Biorremediacion de Un Suelo Contaminado Con Hidrocarburos Empleando Acidos Humicos y Lombrices

LICENCIATURA: CATEDRTICO: Seminario de investigacin
INGENIERA QUMICA PETROLERA. Bilogo: Vctor Villegas UNIVERSIDAD POPULAR DE LA CHONTALPA. MATERIA: TRABAJO: Biorremediacion de suelo contaminado
Biorremediacin de un Suelo Contaminado con Hidrocarburos, e mpleando cidos Hmicos y Lombrices (Eisenia andrei) Protocolo Tesis que presenta: Ramiro Snchez Sols
CATEDRTICO: Biol: Vctor Villegas CARRERA: Ing. Qumica Petrolera. Semestre: 6o Grupo: A Turno: Matutino.
H. Crdenas Tabasco. Diciembre de 2012

Alumno: Ramiro Snchez Sols. Villegas SEMESTRE 6 D. BIOL: Vctor
CONTENIDO
1. INTRODUCCIN........................................................................................................................ ................... 1 1.1. SUELO ................................................................................................................................................ ..... 1 1.1.1. Componentes del suelo . ............................................................................................................. 3 1.1.2. Suelo y su dinmica .................................................................................................................... 4 1.1.2.1 Humus...................................................................................................................................... .5 1.1.2.1.1. Tipos de humus .............................................................................................................. 6 1.1.2.2. Composicin del Humus (Substancias Hmicas) .............................................................. 6 1.1.2.3. Substancias Hmicas y sus propiedades............................................................................ 8 1.1.2.3.1. Propiedades detergentes de las Substancias Hmicas ......................................... 12 1.1.2.4. Humificacin de HTPs ......................................................................................................... 13 1.2. CONTAMINACIN DE SUELOS CON HIDROCARBUROS .......................................................................... 13 1.2.1. Petrleo y produccin................................................................................................................ 14 1.2.2. Composicin del Petrleo ......................................................................................................... 14 1.2.2.1. Complejos Altamente Recalcitrantes (Asfaltenos) ........................................................... 15 Alumno: Ramiro Snchez Sols. Villegas SEMESTRE 6 D. BIOL: Vctor
1.2.3. Transporte de los HTPs en el ambiente ................................................................................ 16 1.2.4. Migracin de la mezcla de HTPs ............................................................................................ 17 1.2.5. Toxicidad de las fracciones recalcitrantes del petrleo........................................................ 19 1.2.5.1. Hidrocarburos Alifticos (HAs) ........................................................................................... 19 1.2.5.2. Hidrocarburos Policclicos Aromticos (HPAs)................................................................ 19 1.2.5.3. Compuestos heterocclicos con azufre o nitrgeno ......................................................... 19 1.2.5.4. Efecto de los HTPs en la salud .......................................................................................... 20 1.2.6. Biodegradacin de los Hidrocarburos Totales del Petrleo ................................................ 21 1.2.6.1. Microorganismos degradadores de hidrocarburos .......................................................... 21
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1.3. TECNOLOG AS DE REMEDIACIN DE SUELOS CONTAMINADOS (IN-SITU, EX-SITU) ............................... 23 1.3.1. Lavado de suelo ......................................................................................................................... 24 1.3.1.1. Surfactantes ........................................................................................................................... 24 1.3.2. Tecnologas de biorremediacin de suelos contaminados .................................................. 26 1.3.2.1. Bioestimulacin ..................................................................................................................... 27 1.3.2.2. Residuos agroindustriales ................................................................................................... 28 1.3.2.3. Vermicomposteo ................................................................................................................... 29 1.3.2.3.1. Las lombrices ............................................................................................................... 30 1.3.2.3.2. Las excretas de lombriz .............................................................................................. 30 1.3.2.3.3. Agregados de excretas ............................................................................................... 30 1.3.2.3.4. Canales o galeras formados por la lombriz ............................................................ 31 1.3.2.3.5. Enzimas de la lombriz ................................................................................................. 31 1.3.2.3.6. Efecto de fuentes orgnicas e inorgnicas de N sobre la poblacin de lombrices del suelo......................................................................................................................................... .... 33 1.3.2.3.7 Remocin de HTPs empleando lombrices ............................................................... 33 1.3.3. Factores que afectan la biorremocin de hidrocarburos en el suelo ................................. 34 1.3.3.1. Relacin Carbono Nitrgeno (C/N) Alumno: Ramiro Snchez Sols. Villegas SEMESTRE 6 D. BIOL: Vctor
.................................................................................... 35 2. JUSTIFICACIN ......................................................................................................................................... 38 3. HIPTESIS ................................................................................................................................................ .. 38 4. OBJETIVOS ................................................................................................................................................ . 39 4.1. OBJETIVO GENERAL .............................................................................................................................. 39 4.2. OBJETIVOS ESPECFICOS ...................................................................................................................... 39 5. MATERIALES Y MTODOS ..................................................................................................................... 40
VII 5.1. SUELO ................................................................................................................................................ ... 40 5.2. EXTRACTO DE LEONARDITA ................................................................................................................. 41 5.3. LOMBRIZ ................................................................................................................................................ 41 5.4. VERMICOMPOSTA .................................................................................................................................. 40 5.5. BAGACILLO DE CAA ............................................................................................................................. 40 5.6. ESTRATEGIA EXPERIMENTAL ................................................................................................................ 42 5.6.1. Caracterizacin del suelo contaminado, bagacillo de caa, extracto de leonardita y SEMESTRE 6 D. BIOL: Vctor
vermicomposta.................................................................................................................... ......................... 43 5.6.2. Seleccin de la fuente de nitrgeno y relacin C/N .............................................................. 44 5.6.3. Fermentacin slida del suelo contaminado ......................................................................... 45 5.6.3.1. Dispositivo experimental ...................................................................................................... 45 5.6.3.2. Diseo experimental factorial general ............................................................................... 46 5.6.3.3. Acondicionamiento de los tratamientos ............................................................................. 47 5.6.4. Lavado de suelo con substancias hmicas ........................................................................... 48 5.6.4.1. Diseo experimental factorial completo............................................................................. 48 5.6.5. Fermentacin slida del suelo lavado .................................................................................... 49 5.6.5.1. Acondicionamiento del suelo lavado .................................................................................. 49 5.6.6. Lixiviado.................................................................................................................................... ... 49 5.6.7. Anlisis estadstico .................................................................................................................... 49
6. CONCLUSIONES ...................................................................................................................................... 133 7. BIBLIOGRAFA .......................................................................................................................................... 135
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INDICE DE FIGURAS
Figura 1. Columna de suelo y la organizacin de sus diferentes horizontes Figura 2. Componentes principales de los agregados del suelo Figura 3. Propiedades fisicoqumicas de las substancias hmicas (SH), Figura 4. Fragmento estructural hipottico de las Substancias Hmicas del suelo Figura 5. Regeneracin de la capacidad oxido-reduccin de las quinonas Figura 6. Regiones susceptibles de fragmentacin y biodegradacin en los asfaltenos Figura 7. Migracin de los HTPs en el ambiente Figura 8. Estrategia experimental para la remocin de HTPs del suelo Figura 9. Dispositivo experimental para llevar a cabo la fermentacin slida del suelo Figura 10. Diseo Experimental Factorial General
1 2 7 11 11 16 18 42 45 46
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INDICE DE TABLAS
Tabla 1. Clasificacin general de los compuestos del petrleo Tabla 2. Facilidad de degradacin de HTPs y productos de su metabolismo Tabla 3. Tecnologas de remediacin Ex situ de acuerdo a la USEPA Tabla 4. Tecnologas de remediacin In situ de acuerdo a la USEPA Tabla 5. Tecnologas de Biorremediacin Ex situ e In situ, de acuerdo a la USEPA Tabla 6. Actividad enzimtica detectada en la flora microbiana intestinal de la lombriz Tabla 7. Efecto de diversos hidrocarburos sobre la lombriz Tabla 8. Factores limitantes en la remocin de hidrocarburos totales del petrleo Tabla 9. Determinaciones analticas aplicadas a los materiales empleados Tabla 10. Factores y niveles usados en el diseo factorial 33
14 21 23 24 27 32 34 35 43 48
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Tabla 26. Niveles de remocin de HTPs en funcin de la presencia de asfaltenos Tabla 27. Tipo y concentracin de hidrocarburos residuales, para el suelo lavado Tabla 28. Tipo y concentracin de hidrocarburos residuales, para el lixiviado
123 124 131
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NOTACIN
SHs AHs M.O.S. HPAs HTPs S EL BC VC CRA
Substancias hmicas cidos hmicos Materia Orgnica del Suelo Hidrocarburos Policclicos Aromticos Hidrocarburos Totales del Petrleo Suelo Extracto de Leonardita Bagacillo de Caa Vermicomposta Capacidad de Retencin de Agua
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RESUMEN
Las Interacciones fsico-qumicas y la estimulacin biolgica son la base de algunas tecnologas aplicadas actualmente a la remediacin de suelos contaminados. Se ha sugerido que el desarrollo de una tecnologa combina de estos dos principios aumentar la eficiencia de recuperacin de suelos contaminados. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de las lombrices de tierra (L) y los cidos hmicos (AH), en la biorremediacin de un suelo arcilloso muy contaminado con complejas mezclas de hidrocarburos totales del petrleo (HTP) intemperizados. Debido a la alta toxicidad de las sales minerales en las lombrices de tierra, fue usada vermicomposta (VC), como fuente de nitrgeno y de fsforo. Cuatro kg de suelo contaminado con 83000 mg HTP/kg de suelo (28.5% alifticos, 15% aromticos, 21.5% saturados y 35% asfaltenos) fueron bioestimulados con agua (60% de la capacidad de retencin de agua, CRA) y VC; Relacin C:N:P de 100:25:1. A continuacin, L y AH, as como el bagacillo de caa (BC), se incorporaron de acuerdo a un diseo factorial 3 2 2, de la siguiente manera: L, tres niveles: 0, 20, 40; BC, dos niveles: 0%, 6%, y AH, dos niveles: 0%, 1%. Por otra parte, cuatro kg de suelo contaminado con 83000 mg HTP/kg de suelo, fueron lavados con una solucin de cidos hmicos (3g / L), con una relacin 1:10 (suelo: solucin) obtenindose suelo contaminado con 50000 mg HTP/kg de suelo (35.7% de remocin de HTPs). Este suelo se bioestimul de acuerdo con el mejor tratamiento del suelo sin lavar (con BC, AH y 40 L). Los tratamientos se incubaron a temperatura ambiente (25 2C) y pH 7 0.5, durante 94 das, airendolos diariamente. Las muestras fueron analizadas peridicamente para HTP residuales, produccin de AH y crecimiento microbiano, como carbono de biomasa y unidades formadoras de colonias (UFC/g suelo). Segn el ANDEVA, las variables L, AH y BC tienen un efecto significativo en la remocin de HTP con una p(F) <0,05. El mayor porcentaje de remocin de HTP (64 2% en 94 das) se obtuvo con el tratamiento compuesto por BC, AH y 40 L. Este tratamiento removi el 35% de los asfaltenos, 85% de alifticos, 78% de aromticos y 73% saturados. En trminos generales, los porcentajes de eliminacin de HTP estuvieron en el rango de 64% a 28%, el ms bajo correspondi a una prueba control preparada con agua y VC. El crecimiento microbiano y la produccin de AH, se correlacionaron con la remocin de HTP. Estos resultados se pueden explicar desde dos puntos de vista: i) una mejor disponibilidad de todas las fracciones de hidrocarburos degradables, cuando se aadieron AH, ii) la presencia de una microflora (del BC y VC) con la capacidad de consumir hidrocarburos. El suelo lavado biotratado, tuvo una remocin de TPH de slo 472% en 94 das. Este tratamiento removi el 15.7% de los asfaltenos, 69.9% de alifticos, 64.3% aromticos y 52.6% saturados. Este resultado se puede explicar debido a la prdida de microorganismos hidrocarbonoclastas, despus de lavar el suelo.
