A.

Finalidad de este ejercicio

La finalidad de este ejercicio es muy simple: Empezar a familiarizarse con el laboratorio de Microbiologa y adquirir una visin de conjunto del mismo, del equipo ms frecuente y de los materiales ms utilizados.

B. Panormica de un Laboratorio de Microbiologa

Un laboratorio de Microbiologa es un lugar convenientemente habilitado donde se pueden manejar y examinar microorganismos. Este tipo de trabajo debe ser llevado a cabo con una buena tcnica asptica, y por tanto se requiere un ambiente limpio y ordenado. Cuando se maneja cualquier tipo de muestra se debe evitar que los microorganismos ajenos a nuestros cultivos y presentes en el ambiente se introduzcan en ellos contaminandolos, o que los microorganismos de la muestra nos contaminen a nosotros. Por ello, se debe trabajar siempre en condiciones de seguridad. En el laboratorio de Microbiologa encontraremos estas condiciones bien en las campanas de seguridad biolgica o bien en la proximidad de la llama de un mechero de alcohol o de gas. Incluso aunque los microorganismos que se manipulen en un momento dado no sean supuestamente patgenos, todos los cultivos de microorganismos deben ser manejados con precaucin por su potencial patogenicidad.

Algunos elementos comunes a cualquier laboratorio

Mesas de laboratorio bajas para trabajar sentado.

Mesas de laboratorio altas para trabajar de pie o apoyado en taburetes.

Fregadero y puntos de agua.

Vitrinas y armarios.

Algunos elementos ms especficos

Microscopio ptico

Estufas de cultivo

Autoclaves

Cabina de siembra

C. Normas Generales del Trabajo en Microbiologa

Todo el material empleado en el manejo de microorganismos deber estar estril.

Todas las manipulaciones debern realizarse en un radio de 10-15cm (zona asptica), alrededor de la llama del mechero, o bien en una campana de flujo laminar.

Se procurar disponer de todo el material necesario para el procesamiento de la muestra microbiolgica al alcance de la mano, para evitar desplazamientos innecesarios. Es necesario adquirir rapidez y automatismo, indispensable para una buena ejecucin de las tcnicas.

Restringir la presencia de los microorganismos en estudio a sus recipientes y medios de cultivo para evitar el riesgo de la contaminacin. Evitar que los microorganismos ambientales (presentes en la piel, pelo, aire, ropa,, etc.) contaminen nuestras muestras. No se debe pipetear nunca con la boca. Utilizar siempre pipeteadores manuales.

Para deshacerse del material contaminado se deben utilizar unos recipientes adecuados para ser esterilizados posteriormente. Nunca debe tirarse nada por el fregadero o al cubo de la basura comn sin haber sido esterilizado previamente.

D. El Puesto de Trabajo en Microbiologa

1.- Debe de estar limpio 2.- Todo el material necesario para la manipulacin de microorganismos o muestras en Microbiologa debe de haber sido preparado adecuadamente (esterilizado o desinfectado o lavado ....) antes de empezar la manipulacin.

3.- Todo el material necesario debe de situarse de tal forma en el puesto de trabajo que facilite su utilizacin.

4.- La incorrecta disposicin espacial del material a emplear nos va a obligar a hacer movimientos inadecuados que pueden originar contaminacin y/o accidentes de la muestra, del puesto de trabajo, del ambiente y/o del personal. 5.- El no tener todo el material a emplear disponible nos obliga a desplazarnos durante la manipulacin de la muestra dentro del laboratorio estos desplazamientos, evitables, pueden originar una contaminacin del ambiente del laboratorio.

6.- La utilizacin de material que no haya sido tratado convenientemente para el trabajo a realizar puede originar una contaminacin de la muestra a manipular y los resultados que se obtengan no sern fiables.

E. Equipos mas frecuentes

croscopio ptico

Utilizan lentes pticas. TIPOS DE LENTES Ocular Objetivo AUMENTO DE LAS LENTES En la superficie de cada lente hay un nmero y un signo (X) marcado que es el aumento de la lente El aumento total del microscopio viene dado por el resultado de multiplicar el aumento del ocular por el del objetivo. Los objetivos pueden ser de (10X), (20X), (40X), (64X) y (100X). Aumento Si se utiliza un ocular de (10X) y el objetivo de (10X) 10 x 10 = 100 veces Si se utiliza un ocular de (10X) y el objetivo de (20X) 10 x 20 = 200 veces Si se utiliza un ocular de (10X) y el objetivo de (40X) 10 x 40 = 400 veces Si se utiliza un ocular de (10X) y el objetivo de (100X) 10 x 100 = 1.000 veces El maximo aumento que se puede conseguir con estas lentes, por tanto es 1.000 veces PODER DE RESOLUCION Es la capacidad de poder diferenciar y separar puntos muy cercanos. El concepto es facilmente comprensible con el ejemplo de los faros de un automovil. Supongamos un coche que viene por la noche desde muy lejos hacia nosotros. En la lejana slo se v un haz luminoso, pero a medida que se acerca hay un instante que diferencian dos haces luminosos (los dos faros) proximos pero separados.

