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Revista Brasileira de Farmacognosia Brazilian Journal of Pharmacognosy 18(3): 387-393, Jul./Set.

2008

Recebido 15 Novembro 2007; Aceito 26 Maio 2008

Artigo

Estudo toqumico de goiaba (Psidium guajava L.) com potencial antioxidante para o desenvolvimento de formulao tocosmtica
Silvia M. Iha,1 Ketylin F. Migliato,1,2 Jos C. R. Vellosa,3 Luis Vitor S. Sacramento,3,4 Rosemeire C. L. R. Pietro,1,2 Vera L. B. Isaac,1 Iguatemy L. Brunetti,3 Marcos A. Corra,1 Hrida R. N. Salgado*,1,2
Departamento de Frmacos e Medicamentos, Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho, 14801-902 Araraquara-SP, Brasil, 2 Programa de Ps-Graduao em Cincias Farmacuticas, Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho, 14801-902 Araraquara-SP, Brasil, 3 Departamento de Anlises Clnicas, Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho, 14801-902 Araraquara-SP, Brasil, 4 Departamento de Produtos Ativos e Naturais, Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho, 14801-902 Araraquara-SP, Brasil
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RESUMO: Considerando-se a qualidade dos toterpicos, importante salientar que a preocupao com esta questo inclui rigoroso acompanhamento das diferentes etapas do desenvolvimento e produo destes produtos, desde a coleta do vegetal at a disponibilidade do produto nal. Neste trabalho, foram realizados o controle da qualidade, o potencial antioxidante como tambm ensaios biolgicos in vitro do fruto da goiabeira (Psidium guajava L.), para o desenvolvimento de uma formulao tocosmtica. Os resultados obtidos mostraram que o fruto apresenta taninos e avonides, bem como atividades antioxidante e antimicrobiana. A anlise microbiolgica no apresentou crescimento de patgenos na formulao desenvolvida entre os outros testes realizados. Destaca-se a importncia do estabelecimento do controle da qualidade para as plantas, a m de que sejam utilizadas para o desenvolvimento de uma formulao tocosmtica segura, ecaz e com qualidade. Unitermos: Psidium guajava, Myrtaceae, goiaba, atividade antioxidante, tocosmtico, atividade antimicrobiana. ABSTRACT: Phytochemical study of guava (Psidium guajava L.) with potential antioxidant activity aiming at developing a phytocosmetic formulation. Considering the quality of the phytotherapic products, it is important to point out that the concern with this question includes rigorous accompaniment of the different stages of the development and production of these products, since the collection of the vegetable until the availability of the end product. In this work the quality control, the antioxidant potential were performed as also biological assays in vitro of guava fruit (P. guajava L.), for the development of a phytocosmetic formulation. The results had shown that the fruit presents tannins and avonoids, as well as antioxidant and antimicrobial activities. The microbiological analysis did not present growth of pathogens. The importance of the establishment of the quality control for the plants is relevant, so that they are used for the development of a phytocosmetic formulation considered safe, efcient and with quality. Keywords: Psidium guajava, Myrtaceae, guava, antioxidant activity, phytocosmetic, antimicrobial activity.

INTRODUO A Organizao Mundial da Sade refere que 65 a 80% da populao mundial buscam nas plantas ns teraputicos, seja por motivo de pobreza ou precariedade no sistema de sade (Calixto, 2000). Nesse sentido, o Brasil tem enorme biodiversidade, possuindo uma das mais ricas oras do mundo e os poucos estudos existentes deste material 387

justicam a busca de maior desenvolvimento nesta rea. Uma vez que a biodiversidade brasileira no totalmente estudada, milhes de espcies distintas de vegetais, microrganismos ou animais podem ser pesquisados (Guerra & Nodari, 2001). No decorrer do tempo, o homem veio descobrir que as frutas possuem no s um grande valor nutritivo, mas tambm efeito medicinal e cosmtico estando, atualmente, entre os maiores agentes teraputicos obtidos da natureza.
ISSN 0102-695X

