UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA

FACULDADE DE CINCIAS AGRRIAS E VETERINRIAS CAMPUS DE JABOTICABAL DEPARTAMENTO DE ZOOTECNIA PROF. DR. LUS ROBERTO DE ANDRADE RODRIGUES

RAZES: A PARTE OCULTA DAS PASTAGENS METODOLOGIAS PARA AVALIAO DE RAZES DE PLANTAS FORRAGEIRAS - ASPECTOS TCNICOS E PRTICOS -

Danilo Gusmo de Quadros

Eng Agr - Mestrando

Seminrio Apresentado como Parte das Exigncias da Disciplina Introduo de Plantas Forrageiras

Jaboticabal, SP Julho de 2000

1 - INTRODUO O sistema radical das plantas um rgo vital que possui as funes bsicas de sustentao, reserva e absoro de gua e nutrientes. Existem funes especficas em determinadas espcies de plantas superiores como simbiose com fungos micorrzicos e bactrias fixadoras de nitrognio, cuja funo melhorar a nutrio mineral, ou mesmo, respirao em charcos, parasitismo, reserva de nutrientes (as razes tuberosas de algumas plantas servem de alimento para o homem) etc. O estudo da sistemtica de razes data do sculo XVIII DC, mas provvel que esse assunto despertou a curiosidade dos cientistas muito antes disso. Mais recentes so as observaes de fisiologia e ecologia de razes, pois antigamente era difcil a transmisso da informao. Nos dias de hoje, apesar do avano tecnolgico da pesquisa e da rapidez na difuso da informao, pouco se tem trabalhado nessa linha de estudo. Na forragicultura, rea do conhecimento em que se costuma dizer que uma das ltimas da agricultura a aplicar as tcnicas agronmica, desta forma sempre estando em atraso, a situao muito pior. Dizem que essa "renegao" se d pela baixa importncia econmica da cultura de plantas forrageiras, entretanto que fala isso desconhece o potencial econmico de resposta aos investimentos das pastagens, seja de forma direta (novos cultivares, sementes, biotecnologia) ou indireta (pecuria, empregos, benefcios sociais). Para se ter uma idia, na Reunio Anual da Sociedade Brasileira de Zootecnia, realizada no ano de 2000, na Universidade Federal de Viosa, de 447 trabalhos apresentados na rea de forragicultura, apenas trs deles enfatizaram os aspectos radicais, sendo que um deles que esse observou aspectos dinmicos como assunto principal. A pergunta que mais bvia a ser feita por que o estudo de razes to difcil? Ser que faltam metodologias? Ou a parte que no se enxerga menos importante ou mais difcil de termos acesso? Devemos lembrar que se pode dividir grosseiramente a planta forrageira em duas parte, tudo que produzido em cima produzido em baixo. Realmente, os mtodos disponveis so morosos e de alto custo. O objetivo do presente seminrio ser abordar as principais metodologias existentes no estudo de razes, sabendo-se que muitas nunca foram antes aplicadas, ou melhor, no so indicadas para plantas forrageiras.

Kolesnikov (1971), citado por BHM (1979), agrupou os mtodos de estudos de razes em oito grupos, a seguir: a) Mtodos de escavao b) Mtodos do monlito
c)

Mtodos da verruma1

d) Mtodos da parede como perfil e) Mtodos da parede de vidro f) Mtodos indiretos g) Outros mtodos h) Mtodos do continer

Instrumento cuja extremidade inferior lavrada em hlice e acaba em ponta, usado para abrir furos; tradinha, broca. 3

2 - MTODOS DE ESCAVAO Esse o mais velho mtodo usado na pesquisa de ecologia de razes. utilizado para expor o sistema radical da planta "in situ", removendo o solo que cerca as razes, o qual complicado, pois tem que ser uma retirada muito cuidadosa com instrumentos especiais, jatos de ar ou gua (para as razes finas recomenda-se instrumentos delicados, como pincis de pelo de rabo de camelo). Dependendo do objetivo do estudo, a tcnica pode vir acompanhada de desenho ou tomada de imagens. interessante por mostrar a posio e as relaes das razes expostas, verificando presena de competio intra e interespecfica. Esse mtodo operacionalmente difcil com gramneas forrageiras, pois, devido ao tipo de sistema radical (fasciculado ou cabeleira), h presena de grande quantidade de razes muito finas (< 1 mm2, ANEXO 1), quebrando facilmente ao serem retiradas do torro de solo. J em leguminosas forrageiras arbustivas, o mtodo pode ser muito bem aplicado. Mesmo assim o mtodo recomendado para espcies de porte variado. A escavao pode ser aps cavada uma trincheira e ir paulatinamente avanando ao centro gravitacional da planta, evitando a destruio das razes laterais ou dimensionar um stio de escavao e ir escavando em camadas horizontais, pois as razes laterais podem superar 10 m de comprimento. BHM (1979) recomendou que para gramneas e ervas que a distncia da planta escolhida, na qual devemos fazer a trincheira de 20-80 cm, dependendo da espcie e do estdio de crescimento (FIGURA 1). O autor comenta que as trincheiras de 1 m de largura facilitam o trabalho e a profundidade deve ser de 20-30 cm abaixo das razes mais profundas. A consistncia do solo tem alta influncia no sucesso desse mtodo. As caractersticas e propriedades fsicas do solo, por sua vez, influenciam na consistncia como: a textura (% de areia, silte e argila) e densidade (massa/volume) do solo. Simultaneamente ao procedimento da escavao, medies cuidadosas e tomada de imagens podem ser feitas no sistema radical. A tomada de imagem pode ser utilizada em vrios mtodos, como o desenho (FIGURA 2), a fotografia e a filmagem, com objetivo maior, nesse caso, de mensurar a distribuio das razes no perfil do solo, verificando a profundidade total, as camadas de maior concentrao, podendo servir de varivel resposta para algum tratamento, como diferentes doses de fertilizante ou manejos de irrigao.

