Cambios relacionados con la edad de parmetros seleccionados hematolgicamente en conejos

abstract

Incluso aunque haya una abundancia de informacin sobre los valores de referencia de parmetros haematological en conejos adultos, sepa un poco sobre los cambios de haematology en conejos recin nacidos o durante su desarrollo de posparto. Por lo tanto, el objetivo de nuestro estudio era investigar cambios de glbulos rojos (RBC), glbulos blancos (WBC) y el leucocito diferencial incluye Nueva Zelanda SPF conejos Blancos de la edad de un da a 20 semanas. Cambios significativos relacionados con la edad durante las cuatro primeras semanas de vida fueron descubiertos. Estos incluyeron un aumento de RBC Y WBC, inversin de la proporcin neutrophil/lymphocyte y el aumento de las cuentas totales de eosinophils y basophils. De la edad de seis semanas de vida, todos los parmetros estudiados haematological eran comparables para aquellos de conejos adultos.

1. Introduccin
Los conejos europeos de introduccin (Oryctolagus cuniculus) son una de la especies de animal a menudo usada como un modelo experimental en la investigacin humana y veterinaria. Los conejos como un modelo de animal tienen muchas ventajas. Ellos estn fcilmente disponibles commercialemente y fcilmente pueden ser transportados. Ellos bien son caracterizados biolgicamente, tienen un perodo de gestacin corto y ms fcilmente pueden ser almacenados y manejados que la especie ms grande. Para estos motivos, conejos han sido esenciales al estudio de un nmero de enfermedades infecciosas y no contagiosas (Gamboa y el Molinero, 1984; Filice et al., 1988; Jayo et al., 1994; Peiffer et al., 1994) o toxicidad y pruebas de seguridad (Anderson y Henck, 1994). Adems, los conejos se han mostrado para ser un modelo bueno para estudios relacionados con el perodo perinatal (Bortolotti et al., 1989). Sabe que en conejos, as como en otra especie de animal, haematological y parmetros bioqumicos son considerablemente bajo la inflluencia de la tensin de los conejos (Laird et al., 1970), gnero (Laird et al., 1970; Wolford et al., 1986), variacin diurna (Zorro y Laird, 1970) condicin fisiolgica, como embarazo (Pozos et al., 1999; Kim et al., 2002) y edad (Laird et al., 1970; Bortolotti et al., 1989). Incluso aunque mucha informacin sobre los valores de referencia de parmetros haematological en conejos adultos exista (Wolford et al., 1986; Hewitt et al., 1989; Kabata et al., 1991; Jain, 1993; Aleman et al., 2000), un poco saben sobre cambios de valores de haematology en conejos recin nacidos o durante su desarrollo de posparto. Los estudios del efecto mayor de edad sobre parmetros haematological en conejos

