Practica #4

NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-112-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. DETERMINACIN DE BACTERIAS COLIFORMES. TCNICA DEL NMERO MS PROBABLE.

INTRODUCCION: En esta prctica se describe, analiza y desarrolla la tcnica del nmero ms probable en base a la norma oficial mexicana NOM-112-SSA1-1994, dando a conocer el fundamento y objetivo de esta norma, al igual se mencionara el tema de los coliformes Las enterobacteriaceae lactosa-positivas o grupo coli-aerogenes constituyen bacterias que se definen mas por las pruebas usadas para su aislamiento que por criterios taxonmicos. Pertenecen a la familia enterobacteriaceae y se caracterizan por su capacidad para fermentar la lactosa con produccin de acido y gas, ms o menos rpidamente, en un periodo de 48 horas y con una temperatura de incubacin comprendida entre 30-37C Son bacilos gramnegativos, aerobios y anaerobios facultativos, no esporulados. Del grupo coliformes forman parte barios gneros: Escherichia Enterobacter Klebsiella Citrobacter Se encuentran en el intestino del hombre y de los animales, pero tambin en otros ambientes: suelo, plantas, cascara de huevo, etc. Aunque su especificidad como indicadores no es buena, se suelen usar como ndice de contaminacin fecal por: Su frecuencia en heces Su fcil deteccin en el laboratorio Sus caractersticas semejantes, en algn aspecto, a las de algunos miembros patgenos de la familia enterobacteriaceae Dentro de este grupo, son los coliformes fecales los que tienen significado sanitario y, por consiguiente, los que ms interesan en el anlisis microbiolgico de alimentos

Se considera a los coliformes fecales como presunto a Escherichia coli. Sus principales caractersticas son:

Aptitud para desarrollarse entre 43-45C Capacidad para crecer en presencia de sales biliares Facultad para producir indol en agua de peptona En general, niveles altos de Enterobacteriaceae lactosa-positivas (coliformes) indican manipulacin y elaboracin deficientes de los alimentos. OBJETIVOS: Esta Norma Oficial Mexicana establece el mtodo microbiolgico para estimar el nmero de coliformes presentes en productos alimenticios, por medio del clculo del nmero ms probable (NMP) despus de la incubacin a 35 C de la muestra diluida en un medio lquido. FUNDAMENTO: Este procedimiento puede aplicarse a agua potable, agua purificada, hielo y alimentos procesados trmicamente, as como a muestras destinadas a evaluar la eficiencia de prcticas sanitarias en la industria alimentaria. Esta norma se complementa con lo siguiente: NOM-109-SSA1-1994 Procedimientos para la Toma, Manejo y Transporte de Muestras de Alimentos para su Anlisis Microbiolgico. NOM-110-SSA1-1994 Preparacin y Dilucin de Muestras de Alimentos para su Anlisis Microbiolgico. PRACTICA: Material 32 Tubos de hemolisis 5 tubos de ensayo 20x250 27 tubos de tubos de ensayo 15x75 Esptula y 2 asas 3 matraz Erlenmeyer 3 pipetas de 10 ml 1 probeta de 100 ml Mechero de bunsen y tripie 1 balanza granataria Reactivos y cepas Agar nutritivo Agar bilis verde brillante Agar lactosa Agua para tomar Solucin salina Cepa control E.coli Agua destilada

Preparacin y Operaciones para el caldo nutritivo-lactosado y el caldo bilis:

5 tubos de ensayo de 20 x 250 el cual contendrn 20 ml de caldo nutritivo lactosado (al doble) cada uno y se les agregara a cada uno un tubo de hemolisis para realizar la campana de Durham

15 tubos de ensayo de 15 x 75 el cual contendrn 10 ml de caldo bilis verde brillante cada uno y se les agregara a cada uno 1 tubo de hemolisis para realizar campana de Durham, aparte 1 tubo de ensayo que ser el control