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1. INTRODUCCIN
1.1. Suelo
El suelo es definido como el manto de roca erosionada que contiene materia orgnica, minerales y nutrientes capaces de soportar el crecimiento de plantas, mientras que la fertilidad del suelo, es atribuida a la actividad de los microorganismos.
El suelo se encuentra formado por capas denominadas horizontes. Estos horizontes van a variar tanto en su estructura como en su poblacin microbiana. Los horizontes se encuentran ordenados empezando por el "0" y luego por letras en orden alfabtico (Figura 1). El horizonte "0" es el formado por desechos animales y plantas, es el horizonte orgnico; los horizontes A y B son los principales depsitos de compuestos como xidos y salicilatos; en ellos se llevan a cabo los fenmenos de lixiviacin y deposito de materiales orgnicos e inorgnicos. El horizonte C se caracteriza por una baja actividad biolgica y contienen acumulaciones de carbonatos de Ca y Mg, es el ltimo horizonte y colinda con la roca madre. La actividad microbiana se da principalmente en los 15-20 cm superiores de la columna del suelo, despus de esta profundidad, el nmero as como la actividad microbiana disminuye (Sylvia, 1998)
Figura 1. Columna de suelo y la organizacin de sus diferentes horizontes.
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El suelo, posee caractersticas fsicas y qumicas como: textura, densidad, porosidad, estructura, pH, intercambio inico, humedad y nutrientes, que le confieren sus propiedades (Sylvia et al, 1999). La textura est dada principalmente por las proporciones de arcilla, limo y arena, que influyen en la densidad y porosidad de los suelos; los cuales son un factor importante en la ecologa de los microorganismos, debido a que determinan el rea superficial disponible para el crecimiento microbiano (Atlas-Bartha, 1998).
La composicin heterognea (slido, lquido, gaseoso) tanto a lo largo como a lo profundo del suelo, permite el crecimiento microbiano formando un hbitat complejo (Figura 2), en donde existe una gran competencia de los microorganismos por nutrientes, espacio y humedad. Los microorganismos que conforman el suelo son numerosos y diversos, los ms pequeos (bacterias, actinomicetos, levaduras y hongos) son denominados microflora (Sylvia, et al, 1999). De los microorganismos que forman la microflora, las bacterias son los ms abundantes (10 8), seguidos por actinomicetos (106-107) y hongos (104-106) (Sylvia, 1999).
Figura 2. Componentes principales de los agregados del suelo.
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1.1.1.
Componentes del suelo
Los componentes primarios del suelo son: 1) compuestos inorgnicos no disueltos, producidos por la meteorizacin y la descomposicin de las rocas superficiales; 2) los nutrientes solubles utilizados por las plantas; 3) distintos tipos de materia orgnica, viva o muerta y 4) gases y agua requeridos por las plantas y por los microorganismos. La naturaleza fsica del suelo est determinada por la textura. Los suelos con un porcentaje elevado de arcilla, tienen baja porosidad (30-45%) y capacidad de retencin de agua. Si el suelo tiene mayor contenido de arcilla que arena con la misma cantidad de limo, el suelo es cohesivo, teniendo una mayor capacidad de retencin de agua y por lo tanto velocidades de infiltracin y aireaciones bajas. Esto se debe a que los poros de mayor tamao son vaciados rpidamente y la cantidad de agua que queda en la matriz del suelo es pequea. En los suelos arcillosos, el agua es absorbida en los poros pequeos y la disminucin de su contenido es ms gradual. Por otro lado, la superficie neta negativa de las arcillas favorece la formacin de agregados que ocasionan el secuestramiento de nutrientes. Los agregados se forman por los enlaces inicos mediante catines polivalentes presentes en el suelo, entre arcillas y materia orgnica. Estos complejos favorecen una gran adsorcin de compuestos orgnicos hidrofbicos (Soderstrom, 2000). Las grandes partculas del suelo, como la arena y la grava, son en su mayor parte qumicamente inactivas; mientras que las pequeas partculas inorgnicas, como las arcillas, presentan actividad inica, y adems determinan en gran medida la capacidad de un suelo para almacenar agua. La parte orgnica del suelo est formada por restos vegetales y animales, junto a cantidades variables de materia orgnica amorfa llamada humus. Se forma a partir del proceso metablico de los microorganismos, al consumir compuestos orgnicos complejos que constituyen la materia viva. La fertilidad de un suelo est relacionada directamente con el contenido de materia orgnica; ya que mejora la estabilidad del suelo, aumentando su porosidad y capacidad de retencin de agua; lo que favorece el intercambio de gases y agua para los microorganismos. El humus adems, favorece la fijacin de nutrientes y los mantiene ms tiempo a disposicin de los vegetales y los microorganismos.
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La materia orgnica presenta una gran rea superficial con propiedades de intercambio inico, donde se lleva a cabo la adsorcin de compuestos orgnicos, lo cual puede limitar su biodisponibilidad. Las componentes del suelo determinan la zona donde los microorganismos estarn adheridos. El 60% de las bacterias se localizan en partculas recubiertas con materia orgnica; y solo se encuentran en el 0.02% de la superficie de partculas arenosas (Mihelcic, 1993). El componente liquido o solucin de
suelo, est formado por agua con varias sustancias minerales, oxgeno y dixido de carbono disueltos. A travs de esta solucin, los nutrientes son absorbidos por los microorganismos. Los principales gases contenidos en el suelo son oxgeno, nitrgeno y dixido de carbono. 1.1.2. Suelo y su dinmica
El suelo es un organismo vivo: un consorcio de clulas vivas en una matriz orgnico-mineral. Ni las clulas vivas, ni la composicin de esta matriz son constantes: ambas varan con el tiempo y el lugar.. De hecho, existen muchas y variadas interacciones entre el suelo, los microorganismos y las plantas, que influyen en gran medida sobre el crecimiento y el desarrollo de estas ltimas. La macrofauna conduce a la depredacin de los microbios, a la estructura del suelo y a la descomposicin de la materia orgnica. Por ejemplo, las lombrices de tierra afectan en gran medida a la estructura fsica del suelo: fomentan el crecimiento de las races y la ventilacin del suelo gracias a las galeras que fabrican en l, al tiempo que remueven la materia orgnica. El suelo es una matriz compleja donde interacta permanentemente el agua y el aire (Schwarzenbach et al., 2003) y por lo tanto su contaminacin puede propagarse directamente a las superficies, aguas subterrneas y aire (Fent, 2003). Cuando se sobrepasa la capacidad detoxificadora natural de la tierra, se alteran los ciclos biogeoqumicos y la calidad del suelo se ve seriamente afectada, debido a una disminucin de la micro y macrofauna autctona (Martn, 2004). La cual tiene la funcin de acelerar la descomposicin de la materia orgnica (mineralizacin que involucra la transformacin de compuestos orgnicos en inorgnicos) y su fijacin a estructuras complejas estables como las substancias hmicas
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(humificacin que es la sntesis y/o unin qumica y/o biolgica de compuestos de degradacin de residuos de origen vegetal y animal), que constituyen un 80% de la materia orgnica del suelo, y es denominada Humus (Frnd, 1994). 1.1.2.1. Humus En toda materia orgnica se deben presentar los procesos de mineralizacin (transformacin de compuestos orgnicos en inorgnicos) y humificacin (sntesis y/o unin qumica y/o biolgica de compuestos de degradacin de residuos de origen vegetal y animal), que conducen a la produccin de humus. Estos procesos son lentos, de varios meses a decenas de aos, en funcin del tipo de materia orgnica y los factores del medio ambiente (Perminova, 2005). El humus se encuentra en la capa superior del suelo. Es producto de transformaciones, descomposiciones y resntesis de molculas orgnicas, en las cuales no quedan vestigios microscpicos visibles de los tejidos o clulas originales. Su color es oscuro y est conformado
bsicamente por carbono, oxgeno, hidrgeno y nitrgeno, lo que contribuye a la agregacin del suelo (formacin de terrones). El humus favorece la accin microbiana y su alta capacidad de intercambio catinico le permite retener nutrientes (Tan, 2003). La composicin del humus depende en parte del tipo de suelo, ya que ste puede favorecer el desarrollo de las sustancias orgnicas. Tiende a favorecer la aireacin o, por el contrario, puede paralizarla, originando condiciones de anaerobiosis (por ejemplo en suelos hidromorfos o arcillosos). Tambin participan en su formacin la microflora, micro y mesofauna del terreno. El principal factor que determina la composicin del humus es el tipo de vegetacin existente, pues de ella deriva la materia prima cuyas sucesivas descomposiciones originan el humus. Tambin el clima resulta decisivo en este proceso, ya que la humedad y la temperatura influyen esencialmente sobre la composicin del humus y sobre los microorganismos que transforman la sustancia orgnica. Puede ocurrir que la oxidacin del producto bacteriano sea incompleta y los azcares se caramelizan y formen sustancias parecidas a las melaninas, de naturaleza cclica, que engrosan el grupo aromtico Alumno: Ramiro Snchez Sols. Villegas SEMESTRE 6 D. BIOL: Vctor
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de los precursores hmicos. Tambin se producen condensaciones entre los aminocidos y los cidos alcohlicos para generar cadenas alifticas que constituirn los terminales activos de las sustancias hmicas. (Perminova, 2005) Las paredes bacterianas pueden dar lugar, mediante un proceso de carbonizacin en ambientes reductores, a unas sustancias oscuras y poco activas que se conocen como huminas microbianas o huminas heredadas, ya que se sitan al margen del proceso general de humificacin. Los compuestos aromticos, por la accin de grupos de bacterias especficas se fragmentan y generan quinonas que son susceptibles de polimerizarse y generar ncleos aromticos, de masa molecular elevada, que son la base de todas las sustancias hmicas. Sobre estos ncleos aromticos se insertan la cadenas alifticas ya citadas, ricas en grupos carboxlicos, amnicos y alcohlicos, para generar los cidos flvicos, cidos hmicos y huminas de condensacin que son los componentes primordiales del humus (Tan, 2003). 1.1.2.1.1. Tipos de humus
Desde un punto de vista global (evolucin, morfologa, propiedades, unin a la fraccin mineral) el material orgnico se clasifica en tres tipos bsicos de humus (Tan, 2003): Mor. Materia orgnica muy poco transformada. Moder. Mayor transformacin de la materia orgnica (Flvicos y precursores). Mull. Materia orgnica evolucionada (cidos hmicos, coloracin del horizonte muy oscura). 1.1.2.2. Composicin del Humus (Substancias Hmicas) El humus suele fraccionarse en tres compuestos, siguiendo su extraccin del NaOH: humina, cido flvico y cido hmico (Figura 3). La humina es la fraccin que no contiene NaOH y que es susceptible de ser dispersada. El cido hmico, por su parte, es una fraccin de humus soluble en NaOH, que resulta insoluble cuando el pH es 2. El peso molecular del cido hmico vara de 10.000 a 100.000
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Daltones y est compuesto por anillos aromticos, compuestos cclicos de nitrgeno y cadenas peptdicas de estructura indeterminada. El cido hmico presenta una composicin general de 57% de carbono y 4% de nitrgeno. Los grupos funcionales del cido hmico son el COOH, el OH fenlico, el OH alcohlico y las cetonas. El cido flvico es soluble en NaOH y a un pH 2. Resulta ms pequeo que el cido hmico, con un peso molecular que va de 1.000 a 30.000 Daltones. No obstante, los procedimientos de extraccin slo recuperan de un 10 a un 20% de los cidos hmico y flvico que hay en el suelo. Durante la extraccin de los cidos fulvicos, podemos recuperar tambin una gran variedad de carbohidratos del suelo, como monosacridos (hexosas como la glucosa y la galactosa, as como pentosas como la arabinosa y la xilosa), disacridos (sacarosa y celobiosa), olisacridos (celotriosa) polisacridos (celulosa y hemicelulosa), aminoazcares (glucosamina), alcoholes del azcar (como el manitol), cidos azucarados (como los cidos, galacturnico y glucurnico) y azcares mediados (Tan, 2003).
