GUA DE ESTUDIO Subsector: Biologa Profesores: Ricardo Snchez A. Fuente: Biocarampangue.

cl Nivel: NM4 Fecha: MARZO 2011

I. UNIDAD : INFORMACIN GENTICA Y PROTENAS II. CONTENIDO : Experimentos que identificaron al DNA como material gentico. III. APRENDIZAJE ESPERADO : Conocen los experimentos clsicos que revelaron al DNA como la molcula que contiene la informacin gentica y reflexionan sobre la simpleza de su composicin qumica en comparacin con las protenas. INTRODUCCIN El problema de la naturaleza fsica del gen era uno de los grandes problemas de la biologa que haba fascinado por aos a los cientficos. El concepto de gen fue introducido en 1860 por Mendel y recin alrededor de 1920 se realizaron los primeros experimentos que revelaron al DNA como material gentico. La clave para el modelo de estudio fue una enigmtica observacin realizada en 1928 por Frederick Griffith (1879 - 1941) microbilogo britnico, en el curso de experimentos con una bacteria llamada Streptococcus pneumoniae que produce neumona en humanos y que es generalmente letal en ratones. Su trabajo abri el camino a experimentos posteriores (Oswald Avery, Colin MacLeod y McCarty en 1944) que demostraron que el cido desoxirribonucleico (ADN) es el material que, dentro de la clula, transmite los rasgos genticos. Muchos lo consideran el padre de la biologa molecular. LA TRANSFORMACIN BACTERIANA La transformacin bacteriana es un proceso en el cual se produce un cambio en las caractersticas de los organismos debido a transferencia gnica. Fue descubierta en 1928 por Frederick Griffith mientras estudiaba los efectos de la infeccin en ratones por una bacteria que produce neumona en humanos. Lo neumococos con cpsula producen colonias lisas y brillantes, mientras que los que carecen de cpsula producen colonias rugosas de apariencia opaca. Los neumococos encapsulados que infectan ratones son extremadamente virulentos, es decir, tienen un tremendo poder para producir enfermedad. Una sola bacteria inyectada a un ratn puede multiplicarse rpidamente y causar la muerte del animal. La cpsula protege a las bacterias de las defensas del organismo. EXPERIMENTO DE GRIFFITH Griffith inyect algunos ratones con neumococos de colonias lisas (encapsulados) virulentas (L), otros con estas mismas bacterias, pero muertas por calor, y tambin inyect algunos otros ratones con una mezcla de bacterias, rugosas (R) y bacterias lisas y muertas por calor (Figura 1). Tal como se esperaba, los ratones que recibieron neumococos lisos murieron, en cambio sobrevivieron los que recibieron neumococos lisos muertos o neumococos rugosos.