* E-mail: salgadoh@fcfar.unesp.br, Tel. +55-16-33016967, Fax +55-16-33016960

Estudo toqumico de goiaba (Psidium guajava L.) com potencial antioxidante para o desenvolvimento de formulao tocosmtica

A formulao para obteno de cosmticos naturais signica dar a preferncia, sempre que possvel, aos derivados vegetais, evitando a sua substituio por substncias sintticas. Portanto, extremamente importante realizar um balanceamento lgico e coerente entre as matrias-primas sintticas e naturais, maximizando a ao farmacolgica, a m de alcanar melhores efeitos (Rodrigues, 2001; Pietro et al., 2006). Rocha Filho (2000) refere o uso de licopeno, representante dos carotenides, em formulaes cosmticas, devido s propriedades curativas e de preveno relativas a metais pesados e atividades antioxidantes e anti-radicais livres. Atualmente, os consumidores buscam por produtos que apresentam elevada qualidade, os quais minimizam os fenmenos de oxidao durante as fases de processamento e armazenagem dos produtos. Alm dos conjuntos de processos que objetivam eliminar e minimizar a atividade oxidante, buscam-se matriasprimas que apresentem caractersticas antioxidantes (Chorilli et al., 2007; Vicentino & Menezes, 2007). P. guajava (L.) (Myrtaceae), conhecida como goiabeira, um arbusto ou rvore esgalhada, podendo atingir 8 m de altura, sendo encontrada do Mxico at So Paulo. Comumente conhecida como guayabo na Espanha e guava nos Estados Unidos, freqentemente cultivada como um alimento por ser uma fruta agradvel, que tambm utilizada na produo de gelias (Lozoya et al., 2002), sorvetes, sucos, vinhos, queijos e outros. A fruta uma baga, que consiste em um pericarpo e uma polpa com numerosas pequenas sementes (Escrig et al., 2001). Existem dois tipos mais comuns, a vermelha e a branca, sendo a vermelha mais saborosa e nutritiva. Pode ser cultivada a partir das sementes. Possui quantidade regular de cidos, acares, e pectinas. Seus principais constituintes so taninos, avonides, leos essenciais, lcoois sesquiterpenides e cidos triterpenides. As partes utilizadas da planta so a casca, brotos, folhas e razes. Possui atividade antimicrobiana, antimutagnica e atividade hipoglicmica, dentre outras (Corra, 1926; Gondim et al., 2006; Amaral et al., 2006). Na medicina popular utilizada para clicas, colite, diarria, disenteria e dor de barriga (Vendruscolo et al., 2005; Trres et al., 2005; Oliveira et al., 2007; Agra et al., 2007). Na ndia, as folhas novas so usadas como antitussgeno. Na China utilizavam suas folhas como antiinamatrio e agente hemosttico. A decoco destes farmacgenos usada para o tratamento de clera e para reduzir vmitos e diarria. Os chs das folhas so teis contra diarria, alm de terem propriedades antiespasmdicas (Lin et al., 2002). utilizada como anti-sptico bucal e intestinal, til no tratamento das inamaes da boca e da garganta quando usado no bochecho e gargarejo (Alves et al., 2006). Recentemente, a capacidade de atividade antioxidante de quercetina glicosdica, principal constituinte da folha do extrato metanlico, tem atrado a ateno de pesquisadores para aplicao destes produtos na rea da farmacologia.