Existem pesquisadores classificando as razes de plantas forrageiras em muito finas, quando essas so menores de 0,8 mm, outros tm uma outra classificao que engloba 0,6 a 0,8 mm e menores que 0,6 mm como muito finas. 4

Para representar razes de diferentes dimetros em desenhos, usa-se canetas hidrocor de cores ou de espessuras diferentes, sobre filme plstico ou mesmo papel. BETHIER et al. (1997), para estudar o crescimento radial de razes, em espcie arbrea, utilizou-se da escavao, mesurando horizontal (FIGURA 3) e verticalmente (FIGURA 4).

FIGURA 1 - Iniciando uma escavao seca em prados.

FIGURA 2 - Sistema radical de trevo-branco desenhado durante uma escavao seca.

Fonte: BHM (1979)

Fonte: BHM (1979)

FIGURA 3 - Escavao horizontal

FIGURA 4 - Escavao vertical

Fonte: BHM (1979)

Fonte: BHM (1979)

3 - MTODO DO MONLITO

Consiste na retirada de um volume conhecido de solo, na forma de um "bloco" de volume conhecido, no qual as razes so separadas por meio de lavagem com gua, visando a avaliao da densidade de razes. CARVALHO (1999) utilizou, para avaliar as respostas radicais as diferentes estratgias de reforma de pastagens, os mtodos do monlito e escavao com tomada de imagens de forma complementares. A autora fez uso de anis volumtricos para a colheita de amostras, determinou a quantidade de poros (porosidade) e o comprimento de razes, scanneando um gerbox com gua e uma subamostra de razes e passando num analisador de imagens (SIARCS), semelhante ao que ser descrito posteriormente. No mtodo proposto por PAN e BOLTON (1991), acopla-se um scanner e um microcomputador para anlise das amostras obtidas atravs do monlito, existem alogartimos para estimar a rea de razes, comprimento e dimetro mdio. Uma rea bidimensional estimada pelo escurecimento de um certo nmero de pixels, representando uma escala de cinza, de forma individual ou em grupo. O comprimento e a espessura calculado em funo da rea, do nmero de pixels nos limites diagonais. Nesse mtodo existem uma srie de adaptaes, visando facilitar a operao de retirada de amostra, principalmente no que tange a eliminao da necessidade da escavao de um perfil e a retirada de amostras em camadas paralelamente a superfcie do solo. Aps a escolha de uma planta representativa da rea, ASSIS et al. (1976), estudando o sistema radical do capim elefante em diferentes espaamentos e profundidades de plantio, delimitou a rea superficial de 40 x 40 cm e cortou um bloco de terra (FIGURA 5) a 10 cm de profundidade, aparando as amostras com um saco de estopa, depois as lavando, secando-as a 105 C, obtendo assim a massa seca de razes. Este tipo de tcnica pode ser eficiente, desde que o bloco seja representativo na maior parte do sistema radical funcional da planta, mas o corte na parte inferior do bloco seja bem feita e cuidadosa. As fotografia de RODRIGUES et al. (no prelo), demostraram bons resultados da utilizao dessa tcnica para retirada de amostras, visando avaliar os efeitos de diferentes presses de pastejo sobre a massa de sistemas radicais e presena de rizomas em capim elefante cv. Mott . A preocupao de obter uma boa acurcia na amostragem na distribuio de razes e no danificar a parcela experimental levou a BUMAN et al. (1994) a modificar o mtodo do monlito. Os autores construram um amostrador, feito de duas partes de ao reforado, uma reta e outra cncava, com 42 cm de altura por 84 cm de largura por 6 cm de profundidade interna. A amostragem consistiu em, aps a escolha da planta, introduzir o amostrador no solo e parafusar as duas partes de encontro, de forma com que a amostra fique compacta. Depois,