utoclave

Esterilizacin: Tratamiento que da como consecuencia la muerte de todos los organismos vivos en el objeto o producto tratado. Esterilizacin por calor hmedo Se realiza en autoclave durante 15 30 min, segn el volumen, a 115C 121C, segn la naturaleza del material que se desee esterilizar. Se utiliza para esterilizar: -Medios de cultivo -Ropa -Material de plstico resistente al calor hmedo -Objetos de metal que no se alteren con la humedad -Material de vidrio

tufa incubadora

Estufa de incubacin: Cmara de temperatura controlada para cultivo de microorganismos. Se utiliza para facilitar el desarrollo de los microorganismos a su temperatura ptima crecimiento. Generalmente permiten graduar la temperatura entre 10-70C.

igorficos

Frigorfico: Cmara refrigerada. Se utiliza para conservar tanto materiales (medios de cultivo, reactivos) como microorganismos. Generalmente est a una temperatura fija de 4C por tanto la conservacin no es indefinida, aunque tambin son regulables. Los frigorficos mantienen la temperatura entre 0-10C y los congeladores por debajo de 0C, llegando a -80C los ultracongeladores.

omogenizador de paletas o Stomacher Homogenizador de paletas o Stomacher: Permite homogeneizar las muestras. Se utiliza para conseguir que una muestra slida en contacto con un diluyente se mezcle con este totalmente.

ntrfuga

Centrfuga: Aplica sobre los tubos fuerza centrfuga lo que permite la separacin de l distintos componentes de la muestra mediante la precipitacin en el fondo del tubo de las partculas en suspensin.

mpanas seguridad biolgica

En las Cabinas de Seguridad de Tipo I el aire entra directamente del exterior y se filtra antes de devolverse al exterior, es un sistema adecuado para el manejo de croorganismos no patgenos.

En las Cabinas de tipo II el aire no entra directamente sino que pasa por un filtro HEPA que elimina las partculas y la mayora de los microorganismos. En ellas se baja con la cmara parcialmente cerrada de tal forma que existe mayor proteccin del usuario si se manipulan microorganismos patgenos. Como el aire atraviesa un fil tes de entrar se evita la contaminacin de los medios de cultivo con microorganismos del exterior por lo que es adecuada para preparacin de medios.

Las Cabinas de Seguridad de tipo III, constan de una estructura totalmente CERRADA y HERMETICA, en cuyo interior las manipulaciones se efectan por medio de UANTES recambiables cuyo manguito recubre todo el brazo. La camra recibe aire que penetra a travs de un filtro HEPA y evaca a travs de dos filtros HEPA ocados en serie. Las manipulaciones en la cmara se hacen bajo presin negativa, con lo que la PROTECCION de personal, de los productos y del medio ambiente es OMPLETA. utiliza con toda clase de agentes biolgicos. Conviene ABSTENERSE de utilizar lquidos o gases inflamables a causa del riesgo de explosin.

esionizador de agua

La mayora de de los trabajos que se realizan en laboratorio requieren la utilizacin de agua pura con el fin de evitar cualqier tipo de interferencia. Salvo ligeras variaciones los requisitos que debe cumplir el agua para considerarla pura son: - Estar exenta de materiales en suspension - Tener un residuo no volatil de menos de 5ppm a 105C -La coductancia especfica menor de 5 Siemens/cm a 20C - El valor de pH debe estar comprendido entre 5,0 y 7,5

- Para utilizarla en estudios clnicos y patolgicos es preciso que carezca de sustancias pirgenas y para trabajos ms especializados el contenido de iones ha de s nulo

Aunque durante aos se ha utilizado agua destilada (obtenida por evaporacin y posterior condensacin) en el laboratorio, en la actualidad los destiladores clsicos han ido abandonndose para dar paso a desionizadores que funcionan con resinas d intercambio inico.

Otro metodo de purificacin de agua es la smosis inversa que es el mtodo m econmico para eliminar entre el 90 y el 99% de todos los tipos de contaminantes qu pueda contener y que ofrece el agua de mejor calidad.

ntador de colonias

Contador de colonias: Es un aparato que mediante la iluminacin de la placa y una lupa, nos permite observar con mayor nitidez las colonias y por tanto facilita su recuento.

lanzas

Balanzas: se utilizan para pesar, varian en funcin de la precisin que nos ofrecen. La foto de la derecha es un "balanza anltica" y la de la izquierda es un "granatario".

os

Baos termostticos: son recipientes que contienen agua y un sistema de regulaci de la temperatura. Se utilizan para atemperar medios de cultivo o incluso para incuba cultivos de microorganismos. En este caso son mejores los baos que llevan un sistem de agitacin orbital.

gitador, mezclador

Agitador, mezclador: Los agitadores de tubos son muy comunes en el laboratorio. A la izquierda observamos un agitador tipo Vortex y a la derecha un agitador horizontal que se utiliza para mezclar de forma ms suave.

mpa de filtracin

Rampa de filtracin: Sistema unido a una bomba de vaco para la filtracin de lquidos.

F. Material ms utilizado
Placas de Petri vacias

Placas de Petri vacias: Las placas de Petri son recipientes para la preparacin de medios de cultivo slidos.

