UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTN

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS Y AGROPECUARIAS

ESCUELA PROFESIONAL Y ACADMICA DE BIOLOGA

EFECTO DE GLIFOSATO EN EL DESARROLLO EMBRIONARIO DE Carassius auratus l.

Tatiana Chvez, Alexis Coyla, Yasmy Medina, Carmen Revilla, Karina Ttito y Solanhs Soto
Laboratorio de Biologa, Facultad de Ciencias Biolgicas y Agropecuarias, Escuela Profesional y Acadmica de Biologa, Universidad Nacional de San Agustn, Arequipa, Per.

INTRODUCCIN

El glifosato es un herbicida que controla malezas anuales y perennes, gramneas y latifolias y su grado de toxicidad; Sun y Ye (2009) demostraron que los surfactantes, los cuales son adicionados a las mezclas de herbicidas como el glifosato, incrementan la susceptibilidad a los patgenos generalmente POEA. El glifosato es inmvil y para que se movilice, deben realizar arados despus de la aplicacin, llevando el glifosato de la superficie a la profundidad. En nuestro pas el glifosato se aplica en sistemas de siembra directa donde no hay labores mecnicas y la porosidad disminuye. El sedimento absorbe el glifosato presentando toxicidad en los ambientes acuticos, siendo esta a su vez variable de acuerdo a los surfactantes utilizados en los diferentes productos comerciales. En medio acutico, la exposicin a herbicidas a niveles por debajo de las concentraciones ambientales esperadas se ha demostrado que compromete la supervivencia, reproduccin y desarrollo del zooplancton, as como de algunos anfibios; dicho efecto est relacionado con un bajo nivel de pH en el agua (Chen et al., 2008). Existen diversos estudios que describen los efectos de los herbicidas sobre ecosistemas acuticos incluyendo los peces. La carpa dorada, C. auratus (Linnaeus, 1758) perteneciente a la familia Cyprinidae es un modelo escogido por su disponibilidad y tambin debido a la sensibilidad probada para productos qumicos del genotxicos, siendo su patrn de clivaje rpido, 2 horas aproximadamente se estn dando las

primeras segmentaciones, a las 24 horas ya se aprecia una blstula (blastodermo) y la segmentacin del cerebro formndose estructuras como el tubo neural, la notocorda y los somites; a las 72 horas ya se puede ver una gstrula con un domo al 70% aproximadamente y para los cinco das de desarrollo se han formado rganos sensoriales como los ojos y los odos. Asimismo, aparecen el corazn, el hgado, los riones y el pncreas, adems de que los sistemas circulatorio, digestivo y nervioso son perfectamente funcionales. En este momento el pez es perfectamente capaz de responder a estmulos visuales, olfativos y mecnicos y comienza a nadar buscando alimento. En la literatura encontrada, podemos notar que el glifosato no slo afecta el desarrollo embrionario (Scheil et al, 2009 tomado de Barragn et al. 2010) sino que tambin afecta a diversos sistemas, a nivel de ADN y otros genes. El glifosato ha llamado la atencin porque ste interfiere en el mecanismo enzimtico, de manera muy importante en el desarrollo embrionario de todos los vertebrados (Carrasco, ). Otra alteracin producida por este herbicida es que tambin interfiere en el mecanismo de reparacin fisiolgico del DNA que podran conducir a la acumulacin de mutaciones en algunos tipos celulares (Andrs Carrasco). El glifosato penetra a travs de la membrana celular (Haefs, Schmitz- Eiberger y otros, 2002; tomado de Paganelli y colaboradores) y afecta gravemente a las clulas embrionarias de la placenta produciendo dao mitocondrial, necrosis y apoptosis (Benachour y Seralini, 2009; tomado de Paganelli y

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colaboradores). Se encontr adems que el glifosato tambin interfiere en el metabolismo de la sntesis del cido retinoico, que es un componente normal en el desarrollo embrionario y altera la expresin de un conjunto de genes que tienen que ver con la formacin de los ejes embrionarios (Andrs Carrasco) ante tal alteracin el cido retinoico aumenta. Otra lnea de evidencia que apoya los efectos adversos del glifosato fue proporcionada por el grupo de Belle, sugiriendo que el glifosato altera los puntos de control en el ciclo celular (Marc J., Mulner Lorillo O., y Beller R., 2004; tomado de Paganelli y colaboradores). Andrs Carrasco, profesor de Embriologa de la Universidad Nacional de Medicina en Buenos Aires, llego a la conclusin de que el glifosato, al tener contacto con el embrin ya sea en cantidades mnimas, podra producir efectos negativos en la morfologa del embrin. Existe una creciente evidencia concerniente al aumento de los efectos del glifosato en personas que viven en reas donde los herbicidas son utilizados intensivamente. (Leite S. Machi and Acosta-2009). Por lo tanto consideramos que es lo suficientemente perjudicial para el ser humano para lo cual probamos el efecto de este agro toxico en huevos germinados de Carassius auratus L., para la determinacin del efecto nocivo del glifosato.

eclosionaron con algn tipo de malformacin, asi como los alevines muertos.