Alm disso, a atividade antioxidante dos compostos polifenlicos tem sido estudada indicando que a goiaba pode ser um tipo natural de antioxidante (Escrig et al., 2001). O presente trabalho teve por objetivo o estudo toqumico, a avaliao da atividade antimicrobiana e antioxidante, bem como o desenvolvimento de uma nova formulao pela incorporao do extrato de Psidium guajava (L.). MATERIAL E MTODOS Material vegetal As amostras de P. guajava (L.) foram coletadas na Chcara Recanto Sonho Feliz. Rua Fernando Carvalho, 1881- Quadra 4 - Lote 9, Bairro Chcara Flora, Araraquara - SP, durante o perodo de 13 a 30 de Agosto de 2004. Na mesma ocasio, o material foi amostrado para o processo de conferncia de exsicata, para posterior identicao e depsito em herbrio da UNESP de Rio Claro, sob nmero 42747. Preparo, secagem e moagem do material A espcie a ser investigada foi separada em partes, a saber: raiz, caule, folhas, frutos, partes areas ou qualquer outra adequada ao seu processamento. O fruto de P. guajava (L.) foi seco em estufa de ar circulante a 60 oC por quatro dias, pulverizada em moinho de bolas e armazenada em local fresco sem umidade. Utilizou-se etanol 70 oGL, como lquido extrator para o preparo do extrato atravs do mtodo de percolao e, posteriormente, foi realizada a liolizao. Caracterizao toqumica Do total de extrato liolizado obtido, 50 g foram submetidos ao fracionamento com solventes de polaridade crescente: diclorometano (FD), acetato de etila (FA) e n-butanol (EB), para o fornecimento das fraes EE-FD, EE-FE e EE-EB, respectivamente. A frao nal foi denominada EE-FF. Aps o fracionamento, os solventes utilizados foram evaporados para que o resduo obtido fosse ressuspendido em soluo indicada para possibilitar a realizao dos ensaios. Vrios sistemas de eluentes foram testados para que a melhor fase mvel fosse utilizada para o extrato etanlico da goiaba. Assim, para a eluio do extrato diclorometano foi utilizado hexano: acetato de etila (8,0:2,0 e 6,0:4,0). Para a eluio do extrato acetato de etila foi utilizado hexano: acetato de etila, 1:1, v/v. Por m, para a eluio do extrato butanlico foi utilizado clorofrmio: etanol, (8,0:2,0; 7,5:2,5 e 6,5:3,5, v/v). Os reveladores utilizados foram o anisaldedo, o -caroteno e o NP/polietilenoglicol (NP/PEG).
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Caracterizao qualitativa do extrato etanlico e suas fraes Cromatograa de avonides em camada delgada Uma amostra do extrato de P. guajava foi ressupendida em etanol e aplicada sobre a placa cromatogrca. A cromatograa foi desenvolvida em duas fases mveis, clorofrmio: metanol: n-propanol: gua (5,0:6,0:1,0:4,0, v/v/v/v) e clorofrmio:metanol (7,5:2,5, v/v). Utilizou-se como revelador NP/PEG para a primeira fase e para a segunda, -caroteno e como marcadores, a rutina e quercetina. Cromatograa de taninos em camada delgada Uma amostra de 3 g do extrato de P. guajava foi solubilizada em 60 mL de gua destilada, e colocada em funil de separao para realizar o fracionamento com acetato de etila. A cromatograa foi desenvolvida em duas fases mveis, acetato de etila: cido frmico:gua (90 : 5 : 5, v/v/v) e clorofrmio:metanol: n-propanol: gua (5 : 6 : 1 : 4, v/v/v/v). Utilizaram como agentes reveladores soluo de cloreto frrico a 1% em metanol e anisaldedo com traos de cido sulfrico; como marcador utilizou-se a epicatequina. Cromatograa da frao diclorometano, acetato de etila e butanlica em camada delgada Uma amostra do extrato de P. guajava foi ressupendida em etanol e aplicada sobre a placa cromatogrca. A cromatograa foi desenvolvida na fase mvel, hexano: acetato de etila (8:2, v/v) para as fraes diclorometano e acetato de etila, para a frao butanlica utilizou-se clorofrmio: etanol (6,5 : 3,5 v/ v). Utilizou-se como revelador NP/PEG. Os marcadores utilizados foram rutina e quercetina para todas as fraes. Preparo da emulso

Em tubos de ensaio, pipetou-se a amostra (extrato etanlico de P. guajava em diferentes concentraestabela 2), seguida por DPPH (concentrao nal 60 M). O ensaio tambm foi realizado para a vitamina C e cistena, como padres antioxidantes, em diferentes concentraes (Figura 1B). Completaram-se os volumes para 1 mL com etanol absoluto. Incubou-se a mistura por 15 minutos, ao m dos quais leu-se a absorvncia em 531 nm. As absorvncias foram medidas utilizando etanol e extrato como branco (Braca et al., 2003). Todos os testes foram realizados em duplicata. Na presena de scavengers deste radical, a intensidade da absorvncia em 531 nm diminui e a diferena da absorvncia na ausncia e na presena das amostras (Tabela 2), que fornece a porcentagem de inibio, relacionada nos grcos dose-resposta apresentados (Figura 1). Os resultados foram expressos em mdia + desvio padro das porcentagens de inibio (%INIBIO) calculadas como (Cuendet et al., 1997):

