ENSAYOS PRELIMINARES

1 de enero de 2012

Ensayos Preliminares o de Orientacin Papel Sensible

1. Introduccin
El anlisis qumico toxicolgico comprende una serie de aplicaciones como son la clnica, la pericia forense, el anlisis de alimentos o destinado a la evaluacin de un riesgo asociado a la exposicin humana a las sustancias qumicas. A travs el tiempo, el anlisis qumico toxicolgico ha ido evolucionando desde primitivas estrategias de identificacin, orientadas por grupos de sustancias, mediante metodologas sencillas, hasta las disponibles hoy por medio de instrumental de alta complejidad. Frente a la demanda de anlisis qumico toxicolgico, de por s variados y tcnicamente complejos, resulta imprescindible que el laboratorio cuente con una capacidad de respuesta apropiada. Para ello el proceso analtico deber cumplir con un elevado criterio de calidad, considerando disponibilidad, confiabilidad, especificidad y sensibilidad del mtodo elegido. La obtencin de la muestra constituye el primer eslabn de ese proceso y es el que condicionar las etapas siguientes del anlisis hasta llegar al resultado, por lo que establecer pautas claras en esta etapa crtica no debe ser pasado por alto. En nuestro medio el anlisis qumico toxicolgico viene siendo realizado por distintos profesionales y los laboratorios aplican protocolos de diversas procedencias o bien se sigue un criterio personal siguiendo los principios de la Qumica Analtica. Antes de proceder al anlisis definitivo, conviene realizar unos ensayos preliminares que nos orienten en algunos aspectos, y que sirven para un mejor conocimiento del producto o de la posibilidad de la presencia de un toxico determinado. En estos ensayos preliminares se observan los

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caracteres organolpticos de la muestra, se determina su peso o su volumen dependiendo del tipo de material que se trate, su comportamiento frente a papeles reactivos, micrografa, etc.

2. Marco terico
LOS ENSAYOS PRELIMINARES Son tcnicas de carcter orientativo que realizan. Por ejemplo un screening de los analitos de inters presentes en la muestra. Sus principales ventajas son la sencillez y la rapidez. Entre sus inconvenientes podemos citar su falta de especificidad y que estn desarrolladas para un nmero limitado de analitos. En la actualidad los ms utilizados son los inmunoensayos (basados en distintos principios fsico-qumicos). Otros ensayos aplicables seran las reacciones coloreadas y la cromatografa en capa fina. En los casos con historial de intoxicacin por drogas terapeticas (medicamentos) el anlisis preliminar se realiza utilizando cromatografa lquida con detector UV o PDA. Esto permite la identificacin preliminar antes de proceder a la confirmacin y cuantificacin. En el anlisis para drogas cidas se utiliza la metodologa de TOXI-LAB (Cromatografa de capa fina). Es una tcnica donde se extrae y se concentra la droga.

3. Parte experimental
3.1. Objetivos:
Determinar la posible sustancia toxica de la muestra de orina utilizando los ocho papeles sensibles.

3.2. Reactivos
Sulfato de cobre II Resina de guayaco 10% Iodo-iodurarado Reactivo de almidn 1% Carbonato de sodio 10% Acido pcrico 1% Nitrato de plata 10% Cloruro de paladio 50% (PdCl 50%) Tartaro emetico10% Acetato de plomo 10% Hidroxido de sodio 10% Sulfato de hierro II 10 %

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cido clorhdrico concentrado Acido tartrico Lmina metlica de cobre

3.3. Materiales
Frasco de orina con la muestra Pipetas Tiritas de papel filtro de 1cm de ancho x 8 cm de largo Lminas de vidrio Bao mara Campana extracto de gases

3.4. Anlisis Fsico

MUESTRA
Aspecto Color Olor Volumen Liquido Amarillo naranja En frio En caliente 108mL Siu generis Siu generis

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3.5. Anlisis Qumico: Ensayo en papel sensible

Medir 27mL de muestra (La cuarta parte del volumen total)

Preparar los ocho papeles sensibles

Colocar los ocho papeles sensibles en el envase que contiene la muestra ms 100g de cido tartrico y tapar el frasco. Bao Mara por 5 minutos

Retirar los papeles y leer

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3.5.1.

