas inorgnicas y orgnicas en trnsito para diversas partes del cuerpo o que ayudan en el trasporte de las otras sustancias. El plasma se coagula en reposo, permaneciendo lquido solo si se agrega un anticoagulante. Si se deja coagular la sangre total y se elimina el coagulo, el liquido remanente se denomina suero. Est tiene esencialmente la misma composicin que el plasma excepto que su fibringeno y los factores II, V y VIII han sido separados y posee un contenido ms alto en la serotonina por la degradacin de plaquetas durante la coagulacin. Cul es el tipo sanguneo que predomino en el grupo? El grupo sanguneo que predomino en el grupo fue 0+ Si una muestra de sangre se aglutina con el suero anti B y con el suero anti-D pero no lo hace con el anti-A, A qu grupo sanguneo corresponde? El grupo sanguneo que corresponde es B+ Cul es la estructura del antgeno H? Membrana g Ceramida, =Glucosa, =Galactosa, =N-acetilgalactosamina, =Fructosa

Por lo tanto la estructura del antgeno H es una ceramida, glucosa, galactosa, N-acetilgalactosamina, una galactosa y est unida a una fructosa.

Cul es la diferencia estructural entre el antgeno A y el antgeno B con respecto al H? Membrana Antgeno A Antgeno B

g =Ceramida, =Glucosa, =Galactosa, =N-acetilgalactosamina, =Fructosa

Que en el antgeno A posee una acetilgalactosamina es su estructura por otro lado en el antgeno B posee una galactosa en su estructura. Qu utilidad tiene la determinacin del tipo sanguneo? Es importante conocer el tipo sanguneo de un individuo para llevar a cabo con xito las transfusiones de sangre, si es que se requieren. Tambin se puede diagnosticar eritroblastosis fetal y llevarse a cabo medidas de prevencin.

Conclusiones Como ya sabamos, la hemostasia consta de 3 etapas, en la fase vascular y plaquetara se observo indirectamente, como el flujo del torrente sanguneo disminuye cerca de la herida, esto por la vasoconstriccin y posteriormente por la entrada en escena de las plaquetas que desencadenan una serie de etapas en pro de tapar la herida y con ello evitar una hemorragia a gran escala y poder volver a dilatar el vaso sanguneo. Ahora bien respecto a la fase plasmtica, se concluye certeramente que es esta donde se da la coagulacin, la cual se ve alterada por distintos factores, primero est la temperatura, en temperaturas extremas (a bajas y altas temperaturas) la coagulacin no se da puesto que se inhibe la accin de alguno de los factores o agentes ms importantes de la coagulacin (ejemplo la trombina); esto debido a que la coagulacin se da a temperatura corporal, es decir, aproximadamente a los 37 C. El otro efecto es la inhibicin y presencia del calcio en la sangre y como ya se dijo anteriormente, la inhibicin del Ca, no permite la coagulacin, pues participa activamente en la cadena de reacciones de la fase plasmtica, y toda sustancia que lo inhiba su accin es lo que conocemos como un anticoagulante, el usado en clase no es un anticoagulante natural de la sangre, sino es uno usado en laboratorios de estudio (citrato de sodio). Por el contrario al aumentar su concentracin en la sangre este produce una reaccin de coagulacin ms eficiente. La formacin de fibrina por otro lado, nos indica que la fase plasmtica se lleva a cabo, puesto como ya se dijo antes, es la reaccin fundamental de la coagulacin sangunea, es el mecanismo en el que el

fibringeno soluble en el plasma se transforma en estas redes proteicas y resistentes que tienen un papel importantsimo en evitar las hemorragias. Es fundamental tener el conocimiento del grupo sanguneo de una persona, esto para poder llevar a cabo una transfusin a dicho individuo y no provocar que sus anticuerpos ataquen a la sangre colocada en el y que no le servira en fin de salvarlo. Tambin es importante para evitar enfermedades como la eritroblastosis fetal, la cual est directamente relacionada a la ausencia del agente D por parte de la madre.

Bibliografa -Vives i Corrons, Joan Llus; Manual de tcnicas de laboratorio en hematologa, Editorial Elsevier, Pg. 612 -Baynes, John W., Bioqumica mdica, Editorial Elsevier, Espaa, 2005, Pg. 25 -pag. 468