FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES EXACTAS Y DE LA EDUCACIN DEPARTAMENTO DE BIOLOGA

REA DE MICROBIOLOGIA

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1. INTRODUCCIN

Prcticas de Laboratorio de Microbiologa

TECNICAS DE TRABAJO EN MICROBIOLOGA Y MANEJO DEL MICROSCOPIO

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El trabajo de laboratorio y muy especialmente el que se realiza en un laboratorio de microbiologa requiere cuidado, concentracin y buenas prcticas de manejo de tcnicas especiales para obtener resultados confiables sin afectar al estudiante ni los equipos y materiales que se est manipulando. En muchos de los casos, los resultados del trabajo en el laboratorio dependen del buen manejo que se hace de las tcnicas y procedimientos. Se sabe que el ambiente que nos rodea est cargado de una gran variedad de microorganismos, muchos de los cuales son trasportados por el aire, ya sea a travs de partculas o gotas de agua suspendidas. Estos organismos provienen de ambientes como el suelo, ecosistemas acuticos y los organismos vivos. Las personas portan microorganismos en la piel, la boca, el cabello, las manos y otras partes corporales y pueden transferirlos fcilmente a otros ambientes. Por lo expuesto, el trabajo de laboratorio cualquiera que sea el propsito de este, requiere utilizar tcnicas aspticas para evitar contaminaciones. Los microorganismos, gracias a su gran diversidad estructural, fisiolgica y gentica, se presentan en todos los ecosistemas, desempeando funciones ecolgicas trascendentales, a pesar de que no se pueden ser vistos a simple vista. La microbiologa es precisamente la ciencia que se ocupa de estos organismos demasiado pequeos para poder apreciarse a simple vista y su desarrollo como tal solo se logr a partir de la invencin del microscopio. Los primeros microscopios se denominaron simples, pues constaban simplemente de una lente biconvexa, a manera de una lupa comn. Con el desarrollo de la tecnologa de los lentes, se logr avanzar hacia los microscopios compuestos, que generalmente emplean dos sistemas de lentes separados, consiguiendo con ello mayores aumentos. Dado que el microscopio compuesto es un instrumento fundamental en microbiologa, conocer los principios bsicos de la microscopa y la pericia en el empleo y la manipulacin de este instrumento, son requisitos imprescindibles para cualquier estudio en esta ciencia. 2. OBJETIVOS Conocer el funcionamiento de los diferentes equipos y el uso de materiales en el laboratorio de microbiologa Entrenar al estudiante en el manejo correcto del microscopio compuesto Aprender a medir los microorganismos utilizando el microscopio de luz Calibrar un micrmetro ocular 3. CONSULTAS PRELIMINARES Se recomienda leer en un texto de microbiologa general los aspectos relacionados con el uso y manejo correcto del microscopio y aspectos relacionados con el trabajo en el laboratorio de microbiologa.

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4. MATERIALES

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Los materiales requeridos por el docente son: MATERIAL Asa bacteriolgica (aro y recta) Mechero Caja de Petri (vaca) Asa de vidrio Tubo de ensayo Portaobjetos cubreobjetos Micropipeta 5. REACTIVOS SUSTANCIAS* CANTIDAD CANTIDAD 2 1 1 1 1 2 2 1

6. EQUIPOS EQUIPOS* Microscopios Objetivo micromtrico Ocular micromtrico CANTIDAD 2 por grupo 1 1

Los microscopios sern calibrados y ajustados por los estudiantes, de acuerdo con las instrucciones del docente. 7. PROCEDIMIENTO 7.1 Reconocimiento de equipos y materiales usados en un laboratorio de microbiologa Inicialmente, haga un reconocimiento de los diferentes materiales, equipos y aparatos que se emplean en el trabajo de laboratorio en microbiologa, tales como autoclave, incubadora, balanza, horno de esterilizacin, agitador magntico, bao mara, cabina de flujo laminar, cajas de Petri, tubos de ensayo, asa bacteriolgica o de Digralski, pipeteadores, asas y mecheros entre otros. 7.2. MANEJO DEL MICROSCOPIO Coloque la placa a observar sobre la platina Ubique la muestra en el campo visual