10 tubos de ensayo de 15 x 75 el cual contendrn 10 ml de caldo nutritivo lactosado cada uno y se les agregara a cada uno 1 tubo de hemolisis para realizar campana de Durham y 1 tubo de ensayo control

Los tubos de ensayo Durham se utilizan en microbiologa para determinar la produccin de gases de microorganismos

Operaciones:
Caldo nutritivo al doble: 8gr 0.8gr (2)= 1.6gr 1000 ml 100 ml Caldo nutritivo sencillo: 8gr 0.88gr 1000 ml 110 ml

Caldo lactosado al doble: 5gr 0.5gr (2)= 1gr 1000 ml 100 ml

Caldo lactosado sencillo: 5gr 0.55gr 1000 ml 110 ml

Caldo bilis verde brillante (sencillo): 40gr 6.4gr 1000 ml 160 ml

TECNICA: Una vez teniendo lo diferentes caldos solo usaremos los tubos del caldo nutritivo lactosado Agregamos 10 ml de agua a los tubos con caldo al doble, 1 ml de agua a 5 tubos con caldo sencillo y 0.1 ml de agua en los otros tubos con caldo que restan Incubaremos a 35C por 24 horas Ahora usaremos tambin los tubos con caldo bilis verde brillante Aquellos tubos que produjeron gas en las campanas de Durham los inocularemos 2 veces en los tubos con caldo bilis verde brillante Incubaremos a 35C por 48 horas Anotamos los diferentes resultados y comparamos con las tablas del NMP

ESQUEMA:
Se tomara las diferentes cantidades de muestra antes descritas para cada tubo

Caldo nutritivolactosado al doble

Se incubaran los tubos a 35C por 24 horas Caldo nutritivolactosado sencillo Despus de incubar, aquellos tubos que dieron resultado positivo, los inocularemos al cado bilis 2 veces

Caldo bilis verde brillante .

Incubamos a 35C por 48 horas y despus anotamos resultados

RESULTADOS:

Solamente no interesaran aquellos tubos con produjeron gas y no estn turbios ya que pueden representar el crecimiento de otros microorganismos Tubos de ensayo 20x250 al doble (10)
Tubos 1 2 3 4 5 Resultado Negativo Positivo con produccin de gas Negativo Negativo Negativo

Tubos de ensayo 15x75 sencillos (10)

Tubos 1 2 3 4 5 resultado Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo

Tubos de ensayo 15x75 sencillos (10)

Tubos 1 2 3 4 5 Resultado Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo

DISCUSIN:

El anlisis del agua potable es importante puesto que se podr descartar si existe coliformes o cualquier otro microorganismo en ella. Favoreciendo que el consumidor no se enferme por una intoxicacin o infeccin. Tambin que al momento de la manipulacin de dicha bebida no sea favorable, para ello el hombre tiene que conocer las medidas higinicas. De acuerdo a la norma y otras fuentes el agua puede contener <2,2 NPM/100ml, mientras que otros alimentos no debern contener coliformes para no propiciar a una infeccin, es decir, que tienen que estar inocuos. En el caso del agua hicimos la prueba de acuerdo a la tcnica de la norma para llevar un control en el procedimiento y obtuvimos muy pocos resultados que propiciaban a coliformes
CONCLUSION:

No solo se hace la prctica para un recuento de coliformes o para cualquier microorganismo sino que tambin para prevenir que el producto sufra de algn dao mecnico que provoque el deterioro del producto, as como tambin la contaminacin de dicho producto.

BIBLIOGRAFIAS http://avdiaz.files.wordpress.com/2010/02/presentacion-clase-4.pdf http://www.slideshare.net/egrandam/nmp-de-coliformes-totales-y-fecales http://www.agrobit.com.ar/Info_tecnica/alternativos/avicultura/AL_000010av.htm http://www.ingenieriasanitaria.com/pdf/cap8.pdf El manejo higinico de los alimentos, Francisco Bravo, pg. 79