RESULTADOS Despus de los 6 dias de estudio se pudieron realizar las siguientes observaciones: Observaciones cualitativas: Los huevos tratados con 0mg/L de glifosato (grupo control) presentaron un desarrollo normal, los embriones con vesculas pticas eran muy activos dentro del huevo, el corazn tenia un movimiento acompasado y fuerte; los huevos con 1mg/L de glifosato no mostraron mucha variacin en cuanto al desarrollo, en los huevos con 3mg/L se detect cierto retardo en el desarrollo, sobre todo porque la motilidad dentro del huevo fue disminuyendo; pero los cambios mas drsticos se observaron en los huevos de 5mg/L dado que al terminar el estudio algunos huevos aun se encontraban en estadio de embrin con 32 somites, y los alevines eclosionados presentaban un corazn con latidos y circulacin lenta. Dentro de los alevines con malformaciones se pudo observar que el grado de malformacin iba variando de acuerdo a la concentracin de Glifosato, se noto que algunos de los alevines aparentemente normales tenan ciertos problemas en la locomocin dado que no se podan movilizar libremente, la mayora de los alevines atrofiados presentaban problemas en la estructura de la espinal dorsal, pues esta tenia cierto grado de desviacin o era ms corta de lo normal, tambin se observo que el saco vitelino en algunos era mas pequeo Observaciones cuantitativas:

MATERIAL Y MTODOS La especie escogida para el desenvolvimiento de este trabajo fue Carassius auratus L., ya utilizada en otros trabajos de investigacin con sustancias toxicas. El desarrollo de este organismo es rpido y a las 24 horas ya se aprecia la segmentacin y se han formado estructuras como el tubo neural, la notocorda y los somites (precursores de msculo y esqueleto). Se colocaron 80 huevos, con estadio en gastrulacin al 50% (se determin el estadio segn Helen Battle), en 16 recipientes con 100mL de agua destilada con los tratamientos, y agua mineral en los controles. Se realizaron tres concentraciones con 1mg/L, 3mg/L y 5mg/L de glifosato (Abdalla et al., 2008) con 4 repeticiones de cada tratamiento, y un grupo de control, durante 96 horas. El producto utilizado fue Herbosato, que contiene glifosato (480g/L) y disolventes (520g/L). A ambos grupos se les realiz cambio de agua y tratamiento una vez al da. Las observaciones se realizaron cada 24 horas, durante 6 das con ayuda de un microscopio estereoscopio binocular 10X, con objetivos de 2X y 4X, las imgenes fueron registradas con cmaras digitales Panasonic Lumix DMC-FS4 de 8.1 megapxeles. Se hizo una evaluacin cualitativa para observar el desarrollo y describir algn tipo de variacin o retraso en el desarrollo, tambin se evaluaron la cantidad de embriones que prosperaban hacia los estadios siguientes, el numero de huevos muertos, la cantidad de huevos eclosionados y los que

16 14 Frecuencia porcentual 12 10 8 6 4 2 0
0mg/L 1mg/L 3mg/L 13 11 10

15

Atrofiados

5mg/L

Concentraciones de Glifosato

GRFICO N 01 Malformaciones durante tratamiento de Glifosato Al finalizar el estudio se observo que el grupo de control (0mg/L) obtuvo un valor del 11% de alevines con algn tipo de malformacin, lo cual es similar al 10% presente en 3mg/L, en cambio las concentraciones de 1mg/L y 5mg/L presentaron un 13% y 15% respectivamente de alevines con malformaciones,