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escava-se para facilitar a perfeita retirada do amostrador, ento se procede a lavagem da amostra e as outras anlises desejadas. o teste foi feito com milho, talvez se pensando em plantas forrageiras a distncia entre as duas chapas deva ser maior. A textura do solo ser importante na introduo do amostrador, pois texturas mais grossas permitem uma entrada mais fcil em comparao solos argilosos. BHM (1979) descreveu um mtodo semelhante a esse e um outro, que ele denominou-o de mtodo da caixa, que os princpios tambm so bem semelhantes. CECATO et al. (2000) utilizou o monlito na forma de bloco para estimar a massa de raiz e concentrao de carboidratos no fibrosos em capim "coast-cross", contudo BRASIL (2000, comunicao pessoal) alertou que a classificao das razes em dimetro fundamental nesse estudo, pois as razes mais finas (<0,8 mm), muitas vezes desprezadas, contribuem pouco na massa total, so as que mais colaboram na adsoro de nutrientes, entretanto no estudo de reservas devemos saber qual o tipo de raiz que mais contribui para isso, pois as razes mais grossas j esto suberizadas e lignificadas, sem funes biolgicas. Estudando a distribuio e a variao temporal de caractersticas radicais de Brachiaria humidicola, BRASIL et al. (2000) fez uso do monlito de 1 dm3 em trincheiras fixas (FIGURA 6) de 1,2 de profundidade por 1,5 m de largura, nas quais as amostragens no tempo eram obtidas escavando e retirando os primeiros 10 cm perpendiculares ao nvel do solo. Como foi notado que 70% das razes se situavam at os primeiros 20 cm, a partir da segunda data de colheita de amostras, a cada 14 dias, essas foram realizadas nessa profundidade. Os autores classificaram as razes pelo dimetro, sendo: do eixo primrio (grossas = 2,5-1,6 mm), laterais de primeira ordem (mdias = 1,5-0,8 mm) e laterais de ordem superior (finas = <0,8 mm), aferidas pelo paqumetro. As amostras foram digitalizadas em scanner (100 dpi e tons de cinza) e analisadas pelo SIARCS para o clculo de rea e comprimento de razes, enquanto a massa foi determinada pelo peso em estufa 65 C. Esse mtodo tem a dificuldade na submisso das plantas ao pastejo, pois a trincheira ter que ser isolada. para esses fins o mtodo proposto por BUMAN et al. (1994) parece mais vivel, apesar de nunca ter sido usado em pastagens ou a escolha de outra metodologia, como o uso do trado (captulo 4). Muitas razes parecem estar mortas, depois de algum estmulo podem emitir razes novas. Atualmente j existem recursos para o colorimento das razes vivas. Alguns erros na expresso dos resultado em MS de razes tm sido cometidos devido contaminao das amostras com solo. A adoo da unidade de MO de razes mais interessante por eliminar os erros de contaminao do solo atravs da subtrao das cinzas (RAMOS, 2000 comunicao pessoal).
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Avaliando a biomassa e rea do sistema radical em trs cultivares de Panicum maximum sob pastejo rotacionado, BONO et al. (2000) escavou trincheiras e retirou blocos de terra de 10 cm de largura x 20 cm de comprimento e 10 cm de profundidade em quatro profundidade: 0-10, 10-20, 20-30 e 30-40 cm. Nas amostras separou-se uma subamostra para determinao de umidade. Na lavagem utilizou-se duas peneiras sobrepostas de 1 mm (por cima) e 0,25 mm (por baixo). A biomassa foi conhecida em estufa de circulao forada de ar a 65 C, enquanto a rea foi determinada retirando-se uma subamostras das razes (0,5 g) e dispersa sobre um plstico transparente e digitalizadas em um scanner com resoluo de 200 dpi e analisadas pelo SIARCS. Na FCAV-UNESP, h uma idia alternativa de QUADROS e RAMOS (2000, comunicao pessoal) da utilizao dos Mtodos da Parede como Perfil (captulo 6) e adaptao do monlito em conjunto, para tanto de retroescavadeira para cavar as trincheiras, acertando o perfil cuidadosamente com um enxado afiado e jato d'gua pressurizado para expor as razes. Depois da tomada de imagens (50 cm largura x 60 cm profundidade, subdivididas em quadros de 10 x 10 cm), blocos de terra 50 cm de largura por 20 e 10 cm de profundidade por 20 cm de espessura sero retirados nas profundidade de 0-10, 10-20, 20-40 e 40-60 cm e complemente lavados com jatos d'gua pressurizado sobre peneiras de 1 mm, 0,25 mm e um pano sobrepostos. Cada amostra ser pesada e subamostrada para secar em estufa de ventilao forada a 65 C. Dessa forma pretende determinar a distribuio no perfil e a massa de razes, verificando a influncia de cultivar (Tanznia e Mombaa, sob pastejo rotacionado) e de diferentes estratgias de adubao NPK, nessa variveis respostas. FIGURA 5 - Monlito retirado em bloco pela superfcie do solo. FIGURA 6 - Monlito retirado de trincheira.