fueron realizados por Pearce (1948) quien recogi datos de los conejos normales de la tensin de osteopetrosis durante los 39 primeros das de vida y por Laird et al. (1970) quien describi cambios de valores de haematology en Nueva Zelanda convencional conejos Blancos hasta la edad de 120 das. Sin embargo, no hay ninguna informacin sobre cuentas de leucocito diferenciales. En consecuencia el objetivo de este estudio era analizar el efecto mayor de edad sobre los niveles de glbulos rojos (RBC), glbulos blancos (WBC) y el leucocito diferencial incluye una poblacin de conejos SPF ancianos de un da a 20 semanas. 2. Material y mtodos 2.1. Animales Outbred Nueva Zelanda SPF Blanco (sin conejo comn pathogens: myxoma el virus, RHDV, pathogens positivo de gramo y negativo de gramo, ecto-y endo-parsitos) los conejos, estiran Crl:KBL, fueron obtenidos de Carlos River Laboratorios, Alemania (GmbH, Munich, DE). Los animales fueron suministrados por la furgoneta en cajas con filtro. Dos hembras y un macho estuvieron acostumbrados como padres. Despus de un perodo de aclimatacin de dos semanas, los conejos eran mated y las hembras entonces fueron almacenadas individualmente en jaulas criadoras (100 x 60 x 50 cm) con materiales esterilizados que anidan y permitido para entregar a sus perritos. Destetaron a los perritos durante el da 35 de vida. Despus del destete, todos los perritos fueron almacenados individualmente en trituran cable jaulas (52 x 70 x 45 cm) sin el lecho. Todos los conejos fueron guardados en la facilidad de cuidado de animal con condiciones controladas en el Instituto de investigacin Veterinario, Brno, CZ. El espacio fue mantenido en una temperatura de 21 C con la humedad relativa del 40-60 %, la ventilacin de aproximadamente 15 cambios de aire por hora y 12 h el ciclo ligero oscuro. Los conejos fueron alimentados la dieta granulada ( complete la mezcla de alimentos, Bonagro, CZ) acalorado durante 20 minuto a 120 C ad libitum y tena accesos libres para beber. En este estudio, 11 conejos (seis machos y cinco hembras) de la generacin de progenie de dos basuras (cada basura de la hembra diferente) fueron usados. Estos conejos fueron usados para las medidas repetidas de parmetros seleccionados haematology a partir del da 1 a 20 semanas mayores de edad. Los animales fueron almacenados y manejados con el acuerdo de la Comisin de Rama para el Bienestar De animal del Ministerio de agricultura de Repblica Checa. 2.2. El muestreo de sangre y el anlisis El muestreo de Sangre fue realizado en 11 puntos de tiempo diferentes - 1 da, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18 y 20 semanas de vida. La sangre (dependiendo la edad 0.2-1 ml) fue recogida de la vena de odo marginal a 1.5 tubos ml de tipo de Eppendorf (el Plaboratorio, CZ) con el sodio heparin 10 IU por 1 ml de sangre (Heparin el fuerte leciva, Zentiva, CZ) de todos los conejos. Los animales fueron refrenados a mano. Variaciones diurnas en parmetros haematological fueron reducidas al mnimo por recogiendo la sangre en aproximadamente el mismo tiempo (9:00-10:00 h). Las muestras de sangre fueron entregadas al laboratorio dentro de 0.5 h de coleccin e inmediatamente analizadas. El Total RBC y el total WBC cuentas fue evaluado usando el Digicell 500

