Hematopoieza

Hematopoieza este procesul: care asigur formarea tuturor elementelor

figurate din sngele periferic i rennoirea (nlocuirea) lor permanent (echilibru numeric); localizat n organele hematopoietice (la adult: maduva osos roie, hematogen); realizat prin procese celulare: proliferare i difereniere autontreinut i supus unor mecanisme de reglare i control

Hematopoieza prenatal localizare, etape

I. mezoblastic (mezenchimal sau prehepatic):
L I-III; insule sanguine n peretele sacului vitelin si regiunea aort/gonad/mezonefros din hemangioblast cel. progenitoare a cel. endoteliale i cel. sangvine eritroblati primitivi nucleai cu Hb Gower (22)

Hematopoieza prenatal localizare, etape

II.

hepatosplenic:
L II-IX ficat i splin L III-VI apar granulocitele L V apar limfocitele (nu i limfocite T) L III-VI: Hb F (22)

Hematopoieza prenatal localizare, etape

III. mieloid:
debut L III-IV principal final a perioadei gestaie: sediul principal al hematopoiezei la natere: unic sediu al hematopoiezei Hb A (22); la un an: Hb F ~ 2%; Hb A ~ 98%.

Hematopoieza postnatal
Localizare: mduva roie hematogen (MRH) MRH la copil: oasele late, epifizele i diafizele oaselor lungi; calcaneu Adult: coaste, stern, coxale, vertebre, diploea cranian, epifizele oaselor lungi Focare ectopice, chiar extramedulare - n condiii patologice

Ft Activitate hematopoiectic Ficat i splin Sac vitelin

Adult

Oasele late

Oasele lungi

Luni

Natere

Ani

Histologia mduvei osoase

MRH alctuit din:
endost (osteoblaste, osteoclaste) reea 3D de celule reticulare i fibre de reticulin cordoane hematopoietice capilare sinusoide adipocite albe, macrofage
Mduv roie B trabecul osos; E endost; S sinusoide; H insule hematopoietice

Histologia mduvei osoase

Mduva osoas galben: n principal adipocite albe, rare insule hematopoietice

Mduv galben

Funciile mduvei osoase

MO hematopoietic:
formarea i eliberarea elementelor figurate sangvine ndeprtarea din circulaie (fagocitoz i degradare) a bacteriilor i a eritrocitelor sau leucocitelor anormale / senescente producerea de anticorpi (de ctre plasmocite) producerea de precursori ai cel. dendritice, osteoclastelor, mastocitelor, unor cel. endoteliale, fibroblaste

Celule stem
1. Se pot diferenia n mai multe tipuri celulare 2. Au capacitatea de autontreinere (self-renewal) 3. Pot reconstitui un esut funcional in vivo.

Tipuri celule stem (CS)

Ovocit fertilizat

CS totipotente
pot da natere unui organism
Cel. stem totipotente

CS pluripotente
dau natere mai multor tipuri de esuturi
Blastocist cu celule stem embrionare

celule stem (CS) somatice pluripotente

CS multipotente
dau natere mai multor tipuri celulare din acelai esut/organ

Celule stem embrionare (CSE) izolate CS hematopoietice neurale mezenchimale

CSE cultivate in vitro cel. sangvine neuroni cel. conjunctive

Tipuri de celule stem

Celule stem embrionare
Derivate din embrioni n staiul de blastocist (z. 7) Se multiplic indefinit n cultur Se pot diferenia n celule derivate din toate cele trei straturi embrionare

Celule stem adulte (somatice)

Fac parte din esuturile/organele post-natale Capacitate de difereniere limitat la tipurile celulare specifice esutului/organului respectiv Tipuri: hematopoietice, mezenchimale, neurale, musculare, hepatice, etc.

Celule stem embrionare n cultur

Celulele stem hematopoietice

Studiate intens n modele experimentale animale (oareci)
Concepte de baz (multipoten, origine clonal)

Relativ uor accesibile

Adult mduv osoas hematopoietic, snge periferic Perinatal snge din cordonul ombilical

Teste funcionale
in vitro teste clonogenice (formarea de colonii) in vivo modele murine, himere om-oareci SCID

Model experimental pentru studiul hematopoiezei

animal donator
XX

animalul primitor supravieuiete

ablaie medular
celule ale mduvei hematogene

XY

animalele lotului control mor

XY

Celulele stem

CFU (Colony Forming Unit) celul capabil s formeze in vivo sau in vitro o colonie de celule de un anumit tip