% INIBIO = 1 -

A TESTE A MAX

, sendo que:

AMAX a absorvncia do DPPH em 531 nm na ausncia de amostra. ATESTE a absorvncia do DPPH em 531 nm na presena de amostra. Ensaios biolgicos Foram avaliados o controle microbiolgico, a atividade antimicrobiana e o ensaio de citotoxicidade do extrato de P. guajava incorporado no creme no-inico. Foram utilizadas as seguintes cepas padro: S. aureus (ATCC 6538), S. epidermidis (ATCC 12226) e E. coli (ATCC 10536). Contagem total de microrganismos

Foi desenvolvida uma emulso no-inica, utilizando os conservantes usualmente empregados no Brasil, adequados para bases e ativos cosmticos. A composio qualitativa da emulso est representada na formulao (Tabela 1). Estudo da atividade antioxidante O potencial antioxidante do extrato etanlico foi determinado baseado na avaliao da atividade seqestrante de radical 1,1-difenil-2-picrilhidrazila (DPPH). O DPPH um radical estvel muito utilizado nos estudos com antioxidantes, que apresenta mximo de absoro em 531 nm, sendo este o comprimento de onda utilizado para avaliar a ao das amostras. 389
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Foram transferidos, assepticamente, 10,0 g do produto para 90,0 mL de soluo tampo fosfato pH 7,2 para a contagem dos microrganismos totais. A amostra 1:10 foi submetida agitao durante 10 min. Aps a homogeneizao, foi pipetado 1,0 mL da amostra 1:10 e adicionado de 20,0 mL gar tioglicolato para bactrias e gar Sabouraud para leveduras, a 47 o C em placa de Petri, que foram colocadas em estufa a 35 oC por 24 h e 25 oC por 7 dias, para a pesquisa de bactrias e fungos, respectivamente. Aps este perodo, foi realizada a contagem do nmero de colnias com o auxlio de contador, calculando-se o nmero de unidades formadoras de colnias (UFC/mL) (United States Pharmacopeia, 2003; Pinto et al., 2003).

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Tabela 1. Componentes da emulso no-inica.


Componentes lcool cetoestearlico/ lcool cetoestearlico etoxilado lcool cetoestearlico Palmitato de isopropila Base de absoro da lanolina leo mineral Propilenoglicol Metilparabeno Propilparabeno Goma xantana Fragrncia Extrato do fruto de Psidium guajava gua destilada Concentrao 9,00% 4,00% 3,00% 2,00% 9,00% 4,00% 0,18% 0,02% 0,20% qs 5,00% qsp 100 mL