Figura 1

Esto mostr que los restos celulares no eran capaces de causar dao y muerte del animal. Por sorpresa, tambin murieron los ratones que recibieron neumococos lisos muertos junto con neucomocos rugosos. Griffith aisl de estos animales muertos las bacterias que tenan y se encontr con un hallazgo de crucial importancia. La presencia de bacterias muertas encapsuladas haba permitido que las bacterias vivas sin cpsula desarrollaran cpsula y se hicieran virulentas. Ni Griffith ni sus colegas supieron cmo haba ocurrido esta transformacin. Ms an, generaciones posteriores de estas bacterias mantuvieron el fenotipo virulento. Esta transformacin era heredable. Lo que muestra este experimento es que, de alguna manera desconocida en ese momento, los restos celulares de las bacterias virulentas convierten a las bacterias no virulentas en virulentas, siendo estos cambios en las bacterias permanentes y heredables Este proceso se llam transformacin y en la actualidad es utilizado corrientemente en procedimientos de biotecnologa. Tras los hallazgos la pregunta surge en qu consiste o cul es la naturaleza qumica del material causante de la transformacin? Qu significa esto? Que el material gentico es fsicamente transmisible en un modelo experimental de laboratorio y que se abri por primera vez la posibilidad de aislarlo? Qu experimento haran a continuacin para identificar la molcula responsable de esta transformacin? EXPERIMENTOS DE Oswald Avery, Colin MacLeod y McCarty (1944) Dos aos despus se encontr en el laboratorio de Avery que se poda repetir el experimento dejando de lado la inyeccin en ratones. Se establecieron condiciones para la transformacin bacteriana enteramente en cultivo. Oswald Avery y colaboradores descubrieron que una cpsula de polisacridos era la responsable de la virulencia de las bacterias y en 1944 se aisl en su laboratorio la sustancia responsable de la transformacin, marcando el inicio de la gentica molecular. Primero se logr transformar bacterias de colonias R en bacterias de colonias S cultivndolas en presencia de los restos de bacterias virulentas muertas por calor. Luego se comenz a aislar los componentes qumicos de las bacterias S y probar su capacidad de producir la misma transformacin en las bacterias R. Tal como se ilustra en la figura 2, el elemento transformante result ser el DNA, molcula ya conocida bioqumicamente como compuesta por apenas cuatro unidades diferentes. En esa poca ya se haba aislado DNA de las Figura 2 plantas y animales, pero se crea que eran las protenas las portadoras de la informacin gentica. Slo despus de que Watson y Crick determinaron la estructura del DNA qued claro que esta molcula codificaba la informacin gentica. Sin embargo, a pesar de que el trabajo del grupo de Avery realiz numerosas pruebas

(Figura 3) para descartar que su preparacin no estuviera contaminada por protenas, por muchos aos se sigui pensando que el material gentico deba ser protena. EL EXPERIMENTO DE HERSHEY Y CHASE A pesar del cuidadoso trabajo de Oswald T. Avery y colaboradores en la identificacin del Figura 3 ADN como material gentico, muchos bilogos no aceptaron el hecho de que este cido nucleico pudiera contener la compleja informacin gentica. As, hasta los comienzos de los aos cincuenta (1950) muchos todava continuaban creyendo que las protenas podran ser el material gnico.

En 1952, los genetistas Alfred Hershey y Martha Chase, del Instituto Carnagie, efectuaron una serie de experimentos que demostraran, en forma concluyente, que el material de los genes es el ADN. Estos investigadores trabajaron con la bacteria intestinal Escherichia coli y un cierto tipo de virus denominados bacterifagos (fagos en forma abreviada). Estos virus infectan y destruyen a las clulas de E. coli. Se saba que los bacterifagos tenan una forma definida, y en particular, que estaban compuestos slo por una envoltura proteica y ADN. Era conocido, adems, el modo como los fagos invaden a las bacterias, adhirindose a la clula bacteriana y luego de alrededor de 25 minutos, la bacteria explota, liberando cientos de nuevos bacterifagos.

Adems, este equipo de investigadores tena un dato muy interesante: conoca que el ADN contiene fsforo, mientras que las protenas no lo tienen. Por otra parte, las protenas contienen azufre, en tanto que el ADN no. Hershey y Chase "marcaron" a los virus con material radiactivo para seguir sus huellas. Los bacterifagos cultivados en un medio con fsforo radiactivo, incorporaron el elemento radioactivo, exclusivamente en el ADN, porque slo ste contiene tomos de fsforo. Luego, cuando se permiti que bacterifagos "radiactivos" infectaran a bacterias no radiactivas, stas se hicieron radiactivas. Dado que es el ADN la sustancia que penetra en la clula, es tambin el material gentico Finalmente hoy se sabe que es el DNA la molcula donde se almacena la informacin gentica en la clula, una especie de librera celular, que contiene toda la informacin que se requiere para construir y mantener las clulas y los tejidos de un organismo. La duplicacin exacta de esta informacin en cada una de las especies, de generacin en generacin, asegura la continuidad gentica de cada especie. Esta informacin est organizada en unidades llamadas genes, que fueron primero identificadas por la gentica clsica como unidades de herencia que controlan los rasgos caractersticos de cada organismo.