Radiation Research 14, 213-222 (1961)

Cultur in vitro pe medii semisolide (metilceluloz)

Celule CD34+
CFU-GM BFU-E CFU-Mix

Celulele stem hematopoietice

Se autontrein Produc celule fiice cu caractere identice

Diviziune asimetric

Diviziune simetric

Angajarea pe linii de difereniere celular

- Difereniere ireversibil - Genereaz un repertoriu definit i limitat de celule mature

Progenitor limfoid Limfocite B, T Granulocite, monocite Eritrocite, megakariocite

Progenitor mieloid

Difereniere terminal

Precursor mieloid

Granulocite

Precursor eritroid

Eritrocite

Celulele stem hematopoietice

Se difereniaz sub aciunea unor stimuli specifici Rspund la mecanisme de control complexe O celul stem poate sta la originea tuturor liniilor hematopoietice Au capacitate migratorie Morfologie asemntoare cu a limfocitului i/sau monocitului Pot coloniza: maduva osoas gras, splina, ficatul

Celulele stem hematopoietice

Markeri de suprafa
Proteine membranare exprimate n anumite stadii de difereniere Folosii n caracterizarea, enumerarea i izolarea CS hematopoietice prin imunocitochimie, citometrie n flux CS hematopoietice exprim CD34, c-Kit, Flt-3, AC133

Blood 112:3543 (2008)

Celulele stem hematopoietice

Celule stem multipotente CFU (Colony Forming Unit) - LM (Lymphoid Myeloid) capacitate de rennoire extensiv i difereniere ctre toate liniile durata de via lung, diviziuni rare

Celulele stem hematopoietice

Celule stem multipotente CFU-M, CFU-GEMM Celulele limfopoietice capacitate de rennoire i difereniere ctre liniile unipoteniale

Celulele stem hematopoietice

Celule stem bipotente (cel. progenitoare) bi CFU-GM capacitate de reinnoire si diferentiere catre doua din liniile unipotentiale

Celulele stem hematopoietice

Celule progenitoare (stem unipotente) uni BFU-E, CFU-E, CFU-N, CFU-M, CFU-Eo, CFU-Baso, CFU-Mega capacitate de rennoire limitat difereniere ctre o singura linie hematopoietica activitate mitotic intens

Celulele stem. Mecanisme de control al hematopoiezei

Se adreseaz celulelor stem i progenitoare Asigur meninerea echilibrului numeric ntre diferitele populaii celulare sangvine Adaptarea compartimentului hematopoietic la diferite circumstane (fiziologice i patologice) Mecanisme extrinseci i intrinseci

Mecanisme extrinseci: nia hematopoietic

Mediul imediat nconjurtor al celulelor stem Contacte ntre celule stem i celulele endostului (osteoblaste fuziforme) celule stromale matrice extracelular (colagen, fibronectin)

Genes & Dev. 2007 21:3044

Mecanisme extrinseci: nia hematopoietic

Semnale mediate de molecule de adeziune celular (ICAM, VCAM, N-caderin) i receptori ai celulelor stem (VLA-4, CD34, CD31, CD50) Semnale distribuite asimetric Factori de cretere exprimai pe suprafaa celulelor niei sau ataai moleculelor MEC/glicocalixului interacioneaz cu receptori specifici ai celulelor stem

SNO osteoblast fuziform, sKitL ligand kit solubil, FGF4 factorul de cretere al fibroblastelor 4, SDF-1 Factor derivat din celulele stromale (Stromal cells-derived factor), MMP-9 matrix metaloproteinaza 9, CSH celul stem hematopoietic Adaptat dup J. Clin. Invest. 116:1195

Mecanisme extrinseci: factori umorali

Citokine: Funcii pleiotropice (inhib diferenierea celular, previn apoptoza cel. progenitoare, stimuleaz proliferarea celular) Stimuleaz sau inhib hematopoieza Factori de cretere: CSF (colony stimulating factors) definii de capacitatea de a stimula creterea coloniilor hematopoietice n principal glicoproteine Receptori cu specificitate nalt pe celulele hematopoietice Activitate biologic ridicat

Mecanisme extrinseci: factori umorali

citokine i factori de cretere (growth factors)
Nume Stem cell factor Interleukina 3 Interleukina 7 GM-CSF G-CSF M-CSF EPO TPO Aciune Hematopoiez Hematopoiez Hematopoiez mitoza CFU-GM mitoza CFU-G mitoza CFU-M diferenierea CFU-E; mitoza BFU-E diferenierea CFU-meg Surse Celule stromale Limfocite B i T activate Celule stromale Limf. T; Endoteliu Macrofage; Endoteliu Macrofage; Endoteliu Rinichi Ficat