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lo cual seria un indicativo de que el Glifosato en mayores concentraciones podra haber inducido las malformaciones. BIBLIOGRAFA Abdalla A. El Shebly & Mohamed A.H. 2008. Effects of Glyphosate herbicide on serum Growth Hormone (GH) levels and muscle protein content in Nile Tilapia (Oreochromis niloticus L.) Research Journal of Fisheries and Hydrobiology, 3(2): 84-88. Oleh V. Lushchak et al. 2009. Low toxic herbicide Roundup induces mild oxidative stress in goldfish tissue. Chemosphere 76 (2009) 932937. K.A. Modesto, C.B.R. Martinez. 2010. Roundup causes oxidative stress in liver and inhibits acetylcholinesterase in muscle and brain of the fish Prochilodus lineatus. Chemosphere 78 (2010) 294299. K.A. Modesto, C.B.R. Martinez. 2010. Effects of Roundup Transorb on fish: Hematology, antioxidant defenses and acetylcholinesterase activity. Chemosphere 81 (2010) 781 787. Filizadeh & Rajabi Islami. 2011. Toxicity determination of three sturgeon species exposed to glyphosate. Iranian Journal of Fisheries Sciences, 10(3) Alvarez-Moya et al. 2011. Evaluation of genetic damage induced by glyphosate isopropylamine salt using Tradescantia bioassays. Genetics and Molecular Biology, 34, 1, 127-130. Esperanza Ortiz O., Esther Ura G. y Ricardo A. Ruz P. (..). Determinacin de los daos provocados por el uso del herbicida glifosato (frmula comercial Yerbimat) en aspectos reproductivos como fecundidad y desarrollo embrionario en Goodea atripinnis. Laboratorio de Histologa, Departamento de Morfologa, ENCB, IPN. Mxico Alberto Cuesta, Jos Meseguer and M. ngeles Esteban. (.)Immunotoxicological Effects of Environmental Contaminants in Teleost Fish Reared for Aquaculture. Fish Innate Immune System Group, Department of Cell Biology and Histology, Faculty of Biology, University of Murcia, Spain. T. Polard et al. 2011. Mutagenic impact on fish of runoff events in agricultural areas in south-west France.Aquatic Toxicology, vol. 101 (n 1). pp.126-134 Wilson Ramrez d. et al. 2009. Toxicidad aguda y lesiones histopatolgicas en Cachama Blanca (Piaractus brachypomus) expuestas a la mezcla de herbicida Roundup ms surfactante Cosmoflux 411f. MVZ Crdoba 14(1):1563-1575 R. Barragn, Pardo Hernandez D. y Eslava Mocha. 2010. Efectos de los herbicidas sobre el sistema inmune: una aproximacin en peces. Complutense de Ciencias Veterinarias 4 (1): 1-22. Alejandra Paganelli, Victoria Gnazzo, Helena Acosta, Silvia Lopez and Andres Carrasco. (.). Herbicida a base de Glifosato produce efectos teratogenicos en vertebrados

70 60 Frecuencia porcentual 50 40 30 20 10 0
0mg/L

63 58 50 38

Muertos

1mg/L

3mg/L

5mg/L

Concentraciones de Glifosato

GRFICO N 02 Mortalidad durante tratamiento de Glifosato La mortalidad evidenciada en el grupo control es de un 38%, en 1mg/L es de 58%, en 3mg/L es de 50% y en los 5mg/L es del 63%, esta mortalidad se fue registrando segn iba avanzando el estudio, aqu estn incluidos los alevines DISCUSIN Los resultados arriba mencionados podran deberse a que el glifosato por si mismo interfiere con los mecanismos moleculares fundamentales regulando el desarrollo temprano en los embriones de Carassius auratus conduciendo a las malformaciones congnitas. En cada momento del desarrollo del embrin, selectos grupos celulares parecen ser ms sensibles al glifosato que otros, probablemente debido a estados funcionales distintos (proliferacin diferenciacin o migracin celular). En algunos de ellos las clulas podran presentar ms sensibilidad que otras en un momento dado y habilitar a ser afectadas por el glifosato (por ejemplo poblaciones celulares que estn en etapas de divisin celular o muerte celular programada o apoptosis). La accin del glifosato sobre los embriones sugiere un efecto especfico que distorsiona o altera procesos biolgicos normales en territorios y tejidos especficos. Las dosis usadas de glifosato son bajas lo que habilita a especular que no son suficientes para daar membranas mitocondriales con muerte celular masiva, sino que actan con tiempo necesario para la activacin de las caspasas (enzimas asociadas a apoptosis) que desencadenaran la muerte celular programada en territorios especficos. En consecuencia, los efectos observados con las dosis aqu empleadas, en ambos grupos de experimentos, no destruyen completamente al embrin (una forma de muerte celular masiva) sino que alteran con distintas intensidades la forma y desarrollo de territorios morfogenticos discretos.

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interfiriendo en el metabolismo del acido retinoico. CONICETUBA. Facultad de Medicina, Universidad de Buenos Aires. Argentina.