Figura 3. Propiedades fisicoqumicas de las substancias hmicas (SH), Stevenson
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1.1.2.3. Substancias Hmicas y sus propiedades La caracterstica ms importante de cidos hmicos recae en su capacidad de unir iones metlicos insolubles, los xidos e hidrxidos, y liberarlos lenta y continuamente a las plantas cuando son requeridos (Tan, 2003). Debido a estas propiedades, los cidos hmicos son conocidos por producir tres tipos de efectos: fsico, qumico y biolgico. Fsicos Los cidos hmicos modifican fsicamente la estructura del suelo. Mejorar la estructura del suelo: Previenen la perdida elevada de agua y nutrientes en das calurosos y suelos arenosos. En suelos pesados y compactos, la aireacin del suelo y retencin de agua se mejora Previenen el agrietamiento y la erosin de suelo, aumentando la capacidad de de la formacin de agregados. Incrementan la capacidad de retencin de agua y previenen la sequa. Obscurecen el color del suelo y as ayudan a la absorcin de la energa del sol. Qumicos Los cidos hmicos qumicamente cambian las caractersticas de fijacin del suelo. Neutralizan los suelos cidos y alcalinos; regulan el pH de los suelos. Mejoraran y optimizan la absorcin de nutrientes; as como, agua por las plantas. Aumentaan la caracterstica reguladora del suelo. Actuar como quelador natural para iones metlicos bajo condiciones alcalinas y promueven su transporte a las plantas. Ricos tanto en sustancias orgnicas y minerales esenciales para el crecimiento vegetal. Conservan los fertilizantes inorgnicos solubles en agua en las zonas de la raz y reducen su lixiviacin.
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Poseen capacidades extremadamente altas de intercambio catinico. Promueven la conversin de los nutrientes (N, P, K + Fe, Zn y otros oligoelementos) en las formas disponibles para las plantas. Realzan la absorcin del nitrgeno por las plantas. Reducen la reaccin del fsforo con: Ca, Fe,Mg y Al de manera que los liberan en una forma que sea disponible y beneficiosa a las plantas. La productividad de fertilizantes minerales se aumenta considerablemente. Liberan el dixido de carbono del carbonato de calcio del suelo y permitir su uso en fotosntesis. Ayudar a eliminar la clorosis debido a la deficiencia de hierro en plantas. Reducir la disponibilidad de sustancias txicas en suelos. Biolgicos Los cidos hmicos estimulan la planta y la actividad de los microorganismos. Estimulan las enzimas de la planta y aumentar su produccin. Actuan como catalizadores orgnicos en muchos procesos biolgicos. Estimulan el crecimiento y la proliferacin de microorganismos en suelo. Realzan la resistencia natural de la planta contra enfermedades y parsitos. Estimulan el crecimiento de la raz, especialmente verticalmente y permitir una mejor absorcin de alimentos. Aumentan la respiracin de la raz y la formacin de la raz. Promueven el desarrollo de la clorofila, de los azcares y de los aminocidos en plantas y ayuda en la fotosntesis. Aumentan las vitaminas y el contenido mineral de plantas. Espesan las membranas celulares en frutas y prolongan el tiempo de anaquel. Aumentan la germinacin y la viabilidad de semillas.
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Estimulan el crecimiento vegetal (una produccin ms alta de la biomasa) acelerando la divisin de clula, aumentando el ndice de desarrollo en sistemas de la raz y aumentando la produccin de la materia seca. Aumentan la calidad de producciones; mejorar su aspecto fsico y valor alimenticio. La gran mayora de los investigadores de las substancias hmicas, concuerdan en que gracias a los grupos funcionales de stas, se debe su actuacin en las propiedades fsicas y qumicas del suelo, as como en las funciones fisiolgicas de las plantas y en la nutricin vegetal. Se cree que las substancias hmicas intervienen directamente en una gran cantidad de procesos fisiolgicos involucrados con el crecimiento de las plantas e indirectamente en la nutricin vegetal en forma similar a los intercambiadores de iones sintticos (agentes quelatantes), sin embargo, este mecanismo no est bien dilucidado (Schnitzer, 2000). En la estructura de los AH, una de las formas muy interesantes, es la presencia de vacos de variadas dimensiones, los cuales pueden atrapar o unir otros componentes orgnicos como carbohidratos, protenas y lpidos o bien inorgnicos como arcillas minerales y oxihidrxidos. Adems, los carbohidratos y las protenas, son adsorbidos en la superficie externa y en los vacos internos, los puentes de hidrgeno juegan un importante papel en su inmovilizacin, junto con el agua (Tan, 2003). Los grupos funcionales, principalmente los oxigenados, estn involucrados en reacciones con metales y minerales, los que proveen elementos nutrimentales para las races de los vegetales. Los AH y los AF pueden complejar y/o quelatar cationes, debido a su alto contenido de grupos funcionales libres (Figura 4). La reduccin de humus fue reconocida como un camino respiratorio en 1996 (Lovley, et. al., 1996) y que las sustancias hmicas pueden desempear un papel importante en la biodegradacin anaerobia y la biotransformacin de compuestos orgnicos as como inorgnicos. El humus puede servir como un aceptador de electrones terminal que apoya la oxidacin microbiana anaerobia de una amplia variedad de substratos orgnico. El humus microbianamente reducido puede transferir electrones a xidos metlicos, como Fe (III) y Mn (IV), teniendo la regeneracin humus a la forma Alumno: Ramiro Snchez Sols. Villegas SEMESTRE 6 D. BIOL: Vctor
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oxidada. As, las sustancias hmicas puede mediar tanto oxidacin anaerobia como la reduccin de xido metlica (Figura 5).
Figura 4. Fragmento estructural hipottico de las Substancias Hmicas del suelo (Kleinhempel, 1970). Los crculos indican algunos de los grupos funcionales de la molcula como son: pptidos, carbohidratos, quinonas, molculas aromticas, etc.
OH
Fe3+ Acetato CO
2
Proce so Abitico
R OH
Microorganismos
Fe2+
Bacterias reductoras de humus
Humus Reducido
O
Bacterias oxidantes
Nitrato
Microorganismos
R O
Amoniaco o N2
Figura 5. Regeneracin de la capacidad oxido-reduccin de las quinonas, mediante bacterias oxidantes y reductoras de humus; as como, procesos anaerbicos.
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Adems, las substancias hmicas reducidas tambin pueden servir como un donante de electrones para conseguir la reduccin microbiana de aceptadores de electrones ms oxidados, como el nitrato, fumarato y clorato. Diversas pruebas indican que las quinonas en el humus pueden desempear papeles diferentes que contribuyen a la biodegradacin anaerobia y la biotransformacin de substratos ecolgicamente importantes, as como contaminadores de prioridad (Field and Cervantes, 2005). Los cidos Hmicos y los compuestos de modelo de quinona apoyaron la oxidacin microbiana anaerobia de varios substratos importantes sirviendo como un aceptador de electrones terminal en muchos ambientes diferentes. Los consorcios que respiran humus tambin mostraron la capacidad de mineralizacin de contaminantes, como el tolueno, cuando el humus y quinonas fueron proporcionados como un aceptador de electrones final (Field and Cervantes, 2005). As, una tecnologa basada en la inyeccin substancias hmicas en acuferos y sedimentos para estimular la biorremediacin de sitios contaminados puede ser considerada. Las substancias hmicas no necesariamente tienen que ser suministradas en abundancia para estimular el biorremediacin de estos sitios (Tan, 2003).
1.1.2.3.1.
Propiedades detergentes de las Substancias Hmicas
Recientemente se ha sugerido que los cidos de hmicos son especies anfipticas, cuyo comportamiento en solucin sugiere que forman pseudomicelas y agregados semejantes a las micelas formadas por las familias de surfactantes sintticos. Un modelo alternativo recientemente concebido sugiere que los cidos hmicos consisten en subunidades relativamente pequeas que se asocian a travs de las interacciones moleculares dbiles formando pseudomicelas (Conte, 2005; Quagliotto et. al., 2006). Se piensa que las pseudomicelas de los cidos hmicos pueden ser formadas por enrollamiento y asociacin intermolecular, dependiendo del peso molecular, caractersticas estructurales y la polidispersin del cido hmico en cuestin (Wandruszka, 2000).
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1.1.2.4. Humificacin de HTPs
Diversos estudios han demostrado la posibilidad de polimerizar y humificar los HPAs como el pireno en periodos de un ao (Nieman, 1998). Otros investigadores han demostrado que un cambio en los grupos funcionales de los compuestos aromticos permiten que estos sean ms susceptibles a la polimerizacin, en presencia o no de enzimas como la lacasa o polifenoloxidasa. Por otro lado, se ha demostrado que estos compuestos pueden ser humificados o incorporados a precursores de sustancias hmicas como ubiquinonas, compuestos fenlicos o compuestos derivados de la celulosa y la lignina (Nieman, 1998). Estos experimentos han sido llevados en laboratorio en la mayora de los casos en forma muy controlada, como es el empleo de substratos de estudio marcados radiactivamente y su cuantificacin posterior mediante el anlisis de seguimiento de la molcula marcada. Sin embargo, este proceso de humificacin no solo esta limitado a condiciones controladas, ya que; en la naturaleza ocurre este proceso de humificacin dando como resultado el denominado h u u s. La importancia de promover la formacin y el uso de substancias hmicas en la remediacin m de suelos altamente contaminados es evidente por s misma. Las substancias hmicas pueden mejorar la actividad de la biomasa en suelos lavados y contribuir a una adicional atenuacin natural despus de haber sido sometido a un proceso de biorremediacin.