Departamento de Ciencias GUA DE ESTUDIO Subsector: Biologa Profesor: Ricardo Snchez A. Katherine Rivas Fuente: Nivel: NM4

Fecha: Abril 2008

I. UNIDAD : INFORMACIN GNICA Y PROTENAS II. CONTENIDO : Estructura qumica del DNA III. APRENDIZAJE ESPERADO : Reconocen la composicin qumica del DNA y la estructura general de los cidos nucleicos. INTRODUCCIN Si bien el perodo entre principios de siglo y la Segunda Guerra Mundial (1900 a 1940) ha sido considerado la edad de oro de la gentica, los cientficos an no haban determinado que, en el ADN y no en las protenas, se encontraba el material hereditario. Sin embargo en esa poca se realizaron muchos descubrimientos genticos y se estableci la relacin entre gentica y evolucin. El ADN fue aislado por Friedrich Miescher en 1869 de esperma de salmn y de pus de heridas abiertas. Dado que la encontr solamente en los ncleos, Miescher denomin a este compuesto nuclena. Posteriormente se lo cambi a cido nucleico y por ltimo a cido desoxirribonucleico (ADN). Robert Feulgen, en 1914, describi un mtodo para revelar por tincin el ADN, basado en el colorante fucsina. Se encontr, utilizando este mtodo, la presencia de ADN en el ncleo de todas las clulas eucariotas, especficamente en los cromosomas. Durante los aos 20, el bioqumico P.A. Levene analiz los componentes del ADN. Encontr que contena cuatro bases nitrogenadas: citosina, timina, adenina, y guanina; el azcar desoxirribosa; y un grupo fosfato. El concluy que la unidad bsica (nucletido) estaba compuesta de una base pegada a un azcar y que el fosfato tambin estaba pegado al azcar y, lamentablemente tambin concluy errneamente que las bases estaban en cantidades iguales y, que un tetranucletido era la unidad repetitiva de la molcula. Sin embargo queda su idea de la estructura del nucletido el cual es realmente la unidad fundamental (monmero) del cido nucleico (polmero). Ahora ya se sabe que la cadena polimrica llamada ADN est formada por unidades, denominadas nucletido (Figura 1) que consiste en un grupo fosfato unido a un azcar de 5 carbonos que a su vez se une a una base orgnica. El fosfato le da carcter cido a los nucletidos. Las bases generalmente se abrevian A, G, C, y T. Por conveniencia, esta abreviacin de una sola letra se usa cuando se escriben las largas secuencias de nucletidos en el DNA. Los nucletidos polimerizan para formar cidos nucleicos en una reaccin que deja un extremo de la molcula con un fosfato libre en la posicin 5 del azcar mientras que en el otro extremo queda un grupo hidroxilo libre en la posicin 3 del azcar. Esto se conoce como extremos 5 y 3 de la molcula. Por convencin la secuencia se escribe de 5 a 3 y esta direccionalidad o asimetra en los extremos es una propiedad crucial de la molcula.

ESQUEMA SIMPLE DE LOS NUCLETIDOS DEL DNA.

Figura 1

CARACTERSTICAS ELEMENTALES DE LOS NUCLETIDOS La informacin que dicta las estructuras de la enorme variedad de molculas de protenas que se encuentran en los organismos est codificada en molculas conocidas como cidos nucleicos. La informacin contenida en los cidos nucleicos es transcripta y luego traducida a las protenas. Son las protenas las molculas que finalmente ejecutarn las "instrucciones" codificadas en los cidos nucleicos. Los cidos nucleicos estn formados por cadenas largas de nucletidos. Est formado por tres subunidades: un grupo fosfato, un azcar de cinco carbonos y una base nitrogenada; esta ltima tiene las propiedades de una base y, adems, contiene nitrgeno. La subunidad de azcar de un nucletido puede ser ribosa o bien desoxirribosa. Como puede verse, la diferencia estructural entre estos dos azcares es leve. En la ribosa (Figura 2), el carbono 2 lleva un tomo de hidrgeno por encima del plano del anillo y un grupo hidroxilo por debajo del plano; en la desoxirribosa (Figura 1), el grupo hidroxilo del carbono 2 est reemplazado por un tomo de hidrgeno.