Papel Sensible de Schombein

a) Nombre de la reaccin: Papel guayaco-cuprico o de Schonbein. Es un ensayo sensible pero inespecfico. Se puede reconocer hasta 0.25g de cido cianhdrico b) Fundamento: El ensayo se fundamenta en el aumento del potencial de oxidacin de las sales cpricas al pasar a sales cuprosas insolubles o poco disociadas. El ensayo es identificativo dado que al sistema Cu(II)-cianuro se acopla un compuesto reductor (resina de guayaco) que por oxidacin origina un derivado coloreado (de color castao vira al azul). c) Tcnica operatoria: En el momento de su uso, se embebe una franja de papel de filtro en una solucin de CuSO4 al 10.0 % dejando escurrir el exceso. Luego se embebe en una solucin alcohlica de resina de guayaco al 10% de reciente preparacin. El reactivo del papel de guayaco puesto en la boca del recipiente que contiene el material a analizar y llevarlo a bao mara por 5 minutos. Luego el papel se colorea de azul debido a la oxidacin. d) Mecanismo de reaccin: 16CN-1 +16H+ 16HCN + 8Cu++ 8(CN)2Cu 4C2N2+C22H26O6+H2O 4Cu2(CN)2 + 4HCN 12HCN 8Cu(CN)2 + 16H+ 4Cu2(CN)2 + 4C2N2 4HONC+ 4HCN+C22H24O9+8H+ 4[Cu2(CN)3]- + 4H+

16CN- + 8Cu++ + 7H2O + C22H26O6

4HONC+ [Cu2(CN)3]- + 12H- + C22H24O9

e) Reaccin Qumica Balanceada: 12HCN- + 3H2O+ 9CuSO4 + C22H26O6 f) Resultado: Negativo. No se coloreo el papel sensible. 9H2SO4+ 3Cu2(CN)4 +3Cu(CN)2 + C22H24O9

Reaccin Negativa

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3.5.2.

Papel Sensible de Iodo-Almidn

a) Nombre de la reaccin: Papel iodo-almidonado. Tiene una sensibilidad de 1g b) Fundamento: El ioduro de potasio forma el anin triioduro (I3) al combinarse con iodo elemental. A diferencia del iodo, los triioduros son altamente solubles en agua, por lo que el ioduro de potasio aumenta considerablemente la solubilidad del iodo elemental en agua. El in yodo (II) (I2+) puede reducirse a in yoduro (I-) por la accin, de un agente reductor que puede ser el cido sulfhdrico o el cido cianhdrico, y cuando todo el yodo se consume, el color azul desaparece. Esto se llama una valoracin yodomtrica. c) Tcnica operatoria: En el momento de su uso, se embebe una franja de papel de filtro con una gota de solucin de almidn dejando escurrir el exceso. Luego se embebe con una gota de solucin acuosa de iodo-iodorado. d) Mecanismo de reaccin: KI +I2 + 2almidn 2almidn-I + KI

HCN + 2almidn-I e) Reaccin Qumica Balanceada: HCN + I2

2I-1 + 2almidn +CN-1 + H+1

ICN + HI

Otra reaccin: H2S + I3 S0

(Elemental) +

3I- + 2H+

f) Resultado Positivo (se presenta una decoloracin total) Reaccin Positiva

Indica la presencia de HCN.

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3.5.3.

Papel sensible de Griynard

a) Nombre de la reaccin: Ensayo de Grignard, reaccin poco sensible que necesita 5 minutos para evidenciarla. Adaptacin de la clsica reaccin de Hlasiwetz y Waller (reaccin isopurprica) b) Fundamento: El ensayo se fundamenta en que el cido pcrico en presencia del HCN, liberado de la muestra cida, forma isopurpurato alcalino, de color rojo al rojo naranja en el transcurso de cinco minutos. c) Tcnica operatoria: Embeber tiras de papel filtro con solucin acuosa de cido pcrico y escurrir el exceso. Si el papel se prepara en el momento, el ensayo presenta su mxima sensibilidad. El reactivo dura indefinidamente. El papel es puesto en la boca del recipiente que contiene la muestra a analizar. Un color rojo naranja indica resultado positivo. d) Mecanismo de reaccin:
-