Fonte: BHM (1979)

Fonte: BHM (1979)

4 - MTODO DA VERRUMA

O mtodo da verruma ou trado tem a vantagem do uso de forma localizada, sem a necessidade de grande destruio, principalmente quando se pensa em mtodos no estudo de pastagens. A primeira coisa que vem a mente que a quantidade de amostra pode ser limitada, entretanto BHM (1979) apresenta implementos tratorizados para a introduo de uma grande coluna em forma de tubo metlico no solo e depois o fracionamento de pequenos pedaos, para avaliaes posteriores. O autor demonstra o uso desse mtodo at em rvores com amostragens em esquemas radiais. Ao propuserem o nmero de razes como parmetro de avaliao do desenvolvimento do sistema radical de Brachiaria humidicola, RODRIGUES e CADIMA-ZEVALLOS (1991) usaram um trado-sonda com 5,5 cm de dimetro, amostrando em seis camadas: 0-5, 5-10, 1020, 20-50, 50-80, 80-100 cm de profundidade. Aps lavagem, procedeu-se a contagem e depois a mensurao do comprimento atravs da interseo. Os autores, atravs desse mtodo, encontraram altas correlaes positivas e diretas entre o nmero de razes e o comprimento das mesmas. No estudo de dinmica de razes importante no danificar as parcelas experimentais e ter um grande nmero de pontos, o que possvel com a utilizao desse mtodo. Parece promissor o uso do presente mtodo em pastagens uniformes, realizando-se, visando a operacionalidade, a anlise de apenas algumas amostras compostas, como se faz para anlise qumica. Entretanto, a perfeita homogeneizao das amostras ainda parece ser um ponto a ser melhorado, j que os resultados so expressos em gramas de razes por 100 g de solo (base seca).

5 - MTODOS DA PAREDE COMO PERFIL

Esse mtodo largamente utilizado por permitir estudos simultneos na mesma trincheira. Pelo que foi descrito por BHM (1979) originalmente o mtodo percebe a distribuio do sistema no perfil do solo. Para tanto deve-se abrir a trincheira manual, ou mecanicamente, escolher o perfil e realizar as tomadas das imagens, seja por desenho, por cmara fotogrfica ou filmadora. A posio da trincheira, quando o objeto de estudo so pastagens homogneas de gramneas temperadas, no importante, entretanto quando a cultura est disposta em faixas, o corte deve ser transversal perpendicularmente as ruas (BHM, 1979). Para expor as razes pode ser utilizado enxades e instrumentos especiais. Algumas modificaes tm sido feitas nesse etapa, tornando-o mais prtico, como a utilizao de jato d'gua, com pulverizador costal (CARVALHO, 1999). Jatos de ar tambm podem ser utilizados para expor as razes, recomendados em plantas de razes muito finas e fceis de quebrar. Aps a exposio das razes no perfil, colocado uma moldura subdividida em quadrculas, nas quais sero avaliadas individualmente e depois em conjunto. Depois da tomada de imagens em cada quadrcula, existem programas analisadores de imagens, que diferenciam-nas por comprimentos, vitalidade e at mesmo os dimetros das razes. Um desses analisadores o SIARCS, desenvolvido pela EMBRAPA-CNPDIA (CRESTANA et al., 1994), que vem sendo largamente utilizado, contudo existem outros analisadores de imagens bem melhores, porm de alto preo. Entretanto, um novo SIARCS deve ser lanado ainda este ano com muito mais recursos. A fim de proporcionar um maior entendimento, aps a abertura do perfil e a exposio das razes colocado uma moldura, por exemplo 100 x 60 cm, subdividida em vrios quadrados iguais de 10 x 10 cm. A cmara toma as imagens de cada um deles separadamente. Ento as imagens so digitalizadas atravs de placa digitalizadora, assim so processadas pelo SIARCS, que possui uma ferramenta que subdivide a imagem original, em funo do nmero de colunas e linhas desejadas, quantificando o comprimento de razes em cada uma delas (CARVALHO, 1999). O conhecimento da distribuio e massa de razes so fundamentais no estudo da dinmica de razes; os mtodos de escavao com tomada de imagens e monlito devem caminhar juntos. Alguns estudos tm comparado esse mtodo com o monlito para a mensurao da distribuio de razes no perfil do solo (CARVALHO, 1999). A maior vantagem do monlito por meio dele pode ser calculado massa de razes. A rea, comprimento, dimetro e densidade
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de razes sero conhecidos por ambos os mtodos. A maior vantagem do mtodo da parede como perfil a maior rapidez na obteno dos resultados. Entretanto apenas com bons analisadores de imagens se consegue resultados confiveis, e estes at ento tinham alto custo, que ser uma etapa passada ao lanamento do SIARCS II, talvez ainda este ano. A representatividade da rea na parede do perfil escolhido importante nesse mtodo. importante conhecer vrios mtodos e suas adaptaes, pois devem ser utilizados em conjunto, de forma complementares, sabendo-se que as trincheiras so obstculos a testes com pastejo. FIGURA 7 - Esquema do procedimento utilizado para obteno de imagens de razes no perfil do solo (50 x 60 cm) em quadrcula de 10 x 10 cm, em reas de pastagens.

