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No estudo de quantificao de DNA atravs da espectrofotometria tem se como base que o DNA de fita simples, quando exposto a radiao

deste mtodo, possui uma absoro maior que o DNA de fita dupla helicoidal. Isso se d porque as bases do DNA de fita dupla esto encontradas no interior das hlices. Sabendo essas informaes, podemos monitorar por espectrofotometria o momento de desnaturao da dupla fita, que de rpida transio e caracterizada por um aumento significativo na absoro de radiao da mistura analisada. As bases aminadas nos cidos nucleicos so cromforos fortes, ou seja, so as molculas responsveis pela absoro da luz neste mtodo. As cinco bases encontradas no DNA ou no RNA absorvem a luz a uma frequncia entre 250 nm e 280 nm, h de se ressaltar que as proteinas podem interferir nessa absoro, tendo em vista que a frequncia com que elas so absorvidas tipicamente de 280 nm. Para tal, o padro tpico de absoro do DNA de 260 nm, podendo ser analisado em frequncias prximas a esta banda de radiao. Para melhor constatao da quantidade real de DNA obtido na amostra se faz o clculo da razo entre as frequncias tpicas do DNA e da protena. Tal clculo visa determinar a quantia exata de DNA obtido e quanto desta pode ter sido contaminada com protenas, fenis, polissacardeos, alcois ou outros cidos nuclicos, minimizando a interferncia da absoro das protenas devido a proximidade das frequncias de absoro. R= A260nm / A280nm R<1,8 amostra com pequeno grau de pureza de DNA R1,8 amostra com grande grau de pureza de DNA Na anlise de pureza do DNA extraido, verificada pela reao A260 / A280, constatouse que foram obtidas amostras de qualidades significativas. No DNA obtido pela banana R< 1,8, evidenciou-se que a amostra no possua um elevado grau de pureza, podendo, assim, existir contaminaes, o que inviabilizaria a utilizao desta amostra para clculos e anlises posteriores que necessitam de maior preciso.

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