contador de clula (Contraves AG, CH). Cuentas de leucocito diferenciales fueron determinadas por contando 2.3. El anlisis de datos Debido a un relativamente pequeo nmero de animales experimentales, los cambios dependientes de edad de parmetros haematology fue probado con la prueba de ANOVA no paramtrica para medidas repetidas (Friedman la prueba) la utilizacin de la postprueba de Dunn para la comparacin de todos los pares. Las diferencias en el nivel de P 6 0.05 fueron consideradas estadsticamente significativas. Todos los clculos fueron realizados con el EXCEL DE SRA. (El Corp. de Microsoft, la S.A.., EE.UU.) y Prisma (Software de Almohadilla de Grfico, S.A.., San Diego, CA, EE.UU.) software. 3. Resultados Esto sigui del estudio presente que RBC aumentado con el tiempo despus del nacimiento (Mesas 1 y 2). Cuando comparado con conejos adultos (20-semanas), considerablemente redujeron RBC en de 1 da (P <0.001), 2-semana (P <0.05) y 4 semanas (P <0.001) conejos. Asimismo considerablemente redujeron el WBC gradualmente aumentado con el tiempo despus del nacimiento y en conejos hasta cuatro semanas mayor de edad (P <0.001, P <0.001 y P <0.01, respectivamente). En cuentas de leucocito diferenciales, linfocitos estaban en niveles bajos en el momento del nacimiento y bruscamente aumentaron durante el primer mes de vida, tanto en porcentajes como en total se cuentan. Cuando comparado con conejos adultos (20 semanas), considerablemente redujeron los valores de porcentaje de linfocitos en de 1 da (P <0.01) y 2 semanas (P <0.05) conejos. Sin embargo, En contraste con linfocitos, los porcentajes de neutrophils considerablemente fueron aumentados en de 1 da (P <0.001) y 2 semanas (P <0.05) conejos cuando comparado con animales de 20 semanas. De otra parte, el total neutrophil la cuenta mostr una tendencia no significativa. Altos neutrophil y el linfocito bajo incluyen todos los conejos 1-dayold dio el neutrophil contra el linfocito (N:L) la proporcin encima de 1. Entonces, la proporcin N:L disminuy rpidamente y de la edad de 2 semanas, los valores tacaos de proporcin N:L eran inferiores que 1 (el Higo 1). Ningunos cambios significativos fueron descubiertos en los valores de porcentaje de monocytes, eosinophils y basophils cuando comparado con conejos adultos de 20 semanas. Sin embargo, en total las cuentas, la disminucin significativa en eosinophils en de 1 da (P <0.05) y 2 semanas (P <0.01) conejos y la disminucin significativa en basophils en de 1 da (P <0.05), 2-semana (P <0.001) y 4 semanas (P <0.05) conejos fueron registradas. Ningunos cambios significativos fueron descubiertos en total las cuentas de monocytes en cualquier categora de edad cuando comparado con animales adultos de 20 semanas. 4. Discusin Incluso aunque los conejos extensamente sean usados como modelos experimentales, all es una falta de lnea de fondo haematological datos para esta especie de animal en la relacin a las condiciones fisiolgicas que se cambian como la edad y el SPF-ESTADO. En particular, la informacin disponible de conejos recin nacidos es escasa (Pearce 1948; Laird et al., 1970). En consecuencia el objetivo de nuestro estudio era investigar cambios

de RBC, WBC y el leucocito diferencial incluyen Nueva Zelanda SPF conejos Blancos a la edad de 1 das 20 semanas. Un aumento gradual de RBC Y WBC durante el proceso de maduracin es de acuerdo con estudios anteriores que tratan haematology cambios de la tensin de osteopetrosis de conejos holandeses (Pearce, 1948) y en Nueva Zelanda convencional conejos Blancos (Laird et al., 1970). Los valores de RBC en conejos adultos SPF (de 20 semanas) con este trabajo son compatibles con los datos de referencia de RBC en Nueva Zelanda convencional los conejos Blancos de edad comparable (Hewitt et al., 1989; Jain, 1993). Adems, nuestros valores de WBC en conejos adultos (6.16 0.66 ' 109/l) son comparables para aquellos hechos un informe por Kabata et al. (1991) en Nueva Zelanda adulta SPF conejos Blancos (6.2 2.0 ' 109/l). Al contrario los datos de referencia antes publicados por Laird et al. (1970) (12.99 0.65 ' 109/l), Wolford et al. (1986) (9.5 2.07 ' 109/l), Hewitt et al. (1989) (9.2 2.2 ' 109/l) y Aleman et al. (2000) (8.1 0.31 ' 109/l) para conejos convencionales son considerablemente ms alto que valores de WBC en el estudio presente. Esta discrepancia podra ser explicada por el estado SPF de conejos usados en nuestro estudio. Ellos fueron almacenados en condiciones controladas y eran en la exposicin inferior antiGral. que animales convencionales usados en los estudios antedichos. Tabla 2 cambios Relacionados con la edad de glbulos rojos (RBC), glbulos blancos (WBC) y el diferencial incluye conejos ancianos a partir de 12 a 20 semanas (la n = 11 por grupo). Los datos son expresados como la desviacin tacaa estndar. Ningunas diferencias significativas fueron descubiertas en comparacin con conejos adultos (de 20 semanas).