Fonte: CARVALHO (1999)

6 - MTODO DA PAREDE DE VIDRO um mtodo muito custoso, pois, para boas observaes, envolve a construo de um laboratrio subterrneo, muito profundo com as paredes como se fosse cheia de aqurios do teto ao cho. No arredores do laboratrio so plantadas as culturas para estudos. Mesmo tendo o capital de investimento, as condies de profundidade do solo de fundamental importncia. Se o solo for raso, a perfurao da rocha uma tarefa que no se justifica. Projetos menos audaciosos tambm podem usar essa tcnica, montando as paredes de vidros no to profundas, em "janelas de campo", numa espcie de trincheira coberta, para evitar a penetrao de raios solares.

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Em ambos os casos a espessura do vidro fundamental para o sucesso do empreendimento, recomendando-se de 5 a 10 mm, com paredes internas reforadas, para evitar a quebra (BHM, 1979). Este mtodo permite a visualizao do desenvolvimento e da dinmica das razes, sem que tenha que destru-las a cada amostragem. Cada janela, vidro com aproximadamente 50 x 50 cm, pode ser acoplada a instrumento que auxiliam as mensurao, como por exemplo no acompanhamento do crescimento de razes, devemos fixar uma grade subdividida em quadrculas de, mais usualmente, 5 x 5 cm, nas quais so tomados, em cada turno, a medida do avano sobre a superfcie externa do vidro. As razes podem ser subdivididas em categorias e acompanhadas separadamente. Tem-se ento a unidade: cm de crescimento de raiz/cm2/unidade de tempo. As crticas so que, talvez, o crescimento da raiz encostada na janela pode ser diferente ao da mesma em condies naturais, no possibilitando o clculo da densidade de razes. Mesmo assim, interessante acompanhar o efeito de diferentes tratamentos no desenvolvimento de um determinado tipo de raiz ou entre profundidades. No estudo de gentipos forrageiros, um laboratrio como esse no Brasil seria esplendoroso, j que poderiam ser observados aspectos de tolerncia a seca, acidez, baixa fertilidade e pragas de solo afetando as razes. Adaptaes tambm tem sido propostas nesse mtodo. No livro de BMH (1979) trs um esquema de um tubo de vidro com um prolongamento acima do solo, escuro, que possui em seu interior um espelho e uma pequena lmpada, permitindo ao observador de cima ver o que est ocorrendo. As mensuraes so feitas de acordo com linhas transcectas que as razes fazem com as marcaes estratgicas no tubo. 7 - MTODOS INDIRETOS Os mtodos indiretos so baseados nos princpios da determinao de gua e nutrientes em diferentes camadas de solo entre amostragens sucessivas. Dessas mudanas inferimos informaes sobre a distribuio do sistema radical no perfil do solo (BHM, 1979). Alguns mtodos indiretos parecem ser indicados para estudos de ecologia de razes, especialmente na atividade e no na quantidade absoluta de razes no perfil do solo. Os mtodos indiretos que se utilizam de marcadores radioativos so extremamente perigosos, mas tm a vantagem da colheita de informaes sem a necessidade da separao das razes e o solo.

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Mtodos gravimtricos baseiam-se na correlao entre teor de gua no solo e quantidade de razes. Seria prtico para grande quantidade de amostras, entretanto, mesmo alguns autores terem demostrado a eficincia, podemos ocorrer em erros de avaliao dos resultados. A secagem das amostras realizada numa estufa a 105 C, todavia solos com alto teores de matria orgnica devem ser secados num forno a vcuo a 50 C.