1.2. Contaminacin de Suelos con Hidrocarburos
La contaminacin del suelo puede ser debida a los accidentes industriales tales como: derramamientos, goteras, escapes de tanques de almacenamiento subterrneos (Ballarin-Denti et al., 1999; Lee et al., 2002; Kiem et al., 2003) y actividades antropognicas (combustin de combustibles fsiles) (Simcik et al., 1999; Venkataraman et al. 2002) los cuales representan una fuente de contaminacin del medioambiente a largo plazo.
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1.2.1.
Petrleo y produccin
En todo el mundo, aproximadamente 4 billones de toneladas mtricas por ao son producidas, y se ha estimado que del 0.08 al 0.4% de la produccin mundial termina por contaminar los ocanos (Bartha, 1986, BP, 2008). No se tienen estimados de la cantidad de HTPs que contaminan los suelos, pero se considera que gran parte del petrleo producido se derrama de manera accidental, as como tambin gran parte; se vierte al ambiente de manera ilegal. Aproximadamente el 90% de la contaminacin ocasionada por los HTPs se debe a la actividad antropognica, el otro 10 % se debe a derrames accidentales tales como accidentes ocasionados durante su transporte, desastres en tanques de almacenamiento, as como tambin por la ruptura de algunas tuberas. 1.2.2. Composicin del Petrleo
Los hidrocarburos del petrleo crudo son clasificados como alcanos (iso y normal), cicloalcanos y aromticos. Los alquenos (compuestos insaturados anlogos a los alcanos) raramente se encuentran en el petrleo crudo. Frecuentemente estos se producen como consecuencia de los procesos de craque. Los heterocompuestos que tienen en su estructura tomos de oxgeno (fenoles, cidos naftnicos), nitrgeno (piridina, pirrol, indol) y azufre (alquiltiol y tiofeno); son denominados resinas. El petrleo crudo tambin contiene una fraccin altamente asfltica condensada que se encuentra parcialmente oxigenada. En la Tabla 1 se enlista una clasificacin de los componentes del petrleo.
Tabla 1. Clasificacin general de los compuestos del petrleo. Fuente: Machin-Ramrez, 2000
Nombre representativos
Formula General
Algunos compuestos
Hidrocarburos saturados CnH2n + 2 Hidrocarburos naftnicos CnH2n Hidrocarburos Variable aromticos Resinas Variable tiofenos Asfaltenos Variable cido naftnico,
Metano, etano, butano,hexano Ciclopentano, ciclohexano Benceno, tolueno, xileno, etilbenceno Piridinas, quinolinas, carbazoles, Agregados de poliaromticos, como
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metaloporfirinas
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1.2.2.1. Complejos Altamente Recalcitrantes (Asfaltenos) Los asfaltenos del petrleo son hidrocarburos que presentan una estructura molecular
extremadamente compleja, los cuales estn conformados por diferentes proporciones de nitrgeno, azufre y oxgeno (Pineda and Mesta-Howard, 2001). Estos compuestos ocasionan diversos problemas como el bloqueo de tuberas de extraccin y transporte de crudo, reduccin de su aprovechamiento econmico y contaminacin de los ecosistemas. La biodegradacin de los asfaltenos es un proceso que constituye un importante mtodo para eliminar a estos compuestos y tratar de reducir los problemas que ocasionan, sin embargo es un proceso que ocurre en proporciones muy reducidas. La eliminacin de la estructura micelar por la aplicacin de solventes no polares o surfactantes y la fragmentacin de los asfaltenos por fotooxidacin son los procesos iniciales necesarios para poder degradar a estos compuestos. Las estructuras que conforman a los asfaltenos como: los hidrocarburos lineales y ramificados, heteropoliaromticos y aromticos, podran degradarse en este orden a travs de reacciones bioqumicas como oxidaciones omega, beta y aromticas respectivamente, que son procesos distribuidos en una variedad importante de microorganismos (Pineda and Mesta-Howard, 2001). Uno de los problemas ms graves relacionados con stos compuestos en el medioambiente, reside en su resistencia a la biodegradacin por actividad metablica microbiana. Debido a ste hecho, las rutas metablicas involucradas en este proceso son de las menos conocidas en estos das, aunque, hay ciertas evidencias que sugieren que algunos microorganismos tienen la capacidad potencial de transformar asfaltenos y el mejor de los casos, eliminarlos (Figura 6). Las comunidades microbianas en ecosistemas contaminados de esta manera tienden a ser dominadas por aquellos organismos capaces de utilizar y/o de sobrevivir en presencia de los compuestos txicos. Como resultado, estas comunidades son menos diversas que aquellos sistemas de referencia no contaminados, aunque la diversidad tambin puede estar influenciada por la Alumno: Ramiro Snchez Sols. Villegas SEMESTRE 6 D. BIOL: Vctor
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complejidad de la mezcla de compuestos presentes y por el tiempo que las poblaciones han estado expuestas.
Figura 6. Regiones susceptibles de fragmentacin y biodegradacin en los asfaltenos. 1: fotoxidacin, 2: -oxidacin, 3: Ruta metablica del dibenzopireno, 4: Ruta metablica similar al benzopireno, 5: Ruta metablica del pireno, 6: Ruta metablica similar a la del benzo(a)pireno, 7: Ruta metablica similar a los carbazoles.
1.2.3.
Transporte de los HTPs en el ambiente
Los HTPs dispersados en el ambiente migran a travs del suelo como: a) mezcla completa que se infiltra en el suelo por la fuerza de la gravedad y accin capilar; b) componentes individuales que se separan de la mezcla y se disuelven en el aire o el agua contenida en el suelo.
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1.2.4.
Migracin de la mezcla de HTPs
Cuando migra la mezcla completa, se tiene poca o nula separacin de los componentes individuales y la infiltracin es normalmente rpida en comparacin con la velocidad de disolucin (Eastcott, et al., 1989). Muchos compuestos del suelo que son insolubles en agua, son solubles en la mezcla y migran junto con ella. Los factores que afectan la velocidad de infiltracin son: tipo de suelo, tamao de partcula, contenido de humedad del suelo, vegetacin, temperatura, y viscosidad de la mezcla. Conforme la mezcla migra a travs de la columna de suelo, pequeas cantidades son adsorbidas/absorbidas por partculas de este; producindose el fenmeno conocido como saturacin residual. Dependiendo de la resistencia de permanencia de la mezcla, el suelo puede estar saturado por aos (Dragun, 1988). La saturacin residual determina el grado de contaminacin del suelo, y puede convertirse en una fuente continua de contaminacin por los compuestos individuales que se separen de la mezcla (Bauman, 1988). Si el derrame es persistente, una extensa rea puede verse afectada conforme los compuestos individuales continan separndose y migran lejos de la zona inicialmente contaminada. Cuando la cantidad derramada es pequea en comparacin con la extensin de suelo disponible, se produce una saturacin residual y la migracin de la mezcla normalmente cesa, antes de afectar los mantos acuferos. Si el agua pluvial se infiltra a travs del suelo que contiene saturacin residual, existe la posibilidad de que se contaminen las aguas subterrneas debido a la migracin de los componentes individuales. Si la cantidad derramada es grande en relacin con el suelo disponible, la migracin cesa conforme llega a espacios porosos saturados con agua. En este caso, si la densidad de la mezcla es menor que la del agua, el producto tiende a flotar a lo largo de la interface entre las zonas saturadas de agua y las insaturadas, dispersndose horizontalmente en una capa delgada, normalmente en la direccin de la corriente de agua subterrnea, (Knox, 1993; Mackay, 1988). Si la densidad es mayor, la mezcla migra hasta el manto acufero por gravedad y cesa cuando ocurre saturacin residual o cuando la mezcla alcanza una superficie impermeable. Alumno: Ramiro Snchez Sols. Villegas SEMESTRE 6 D. BIOL: Vctor
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Conforme la mezcla migra a travs de la columna de suelo, los componentes pueden separarse de la mezcla y migrar independientemente, dependiendo de su volatilidad, solubilidad, potencial de sorcin y coeficiente de particin carbono orgnico-agua (Figura 7).
Figura 7. Migracin de los HTPs en el ambiente.
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1.2.5.
Toxicidad de las fracciones recalcitrantes del petrleo
1.2.5.1. Hidrocarburos Alifticos (HAs) Se ha encontrado que los hidrocarburos alifticos con cinco o ms carbonos presentan propiedades toxicas, causando efectos narcticos, a causa de inhalaciones prolongadas o por exposicin a altas concentraciones de los mismos. Asimismo, se sabe que los hidrocarburos alifticos no saturados y cclicos exhiben propiedades toxicas un poco menores que los de cadena lineal. No obstante, los efectos anestsicos que presentan stos ltimos afectan seriamente el sistema nervioso central. 1.2.5.2. Hidrocarburos Policclicos Aromticos (HPAs) Se ha observado que en suelos contaminados con hidrocarburos existe un grupo de compuestos sumamente recalcitrantes como los hidrocarburos policclicos aromticos (HPA), los cuales independientemente del porcentaje que representan con respecto a la totalidad de compuestos de que sta constituido el petrleo, se ha comprobado su carcinogenicidad o mutagenicidad en seres vivos. En Estados Unidos, la Agencia de Proteccin al Ambiente (EPA) regula actualmente 16 de estos HPA como compuestos altamente peligrosos, como contaminantes de prioridad en agua y suelo. Estos compuestos son nocivos al ambiente aun en pequeas cantidades, como lo marcan los experimentos que se han realizado con microorganismos y animales. En ratas se presentan problemas mutagnicos con 2 ppm o efectos tumorognicos con 3.5 ppm (ATSDR, 1995), los cuales son solo un ejemplo de la diversidad de reportes existentes. 1.2.5.3. Compuestos heterocclicos con azufre o nitrgeno Aun cuando existen muy pocos trabajos sobre la toxicidad de los compuestos heterocclicos con azufre y nitrgeno, McFall et al. (1984) los han reportado como compuestos txicos con propiedades mutagnicas y carcinognicas. Por otro lado, un derrame de hidrocarburos en el suelo, interrumpe en todos los casos, la vocacin natural o uso antropognico del suelo.
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1.2.5.4. Efecto de los HTPs en la salud Los efectos en la salud se basan en compuestos especficos y dependen de factores como son: tipo de compuesto (o fracciones presentes en los HTPs), tiempo de exposicin, concentracin y cantidad de compuestos detectados. Las fracciones de HTPs se clasifican en grupos con caractersticas similares de movilidad en el ambiente, determinadas por sus propiedades fsicas y qumicas (densidad, solubilidad, presin de vapor, y tendencia a enlazarse con el suelo o partculas orgnicas). Las fracciones de HTPs con densidad menor o cercana a la del agua, como los compuestos no acuosos en fase liquida (NAPLs), flotan formando capas superficiales muy delgadas (Mackay, 1984). Dadas sus propiedades fisicoqumicas, pueden afectar a algunos organismos de la superficie; mientras que, algunas clases de bacterias y hongos, degradan estas fracciones en compuestos ms simples. Las fracciones ms pesadas de los hidrocarburos, como los poliaromticos (PAHs), son ms densas que el agua, y se acumulan en los substratos afectando a la fauna y flora marina de la zona.