respectivamente as placas foram incubadas a a 35 oC por 24 h. As caractersticas das colnias foram observadas e a conrmao foi realizada atravs de mtodo de colorao de Gram. Alm disto, foi realizado o teste da coagulase e da oxidase, para a conrmao de S. aureus e de P. aeruginosa, respectivamente (United States Pharmacopeia, 2003; Pinto et al., 2003). Avaliao do potencial antibacteriano dos extratos de P. guajava Culturas bacterianas desenvolvidas em caldo BHI por 24 horas foram diludas convenientemente (106 bactrias/mL) e semeadas na superfcie de gar Mueller-Hinton. A seguir, discos de papel de ltro foram impregnados com 20 L do extrato vegetal e aps isto colocados sobre a superfcie do gar inoculado. Aps incubao por 24 horas a 37 oC, foram observados os halos de inibio das amostras bacterianas. O dimetilsulfxido (DMSO) foi utilizado na diluio dos extratos e como controle negativo. A medida dos halos foi realizada com paqumetro digital ao dcimo de milmetro. Determinao da concentrao inibitria mnima (CIM) do extrato de P. guajava O extrato vegetal foi ensaiado para determinao da concentrao inibitria mnima para cada uma das espcies bacterianas. Para isso, culturas bacterianas desenvolvidas em caldo nutriente por 6 horas e diludas convenientemente (106 bactrias/mL) foram inoculadas em tubos contendo caldo nutriente acrescido de diferentes concentraes dos extratos (12,5; 25; 50; 75; 100; 150; 200; 300; 400; 500 L). Aps incubao por 48 horas a 37 oC foi observada a ocorrncia de turvao dos caldos de culturas, para determinar a CIM da substncia em estudo. A CIM foi denida como a menor concentrao de extrato que inibe o crescimento bacteriano (Martini & Eloff, 1998). Ensaios do ndice de citotoxicidade in vitro Macrfagos murinos da linhagem J774 foram coletados por tripsinizao, centrifugados e contados em cmara de Neubauer, ajustando o nmero de clulas para 1 x 105 clulas/mL em meio RPMI. Desta suspenso, as clulas foram incubadas a 37 C em atmosfera de 5% de CO2 por 24 a 48 horas. A seguir foram preparadas diluies das amostras dos extratos vegetais a serem testadas, as quais foram adicionadas s clulas aps a retirada do meio, sendo novamente incubadas a 37 C em atmosfera de 5% de CO2 por 24 horas. Aps a adio do corante, a leitura visual foi feita pela mudana de cor do corante de xido-reduo Alamar Blue, onde a cor azul oxidada representa morte celular e o corante na cor rosa representa clulas viveis.
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Pesquisa de Salmonella sp e Escherichia coli Foram transferidos, assepticamente, 10,0 g do produto para 90,0 mL de caldo lactosado, para pesquisa de Salmonella e E. coli, incubados a 35 oC durante 24 a 48 h. Aps este perodo, 1 mL do caldo lactosado foi transferido para 2 tubos contendo caldo tetrationato e caldo selenito cistina, que foram incubados a 35 oC por 24 h. Aps este perodo, a amostra foi semeada do caldo tetrationato para 1 tubo contendo gar verde brilhante e duas placas de Petri contendo gar xiloselisina-desoxicolato (XLD) e gar bismuto sulto. Foi realizado da mesma forma com a amostra inoculada no caldo selenito cistina, transferindo para os trs meios, os quais foram incubados a 35 oC por 24 h. O crescimento e as caractersticas das colnias foram observados. As colnias suspeitas foram semeadas com ala reta em tubo contendo gar trplice acar-ferro (TSI) e incubado a 35 oC por 24 h. A conrmao da Salmonella foi feita pelo mtodo de Gram. Na pesquisa de E. coli, 1,0 mL do caldo lactosado foi transferido para placa contendo gar Mac Conkey e incubado a 35 oC por 24 h. As colnias suspeitas foram semeadas em gar eosina-azul de metileno (EMB) e incubadas a 35 oC por 24 h. A conrmao da E. coli foi realizada atravs de mtodo de Gram (United States Pharmacopeia, 2003; Pinto et al., 2003). Pesquisa de Staphylococcus aureus e Pseudomonas aeruginosa Foram transferidos, assepticamente, 10,0 g do produto para 90,0 mL de caldo soja-casena, para a pesquisa de S. aureus e P. aeruginosa e incubados a 35 oC por 24 a 48 h. Aps este perodo, uma alada foi semeada em placas de gar Vogel Johnson e gar cetrimida, para a pesquisa de S. aureus e P. aeruginosa,

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Tabela 2. Reduo do DPPH pelo extrato etanlico de Psidium guajava.

Extrato (mg/mL) 0,100 0,075 0,050 0,040 0,030 0,020 0,010 0,050 0,000

Leitura 1 (A531nm) 0,282 0,321 0,351 0,361 0,371 0,385 0,400 0,431 0,415

Leitura 2 (A531nm) 0,281 0,321 0,351 0,361 0,371 0,385 0,400 0,413 0,415

Mdia DP 0,2815 0,321 0,351 0,361 0,371 0,385 0,400 0,422 0,415 0,0007 0 0 0 0 0 0 0,013 0

Tabela 3. Determinao da atividade antimicrobiana do extrato de frutos de P. guajava e do solvente.