8.0 - OUTROS MTODOS 8.1 - Mensurando a fora de fixao da raiz Conceitualmente a fora necessria para o arranquio das razes das plantas do solo. So estudos relacionados a capacidade de fixao e colonizao do solo, dando idia de como as razes empurraram, rompendo geogravitacionalmente as camadas do solo. Esses tipos de testes so fceis, rpidos e baratos de serem realizados, devendo ser rotina na avaliao entre cultivares, pois um cultivar com uma maior fora pode ter rompido camadas adensadas ou compactadas, ter tido uma colonizao mais segura do solo. Isto pode ser visto como qualidade das plantas cultivadas, que foram melhoradas pelo homem e perderam parte dessa capacidade, enquanto desvantagem como em plantas invasoras. A aparelhagem envolvida seria uma simples mquina que puxaria a planta do solo, medindo a fora necessria para arranc-la (Snell, 1966, citado por BHM, 1979). Nesse mtodo, a estrutura e o contedo de gua no solo, no momento da amostragem so fundamentais na avaliao dos resultados. O melhor momento da realizao do teste aps uma chuva pesada ou irrigao (BMH, 1979). 8.2 - Mensurando a aglomerao de raiz Visa obter conhecimentos semelhantes ao mtodo anterior, ou seja a observao do ancoramento da planta. Seria, aps o arranquio da planta, verificar a massa de razes agregadas ou ainda presas a planta. um mtodo indireto da resistncia de tenso de razes, muito relacionado com o estdio de desenvolvimento da planta e maturao das razes. 8.3 - Mensurando a fora de tenso das razes

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Outra via para obter dados quantitativos sobre a base das culturas cultivadas a medio da fora de tenso de razes individuais. As razes que sero submetidas a esse teste, aps lavadas e retirada todas as partculas de solo, so conservadas em uma soluo a 10% de lcool ou 5% de formol. Ento, colocadas num simples aparelho de medio da fora de teno de razes. um instrumento conhecido, constitudo de dois pratos, nos quais a raiz est presa. Um deles fixado ficando parado, enquanto o outro trazido em sentido oposto ao outro, at o rompimento da raiz (Kokkonen, 1927; Pavlichenko, 1942; e Spahr, 1960, citados por BHM, 1979). A fora de corte das razes geralmente medida em gramas, servindo como um ndice de fora de teno de raiz. 8.4 - Mtodo da sacola de malha uma modificao dos mtodos diretos, consistindo na escavao estratgicas de buracos de 30 cm de profundidade por 10 cm de dimetro, nos quais so inseridos justamente uma sacola de malha, preenchida de solo. Aps um perodo pr-determinado, as sacolas so retiradas e as razes so separadas por meio de lavagem. Esse teste pode ser usado em larga escala e nesses sacos devem ser colocados diferentes tipos de solos, diferentes daquele no qual a planta est inserida, verificando a "preferncia" da planta. 8.5 - Investigando a rizosfera 8.5.1 - Investigando os plos radicais A rizosfera, que j foi denominada a metade da metade escondida (WAISEL et al. 1991), tem uma importncia fundamental no estudo de razes, pois a rea superficial de explorao dos plos radicais, responsveis da absoro de gua e adsoro de ctions, tambm, apesar de pequenos, contribuem na ancoragem da planta no solo, pois esto entremeados na estrutura do solo. Plos esses que possuem 5-15 m de dimetro e 3-10 mm de comprimento. Segundo BIBIKOVA e GILROY (1997), os plos radicais so projees da superfcie da raiz que so importantes na absoro de nutrientes. A maioria dos estudos com plos radicais usam substratos artificiais ou gua ao invs de solo. Em estudos de campo, aps a lavagem e separao das razes, essas so colocadas em soluo alcolica para posterior observao em microscpio ptico e/ou eletrnico. Existe a