Placas de Petri con medio slido

Placas de Petri con medio slido

Tubos con medio lquido

Tubos con medio lquido

Tubos con medio slido

Tubos con medio slido (agar inclinado)

Mechero Bunsen

Mechero Bunsen

Pipetas de vidrio, plstico y pipeteador manual

Pipetas de vidrio, de plstico y pipeteadores. En la foto podemos observar un pipetador automtico (a la izquierda) y uno manual (verde) que se utilizan para llenar y vaciar las pipetas de vidrio.

Pipetas automticas y puntas de pipeta

Pipetas automticas (micropipetas) y puntas de pipeta. Las pipetas automticas se utilizan para pipetear pequeas cantidades de lquidos. Se utilizan con puntas donde se recoge el lquido que son de distinto tamao y color segn la micropipeta. Normalmente se fabrican en cuatro tamaos: de 0,5-2m; de 2-20 m; de 20-200 m y de 200-1000 m. Las puntas son desechables, de plstico, y se colocan en cajas que pueden esterilizarse en autoclave o con luz ultravioleta.

Asa de siembra

Asas de siembra: para la siembra de microorganismos se utilian asas metlicas que se esterilizan a la llama. Las asas en punta se utilizan para la siembra por picadura.

Asa de Drigalski o varilla de vidrio acodada

Asa de Drigalski o varilla de vidrio acodada: Estas asas se utilizan para la extensin de microorganismos sobre la superficie de un medio de cultivo en placa Petri. Se esterilizan sumegindolas en alcohol que luego se quema a la llama.

Jarra de anaerobios

Jarra de anaerobios: Jarra adecuada para conseguir una atmsfera libre de oxgeno para el cultivo de microorganismos anaerobios.

Portas y cubres

Portas y cubres para las observaciones al microoscopio.

Vasos de precipitados, matraces erlenmeyer, matraces aforados

Vasos de precipitados, matraces erlenmeyer, matraces aforados

Cuchara, esptula

Cucharas y esptulas: Se utilizan para pesar muestras o medios de cultivo. Si es necesario se esterlizan envueltos en papel de aluminio en autoclave o estufa.

G. Precauciones Bsicas en el Laboratorio de Microbiologa

Los productos infecciosos o txicos son siempre potencialmente patgenos y deben tratarse con la debida responsabilidad y cuidado. El uso inadecuado de tales materiales en el laboratorio puede ser peligroso, no slo para la persona que comete la falta sino tambin para otras que trabajen en su proximidad o aun alejadas, en los casos en que los mecanismos de difusin, tales como las conducciones de aire, pueden diseminar los microorganismos patgenos o sus toxinas. Es evidente que el anlisis de los alimentos para poner de manifiesto microorganismos patgenos o sus toxinas lleva consigo tales riesgos de contaminacin, tanto a partir de los propios alimentos como de los cultivos y de los concentrados txicos de ellos derivados. La experiencia indica que tales riesgos se reducen al mnimo con la comprensin inteligente de los peligros potenciales y con la aplicacin de prcticas de laboratorio correctas. La mejor proteccin frente a los riesgos o peligros que lleva consigo el trabajo en un laboratorio microbiolgico es ejercitar el sentido comn en la prctica de Buenas Prcticas de Laboratorio. La lista de reglas que damos a continuacin comprende una serie de faltas o defectos que se sabe han sido la causa de infeccin del personal de laboratorio. 1. No comer, no beber ni fumar en el laboratorio 2. Llevar siempre bata de laboratorio. 3. Las mesas de trabajo deben tener superficie lisas que puedan ser limpiadas y desinfectadas con facilidad. Adquirir el hbito de mantener las manos alejadas de la boca, de la nariz, de los ojos y de la cara.. 4. Cubrir las zonas de trabajo de la mesa con papel absorbente, si es posible recubierto de polietileno por una de sus superficies (la que va a contactar con la mesa), siempre que exista el riesgo de que pueda derramarse material peligroso.

5. No pipetear con la boca sustancias infecciosas o txicas. Poner tapones de algodn en la parte superior de las pipetas, antes de su esterilizacin. 6. Introducir las pipetas usadas inmediatamente en un desinfectante. Pasar las pipetas desinfectadas a un recipiente parcialmente lleno de agua jabonosa y esterilizar en autoclave; llevar guantes impermeables para realizar estas operaciones. 7. Colocar todo el material contaminado en un recipiente adecuado para esterilizarlo en autoclave. No dejar olvidado este recipiente. 8. En caso de que se derrame material infeccioso, cubrir inmediatamente la zona con un desinfectante adecuado. Si este material contiene toxinas botulnicas, cubrir el rea con una solucin saturada de carbonato sdico. 9. No humedecer nunca las etiquetas con la lengua. Puede evitarse utilizando etiquetas que se adhieran por presin. 10. Despus de cada fase de trabajo, humedecer la mesa con un desinfectante y lavarse las manos. 11. Utilizar nicamente jeringas hipodrmicas en las que la aguja se adapte de modo adecuado para evitar la salida de producto. 12. Los cultivos lquidos de microorganismos muy infecciosos precisan cuidado especial, ya que todo lo que mueva la superficie del lquido producir aerosoles. Los homogeneizadores elctricos producen potentes aerosoles.