La degradacin parcial de HTPs presenta efectos nocivos, como son la bioconcentracin, la cual aumenta en forma proporcional al peso molecular (PM) de los HTPs, bioacumulacin especialmente PAHs; alifticos y aromticos de bajo PM no son bioacumulables (Farrington, et al., 1982), y biomagnificacin. En algunos casos, estos efectos pueden ser eliminados, si la fuente contaminante es removida (Cox et al., 1975; Williams et al., 1989).
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1.2.6.
Biodegradacin de los Hidrocarburos Totales del Petrleo
La degradacin microbiana de HTPs se inicia por el ataque a fracciones aliftica y aromtica ligeras. Los compuestos aromticos de alto peso molecular, las resinas y los asfaltenos se consideran recalcitrantes, o en el mejor de los casos son biodegradados muy lentamente (Shiaris, 1989). En la Tabla 2 se muestra una clasificacin de hidrocarburos, en trminos del nivel de transformacin y recalcitrancia. De acuerdo a la facilidad de degradacin, los hidrocarburos pueden ser secuenciados de la siguiente manera (Perry and Cerniglia 1973): Alcanos lineales (C10 - C19) Alcanos lineales (C12 - C18) Gases (C2 C4) Alquenos (C5 - C9), Alquenos ramificados hasta C12 Alquenos (C3 - C11) Alquenos ramificados Aromticos Cicloalcanos.
Tabla 2. Facilidad de degradacin de HTPs y productos de su metabolismo.
Facilidad de degradacin
Productos
Compuesto s fcilment e degradable s Alifticos voltiles, n-parafinas, aromticos Alquenos, alcadienos, alquinos Alifticos pesados, aromticos Alcanos saturados, hidrocarburos cclicos Compuestos fenlicos Fenol, cresol, naftol, xilenol Compuesto s intermedios Hidrocarburos poliaromticos Aromticos mono-, di- y trinucleares Recalcitra ntes Residuos pesados Asfaltos, resinas Alquitranes, ceras Ceras parafnicas
Fuente: Lapinskas, J., 1989. 1.2.6.1. Microorganismos degradadores de hidrocarburos La preferencia en el consumo de HTPs est determinada por la fisiologa del microorganismo, as como por las caractersticas fsicas y qumicas del ambiente donde se desarrolla. De estos tres factores, se considera que el primero es el ms importante; ya que las condiciones ambientales pueden ser controladas de alguna manera. Los diversos componentes de los HTPs son degradados principalmente en condiciones aerobias y la presencia de oxigenasas, mediante diversas rutas Alumno: Ramiro Snchez Sols. Villegas SEMESTRE 6 D. BIOL: Vctor
metablicas. Los microorganismos con capacidad degradadora de HTPs han sido aislados en zonas contaminadas. Puede considerarse que los microorganismos aclimatados, preferentemente de
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naturaleza endgena, generaran mejores resultados que floras microbianas externas (Leahy and Colwell, 1990). La aclimatacin puede llevarse a cabo por un enriquecimiento selectivo de nutrientes, o mediante la ingeniera gentica; insercin de genes que favorezcan el catabolismo de hidrocarburos. Algunos microorganismos que utilizan HTPs como fuente de carbono, son Alcaligenes, Nocardia, Pseudomonas, Mycobacterium. Es importante mencionar que las comunidades microbianas aclimatadas, estn conformadas principalmente por bacterias. Se ha identificado una gran variedad de microorganismos con capacidad para degradar compuestos derivados del petrleo; interesantemente, casi todos son eubacterias, aunque en algunos casos se encontraron arqueobacterias y eucariotes (Vzquez-Duhalt, 2000). Aunque no han sido caracterizados en su totalidad, muchos de estos microorganismos poseen actividades de peroxidasas y oxigenasas, que permiten la oxidacin ms menos especficas de algunas fracciones del petrleo. Esta oxidacin cambia las propiedades de los compuestos, hacindolos susceptibles de ataques secundarios y facilitando su conversin a bixido de carbono y agua. En algunas ocasiones no es necesario llegar a la mineralizacin, sino que basta una oxidacin para disminuir notablemente su toxicidad o aumentar su solubilidad en agua, incrementando su biodisponibilidad (Vzquez-Duhalt, 2000). Uno de los gneros bacterianos ms explotados en bioprocesos no-convencionales es Rhodococcus, un grupo nico consistente en microorganismos que presentan una gran diversidad metablica, particularmente hacia la utilizacin de compuestos hidrofbicos tales como hidrocarburos, fenoles clorados, esteroides, lignina, carbn y petrleo (Finnerty, 1992; Warhurst and Fewson, 1994). Las bacterias del gnero Rhododoccus poseen una gran variedad de vas metablicas para la degradacin y modificacin de compuestos aromticos, incluyendo las actividades de di-oxigenasa y mono-oxigenasa sobre anillos as como la actividad de ruptura de catecol. Algunos aislados presentan tambin la va del 3-oxoadipato. La tolerancia de stas bacterias a la falta de nutrientes, su carencia de un sistema de represin catablica y su persistencia ambiental las hace excelentes candidatas para los tratamientos de biorremediacin (Warhurst and Fewson, 1994). Alumno: Ramiro Snchez Sols. Villegas SEMESTRE 6 D. BIOL: Vctor
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Por otra parte, la inoculacin con microorganismos exgenos, incluso cuando estos microorganismos hayan sido aislados del mismo emplazamiento contaminado, no es en general efectiva (Martn, 2004). Los microorganismos endgenos resultan efectivos, siempre y cuando, dispongan de los nutrientes adecuados y se les suplemente con oxgeno, como tal o en forma de perxido de hidrgeno. La mayor eficiencia se obtiene probablemente optimizando la capacidad de la microflora indgena que es prcticamente ubicua. 1.3. Tecnologas de remediacin de suelos contaminados (in-situ, ex-situ) La necesidad de restaurar los sitios contaminados con hidrocarburos, propicio el desarrollo de tecnologas fsicas y qumicas, exclusivamente. Posteriormente despus de la dcada de los 70's se inicio el desarrollo de la biorremediacin. De esta manera en la actualidad, la remediacin de un suelo puede llevarse a cabo por dos diferentes mtodos, la Agencia de Proteccin Ambiental de Estados Unidos (USEPA por sus siglas en ingls) clasifica a las tecnologas de remediacin en dos grandes grupos: las tecnologas ex-situ, y las tecnologas in-situ (USEPA 2008). En la primera se requiere de excavacin, o de cualquier otro proceso para remover el suelo contaminado antes de su tratamiento que puede realizarse en el mismo sitio (on site) o fuera de l (off site) y las tecnologas in-situ, que se refieren al tratamiento del sitio contaminado en el mismo lugar. En la Tabla 3 y 4, se presentan las tecnologas de remediacin ex-situ e in-situ respectivamente, comprendidas dentro de la EPA (USEPA 2008)
Tabla 3. Tecnologas de remediacin Ex situ de acuerdo a la USEPA .
Tecnologas (Ex situ)

Tratamiento qumico Incineracin On-site Biorremediacin Incineracin Off-site Solidificacin y estabilizacin Neutralizacin Vitrificacin Aireacin mecnica Separacin fsica Lavado de suelos
Principio
Se basa en la adicin de agentes qumicos oxidativos Tratamiento trmico hasta CO2 en el mismo tugar Empleo de organismos vivos Tratamiento trmico hasta CO2 en incineradores especiales fuera del rea Empleo de materiales de la construccin, cemento, limos hidratados entre otros para inmovilizar al contaminante Empleo de agentes alcalinos para neutralizar suelos cidos y permitir la remediacin. El suelo contaminado se mezcla con arena de vidrio y se hace pasar una corriente elctrica; para formar bloques de vidrio con el suelo contaminado. Se emplea para eliminar compuestos voltiles empleando la aireacin. Los contaminantes se extraen y/o separan del medio contaminado, aprovechando sus propiedades fsicas o qumicas (volatilizacin, solubilidad, carga elctrica). Los contaminantes adsorbidos en las partculas finas del suelo son removidos con el uso de soluciones acuosas en un suelo excavado
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Tabla 4. Tecnologas de remediacin In situ de acuerdo a la USEPA .
Tecnologas (In situ)

Extraccin de vapor Solidificacin y extraccin Biorremediacin Lavado de suelo Recuperacin trmica Fitorremediacin Extraccin doble fase
Principio
Recuperacin de componentes voltiles empleando corrientes de vapor Empleo de materiales de la construccin, cemento, limos hidratados entre otros para inmovilizar al contaminante Empleo de organismos vivos para la desintoxicacin de los suelos contaminados Los contaminantes sorbidos en las partculas finas del suelo son removidos con el uso de soluciones acuosas en un suelo excavado Utilizan calor para incrementar la volatilizacin (separacin) de los contaminantes en un suelo La fitorremediacin es un proceso que utiliza plantas para remover, transferir, estabilizar, concentrar y/o destruir contaminantes (orgnicos e inorgnicos) en suelos, lodos y sedimentos Este tipo de procesos, utiliza solventes orgnicos para disolver los contaminantes y as removerlos del suelo.
1.3.1.
Lavado de suelo
Se utiliza para remover y/o concentrar contaminantes absorbidos en suelo, como son los metales, hidrocarburos y PAHs (Preslo, 1989). El suelo contaminado es excavado y alimentado a un sistema que contiene una solucin de lavado y algunos aditivos de pH controlado. Si el suelo tiene un alto contenido de humus y/o arcilla, se deben realizar pre-tratamientos de separacin y cribado, lo cual incrementa Ios costos de operacin. Estos tambin son incrementados por Ios post-tratamientos de las corrientes acuosas. 1.3.1.1. Surfactantes Los detergentes, tambin conocidos como surfactantes debido a que reducen la tensin superficial del agua, son molculas anfipticas formadas por grupos polares (cabeza) y largas cadenas carbonadas hidrofbicas (cola). Sus grupos polares forman puentes hidrgeno con las molculas de agua, mientras que las cadenas carbonadas se agregan debido a interacciones hidrofbicas. En soluciones acuosas, los surfactantes forman estructuras esfricas organizadas llamadas micelas, que por su naturaleza anfiptica, tienen la capacidad de solubilizar compuestos hidrofbicos (Bhairi, 2001).