O N O

HO

O N
+

O O
-

HO

O N

O N OH2 O
-

HO

O N H

N O

O N O
+

CH
N C
-

+
N

C O
-

O
-

O N O
N C
-

OH

O N

O N O
-

OH

O N

O N O
-

OH

O N

O N
+

O N O
+

O H C
-

HC

N O
-

N O
-

C O

C O

C O

O N O N

O HO N
+

O O
-

OH NH2
+

CN
Reduccin

O N
+

+
-

HO

HN

N O
-

C O

N O
-

C O

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e) Reaccin Qumica Balanceada

f) Resultado: La formacin de una coloracin rojiza. Indica la presencia de acido cianhdrico. Reaccin Positiva

3.5.4.

Papel Sensible de Nitrato de Plata

a) Nombre de la reaccin: Poco sensible debido a la poca cantidad de reactivo para reaccionar. b) Fundamento: Reacciona con la muestra problema formando cido sulfhdrico (en forma de sulfuro argntico) adems de arsina y fsforo blanco. c) Tcnica operatoria: En el extremo de una tira de papel de filtro, agregar I o II gotas de solucin de nitrato de plata 10%. En el otro extremo colocar el nmero 4. Obtenida la tira reactiva (papel sensible) colocarlo al borde de un frasco boca ancha, que contenga la muestra problema con cido tartrico. Luego, colocarlo en bao Mara hirviente por cinco minutos. d) Mecanismo de reaccin: H2S + 2Ag+ ASH3 + 6Ag+ + 2H2O Ag2S + 2H+ AsO2H + 6H+ + 6 Ag

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e) Reaccin Qumica Balanceada: H2S + 2Ag+ Ag2S + 2H+

Otras reacciones: a. Fosmamina: formacin de fosfuro de plata H3P + 3Ag+ 3H+ + Ag3P

b. Arsenamina: separacin de plata metlica: H3As + 6Ag+ + 2 H2O HAsO2 + 6H+ + 6AgO

c. Estibamina: formacin de antimoniuro de plata. H3Sb + 3AgO Ag3Sb + 3H+

d. Fsforo blanco: P4 + 6 H2O H3P + 3 Ag+ H3P + 3H3PO2 Ag3P + 36H+

12Ag+ + 3 H3PO2 + 6H2O

3 H3PO4- + 15H+ + 12AgO

f) Resultado: Negativo

Reaccin Negativa

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3.5.5.

Papel Sensible de Cloruro de paladio

a) Nombre de la reaccin: Ensayos a la gota con reactivos - Papel Sensible de Cloruro de Paladio (5%). b) Fundamento: El paladio metlico producido da esa coloracin griscea oscura. El cloruro de paladio reacciona con el monxido de carbono presente en la muestra produciendo el paladio metlico y la precipitacin del dixido de carbono. Adems de acidificar el medio. c) Tcnica operatoria: Se impregna una tira de papel con cloruro de paladio en un extremo. Se lleva la muestra a bao Mara con el papel preparado con el reactivo. Lmite de identificacin: 2 g de CO. d) Mecanismo de reaccin:

Pd+2 + -OC

PdO + O-C+

Pd O + O-C-OH

H2O-

Pd O + OCO + HCl HCl

Pd O + OC-O-OH

e) Reaccin Qumica Balanceada:

PdCl2 + CO + H2O

Pd0 + CO2 + 2HCl

f) Resultado

Reaccin Negativa

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3.5.6.

Papel Sensible de Trtaro emtico

a) Nombre de la reaccin: Ensayos a la gota con reactivos - Papel Sensible de Trtaro Emtico (10%) o tartrato de antimonio y potasio. b) Fundamento: El trtaro emtico al entrar en contacto con el cido sulfhdrico precipitar en forma de sulfuro de antimonio. c) Tcnica operatoria: Se impregna una tira de papel con trtaro emtico cloruro en un extremo. Se lleva la muestra a bao Mara con el papel preparado con el reactivo. d) Mecanismo de reaccin:

OSb-S-SbO

O-Sb-S-SbO S

H-O-Sb-S-SbO S

S H H SSb-S-Sb-O-H S H

H H2O + SSb-S-SbO

SSb-S-Sb-O S

S H H H SSb-S-SbS + H2O H

e) Reaccin Qumica Balanceada: 2K(SbO)C4H4O6 +3H2S

Sb2S3 + 2KH(C4H4O6) +2H2O

f) Resultado Reaccin Negativa

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3.5.7.