Material bsico de laboratorio

Nesta pxina relacinanse algns dos materiais mis utilizados no laboratorio. importante coecer os termos cos que temos que nos referir para indicar este ou aquel utensilio, instrumento, reactivo, etc. A capacidade para seguir as indicacins do profesor ou do responsable do laboratorio, para realizar un ensaio indicado nun protocolo ou PNT (Plan Normalizado de Traballo) e, en definitiva, para poder desenvolver o traballo con seguridade efectividade, dependen do coecemento da terminoloxa tcnica apropiada. Nos laboratorios emprgase unha amplia variedade de instrumentos ou aparellos que, no seu conxunto, chmanse material de laboratorio. No laboratorio de Microbioloxa o material utilizado a coto , entrouto, o seguinte: Asas de sementeira dun s uso

Asa de sementeira curva de aceiro

Asa de sementeira recta de aceiro

Asa de Drigalsky reutilizables (vidro e aceiro) e dun s uso.

Mecheiro de alcol e/ou mecheiro bunsen

Placas Petri

Cristalizador

Vaso de precipitados

Matraz aforado

Matraz Erlenmeyer

Matraz Kitasato

Frascos de vidro autoclavables

Frascos de vidro (topacio e transparente) con tapn roscado precintable.

Frascos de viro (topacio e transparente) con tapn contapingas.

Tubos de ensayo (16cm x 15mm)

Tamn se usan outros tamaos en funcin do ensaio,or exemplo, para o cultivo de organismos anaerobios usamos tubos de 20cm x 25mm

Serotaps (14-16mm)
Cando o calibre dos tubos non axeitado para os serotaps empregamos tapns feitos con gasa e algodn

Tubos de vidro (10cm x 15mm) con tapn roscado

Equipo de vidro para filtracin

Embudo de filtracin

Probetas

Pipetas graduadas

Micropipetas

Racks autoclavables de puntas para micropipetas

Gradillas para tubos

OPERACIONES SEGURAS EN LOS LABORATORIOS DONDE SE MANIPULAN AGENTES BIOLGICOS Los agentes biolgicos constituyen un factor de riesgo laboral por su capacidad de desencadenar enfermedades, tanto profesionales como del trabajo. Con el fin de proteger la salud de los trabajadores frente a los riesgos que se derivan de la exposicin a dichos agentes durante el desarrollo de sus actividades, se public el Real Decreto 664/1997, de 12 de mayo, dentro del marco normativo de la Ley 31/1995, de 8 de noviembre de Prevencin de Riesgos Laborales. 4.1 Definicin y clasificacin de agentes biolgicos Segn el mencionado Real Decreto 664/1997, los agentes biolgicos se definen como: microorganismos, con inclusin de los genticamente modificados, cultivos celulares y endoparsitos humanos, susceptibles de originar cualquier tipo de infeccin, alergia o toxicidad. A su vez, se entiende como microorganismo, toda entidad microbiolgica, celular o no, capaz de reproducirse o de transferir material gentico. Se consideran cuatro tipos bsicos: bacterias, hongos, virus y parsitos (protozoos, helmintos, etc.). Por su parte, cultivo celular es el resultado del crecimiento in vitro de clulas obtenidas de organismos multicelulares. En funcin del riesgo de infeccin, el Real Decreto 664/1997 clasifica los agentes biolgicos del siguiente modo: Agente biolgico del grupo 1: Aquel que resulta poco probable que cause una enfermedad en el ser humano. Agente biolgico del grupo 2: Aquel que puede causar una enfermedad en el ser humano y puede suponer un peligro para los trabajadores, siendo poco probable que se propague a la colectividad y existiendo generalmente profilaxis o tratamiento eficaz. Agente biolgico del grupo 3: Aquel que puede causar una enfermedad grave en el ser humano y presenta un serio peligro para los trabajadores, con riesgo de que se propague a la colectividad y existiendo generalmente una profilaxis o tratamiento eficaz. Agente biolgico del grupo 4: Aquel que causando una enfermedad grave en el ser humano, supone un serio peligro para los trabajadores, con muchas posibilidades de que se propague a la colectividad y sin que exista generalmente una profilaxis o tratamiento eficaz. Segn esta clasificacin, el anexo II del Real Decreto en cuestin presenta una lista de agentes biolgicos, de los grupos 2, 3 y 4, ordenados segn los cuatro tipos antes citados, es decir: bacterias, hongos, virus y parsitos. 4.2 Vas de transmisin Las principales vas de entrada en el organismo de los diferentes agentes biolgicos son: Inhalatoria: Es la de mayor capacidad infectiva. Los agentes biolgicos susceptibles de transmitirse por esta va se encuentran habitualmente en forma de aerosoles producidos por