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El empleo de surfactantes, se ha propuesto como una tcnica para incrementar la biodisponibilidad de contaminantes orgnicos hidrofbicos (HOCs) como HTPs, PCBs, explosivos, clorofenoles, pesticidas, entre otros, y as facilitar su biodegradacin (Majer et al..1999). Los surfactantes pueden ser sintetizados qumicamente o bien por algunos microorganismos, en este ltimo caso se les conoce como biosurfactantes. Estos compuestos incrementan la solubilidad de los HOCs a travs de una fase micelar (hidroflica/hidrofbica), la cual propicia la desorcin de los contaminantes del suelo hacia la fase lquida, logrndose as un incremento en la biodisponibilidad de los HOCs. La solubilizacin de los contaminantes se lleva a cabo solamente cuando se forma la fase micelar, la cual se obtiene cuando la concentracin del surfactante es superior a la concentracin micelar critica (CMC), es decir, arriba de la concentracin mxima a la cual el monmero del surfactante an se mantiene en solucin (Ko et al., 2000). La CMC es una propiedad muy sensible a la temperatura y polaridad del medio, y generalmente su valor se reporta a temperaturas entre 20 y 25C. El nmero de agregados para formar una micela, es el valor promedio del nmero de monmeros en una micela. Los diferentes tipos de surfactantes que son empleados para lavar el suelo, estn en funcin de la naturaleza del contaminante a ser removido. Por ejemplo, los pesticidas son eliminados por surfactantes no-inicos como el Tritn X-100 y biosurfactantes como los ramnolpidos (Noordman et al. 2000; Mata-Sandoval, 2002). Los Hidrocarburos Policclicos Aromticos (PAH) pueden ser lavados por alquilfenol etoxilato (Garon et al., 2002), (Cuypers et al., 2002) y otro surfactantes aninicos como SDS (Chun et al.2002). El uso de surfactantes no inicos, es una de las prcticas ms comunes y efectivas empleadas para la desorcin de compuestos orgnicos hidrofbicos (HOCs) (Kotterman at al., 1998; Ghosh, 1997). La eficiencia de desorcin de un surfactante depende de su naturaleza, de la dosis empleada, de la hidrofobicidad del contaminante, de la interaccin surfactante-suelo y del tiempo de contacto surfactante-suelo (Guha et al., 1996). Sin embargo, la mejor eficiencia de desorcin no est siempre relacionada con la mejor eficiencia de degradacin, debido principalmente a que el empleo de una alta concentracin de surfactante puede
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inhibir la degradacin (Laha y col., 1992). Stelmack y col. (1999), demostraron que el uso de surfactantes reduce la adhesin de las bacterias en la superficie hidrofbica, dando como resultado una baja actividad de biodegradacin. Para solucionar este tipo de problema, algunos investigadores recomiendan la utilizacin de surfactantes fcilmente biodegradables, como el Brij 30, Brij 35 y Tween 80 (Ghosh, 1997). Abiola y col. (1997), determinaron que el uso de surfactantes favorece la remocin de HTP en un suelo contaminado con 20,000 mg/kg de suelo. Los sistemas experimentales fueron biopilas estticas y alargadas con y sin surfactante. El grupo observ que solamente en las biopilas alargadas adicionadas de surfactante se favoreci la biodegradacin de hidrocarburos. Kotterman y col. (1998), evaluaron la oxidacin de PAHs utilizando diversos surfactantes. En este estudio se determin que el surfactante Tween 80 (1 - 2.5 g/L), present la menor toxicidad sobre el sistema ligninoltico de la bacteria Bjerkandera sp., as como un mayor estmulo en la velocidad de oxidacin del antraceno y del benzo(a)pireno. Por su parte, Ghosh en 1997, evalu la biodegradacin de PAHs en suelos utilizando cuatro diferentes surfactantes no inicos, en este estudio observ degradaciones de fenantreno de 70 - 80% en 98 das, al emplear concentraciones de surfactantes de 2.5 g/L o mayores; este resultado fue atribuido principalmente a que arriba de este valor se presenta la formacin de micelas, adems de que se aumenta el tiempo de vida del surfactante en el suelo. 1.3.2. Tecnologas de biorremediacin de suelos contaminados
En lo que se refiere a la Biorremediacin, esta tiene como antecedente el tratamiento biolgico de efluentes, lo cual permiti que la investigacin en esta rea se desarrollara de manera rpida. El termino biorremediacin, se utiliza para describir una variedad de sistemas que utilizan organismos vivos (plantas, hongos, bacterias entre otros, para remover (extraer), degradar (biodegradar) o transformar (biotransformar) compuestos orgnicos txicos en productos metablicos menos txicos o inocuos.
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Dentro de los procesos biolgicos que suceden en la biorremediacin, las enzimas funcionan como catalizadores, dado que pueden modificar molculas orgnicas (contaminantes) produciendo cambios en su estructura as como en sus propiedades toxicolgicas incluso, dar como resultado la completa conversin de dichos compuestos en productos inorgnicos como agua, CO 2 o formas inorgnicas de N, P y S (Alexander 1994). En lo que se refiere a las tecnologas de Biorremediacin, la Tabla 5 resume estas empleando el mismo criterio de las tecnologas de remediacin: Ex-situ e In-situ.
Tabla 5. Tecnologas de Biorremediacin Ex situ e In situ, de acuerdo a la USEPA.
Tecnologa (Ex-situ)
Biopila Bioreactores Composta o vermicomposta Biolabranza
Principio
Es un tratamiento en fase solida, aerobio en el que se trata fuera del sitio contaminado, utiliza equipo para airear mecnicamente, mezclar el suelo y nutrientes. Se basa en la remocin de contaminantes empleando reactores en un sistema de lodos. Permite la combinacin controlada y eficiente de procesos qumicos, fsicos y biolgicos, que mejoran y aceleran la biodegradacin. El composteo es un proceso biolgico mediante el cual es posible, convertir residuos orgnicos en materia orgnica estable, gracias a la accin de diversos microorganismos o el efecto de las lombrices. El suelo contaminado se mezcla con agentes de volumen y nutrientes, y se remueve (labra) peridicamente para favorecer su aireacin.
Tecnologas (In situ)

Lagunas Bioventeo Fitorremediacin
Principio
Se basa en el tratamiento de suelo inundndolos con agua para recuperar compuestos voltiles. Se basa en la aireacin a travs de columnas, para estimular la actividad microbiana y la degradacin del contaminante Es un proceso que utiliza plantas junto con microorganismos para remover, transferir, estabilizar concentrar y/o destruir contaminantes (orgnicos e inorgnico) en suelos o sedimentos
1.3.2.1. Bioestimulacin De las tecnologas de biorremediacin, la bioestimulacin es una tecnologa atractiva ya que utiliza los microorganismos autctonos para la remocin de hidrocarburos y es in situ. En esta tecnologa de biorremediacin, se suministran nutrientes a los microorganismos capaces de degradar hidrocarburos, lo que les permite llevar a cabo tanto un crecimiento, como una actividad metablica. En suelos contaminados con hidrocarburos, la deficiencia de N y P en relacin al C, generada por la contaminacin, es un factor limitante para que los microorganismos autctonos puedan llevar a cabo la remocin de hidrocarburos (Atlas, 1981; Leahy and Colwell, 1990). Esta deficiencia de nutrientes Alumno: Ramiro Snchez Sols. Villegas SEMESTRE 6 D. BIOL: Vctor
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puede ser balanceada utilizando como mtodo de remediacin a la bioestimulacin (Boopathy et al, 1997; Leahy and Colwell, 1990). Los nutrientes son clasificados en macronutrientes y micronutrientes. Los macronutrientes son aquellos compuestos requeridos en grandes cantidades y que forman parte de las macromolculas de las clulas como carbohidratos, lpidos y cidos nucledos; entre los macronutrientes se tiene al C, seguido del N, P y S (Atlas 1981; Sylvia et al, 1999). Los micronutrientes, a diferencia de los macronutrientes, son requeridos en menor cantidad y sirven como componentes estructurales o bien como elementos que favorecen la actividad enzimtica capaz de degradar los contaminantes. Entre estos elementos se encuentran el Ca, Zn, Mo, Cu, Mn, y Mg (Sylvia et al, 1999). Algunos microorganismos pueden sintetizar todos sus componentes a partir de una fuente de carbono como los hidrocarburos y algunos nutrientes minerales, mientras que otros requieren nutrientes ms complejos e inclusive de compuestos ms especficos como aminocidos, purinas, pirimidinas y/o vitaminas (Atlas, 1981; Sylvia et al, 1999). Para que estos componentes puedan ser asimilados por los microorganismos, se necesita que estos sean disponibles, se encuentren en cantidades suficientes y como molculas fciles de asimilar. En la bioestimulacin el N y el P son los nutrientes frecuentemente adicionados a suelos contaminados (Atlas 1981; Leahy and Colwell, 1990). 1.3.2.2. Residuos agroindustriales El adicionar un texturizante al suelo contaminado con hidrocarburo permite incrementar la actividad microbiana, debido a que mejora el transporte de los contaminantes hacia los microorganismos; adems incrementa la porosidad en la mezcla suelo-agua-texturizante. La adsorcin con carbn activado puede ser altamente eficiente en la remocin de muchos elementos traza en el agua, pero su alto costo prohbe su aplicacin a gran escala, adems de los problemas que presenta en cuanto a su disposicin una vez que ha sido usado. Los desechos agrcolas representan recursos naturales no utilizados y en algunos casos presentan serios problemas de disposicin final, de ah que se busquen alternativas para convertirlos en productos tiles. El aserrn ha merecido diversos estudios para la
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remocin de contaminantes tales como colorantes, sales y metales pesados a partir de agua y efluentes acuosos (Shukla et al., 2002). Las paredes celulares del aserrn consisten principalmente de celulosa y lignina, adems de muchos grupos hidroxilos provenientes de taninos u otros compuestos fenlicos. Esos grupos a un pH apropiado son intercambiadores inicos efectivos. La lignina, un componente de la madera, es un hetreopolmero constituido por unidades de fenilpropano. La interaccin con los grupos funcionales de este compuesto da la capacidad de adsorcin de la madera hacia compuestos orgnicos (Kubick and Apitz, 1999). En un estudio realizado para la eliminacin de cobre con aserrn de mango se encontr que el tamao de partcula mas apropiado para la adsorcin fue de 100 m, logrando una eficiencia de adsorcin del 81% en una solucin que contena 17 mg/L de Cu (II) a pH de 6.25C y 50 g/L de aserrn (Ajmal et al., 1998). Gupta et al., (2002), usaron residuos de la industria azucarera (bagacillo de caa), para la remocin de lindano y malatin, para un tiempo de contacto de 60 min a pH de 6 la remocin fue del 97-98%. Resultados similares obtuvieron utilizando DDT y DDE. Se ha reportado que cuando se utilizan soportes en procesos biolgicos, la eficiencia del proceso se mejora cuando los contaminantes son adsorbidos reversiblemente (Fava, 1996). 1.3.2.3. Vermicomposteo El vermicompostaje es una forma alternativa de generar abono y eliminar desechos orgnicos. La accin de la lombriz en su proceso digestivo produce un agregado notable de bacterias que actan sobre los nutrientes macromoleculares, elevndolo a estados directamente asimilables por las plantas, lo cual se manifiesta en notables respuestas de las cualidades organolpticas de frutos y flores, como as tambin resistencia a los agentes patgenos (Ferruzzi, 1994). El vermicompostaje de hecho es la actividad de alimentar lombrices con restos vegetales y recoger los excrementos, de alto poder fertilizante. Es una actividad limpia que no produce mal olor y que genera un fertilizante seco.