Extrato Psidium guajava (L) Microrganismos S. aureus S. epidermidis E. coli 12,5 + + + 25,0 + + + 50,0 + + + 75,0 + + + 100,0 + + 150,0 + + 200,0 + 300,0 + 400,0 + 500,0 +

+ : crescimento bacteriano; -: ausncia de crescimento bacteriano.

A
35 30

amostra:Extrato etanlico de Psidium guajava (goiaba) ensaio: DPPH 60uM

cisteina vitamina C
100

80
25

inhibition (%)

inibio (%)

20 15 10 5 0 0,00

y = 328,52x - 0,6766 R2 = 0,9965


IC50 = 0,1501mg/mL

60

40

20

0
0,02 0,04 0,06 0,08 0,10

0,00

0,05

0,10

0,15

0,20

0,25 40

50

concentrao (mg/mL)

mM

Figura 1. Atividade seqestrante de radical DPPH: A) do extrato etanlico de Psidium guajava (IC 50 = 0,15 mg/mL); B) de padres (IC 50 cistena = 20 mM e IC 50 vitamina C = 28 mM).

RESULTADOS E DISCUSSO Com base nos resultados obtidos e pela comparao com dados descritos na literatura, possvel armar a presena de taninos na amostra de P. guajava. Os resultados negativos para as reaes de gelatina e sais de ferro se devem pelo motivo da pequena quantidade da amostra assim como o local de cultivo e poca de colheita (Santos et al., 1995). Para os avonides a P. 391
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guajava, apresentou-se positiva conrmando os dados descritos na literatura (Lorenzi & Matos, 2002; Martins et al., 1994; Panizza, 1997). Na cromatograa em camada delgada de avonides aps visualizao sob luz ultravioleta, observou-se uma mancha uorescente caracterstico para o avonide referente ao marcador rutina e quercetina, e ao extrato etanlico. Com o resultado desta cromatograa, pode-se armar que o extrato obtido

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contm avonides. Para um segundo ensaio aps uma hora de exposio da placa na luz solar ocorreu a formao de manchas amarelas correspondentes aos marcadores, rutina e quercetina. Na cromatograa em camada delgada de taninos, foi possvel identicar a presena de taninos no extrato de P. guajava, na frao extrada com acetato de etila. Pode-se observar o aparecimento de pontos de cor marrom similares ao marcador epicatequina. Nas fraes diclorometano e acetato de etila, no foram encontradas substncias antioxidantes. A frao rica em avonides foi detectada na frao butanlica, a frao mais polar de todas, pois manchas laranjas foram encontradas utilizando o revelador -caroteno. Tambm foram encontradas as manchas utilizando o NP/PEG como revelador. A atividade antioxidante foi avaliada atravs do DPPH, um radical livre estvel temperatura ambiente e que produz cor violeta na soluo etanlica. Este radical reduzido na presena de molculas antioxidantes, o que promove queda da intensidade de cor em 531 nm (reduo da colorao violeta na soluo). A utilizao do mtodo DPPH muito vantajosa, pois consiste num mtodo rpido e economicamente acessvel. Os resultados da reduo do DPPH pelo extrato etanlico esto descritos na Tabela 2. O valor do IC50 foi obtido atravs da regresso linear apresentada na Figura 1A, sendo que o extrato etanlico de P. guajava apresentou atividade antioxidante considervel (IC 50 = 0,15 mg/ mL), sendo mais eciente do que as substncias puras testadas como padro (vitamina C e cistena). Observase que no caso da vitamina C (176,1 g/mol) o valor determinado para o IC50 foi 4,9 mg/mL (28 mM) e para a cistena (121,2 g/mol) foi 2,4 mg/mL (20 mM). Para o teste de atividade antimicrobiana houve crescimento, nos tubos de ensaio e nas placas, de todos os controles positivos das bactrias S. aureus, S. epidermidis e E. coli. No houve crescimento, nos tubos e nas placas, dos controles negativos do meio, do solvente dimetilsulfxido (DMSO) e tambm dos extratos de Psidium guajava, o que indica que nenhum deles estava ou foi contaminado com microrganismos. Foi possvel observar a turvao nos tubos que continham 200 L de DMSO e as bactrias estudadas, bem como nas amostras retiradas destes tubos, as quais foram semeadas em placas (Tabela 3). Este resultado indica que o solvente DMSO no apresentou atividade antimicrobiana da forma como foi usado, e por isso, no interferiu nos resultados obtidos com os extratos. A Tabela 3 apresenta os resultados de atividade antimicrobiana com as concentraes dos extratos obtidas a partir da primeira soluo-me 500 g/mL. Desta forma, determinou-se que a concentrao inibitria mnima, do extrato de P. guajava, para S. aureus de 75 g/mL, e para S. epidermidis de 50 g/mL. Os resultados demonstram que o extrato