centrifugacin de muestras o agitacin de tubos y por aspiracin de secreciones (tos, estornudos, etc.). Digestiva: La transmisin por esta va tiene lugar como consecuencia de la prctica de malos hbitos de trabajo, como pipetear con la boca o de actuaciones inadecuadas como beber, comer y fumar en el lugar de trabajo. Parenteral, piel y mucosas: Esta va de transmisin est propiciada por pinchazos, mordeduras, cortes, erosiones, salpicaduras, etc. 4.3 Especificaciones de los lugares de trabajo en funcin de los agentes biolgicos manipulados Antes de comenzar cualquier actividad relacionada con la manipulacin de agentes biolgicos debe realizarse un inventario, a fin de identificar los agentes utilizados, clasificarlos de acuerdo con el criterio reseado en la lista anteriormente citada y establecer las medidas preventivas a tener en cuenta en funcin del nivel de contencin requerido, lo que se indicar oportunamente. Los medios de contencin biolgica de los laboratorios se orientarn en funcin de los cuatro grupos de riesgo citados anteriormente, es decir: Nivel de contencin biolgica 1, para microorganismos del grupo de riesgo 1. Nivel de contencin biolgica 2, para microorganismos del grupo de riesgo 2. Nivel de contencin biolgica 3, para microorganismos del grupo de riesgo 3. Nivel de contencin biolgica 4, para microorganismos del grupo de riesgo 4.

4.4 Manipulacin segura de agentes biolgicos La manipulacin de agentes biolgicos comporta unos riesgos, cuya prevencin debe responder a unas estrictas pautas de comportamiento. Desde la recepcin de las muestras, hasta la eliminacin de los residuos generados, todas las operaciones que se realizan en un laboratorio de estas caractersticas deben estar debidamente sistematizadas. Por tales motivos, presentamos a continuacin las directrices a tener en cuenta en estos lugares de trabajo, con el fin de que las actividades que en ellos se realizan habitualmente, transcurran en las mejores condiciones de seguridad posibles. 4.4.1 Recepcin de muestras Ante la recepcin de una muestra biolgica, cualquiera que sea su naturaleza y el tipo de laboratorio, debern tomarse las siguientes medidas preventivas: Recoger siempre la muestra con guantes de ltex o de silicona Lavarse las manos tras la recogida de la muestra Si se sospecha que la muestra puede contener agentes infecciosos no esperados, utilizar barbijo o mascarilla y notificarlo inmediatamente al supervisor del laboratorio y al Servicio de Prevencin de Riesgos Laborales 4.4.2 Operaciones diversas de laboratorio Las medidas preventivas a tomar en la realizacin de cualquier operacin que se lleve a cabo en un laboratorio de biotecnologa o de tipo biolgico (cultivos, centrifugaciones, anlisis, etc.) son las siguientes: Precauciones generales relativas al local Establecimiento de normas de seguridad en el trabajo en cada laboratorio, acordes a sus caractersticas. Implicacin de todo el personal del laboratorio en el cumplimiento de las normas de seguridad que se dictaminen. Acceso limitado al laboratorio, permitiendo la entrada nicamente al personal autorizado.

 Sealizacin de riesgo biolgico en todas las reas de los laboratorios catalogados de nivel de contencin 2 en adelante. Limpieza y desinfeccin diaria de todas las superficies de trabajo, as como siempre que se produzca un derrame. Mantenimiento del laboratorio limpio y ordenado evitando utilizar los pasillos como almacn. Siempre debe quedar un espacio libre no inferior a 120 cm para poder evacuar el local en caso de emergencia. Precauciones durante el desarrollo del trabajo Evitar el empleo de libros y material de escritorio en el rea de trabajo, ya que el papel contaminado es difcil de esterilizar. Est rigurosamente prohibido pipetear con la boca. El pipeteo se llevar a cabo con dispositivos especialmente diseados al efecto, debiendo entrenarse adecuadamente al personal para su correcto uso. Debe limitarse el uso de agujas hipodrmicas y jeringas, debiendo utilizarse nicamente las unidades ya montadas. No debe volver a ponerse la capucha a las agujas y stas no deben ser dobladas ni separadas de la jeringa. Las agujas y jeringas usadas, as como los bistures, deben desecharse nicamente en contenedores especiales diseados para este propsito. Cuando se centrifugue material biolgico potencialmente infeccioso deben utilizarse tubos cerrados. La centrfuga deber disponer de rotores o cestillos de seguridad que eviten la formacin de aerosoles. La rotura accidental de un tubo y su vertido en la cubeta representa una incidencia importante que debe ser comunicada inmediatamente al responsable del laboratorio y al Servicio de Prevencin de Riesgos Laborales, procediendo inmediatamente a la desinfeccin segura del equipo. No deben utilizarse centrfugas que no dispongan de sistema de cierre de seguridad, ni manipular tales equipos de forma que puedan abrirse mientras estn en funcionamiento y formar aerosoles. Si el laboratorio dispone de ultracentrfugas, es fundamental llevar a cabo el equilibrado cuidadoso del rotor. Los derrames y accidentes, como cortes y pinchazos, deben ser informados inmediatamente al responsable del laboratorio y al Servicio de Prevencin de Riesgos Laborales, y hacerse constar por escrito. Reglas de higiene personal Cubrir heridas y lesiones con apsitos impermeables antes de comenzar el trabajo. Si las lesiones no pueden cubrirse adecuadamente, no exponerse hasta que curen. Retirar anillos y otras joyas. Evitar el contacto de la piel con materiales potencialmente infecciosos. Para ello, cuando se manipulen muestras que contengan posibles agentes patgenos deber usarse guantes de ltex o de silicona, que debern retirarse siempre antes de salir del rea de trabajo. Jams se abandonar el laboratorio con los guantes puestos ni se coger con ellos el telfono. Tras quitarse los guantes, se proceder al lavado de manos utilizando jabones antispticos. Se usarn gafas protectoras y mascarillas faciales si existe riesgo de salpicaduras o de formacin de aerosoles. No debern usarse lentes de contacto.