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Durante el proceso de vermicompostaje se generan compuestos bioactivos que son de importancia para los procesos bioqumicos y reguladores de los suelos, como las enzimas: amilasa, celulosa, lipasa, invertasa, proteasa, amidasa, ureasa, monoestereasa (fosfatasa acida y alcalina), arilsulfatasa y deshidrogenase. Adems, se generan distintos tipos de antibiticos, vitaminas, hormonas y substancias hmicas (cidos hmicos, flvicos y huminas), de gran valor (Quintero, 2002). 1.3.2.3.1. Las lombrices
El cuerpo de las lombrices, interna y externamente, es el sitio de los procesos metablicos, como son la produccin interna y externa de moco, respiracin, paso de material por su intestino y excrecin de compuestos nitrogenados. A este nivel la actividad microbiana es estimulada en el intestino por un sistema mutualstico de digestin, que aumenta la capacidad de las lombrices para ingerir residuos orgnicos. Similarmente, la produccin de moco externo acta como un estimulador para el crecimiento y produccin de microorganismos (Ferruzzi, 1994). 1.3.2.3.2. Las excretas de lombriz
Las excretas de lombriz son productos del material que pasa a travs de su intestino de la lombriz son excretados en dos principales formas: globular y granular, las cuales tienen diferentes tamaos, estabilidad y duracin, contenido de nutrientes y sus efectos sobre la dinmica de la materia orgnica y la actividad microbiana es muy diferente (Ferruzzi, 1994). 1.3.2.3.3. Agregados de excretas
Los agregados de excretas son creados por lombrices ancicas (lombrices que viven dentro del suelo, cavan galeras verticales y durante la noche suben a la superficie del suelo alimentndose de materia orgnica) y consisten en la acumulacin de excretas depositadas en la superficie y material orgnico dentro y fuera de las galeras o canales abiertos en la superficie del suelo. Estas estructuras pueden
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ser consideradas como hbitat de los microorganismos y fauna del suelo, as como aceleradoras de la descomposicin de la materia orgnica (Ferruzzi, 1994). 1.3.2.3.4. Canales o galeras formados por la lombriz
Los canales formados son producidos por el trabajo de las lombrices por su trayecto en el suelo, llegan a ser permanentes (algunos aos) o temporales, tambin pueden ser abiertos o llenos de excretas y son principalmente importantes por su intercambio de agua, gases y movimiento de suelo. Adems, sirven como ruta preferencial para la expansin de las races de las plantas (Ferruzzi, 1994). 1.3.2.3.5. Enzimas de la lombriz
Las lombrices tienen un sistema digestivo muy completo, debido a la asimilacin y al impacto en la actividad microbiana, este proceso de digestin es muy importante en la regulacin de la dinmica de la materia orgnica. A travs del paso por su intestino, los materiales ingeridos son rpidamente reestructurados de manera fsica, qumica y biolgica hasta convertirlos en las excretas. Esto lo logran por medio de la ayuda de diferentes enzimas que producen (Tabla 6). De las principales enzimas encontradas en el intestino se pueden citar: quitinasas, proteasas, fosfatasas, celulasas, y algunas otras enzimas glucosdicas (Lattaud et al., 1999). Estas enzimas les permiten digerir bacterias, protozoarios, hongos y descomponer parcialmente residuos de plantas. Algunas especies pueden participar en la descomposicin de lignina y el proceso de humificacin ya que poseen peroxidasas, las cuales destruyen el enlace aromtico de la lignina, las enzimas peroxidasas han sido encontradas en el intestino de Eisenia foetida (Hassett et al., 1988; Quintero, 2002). El origen de estas enzimas, ya sea por la lombriz o por microorganismos, han sido encontradas en diferentes gneros; sin embargo, el complejo enzimtico es distinto para cada especie y su origen
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puede ser de la pared intestinal y as presumiblemente, propia de la lombriz o de la microbiota que vive en el intestino de la lombriz (Hassett et al., 1988).
Se ha encontrado que las lombrices posee citocromo P-450, actividad monooxigenasa, que son enzimas responsables del metabolismo de HPAs en hongos y algas (Cerniglia, 1993). Adems Eisenia foetida presenta un complejo glicolipoproteinico (G-90) con actividad mitogenica y antioxidante esto hace pensar que la lombriz se sirve de dicho complejo para protegerse del dao celular contra contaminantes como los xenobiticos (Grdisa et at, 2001).
Se han reportado diferentes bacterias asociadas al intestino, a las excretas o en el fluido interno de sus huevecillos, como son: Pseudomonas, Acidobacterium, Nocardia, Alcaligenes, Rhodococus, Azotobacter y algunos hongos como son Penicillum, Mucor, Aspergillus entre otro gran nmero de microorganismos (Morgan and Burrows, 1982; Singleton et al., 2003; Pizl and Novkov, 2003). Algunos de estos microorganismos pueden degradar HPAs, tal es el caso de Pseudomonas, Alcaligenes, Nocardia, Rhodococus, Azotobacter y Penicillum (Cerniglia, 1993; Johnsen et al., 2005).
Tabla 6. Actividad enzimtica detectada en la flora microbiana intestinal de la lombriz.
Especie
E. andrei E. andrei E. andrei E. fetida E. fetida E. fetida
Enzimas
Fosfotriesterasa Catalasa, citocromo reductasa acetil colin esterasa, Glutatin Citocromo P-450, Peroxidacin lipdica Complejo glicolpido protenico (G-90) Complejo glicolpido protenico (G-90) Citocromo P-450, monooxigenasa
Observaciones
Hidroliza fosfotriesteres pesticidas Actividad con metales: Pb, Cu, Zn, Hg, Co, Fe, Cd Con benzo(a)pireno la actividad aumenta Actividad anticoagulante y fibrinoltica Aumenta la proliferacin celular, actividad mitognica y actividad antioxidante Citocromo P-420 y Citocromo P-450, NADPH citocromo Creductasa y actividad monooxigenasa
Referencia
Lee et al., 2001 Denis-Saint et al., 2001 Saint-Denis et al., 1999 Hrzenjak et al., 1998 Grdisa et al., 2001 Achazi et al., 1998
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1.3.2.3.6.
Efecto de fuentes orgnicas e inorgnicas de N sobre la poblacin de lombrices del suelo
Investigaciones realizadas por Edwards and Lofty (1982) en Rothamsted, y otros trabajos citados por Lampkin, (2002) encontraron que la remocin de la paja y ciertas tcnicas de cultivo afectan a las lombrices y otros organismos del suelo. Tambin se encontr un mayor nmero de especies de lombrices en suelos tratados con fertilizantes orgnicos que en suelos no tratados. Se observ una alta correlacin positiva entre dosis de N inorgnico y poblacin de lombrices, probablemente por la mayor produccin de races y residuos, aunque tambin se observ que las fuentes orgnicas de N aumentaban ms la poblacin que fuentes inorgnicas. Sin embargo, los suelos que recibieron ambas fuentes de N, orgnico e inorgnico resultaron con las ms alta poblacin de lombrices. Edwards and Lofty (1982) consideran que el efecto prejudicial de fertilizantes informado en otras publicacin se puede deber al aumento de la acidez del suelo causada por su uso. 1.3.2.3.7. Remocin de HTPs empleando lombrices
La lombriz en su hbitat natural est expuesta a una variedad de compuestos alcaloides de plantas, hidrocarburos policclicos aromticos (HPAs) y pesticidas que inducen sistemas de citocromo P-450 (enzima que inicia la ruta de degradacin de los HPAs en algunas algas, bacterias y hongos; as como, compuestos persistentes en el ambiente producidos por el hombre), y otros sistemas enzimticos que las protegen y ayudan a metabolizar diferentes compuestos (Achazi et al., 1998). Las lombrices acumulan muchos contaminantes orgnicos lipoflicos (xenobiticos y metales pesados, entre otros) de su medio ambiente. Son capaces de acumular compuestos lipoflicos no solo por absorcin pasiva de la fraccin disuelta en el agua intersticial a travs de la pared del cuerpo (Belfroid et al., 1993), tambin por asimilacin intestinal durante el paso de suelo contaminado a travs del intestino (Belfroid et al., 1994). Liste and Alexander (2002) encontraron que las lombrices son capaces de asimilar HPAs de la porcin remanente en suelos, que no son disponibles por otras tcnicas de extraccin convencionales. Alumno: Ramiro Snchez Sols. Villegas SEMESTRE 6 D. BIOL: Vctor
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Est demostrado que la desaparicin de fenantreno y fluoranteno en suelos se acelera por la presencia de lombrices del tipo Lumbricus rubellus (Ma et al., 1995). Belfroid et al. (1995) reportaron que compuestos del tipo PCBs (Bifenilos policlorados) son asimilados por lombrices de E. andrei, despus de la exposicin alimenticia a pesar de su gran tamao molecular y que un aumento en la concentracin de dichos compuestos en el alimento, resulta en un aumento proporcional en la concentracin en las lombrices. La capacidad de un nmero de especies poliquetes y oligoquetos para metabolizar en vivo una variedad de xenobiticos, incluyendo hidrocarburos policclicos aromticos (HPAs) y aromticos clorados, sugieren que sistemas de citocromo P-450 son activos en este grupo de anlidos, los cuales pudieran facilitar la eliminacin de estos compuestos de la lombriz (Lee, 1985), en el Tabla 7 se muestran algunos estudios que demuestran la capacidad enzimtica de las lombrices para vivir en presencia de hidrocarburos y otros compuestos xenobiticos.
Tabla 7. Efecto de diversos hidrocarburos sobre la lombriz.
Especie
E. fetida Lumbricus terrestris E. fetida E. fetida Lumbricus rubellus E. andrei E. fetida
Contaminante
Petrleo crudo Petrleo crudo Antraceno, criseno, pireno y benzo(a)pireno Fenantreno, pireno y criseno Fenantreno y fluoranteno Hexabromobenceno y octacloronaftaleno CClorobencenos
Observaciones
Tolera y sobrevive a 1.5% de petrleo Es muy sensible no tolera 0.5% Asimilacin mayor en suelos con poca materia orgnica Asimila compuestos que no son disponibles por extraccin soxhlet Mayor bioacumulacin bajo estrs nutricional Mayor asimilacin y con mayor contaminante en tejidos y una lenta aliminacin La eliminacin aumenta con materia orgnica
Referencia
Safwat et al., 2002 Safwat et al., 2002 Tang et al., 2002 Liste y Alexander, 2002 Wei-Chun et al., 1995 Belfroid et al., 1995 Belfroid y Sijm, 1998
1.3.3.