CSF Factor de stimulare al producerii de colonii (Colony stimulating factor), EPO eritropoietin, TPO - trombopoietin

Factori umorali

N Engl J Med 2006;354:2034

Eritropoietina
Produs n rinichi, hormon glicoproteic Accelereaz angajarea celulelor stem pe linia eritropoietic Aciuni: Stimuleaz creterea coloniilor eritroide Inhib apoptoza precursorilor liniei roii Induce eliberarea reticulocitelor din mduva osoas Stimuleaz producerea de globin n cel. precursoare

Mecanismul de aciune al eritropoietinei

De zec hi

libr u

Nivel normal de oxigen

De zec hi libr u

Eliberarea EPO de ctre rinichi stimulat de: 1. 2. 3. Hipoxie prin scderea nr. eritrocite Scderea disponibilitii de O2 Creterea nevoilor tisulare de O2

Crete capacitatea de transport O2 a sngelui

Scderea nivelului O2 n snge

Eritropoiez crescut -> creterea nr. eritrocite

EPO stimuleaz eritropoieza

Mecanisme intrinseci: factori de transcriere Proteine cu localizare nuclear Asigur sau suprim expresia unor seturi definite de gene

Cantor & Orkin Oncogene 2002

Celulele precursoare
nu se rennoiesc recognoscibile morfologic, ca membri ai unei singure linii hematopoietice total difereniate

Terminologie
blast (Gr. blastos, germen) stadiu imatur n dezvoltarea unei celule sau tip celular, nainte de apariia caracteristicilor definitive ale celulei; cit (Gr. kytos) celul (dup dobndirea caracteristicilor definitive ale celulei); pro (L. si Gr.) inainte meta (Gr. meta) dupa, dincolo de, peste eritro prefix pentru precursorii liniei rosii; mielo prefix pentru precursorii granulocitari; celule formate n spaiul medular hematopoietic; limfo prefix pentru precursorii limfocitari; mega (Gr. megas), mare cario (Gr. karyon) - nucleu, smbure megacario prefix pentru precursorii plachetelor; mono (Gr. monos, singur) prefix pentru monocite CFU Colony Forming Unit = Unitate formatoare de colonii

Criterii morfologice ale dezvoltrii celulelor sngelui

Mrimea celulei: celulele imature sunt mai mari Afinitatea tinctorial: celulele tinere sunt
bazofile, apoi, trecerea spre normocromie

Structura nucleului:
Configuraia cromatinei: celule tinere, cromatina mai puin condesat Dispariia nucleolului: semn de trecere de la un nucleolului stadiu imatur la forme apropiate de cea adult; Lobulaia nucleului: granulocitele dobndesc nucleului forma lobulat n cursul dezvoltrii; Pierderea nucleului: seria roie; nucleului

Prezena produilor de difereniere

Granule citoplasmatice pentru granulocite; Hemoglobina, pentru seria roie

Caractere generale eritropoiez

3 5 diviziuni celulare ntre stadiile de proeritroblast i eritroblast ortocromatofil Durata: aproximativ 7 zile Absena granulaiilor citoplasmatice

Proeritroblast
12-20m N rotund Nucleoli: 2 Cromatina fina Citoplasma bleu inchis N/C 8:1 Maduva: 1% Sange: 0%

Eritroblast bazofil
15-20 m N. rotund/oval Nucleoli: 2-5 Cromatina fina Citoplasma moderat bazofila Granule absente N/C 4:1 Maduva: 0-1% Sange: 0%

Eritroblast policromatofil
10-12m N. rotund Nucleoli: 0 Cromatina condensata Citoplasma bleu gri N/C 4:1 Maduva: 10-20% Sange: 0%

Eritroblast ortocromatofil
8-10 m N. rotund Nucleoli: 0 Cromatina condensata complet Citoplasma rozportocaliu N/C 0,5:1 Maduva: 5-10% Sange: 0%

Reticulocit
8-8,5 m N. NU Nucleoli NU Cromatina NU Citoplasma roz-portocaliu N/C NU Maduva: 1%% Sange: 0,5-2% Col. supravitale (albastru cresil briliant)

Eritrocit
7-8 m N. NU Nucleoli NU Cromatina NU Citoplasma roz-portocaliu N/C NU Maduva: NU Sange: tip celular predominant

Seria eritrocitara