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possibilidade do clculo da rea superficial dos plos, mensurando o dimetro e comprimento dos mesmos. Na distino da vivacidade dos plos, h corantes como mergulhando-os em soluo de azul de metileno por alguns minutos, ou vermelho neutro a 1%. A elongao dos plos radicais ocorrem atravs da diferenciao e expanso celular. Trabalhos demostram a organizao e polarizao dos citoplasmas dessas clulas (Emons, 1987, citado por BIBIKOVA e GILROY, 1997). Em um trabalho sobre o papel fisiolgico dos gradientes de clcio citoplasmtico no crescimento de plos radicais, BIBIKOVA e GILROY (1997) utilizaram-se de imagem radiomtrica para monitorar o Ca++, visualizando todo o desenvolvimento de plos radicais, desde sua iniciao, sucesso de crescimento e paralisao. Os autores realizaram a primeira observao antes da formao do plo, ou seja, de 30 a 40 minutos antes do incio da emergncia, observando-se o indicativo do inchao local das clulas. Uma vez iniciada, foi mensurado o crescimento, calculando-se um ndice de crescimento. Todo o processo durou em torno de seis horas. 8.5.2 - Determinando a nodulao e fixao de N Caracterstica fundamental nas leguminosas, a formao de ndulos indica a simbiose com bactrias fixadoras de N do ar atmosfrico, fornecendo-o para a planta hospedeira e o solo. So diversas os fatores que influenciam a quantidade de N fixadas e isso objeto de estudos, seja em laboratrio, seja em campo. Nesse contexto, BHM (1979) sugere estudos sobre: poca de nodulao, relacionado com a fenologia ou caractersticas ambientais; e das caractersticas intrnsecas ao ndulo (como forma e colorao interna). Para tanto, mtodos como parede de vidro recomendada. No campo microbiolgico, tem-se os estudos de isolamento das estirpes bacterianas, determinao de suas espcies e outros cortes histolgicos. CROWDER e CHEEDA (1982) sugeriram os seguintes mtodos para avaliar a quantidade de N fixada pelas bactrias do gnero Rhizobium : a) Estimativas atravs de lismetros, onde o N tem sido mensurado na parte area inteira, e no solo e na drenagem de gua. b) Total de N produzido na parte area e raiz das leguminosas pelo mtodo Kjeldahl. Pela dificuldade de retirada de razes em muitos estudos retirado apenas a parte area, aplicando-se um fator de correo.

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c) Mtodos indiretos: Comparao da produo de parcelas compostas de gramneas adubadas submetida doses crescentes de N e de consrcio de gramnea + leguminosa. A produo obtida no consrcio comparada com as das parcelas adubadas e, atravs de uma escala simples, encontra-se o ponto na qual a fixao correspondeu; comparao de parcela consorciadas de gramneas + leguminosas subtraindo-se a produo da gramnea solteira; comparao do ganho de peso dos animais pastejando pastos consorciados gramnea + leguminosa e puros.
d)

Reduo do acetileno baseado na atividade da nitrogenase, que converte o C2 em NH3. O etileno medido em cromatgrafo gasoso.

8.0 - MTODO DO CONTINER O mtodo do continer utilizado para estudos de morfologia, fisiologia, bioqumica e ecologia de raiz. Os continers isolam os fatores ambientais que influenciam o crescimento de razes em perfis naturais, tornando os resultados mais "limpos", pois o pesquisador pode focalizar o objetivo e o objeto de estudo. A facilidade de manuseio e uniformidade de ambientes entre as parcelas so vantagens do mtodo, pois esses trabalhos so conduzidos em laboratrio e, mais comumente, em casa de vegetao, com temperatura, umidade e luminosidade controladas. Algumas desvantagens so condies limitadas ao crescimento das razes no volume dos vasos, ausncia de competio, distribuio anormal e a densidade do solo no traduz as condies de campo.

