Explorarea metabolismului proteic, Electroforeza

Adrian Ghervasa Grupa 108C, Kinetoterapie, IFR 1. Principiul metodei Aceasta metoda se bazeaza pe principiul ca proteinele cu sarcini electrice diferite migreaza diferit in camp electric, in functie de sarcina electrica si de greutatea moleculara. Ea utilizeaza suporturi solide si ph alcalin la care toate componentele proteice sunt incarcate negativ si migreaza spre polul pozitiv.

2. Materiale necesare - picatura de ser plasmatic, 20 ml - trusa de electroforeza - reactivi de culoare (rosu carmin) - film electroforetic sau microceluloza 3. Modul de lucru O cantitate de 20 ml de ser plasmatic (se fac inscriptionari cu ser plasmatic) se fixeaza pe un support si se introduce in electroforeza (o baie cu 2 electrozi, unul - si +). Se fixeaza cate 5 herti pentru fiecare pacient si se da drumul la curentul electric. Apoi urmeaza perioada de colorare, relevarea probei. In timpul somnului ficatul se reface 100%. 4. Rezultat Pe electroforegrama proteinele apar sub forma de benzi carora li se masoara densitatea optica, fiecare banda avand un maxim de absorbtie. Electroforeza pune in evidenta o banda intensa si ingusta ( banda M - myelome - proteine ), oriunde intre zonele alfa si gama ( mai frecvent, insa, in zona gama). Dupa scanarea densiometrica gamapatiile monoclonale prezinta un varf inalt si ascutit, egaland sau intrecand de cele mai multe ori din punct de vedere cantitativ varful albuminei. 5.Interpretarea rezultatelor Proteinele serice se impart in 5 grupe principale: albumina, alfa 1, alfa 2, beta si gama globuline. Albumina, alfa 1 si beta apar sub forma unor benzi omogene, bine definite. Alfa 2 si gama apar ca benzi difuze, iar fractiunea gama prezinta in partea sa centrala o zona mai intens colorata. Electroforeza proteinelor serice furnizeaza valori procentuale. Concentratia absoluta a fractiunilor proteice se calculeaza in functie de proteinele totale.

Proteinograma serului normal ( valori normale) albumina: 52 - 68 % alfa 1 - globuline: 1,5 - 4,5 % alfa 2 - globuline: 8 - 17% beta - globuline: 8-17% gama - globuline: 10,5 - 20,5 % Electroforeza este afectata de un nivel ridicat al lipidelor (hiperlipidemie ) si de medicamete precum corticosteroizii, contraceptivele orale, aspirina, bicarbonatii, clorprozamina, izoniazida si neomicina, tratament citostatic sau imunosupresor. Fractiunea C3 a complementului este labila si scade pe timpul stocajului. Interferete analitice.O crestere usoara a largimii benzii de albumina poate fi datorata legarii unor medicamente (penicilina) sau a bilirubin. Bisalbuminemia tranzitorie ( non - ereditara ) poate fi intalnita ca rezultat al unui tratament medicamentos sau unei perturbari metabolice severe (ex. pancreatita ). Benzi monoclonale false pot fi date de: hemoglobina libera, in cazul unui ser hemolizat sau a unei hemolize intravasculare ( banda in zona alfa 2 - beta ). Vizualizarea este dificila in cazul in care banda monoclonala se suprapune peste o banda normala ( ex. banda monoclonala in zona beta 1 va migra in aceeasi pozitie ca si transferina).