etanlico de P. guajava no apresentou atividade antimicrobiana para E. coli em nenhuma das concentraes testadas. Todos os controles positivos mostraram crescimento bacteriano. Observou-se que para o ensaio do controle microbiolgico no houve crescimento de microrganismos patognicos especcos nas amostras analisadas. Na contagem do nmero total de microrganismos houve crescimento inferior a 10 UFC/g de produto, o que permite a sua aprovao, segundo as recomendaes ociais para produtos no estreis. Para o ensaio de citotoxicidade o extrato etanlico de frutos de P. guajava, ensaiado de acordo com a metodologia descrita, no apresentou citotoxicidade para a linhagem J774 at a concentrao de 100 g/ mL. CONCLUSES Os ensaios do extrato etanlico de P. guajava, empregando cromatograa em camada delgada, conrmaram a presena de taninos, possveis responsveis pela atividade antimicrobiana encontrada, e de avonides, responsveis pela possvel atividade antioxidante. O fracionamento do extrato etanlico foi de extrema importncia, uma vez que se pde constatar que na frao etanlica possivelmente encontram-se os avonides responsveis pela atividade antioxidante. O mtodo de determinao da concentrao inibitria mnima permitiu conrmar que o extrato etanlico de frutos de P. guajava apresenta atividade antimicrobiana frente s bactrias Gram positivas testadas. Pde-se determinar que a concentrao do extrato etanlico de frutos de P. guajava equivalente a 50 g/mL suciente para inibir o crescimento de S. epidermidis e a concentrao do mesmo extrato, equivalente a 75 g/mL suciente para inibir o crescimento de S. aureus. O extrato etanlico no inibiu o crescimento de E. coli. A realizao da atividade citotxica foi importante uma vez que esta foi necessria para que a formulao tocosmtica fosse desenvolvida incorporando o extrato de goiaba. Baseados em mecanismos de estudo de molculas DPPH, extensivamente descritos na literatura e em conhecimentos prvios da qumica de algumas plantas e frutos possvel deduzir que a grande capacidade antioxidante de alguns extratos polares devido em parte presena de substncias antioxidantes como grupos hidroxilas como, por exemplo, avonides neste caso. Este estudo da atividade antioxidante realizado com o extrato etanlico de goiaba foi em escala laboratorial utilizando concentraes que promovam as inibies iguais ou prximas de 100%. O estudo do controle microbiolgico do creme manipulado com extrato de goiaba mostra-se adequado,
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Silvia M. Iha, Ketylin F. Migliato, Jos C. R. Vellosa, et al.

pois alm de determinar o nmero de microrganismos viveis, permite a identicao de contaminantes originrios da matria-prima e outros materiais utilizados, do prprio desenvolvimento da formulao, bem como do material de acondicionamento. AGRADECIMENTOS Tcnica do Laboratrio Maria de Ftima Lopes Rodrigues. Ao PACD-FCF-UNESP e FUNDUNESP, pelo apoio nanceiro ao projeto. Ao CNPq, pela concesso de bolsa de iniciao cientca S.M.I. REFERNCIAS
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Rev. Bras. Farmacogn. Braz J. Pharmacogn. 18(3): Jul./Set. 2008

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