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Existem uma infinidade de formas (quadrada, cilndrica, retangular), tipos (tubo, caixa, potes) e tamanhos de continers que so usados em experimentos de razes. Alguns autores, tentando simular as condies de campo, enchem tubos (que permite uma expanso de razes em uma profundidade maior) com os horizontes A e B de um solo conhecido. Visando comparar a capacidade de diferentes gentipos de penetrar em camadas compactadas, BUSHAMUKA e ZOBEL (1998) utilizaram-se de um continer medindo 30 cm de altura por 11,5 cm de dimetro efetivo, com uma camada compactada (artificialmente com piston hidrulico para uma densidade de 1,65 mg/m3, enquanto a testemunha de 1,2 mg/m3) de 2,5 cm a 10 cm de profundidade. Para monitoramento do crescimento e distribuio das razes, foi utilizado radiografia de neutrons. Nesse estudo de plntulas, houve separao de razes em primrias (primeira raiz para emergncia da epictilo), basais (originria da base do hipoctilo ou mesoctilo, nas monocotiledneas so as razes seminais) e razes laterais. RODRIGUES et al. (no prelo), utilizaram de tubos de 15 cm de dimetro e 2 m de comprimento, secionados a cada 20 cm, para avaliar as diferenas entre gentipos de labe-labe. Nas datas de colheita de dados, cada segmento foi cortado e lavado numa mquina separadora de razes. Depois de limpas, as razes foram mantidas em soluo alcolica a 20 %, para posterior avaliao do comprimento, atravs do mtodo da intercesso de pontos. A densidade de razes em cada segmento foi calculada dividindo-se o comprimento total pelo volume de solo. Nos dois experimentos de HUANG e FRY (1998) fizeram uso de tubos e vasos. O primeiro experimento objetivou comparar a densidade de razes de cultivares de festuca. Para tanto, a dimenso dos tubos utilizados eram de 3,5 cm de dimetro por 180 cm de comprimento. Geralmente nos experimentos de contineres, pela quantidade limitada de solo, a nutrio das plantas realizada com solues nutritivas. Aps 84 dias os tubos foram secionados a cada 30 cm, as amostras foram lavadas e foram mensurados o comprimento de razes por um analisador de imagem digital, a densidade (como descrito no trabalho de RODRIGUES et al., no prelo). O segundo, visando avaliar as respostas anatmicas, fisiolgicas e morfolgicas nas razes de festuca (cv. Kentucky 31) submetida a estresse hdrico, fez-se uso de vasos de 30 cm de dimetro por 40 cm de profundidade. Aps a colheita das amostras, determinou-se o comprimento especfico das razes (comprimento/massa), crescimento de plos, potencial de gua e de turgor, estrutura cortical em microscopia, e vazamento eletroltico (mensurado com um condutivmetro eltrico). Atravs da microscopia, os autores demostraram os efeitos da seca sobre o nmero, comprimento dos plos radicais e as alteraes no arranjamento de tecidos da
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crtex, sendo didtico e muito ilustrativo. Assim, aconselha-se o uso dessa tcnica na demonstrao de resultados. BLANCAFLOR et al. (1997) adotou um microscpio equipado com um laser para capturar as clulas separadas das razes. Muitas novas tcnica tm sido desenvolvidas com o objetivo de melhor estudar razes, como por exemplo: "janelas" transparentes vistas na superfcie dos rizotrons e mini-rizotrons, que so utilizados em estudos de crescimento, maturao e senescncia (MACFALL, 1997). A tomada de imagens cocumitantemente ao crescimento das razes em continers, ou "in situ" uma tcnica muito til no estudo de razes. BLAND e DUGAS (1988) estudaram o uso do minirizotrom para observao do comprimento e densidade de razes de algodo e sorgo. Os autores enterraram um tubo acrlico transparente no solo de um continer. Os buracos para colocao do tubo devem ser feitos com bastante cuidado. Esse mtodo pode ser considerado como uma adaptao entre a parede de vidro e continer. A opo do uso do mini-rizotrom com miniaturas de cmaras de vdeo foi feita por JOHNSON et al. (1997). Segundo MACFALL (1997), certamente nesse tipo de estudos existem efeitos devido barreira fsica na formao, funo e rota de crescimento das razes. Muitos estudos usam a cultura hidropnica em continers. No Brasil, esse tipo de estudo tem sido realizado principalmente nos trabalhos que estudam aspectos nutricionais (SILVA, 1997). WENZL et al. (1997) simularam as condies de acidez do solo e mensuraram sua influncia no crescimento e H+ATPase de plasma celular de razes de duas espcies de Brachiaria sp., em soluo nutritiva. Efetuanado estudos de toxicidez de alumnio em gramneas, PAPERNIK e KOCHIAN (1997) e SILVA (1997) utilizaram o cultivo das plantas em continers com soluo nutritiva. MIYAZAWA et al. (1993) emergiram em gua destilada solos de oito localidades brasileira, extrado a soluo, a qual recebeu concentraes diferentes de tipos txicos de alumnio, determinado por potenciomentria com eletrodo seletivo de fluoreto. A literatura (BIRGHAM et al. (1997) trs o cultivo de plantas em soluo nutritiva para experimentos de fisiologia de raiz. Uma das claras vantagens do mtodo do continer, o nmero grande de tratamento, numa espao fsico reduzido e a possibilidade de acoplar equipamentos que auxiliem nas medies. BONSER et al. (1997) desenhou um reator acoplado a um tubo para estudos de trocas gasosas em razes, sob soluo nutritiva. MACFALL (1997), do departamento de radiologia da Duke University, explicou o uso de imagens obtidas atravs da ressonncia magntica na visualizao do crescimento e desenvolvimento de razes. Contudo, o mtodo necessita de grande quantidade de
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equipamentos, os quais so comuns em consultrios mdicos. Talvez, financeiramente, a aquisio pode ser possvel em laboratrios para estudos de razes, que ainda no temos no Brasil, ou entre convnios de instituies de pesquisa e ensino com hospitais. A possibilidade de observar o sistema radical ao longo do tempo sem alterar o comportamento das razes e das plantas uma grande vantagem. CHAUGHULE et al. (1997) estudaram, atravs de ressonncia magntica, os danos do estresse hdrico em batatas, com excelente resoluo de imagens. FIGURA 8 - Vista parcial de um experimento em tubos PVC com espcies arbreas

Fonte: BHM (1979)

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ANEXO 1

TABELA 1 e 2 - Classificao de razes. 1) Classificao da quantidade de razes Muito pouca Moderadamente pouca Pouca Comum Muita 2) Classes de tamanho de razes Muito fina Fina Media Grossa Muito grossa Por unidade de rea < 0.2 0.2 to 1 <1 1 to < 5 >= 5

Diametro em mm <1 1-2 2-5 5 - 10 > 10

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