 No comer, beber o fumar ni aplicarse cosmticos en las reas de trabajo. Asimismo, queda prohibido guardar alimentos o bebidas en las citadas reas El personal con el cabello largo debe llevarlo recogido. 4.4.3 Transporte de material biolgico Se tendrn en cuenta las siguientes precauciones: El transporte de las muestras dentro o entre laboratorios se realizar de tal modo que, en caso de cada, no se produzcan salpicaduras. Se aconseja llevarlo a cabo en cajas hermticas o neveras porttiles. Estas cajas o neveras debern ser rgidas y resistentes a los golpes, contar con materiales absorbentes en su interior y de fcil desinfeccin. Se etiquetarn o identificarn de forma oportuna y no podrn ser utilizadas para otros fines. Bajo ningn concepto se transportarn muestras a mano. Cuando sea necesario transportar material biolgico que pueda presentar riesgo de infeccin, se recurrir a la utilizacin del llamado sistema bsico de embalaje que se compone de: Recipiente primario estanco, a prueba de filtraciones, etiquetado, que contiene la muestra. El recipiente debe envolverse en material absorbente. Recipiente secundario estanco, a prueba de filtraciones, que encierra y protege el recipiente primario. Recipiente externo de envo. Es un paquete que protege el recipiente secundario y su contenido de los elementos externos. 4.4.4 Almacenamiento de muestras biolgicas Las muestras biolgicas deben almacenarse en zonas de acceso restringido, con el fin de minimizar la posibilidad de contaminacin del personal o del ambiente. El almacenamiento en congeladores de nitrgeno lquido, debe realizarse utilizando viales que soporten las bajas temperaturas del medio sin romperse. En caso de rotura, debe vaciarse el recipiente, dejar que el nitrgeno lquido se evapore y proceder a su limpieza. Cuando se maneja el material almacenado en este tipo de congeladores, siempre se debern utilizar gafas o mascarillas de proteccin para evitar salpicaduras de nitrgeno lquido. 4.4.5 Tratamiento de los residuos generados por los laboratorios que manipulan agentes biolgicos Todos los desechos biolgicos tienen que ser descontaminados antes de su eliminacin, debiendo seguirse las normas sobre gestin de residuos de mbito nacional (Ley 10/1998, de 21 de abril, de Residuos), as como las de mbito autonmico (Decreto 240/1994, de 22 de noviembre, de la Generalitat Valenciana, por el que se aprueba el Reglamento Regulador de la Gestin de los Residuos Sanitarios; Orden de 14 de julio de 1997, de la Consellera de Medio Ambiente de la C.V., por la que se desarrolla el Decreto 240/1994; Ley 10/2000, de 12 de diciembre, sobre Residuos de la Comunidad Valenciana). Los residuos generados por los laboratorios que manipulan agentes biolgicos responden generalmente a los siguientes tipos: Residuos slidos biolgicos asimilables a urbanos. Residuos slidos biolgicos especiales. Residuos slidos procedentes de cultivos microbiolgicos no patgenos. Residuos biolgicos lquidos.

A continuacin se indica el tratamiento recomendado para los diferentes tipos de residuos indicados. Residuos biolgicos asimilables a urbanos: Habitualmente se trata de materiales slidos no cortantes ni punzantes, como papeles, guantes, plsticos, gasas, etc., contaminados con sangre y fluidos biolgicos.