Figura 2 Desoxirribosa

Figura 3 Desoxirribosa

Los nucletidos pueden unirse en cadenas largas por reacciones de condensacin que involucran a los grupos hidroxilo de las subunidades de fosfato y de azcar. En la figura se muestra una molcula de RNA que, como se observa, est formada por una sola cadena de nucletidos. Las molculas de DNA, en cambio, constan de dos cadenas de nucletidos enrolladas sobre s mismas, formando una doble hlice.

La ribosa es el azcar en los nucletidos que forman cido ribonucleico (RNA) y la desoxirribosa es el azcar en los nucletidos que forman cido desoxirribonucleico (DNA). Hay cinco bases nitrogenadas diferentes en los nucletidos, que son los sillares de construccin de los cidos nucleicos. Dos de ellas, la adenina y la guanina, se conocen como purinas. Las otras tres, citosina, timina y uracilo se conocen como pirimidinas. La adenina, la guanina y la citosina se encuentran tanto en el DNA como en el RNA, mientras que la timina se encuentra slo en el DNA y el uracilo slo en el RNA. Aunque sus componentes qumicos son muy semejantes, el DNA y el RNA desempean papeles biolgicos muy diferentes. El DNA es el constituyente primario de los cromosomas de las clulas y es el portador del mensaje gentico. La funcin del RNA es transcribir el mensaje gentico presente en el DNA y traducirlo a protenas. Los nucletidos, adems de su papel en la formacin de los cidos nucleicos, tienen una funcin independiente y vital para la vida celular. Cuando un nucletido se modifica por la unin de dos grupos fosfato, se convierte en un transportador de energa, necesario para que se produzcan numerosas reacciones qumicas celulares. La energa en los nucletidos modificados, esta disponible en cantidades convenientes y aceptado en forma generalizada. El principal portador de energa, en casi todos los procesos biolgicos, es una molcula llamada adenosn trifosfato o ATP. Figura 4

EL MODELO DE LA MOLCULA DE ADN: WATSON Y CRICK (1953) En 1953, James D. Watson y Francis H.C. Crick, dos cientficos que trabajaban en la Universidad de Cambridge, Inglaterra, propusieron el modelo que hoy se acepta para la estructura de la molcula de ADN, sobre la base de todos los datos disponibles. Las principales caractersticas de la molcula de ADN, de acuerdo con el modelo Watson - Crick, se pueden resumir en los siguientes puntos: 1. 2. 3. 4. 5. 6. . La molcula se compone de dos barras torcidas entre s, configurando una doble hlice. Cada barra se compone de una cadena de nucletidos, las que se disponen de manera antiparalela, es decir, una cadena va en direccin 5' 3' y la otra 3' 5'. Los nucletidos de cada barra se unen entre s por los grupos fosfatos. Las cuatro bases nitrogenadas se encuentran apareadas con slo dos posibles combinaciones: A =T y G = C. Las bases nitrogenadas estn unidas entre s por dbiles enlaces de hidrgeno, los que son fciles de romper. Como la secuencia de nucletidos es el nico elemento variable en la molcula, es evidente que debe ser tambin la propiedad que se utiliza para codificar las instrucciones genticas. Figura 5: Modelo de la molcula de ADN de Watson y Crick; A: detalle en que se muestra la disposicin de los nucletidos formando enlaces de hidrgeno entre los pares de bases (flecha); B: esquema ms general, en que se muestra la organizacin general de las dos fibras antiparalelas; C: morfologa general de la molcula de ADN, la doble hlice A B C