Fig 1. Cambios relacionados con la edad de neutrophil contra linfocito (N:L) proporcin en conejos ancianos de 1 da a 2 20 semanas (n = 11 por grupo). Los datos son expresados como tacao, las barras representan la desviacin estndar.

Tabla 2 cambios Relacionados con la edad de glbulos rojos (RBC), glbulos blancos (WBC) y el diferencial incluye conejos ancianos a partir de 12 a 20 semanas (la n = 11 por grupo). Los datos son expresados como la desviacin tacaa estndar. Ningunas diferencias significativas fueron descubiertas en comparacin con conejos adultos (de 20 semanas).

En el estudio presente, ambos porcentajes y los nmeros absolutos de neutrophils excedieron en nmero linfocitos en todos los conejos de 1 da, dando a la proporcin N:L ms alto que 1. La proporcin N:L disminuy rpidamente, y durante las dos primeras semanas de vida dejada caer a valores ms abajo que 1, como est en conejos adultos; en estos los nmeros de linfocito exceden cuentas de neutrophil. La proporcin aumentada N:L ha sido atribuida a las concentraciones ms altas de corticosteroids en conejos neonatales y su efecto sobre neutrophils y linfocitos (Jain, 1993). Los conejos entregados por la cesrea durante el da 29 de gestacin mostraron una proporcin comparable N:L como conejos adultos (Bortolotti et al., 1989). La disminucin de proporcin N:L durante las primeras semanas de vida fue descrita para mucha especie de animales como el ganado (Jain, 1993; Mohri et al., 2007), caballos (Jain, 1993), cerdos (Zelnickova et al., 2006) y perros (Jain, 1993; Faldyna y Toman, 1998). Mientras que los nmeros totales de linfocitos aumentaron considerablemente durante las cuatro primeras semanas de vida, ningunos cambios fueron descubiertos en los nmeros totales de neutrophils. De la misma manera en otra especie de animal, el nmero total de neutrophil granulocytes en conejos as es establecido como relativamente constante durante el temprano desarrollo de posparto (Jain, 1993). Este hecho puede ser importante en la defensa de conejos recin nacidos contra el potencial pathogens el presente en su entorno, debido al hecho que el nivel de su inmunidad adquirida principalmente caracterizada por linfocitos es todava bajo (Jeklova et al., 2007a). Los valores de porcentaje de eosinophils y basophils eran estables durante el proceso de maduracin, mientras sus nmeros absolutos aumentaron considerablemente, probablemente como una consecuencia de elevacin WBC. Los nmeros de estas clulas tambin pueden cambiarse con la edad de alguna especie de animal. Ms alto eosinophil y nmeros de basophil puede ser encontrado en los adultos de la mayor parte de especie, probablemente como consecuencia de cambios de la experiencia de inmunologa, en particular despus de enfermedades parsitas (Jain, 1993). Sin embargo, esto no era el susodicho caso, porque los conejos en este estudio eran sin ecto-y endo-parsitos y fueron almacenados en condiciones controladas. Ningunos cambios en total y los valores de porcentaje de monocytes fueron

observados. Esto est en el acuerdo con los estudios realizados sobre otra especie de animal, donde los nmeros de monocytes fueron observados. Esto est en el acuerdo con los estudios realizados sobre otra especie de animal, donde los nmeros de monocytes no parecieron ser sumamente bajo la inflluencia de la edad. Basado en datos presentados aqu, podemos concluir que (de la misma manera en otra especie mammalian estudiada hasta ahora) RBC, WBC y el leucocito diferencial incluye Nueva Zelanda SPF conejos Blancos sufren el desarrollo significativo de posparto. De la edad de seis semanas, los valores de todos los parmetros estudiados haematological eran comparables con aquellos de conejos adultos. Esto es de acuerdo con nuestros estudios antes publicados que conciernen el desarrollo de posparto de subpoblaciones de linfocito y actividad de linfocitos (Jeklova et al., 2007a, b).