Para la recogida de estos residuos se recomienda el uso de bolsas de 220 mg/cm2 de galga, en contenedores de basura especiales. Su eliminacin se efectuar como residuos asimilables a los urbanos. Residuos slidos biolgicos especiales: Tienen un potencial infeccioso superior a los residuos slidos urbanos. La gestin de estos residuos se realizar conforme a lo establecido por la Ley 10/1998, de 21 de abril y su normativa de desarrollo, as como segn lo dispuesto por las normas legales de mbito comunitario, citadas al comienzo de este epgrafe. En este tipo de residuos se incluyen materiales punzantes y cortantes como agujas, hojas de bistur, restos de vidrio roto, etc., que han estado en contacto con sangre y fluidos biolgicos o con material procedente de actividades microbiolgicas. Estos residuos especiales deben acumularse separadamente de todos los dems tipos, en envases exclusivos rgidos, impermeables e interiormente inaccesibles. Estos envases son de un solo uso y una vez cerrados no se pueden volver a abrir. Han de mantenerse intactos hasta su recogida, evitando presiones y golpes que puedan afectar su integridad durante su almacenamiento o transporte. Su eliminacin final debe realizarse por una entidad autorizada. Residuos slidos procedentes de cultivos microbiolgicos no patgenos: Estn constituidos por placas de Petri, tubos de ensayo, matraces, etc., que contienen medio slido de cultivo. Estos residuos se colocan en bolsas resistentes al autoclave para su esterilizacin con este medio. Una vez realizada la operacin, los residuos se recogen por el personal encargado de esta actividad. Residuos biolgicos lquidos: Se inactivan con leja de uso domstico (hipoclorito sdico al 10%) durante 30 minutos, pudiendo eliminarse a continuacin por el desage. Conviene precisar que el uso indiscriminado de leja puede provocar contaminacin ambiental. La disolucin de leja domstica aqu indicada es suficiente, no debindose utilizar disoluciones ms concentradas. 4.5 Elementos de proteccin colectiva Constituyen el mejor medio de proteccin frente a los riesgos que se derivan de la manipulacin de agentes biolgicos. Son las llamadas cabinas de seguridad biolgica (CSB), cuya descripcin se aborda seguidamente. Dichas cabinas son cmaras de circulacin forzada de aire que, proporcionan diferentes niveles de proteccin, en funcin de sus especificaciones y diseo. Se clasifican segn el nivel y tipo de proteccin. Antes de entrar en el estudio y descripcin de estos equipos conviene distinguir entre las campanas de extraccin de gases, las cabinas de flujo laminar y las cabinas de seguridad biolgica. Las campanas de gases (o vitrinas extractoras de gases) son recintos ventilados que capturan los humos y vapores procedentes de la manipulacin de productos qumicos en el laboratorio. Si bien constituyen elementos muy tiles en la contencin del riesgo qumico, no ofrecen proteccin alguna frente a riesgos biolgicos. Las cabinas de flujo laminar son recintos que disponen de un ventilador para forzar el paso del aire a travs de un filtro HEPA (High Efficiency Particulate Air) barriendo la superficie de trabajo. El flujo de aire puede ser vertical u horizontal. Estas cabinas ofrecen proteccin nicamente al material que se maneja en su interior, pero nunca al operador, por lo que no son recomendables para el trabajo en laboratorios de microbiologa. Son de gran utilidad en las llamadas zonas limpias. Las cabinas de seguridad biolgica son recintos ventilados diseados para limitar al mximo el riesgo del personal de laboratorio expuesto a agentes infecciosos. Su finalidad es reducir la probabilidad que tiene una partcula transportada por el aire, de escapar fuera de la cabina y contaminar as al trabajador y a su entorno. Algunas de ellas ofrecen adems, proteccin al material que se manipula en su interior. Las cabinas de seguridad biolgica son equipos de contencin muy efectivos para reducir el posible escape de contaminantes biolgicos, lo que consiguen mediante dos

sistemas: Las barreras de aire. Permiten que ste fluya en una sola direccin y a una velocidad constante creando una verdadera "cortina" que se conoce como flujo de aire laminar, es decir, sin turbulencias. Los filtros. Tienen como finalidad atrapar las partculas contenidas en este flujo de aire. Habitualmente se emplean los llamados HEPA, que retienen con una eficacia del 99,97% partculas de hasta 0,3 micras de dimetro. Dichas cabinas se dividen en tres categoras: clase I, clase II y clase III. Cabinas de clase I. Son cmaras cerradas con una abertura al frente para permitir el acceso de los brazos del trabajador. El aire penetra por este frontal, atraviesa la zona de trabajo y sale al exterior a travs de un filtro HEPA. La velocidad del flujo de aire es de unos 0,40 m/s. Son apropiadas para manipular agentes biolgicos de los grupos 1, 2 3. Estas cabinas no protegen de una posible contaminacin al material con que se trabaja. Cabinas de clase II. Se diferencian de las de clase I en que, adems de proteger al operario y a su entorno, protegen al producto frente a contaminaciones externas. La superficie de trabajo est barrida por aire limpio procedente de un filtro HEPA. La salida del aire se produce a travs de otro filtro HEPA. Son equipos vlidos para el manejo de agentes biolgicos de los grupos 1, 2 3. Cabinas de clase III. Son recintos hermticos en presin negativa, por lo que su interior est completamente aislado del entorno. Se opera en ellas por medio de unos guantes con trampa para introducir el producto. El aire entra a travs de un filtro HEPA y se expulsa al exterior a travs de dos filtros HEPA. Se recomiendan para el manejo de agentes de los grupos 1, 2, 3 4. Son las que ofrecen un mayor nivel de seguridad. Hasta el momento, no existe en Espaa legislacin alguna que regule los requisitos que deben cumplir las cabinas de seguridad biolgica. La prctica ms habitual consiste en exigir a los proveedores la declaracin CE de conformidad con la norma britnica BS 3928. A continuacin se resean algunas recomendaciones a tener en cuenta con estos equipos. 4.5.1 Instalacin de una cabina de seguridad biolgica Situarla lo ms lejos posible de las rejillas de aire acondicionado, campanas de gases, puertas y zonas de mucho trnsito de personas, que puedan crear perturbaciones en el flujo laminar. Las ventanas del laboratorio han de permanecer siempre cerradas. Debe existir al menos 0,3 m entre la salida de aire de la cabina y el techo del laboratorio. Se instalar sobre una superficie slida y nunca mvil. Si es posible, en un recinto cerrado o en una zona de acceso restringido. 4.5.2 Recomendaciones al comenzar el trabajo Poner en marcha la cabina durante unos 5 minutos, a fin de purgar los filtros y la zona protegida. Comprobar que el manmetro se estabiliza e indica la presin adecuada (vara con el modelo de cabina). Apagar la luz ultravioleta (si estuviera encendida) y encender la luz fluorescente. Limpiar la superficie de trabajo con un producto adecuado (por ejemplo, alcohol etlico al 70%). Utilizar batas de manga larga con bocamangas ajustadas y guantes de ltex o de silicona, para minimizar el desplazamiento de la flora bacteriana de la piel hacia el interior del rea de trabajo y proteger las manos y brazos del operador de toda contaminacin. Antes de empezar las actividades, situar el material preciso en la zona de trabajo, para evitar