Papel Sensible de Acetato de plomo

a) Nombre de la reaccin: Papel sensible de acetato de plomo Sensibilidad: 1 ug de azufre b) Fundamento: Se basa en la formacin de sulfuro de plomo (color negruzco). c) Tcnica operatoria: Se impregna una tira de papel con una solucin al 10% de acetato de plomo y se expone al interior del recipiente por unos minutos. Se formar unos puntos negros evidenciando la presencia de sulfuro de plomo. d) Reaccin Qumica Balanceada:

SH2 + Pb(CH3COO)2 e) Resultado

SPb + 2CH3COOH

Reaccin negativa, no hay formacin de puntos negros.

3.5.8.

Papel Sensible Alcalino

a) Nombre de la reaccin: Ensayo de Magnin Sensibilidad: Reaccin poco sensible (10 g de in cianuro) pero muy especfica. b) Fundamento: Se basa en la formacin del complejo azul de Prusia. c) Tcnica operatoria: Se impregna una tira de papel con hidrxido de sodio al 2% y se expone en el interior del recipiente unos minutos. Se retira y se extiende sobre una cpsula de porcelana. Se distribuyen sobre la superficie expuesta 4 gotas de solucin de sulfato ferroso 2%. Se observa un precipitado verdoso que luego pasa a castao (hidrxido frrico). Finalmente por agregado de unas gotas de cido clorhdrico concentrado se observa color azul por formacin azul de Prusia.

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d) Mecanismo de reaccin: HCN + OH6CN- + Fe+2 Fe+2 + 2OHCN- + H2O Luego [Fe(CN)6] -4 Fe(OH)2 precipitado verde 2Fe(OH)3 en medio HCL Fe(CN)6FeNa + 3H2O Azul de prusia e) Reaccin Qumica Balanceada: Fe(OH)3 + [Fe(CN)6] -4 + 3H + + Na+ Na [Fe2(CN)6] + 3H2O

2Fe(OH)2 + 1/2O2 + H2O Fe(OH)3 + [Fe(CN)6] -4 + 3H + + Na+

f) Resultado Reaccin positiva, formacin de azul de Prusia

Azul de prusia

3.6. Anlisis qumico: ensayo en lmina metlica

a) Fundamento: El arsnico o mercurio se deposita en una laminilla de cobre cuando se reduce el mercurio o arsnico. b) Tcnica operatoria

Colocar una laminilla de Cu en el frasco que contiene la muestra

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Agregar 0.5mL de HCl

Bao Mara por 5minutos

Observar

c) Reaccin qumica Hg+2 +Cu0 d) Resultado: Negativo. No se observ cambios. Hg0 + Cu+2

4. Discusin
La muestra analizada por los ocho papeles sensibles que son muchos de ellos inespecficos porque pueden reconocer ms de una sustancia toxica es decir son generales; esto complica el anlisis pero nos aguda u orienta nuestro anlisis posteriores a hacia una posible sustancia toxica. Se le agrego acido tartrico a la muestra para poder regenerar los gases txicos. Para concluir que nuestra muestra posiblemente contenga cianuro o sus sales respectivas es porque dio positivo en tres papeles sensibles.

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5. Conclusin
El cianuro y sus respectivas sales son las posibles sustancia toxica de la muestra de orina analizada.

6. Bibliografa
Giannuzzi Leda, Tomas Mabel y Ferrari Luis. Txicos voltiles y gaseosos. Disponible en: http://www.biol.unlp.edu.ar/toxicologia/seminarios/parte_1/toxicos_volatiles.html. Revisado el 24 de enero del 2012.

Manual prctico de quimica toxicologica. Guatelli Manuel

El cido cianhdrico. Disponible en: http://diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/11789/2/spm83.pdf Ensayos preliminares de orientacin. Disponible en: http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_medicina/Documentos/materialinstr uccionalescuelasycatedras/bioanalisis/lab.toxicologia/contenidos/introduccion/ensayostoxicologico.html Monxido de carbono. Disponible en: http://www.biol.unlp.edu.ar/toxicologia/seminarios/parte_1/monoxido_carbono.html

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