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Coloque el objetivo de 10X en la posicin de trabajo Suba la platina hasta el tope Con el tornillo macromtrico descienda hasta lograr un enfoque grueso Con el tornillo micromtrico de un enfoque fino Utilizando los accesorios de los oculares cuadre distancia interpupilar y dioptras Pase a objetivo de 40X, solamente mueva el tornillo micromtrico para ajustar la imagen. Si va a utilizar objetivos de 60X, 80X y 100X recuerde que debe usar aceite de inmersin, y limpiar las lentes con papel de arroz inmediatamente despus de retirada la placa, de lo contrario daa las lentes. Al terminar su observacin coloque el objetivo de 4X en la posicin de trabajo y devulvalo al laboratorista.

Al final del presente material de apoyo encontrar un documento sobre el microscopio, sus partes y explicacin cientfica sobre el funcionamiento y propiedades.

7.3. CALIBRACION DEL OCULAR MICROMTRICO Colocar el micrmetro ocular en el ocular enfocable. Para ello desenroscar primero la parte inferior del ocular, quitar el anillo que est sobre el diafragma del ocular y colocar la placa del micrmetro (con la escala hacia arriba), colocar nuevamente la parte inferior del ocular. Con el ocular en la mano y orientado hacia la luz (ventana o superficie iluminada) enfocar la lente superior desplazando de manera que el ojo perciba con mxima nitidez la graduacin; insertar el ocular en el tubo. Colocar el micrmetro objetivo sobre la platina del microscopio y enfocar la escala. Ambas escalas deben aparecer ntidamente definidas. Gire el ocular para colocar la escala del micrmetro ocular paralela con respecto a la divisin del micrmetro objetivo. Encontrar que nmero de trazos en el micrmetro ocular corresponden exactamente a qu longitud en el micrmetro objetivo y con esto, determinar la longitud que equivale a un trazo de graduacin en el micrmetro ocular. Recuerde que el valor de cada intervalo en el micrmetro objetivo corresponde a 0,01mm osea 10m Registre el dato de calibracin para los objetivos 10, 40 y 100X

Ej: Si encontrramos que 70 intervalos corresponden a 0,4 mm (400 m): 0,4 mm -----------70

Un intervalo del ocular =

= 0,0057 mm = 5,7 m

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9. RECUPERACIN, DESACTIVACIN Y/O ALMACENAMIENTO TEMPORAL DE LOS RESIDUOS. No se generan residuos 10. BIBLIOGRAFA MADIGAN M. T., MARTINKO J.M. y PARKER J. BROCK. microorganismos. Octava edicin. Prentice Hall Iberia, Madrid, 1999. Biologa de los

HARLEY, PRESCOTT. Laboratory Exercises in Microbiology. Fifth Edition. The McGrawHill, 2002

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REPORTE DE PRACTICA 1. Nombre: Fecha:

______________________________________ ______________________________________

Programa: ______________________________________

1. Ubique las diferentes partes de su microscopio y responda las siguientes preguntas. a. Cul es la magnificacin de los oculares de su microscopio? ______________ b. Cul es la magnificacin de cada objetivo de su microscopio? ___________________

c. Calcule el aumento total para cada combinacin objetivo / ocular en su microscopio. Ocular Objetivo aumento total

d. Haga una lista del aumento y apertura numrica para cada objetivo de su microscopio Aumento del objetivo Apertura numrica del objetivo

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e. Algunos microscopios compuestos, tienen un tornillo que al aflojarlo le permite girar el revlver o portaobjetivos 180 Cul es la ventaja de poder rotar el revlver?

f. Observe las escalas vertical y horizontal de la platina. Cul es la funcin de estas escalas?

________________________________________________________________________ g. Donde est localizado el diafragma de campo en su microscopio?

cmo puede regular la luz del diafragma de campo? ____________________________

________________________________________________________________________ h. Localice el condensador en su microscopio. Cul es su funcin y como puede ser regulado? _______________________________________________________________

i. Se puede regular la intensidad de la luz en el microscopio? Explique

________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________