la entrada y salida continua de material, durante el tiempo que dura la operacin. Antes de introducir el material en la cabina, proceder a su descontaminacin. 4.5.3 Recomendaciones durante el desarrollo del trabajo Se aconseja trabajar a unos 5 10 cm por encima de su superficie y alejado de los bordes. Evitar la obstruccin de las rejillas del aire con materiales o residuos. Una vez que haya comenzado el trabajo y sea imprescindible introducir nuevo material en su interior, se recomienda esperar 2 3 minutos antes de reiniciar la tarea. De este modo, se permite la estabilizacin del flujo de aire. Evitar las corrientes de aire que perturban la cortina de aire. El flujo laminar se altera fcilmente por las corrientes de aire ambientales provenientes de puertas o ventanas abiertas, movimientos de personas, sistema de ventilacin del laboratorio, etc. El movimiento de los brazos y manos en el interior de la cabina deber ser lento, con el fin de impedir la formacin de corrientes de aire que alteren el flujo laminar. No debe utilizarse el mechero Bunsen, cuya llama crea turbulencias en el flujo y adems puede daar el filtro HEPA. Si se produce un vertido accidental de material biolgico, se recoger de inmediato, descontaminando la superficie de trabajo y todo el material que en ese momento se encuentre dentro de la cabina. Nunca debe utilizarse una cabina cuando est sonando alguna de sus alarmas. 4.5.4 Recomendaciones al terminar el trabajo Vaciar la cabina por completo de cualquier material y limpiar su exterior. Limpiar y descontaminar con alcohol etlico al 70% o producto similar la superficie de trabajo. Dejar en marcha la cabina durante al menos 15 minutos. Conectar, si fuera necesario, la luz ultravioleta (UV). Conviene tener presente que la luz UV tiene poco poder de penetracin por lo que su capacidad descontaminante es muy limitada. 4.5.5 Limpieza y desinfeccin de las cabinas de seguridad biolgica La limpieza tiene por objeto eliminar la suciedad adherida a las superficies. Al limpiar, se elimina tambin la materia orgnica que sirve de soporte a los microorganismos, contribuyendo de forma eficaz a la posterior descontaminacin. Se llevar a cabo una desinfeccin completa en los siguientes casos: Si se ha producido un vertido considerable Antes de cualquier reparacin Antes de iniciar las revisiones peridicas Siempre que se cambie el programa de trabajo Cuando se sustituyan los filtros HEPA Al cambiarla de lugar, incluso dentro del mismo laboratorio Se realizar mediante el desinfectante que recomiende el fabricante y en las condiciones indicadas por ste. Es conveniente levantar la superficie de trabajo, limpiando y descontaminando por debajo de ella, una vez a la semana. Nunca se debe utilizar la cabina como almacn transitorio de equipos o materiales de laboratorio. Esta mala prctica conduce innecesariamente a la acumulacin de polvo. No introducir en la cabina materiales que emitan partculas con facilidad, como algodn, papel, madera y cartn. 4.5.6 Mantenimiento de las cabinas de seguridad biolgica

 Limpiar la superficie de trabajo y el resto del interior de la cabina con periodicidad semanal. Comprobar con frecuencia semanal la lectura del manmetro. Limpiar mensualmente todas las superficies exteriores con un pao hmedo, a fin de eliminar el polvo acumulado. Revisar con periodicidad mensual el estado de las vlvulas interiores con que vaya equipada. Proceder a su certificacin por una entidad cualificada, una vez al ao. En cualquier caso, seguir las instrucciones del fabricante que deben figurar en el manual correspondiente. Ms informacin en: REAL DECRETO 664/1997, de 12 de mayo, proteccin de los trabajadores contra los riesgos
relacionados con la exposicin a agentes biolgicos durante el trabajo. BOE nm. 124 de 24 de mayo. (versin para imprimir aqu). Seguridad en el laboratorio (Servicio Integrado de Prevencin de Riesgos Laborales. Universidad politcnica de Valencia) (versin para imprimir, incluyendo todo el texto anterior, aqu).

Bioseguridad en los laboratorios de Microbiologa y Biomedicina. Prcticas de seguridad standard en el laboratorio de microbiologa.