Factores que afectan la biorremocin de hidrocarburos en el suelo
En las superficies activas del suelo donde prevalecen las condiciones aerobias, la biodegradacin de estos compuestos es usualmente rpida y extensiva a condiciones de temperatura y humedad favorables. Sin embargo, son muchas las limitantes para que el proceso de biodegradacin se lleve a cabo de manera eficiente. Existen otros como los asfaltenos que mediante periodos prolongados de Alumno: Ramiro Snchez Sols. Villegas SEMESTRE 6 D. BIOL: Vctor
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tiempo pueden se biodegradados en solo un 5 al 35% (Pineda and Mesta-Howard, 2001). El estado fsico de los HTPs determina el rea superficial inicial donde puede comenzar la biodegradacin, un incremento en el rea superficial correlaciona positivamente con la biodegradacin. Las variables ms importantes que limitan la biorremocin de Hidrocarburos Totales del Petrleo (HTPs) son: la biodisponibilidad, la transferencia de masa, las heterogeneidades espaciales y las prdidas abiticas. Dada la baja solubilidad de estos compuestos en agua, una de las estrategias para la biorremediacin en suelo es la adicin de surfactantes naturales o sintticos, que solubilicen a los HTPs y aumenten su biodisponibilidad (Ghosh, 1997). La escasez de nutrientes, especialmente nitrgeno y fsforo limitan el crecimiento de microorganismos degradadores de hidrocarburos. Otros micronutrientes como el hierro o azufre tambin son indispensables aunque en pequeas cantidades para mejorar el proceso de remocin. En la Tabla 8 se resume algunos de los factores que son limitantes en el proceso de biodegradacin.
Tabla 8. Factores limitantes en la remocin de hidrocarburos totales del petrleo
Factor limitante Composicin de los hidrocarburos Estado fsico Potencial de agua agregados hidrofbicos Temperatura degradacin Oxidantes Nutrientes minerales Reaccin Microorganismos general se
Ejemplo s Estructura, cantidad, toxicidad

Agregacin, propagacin, dispersin, adsorcin Fuerza osmtica, exclusin de agua de Influencia en la evaporacin y velocidades de O2, NO3- o SO4= N, P, Fe Valores bajos de pH son limitantes Los microorganismos degradadores por lo encuentran en poca cantidad
1.3.3.1. Relacin Carbono Nitrgeno (C/N La transformacin del N orgnico a N disponible realizada por microorganismos est influenciada por la relacin C/N de la sustancia agregada al suelo. Si la relacin C/N es menor que 20 la Alumno: Ramiro Snchez Sols. Villegas SEMESTRE 6 D. BIOL: Vctor
transformacin orgnica ocurre y se libera al suelo N disponible para las plantas. Sin embargo, si la
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relacin C/N es mayor que 30 el desbalance debido al exceso de carbono impide que la transformacin ocurra, a no ser que exista N disponible en el suelo que pueda ser usado por los microorganismos. El resultado neto es una disminucin o inmovilizacin del N disponible del suelo. Para relacin es C/N entre 20 y 30 puede no ocurrir ni liberacin ni inmovilizacin de N disponible (Tisdale, et al., 1993). La descomposicin de la materia orgnica es llevada a cabo por los organismos vivos, los cuales utilizan el carbn como fuente de energa y el nitrgeno para construir su estructura. Mas nitrgeno que carbono es necesario, pero si el exceso de carbono es muy grande, la descomposicin decrece cuando el nitrgeno es empleado y algunos microorganismos mueren, el nitrgeno almacenado es entonces utilizado por otros microorganismos para formar nuevo material celular, y en el proceso ms carbono es empleado. As la cantidad de carbono es reducida a un nivel ms accesible mientras que el nitrgeno es reciclado (Gotaas, 1956). Los microorganismos utilizan cerca de 30 partes de carbono por cada parte de nitrgeno, una relacin C/N de 30 (en cantidades disponibles), por lo que esta relacin parecera ser la ms favorable para la descomposicin de la materia orgnica. El nitrgeno es ms difcil de conservar que el fsforo, potasio, y los micronutrientes los cuales, de acuerdo a su condicin qumica en la cual estn presentes, son perdidos solo por lixiviacin. El nitrgeno puede ser perdido por lixiviacin, pero la mayor prdida viene del escape de amonio u otros gases voltiles nitrogenados a la atmsfera (Gotaas, 1956). La prdida de nitrgeno como amoniaco durante la degradacin aerbia es afectada por la relacin C/N, el pH, el contenido de humedad, aireacin, temperatura, forma de los compuestos nitrogenados al inicio de la degradacin, y la capacidad adsorptiva y de capacidad de retencin de nitrgeno por la materia presente.
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El contenido de humedad de los proceso de degradacin afecta la conservacin del nitrgeno. El agua sirve como solvente y diluyente del amoniaco, de manera que reduce la presin de vapor y volatilizacin. Un contenido de humedad en el rango de 50 70%, asistir a la conservacin del nitrgeno. La aireacin y volteo afectan de manera adversa la conservacin de nitrgeno. Si el amoniaco est presente, ste escapar ms fcilmente cuando el material es mezclado y expuesto a la atmsfera. Aunque, si la relacin C/N es suficientemente alta la perdida de nitrgeno durante el mezclado ser baja (Gotaas, 1956). Algunos materiales como la celulosa y materia fibrosa porosa, tienen la capacidad de absorber o mantener la humedad y las sustancias voltiles, y disminuyen su tendencia a escapar. Existe evidencia considerable que los materiales de este tipo juegan una parte en la reduccin de las prdidas de nitrgeno.
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2. JUSTIFICACIN
La degradacin de hidrocarburos totales del petrleo (HTPs) intemperizados de suelos reales contaminados, es una prioridad mundial debido a su efecto txico sobre los seres vivos, es por esta razn que es de inters desarrollar tecnologas de remediacin efectivas y econmicamente viables. Las tecnologas de biorremediacin han demostrado ser eficientes y econmicas; sin embargo, pueden ser lentas y poco eficientes en la remocin de las fracciones ms recalcit rantes de los HTPs como son los asfaltenos e hidrocarburos policclicos aromticos (HPAs). Entre las principales limitaciones se encuentran la ausencia de nutrientes, la biodisponibilidad de los hidrocarburos y la diversidad de microorganismos hidrocarbonoclastas. La degradacin de estos hidrocarburos se puede llevar a cabo por procesos de co-metabolismo, donde participen microorganismos caractersticos de la transformacin de molculas aromticas como la lignina presente en residuos celulolticos y los microorganismos asociados a la flora intestinal de la lombriz. La desorcin de hidrocarburos de las partculas de suelo ha sido comnmente realizada a base de tensoactivos sintticos. Aunque, materiales tensoactivos de origen orgnico, tales como los biotensoactivos y cidos hmicos, son una opcin interesante. En lo que concierne a los cidos hmicos, molculas complejas que evolucionan en el curso del tiempo, existen reportes cientficos acerca de su poder tensoactivo y capacidad para incorporar estructuras aromticas en su molcula. En el presente trabajo se propuso evaluar el efecto de la presencia de lombrices (Eisenia andrei) y la adicin de cidos hmicos en forma de extracto de leonardita con el objetivo de reducir los tiempos de remediacin de suelos arcillosos contaminados.
3. HIPTESIS
Las propiedades fisicoqumicas de los cidos Hmicos; as como, la flora microbiana asociada al intestino de lombriz Eisenia andrei y su efecto mecnico sobre el suelo, permitirn reducir el tiempo de restauracin de un suelo contaminado. Se ha considerado que el lavado de suelo con cidos hmicos, reducir an ms el tiempo de restauracin del suelo contaminado. Alumno: Ramiro Snchez Sols. Villegas SEMESTRE 6 D. BIOL: Vctor
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4. OBJETIVOS 4.1. Objetivo general
Evaluar el efecto de la implementacin de una tecnologa en serie: lavado-fermentacin slida, enfocado a reducir los tiempos de restauracin de suelos altamente contaminados con hidrocarburos totales del petrleo (HTPs) e hidrocarburos policclicos aromticos (HPAs) intemperizados.
4.2.
4.2.1.
Objetivos especficos
Determinar la fuente de nitrgeno para bioestimular el suelo contaminado, en funcin de la sobrevivencia de la lombriz.
4.2.2.
Evaluar el efecto de la incorporacin de la lombriz (Eisenia andrei) con o sin alimento (bagacillo de caa), en el proceso de remocin de HTPs y HPAs del suelo contaminado en fermentacin slida.
4.2.3.
Evaluar el efecto de la adicin de cidos hmicos, en el proceso de remocin de HTPs y HPAs del suelo contaminado en fermentacin slida.
4.2.4.
Determinar el efecto y niveles de remocin de HTPs del suelo contaminado, mediante lavados con soluciones de cidos hmicos.
4.2.5.
Evaluar el efecto de biotratar el suelo contaminado lavado con cidos hmicos, en el proceso de remocin de HTPs y HPAs en fermentacin slida.
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5. MATERIALES Y MTODOS
5.1. Suelo Se utiliz un suelo proveniente del campo perteneciente a Pemex, ubicada en el municipio de cunduacan, Tabasco, localizada en la zona Norte del estado a, a una altura de 40 metros sobre el nivel del mar. La zona pertenece a la regin hidrolgica de la chontalpa que forma parte de las cuencas del ro Samaria. La zona se considera con un clima clido, una temperatura promedio de 24.2C, su precipitacin pluvial media anual es de 1,010mm y su humedad relativa vara entre 76 y 80%. El suelo se obtuvo mediante una serie de muestras que se tomaron desde una profundidad de 50 cm de diferentes puntos del sitio y posteriormente estas muestras se secaron y mezclaron entre s para tener una muestra representativa del suelo. El suelo fue homogenizado, triturado y cribado en malla 25 para su caracterizacin.
5.2. Bagacillo de caa Producto de desecho de un procesadora de azucar de la compaa Betha San miguel del estado de tabasco, previamente precomposteada. El bagacillo de caa fue homogenizado y triturado para su caracterizacin.
5.3. Vermicomposta
Producto de la vermicomposta de paja y estircol bovino previamente precomposteados. Proporcionada por el modulo de vermicompostaje del rea de microbiologa del Colegio de Postgraduados del Departamento de Edafologa. La vermicomposta fue homogenizada y cribada en malla 10 para su caracterizacin.
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5.4. Extracto de Leonardita (EL)
La leonardita son depsitos de un tipo de carbn suave usualmente encontrados en conjunto con depsitos de lignita. La leonardita es el producto final del proceso de humificacin a lo largo de 70 millones de aos aproximadamente. Se empleo el producto comercial Humintech Powhumus el cual es un acondicionador natural del suelo y bioestimulante de las plantas que contiene substancias hmicas naturales incluyendo, cidos hmicos y cidos polihidroxicarboxlicos derivados de Leonardita.
5.5. Lombriz
Eisenia andrei (Bouch 1972) con clitelio, proporcionada por la Dr. Maria del Carmen del Colegio de Postgraduados del programa de postgrado en Edafologa.
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5.6. Estrategia Experimental
La estrategia experimental estuvo dividida en seis etapas, como se indica en la Figura 8. El primer bloque comprende la caracterizacin fsica, qumica y biolgica del suelo, bagacillo de caa, vermicomposta y extracto de leonardita. Posteriormente se llev a cabo la seleccin de la fuente de nitrgeno para la fermentacin slida, en funcin de la sobrevivencia de la lombriz; as mismo, se establecieron las condiciones para el lavado de suelo empleando soluciones de cidos hmicos. Una vez seleccionada la fuente de nitrgeno, se llev a cabo la fermentacin slida del suelo, previo a su acondicionamiento de acuerdo a un diseo experimental indicado en la seccin 5.6.3.2. El suelo lavado, se acondicion en funcin al mejor tratamiento obtenido en la fermentacin slida. Los lixiviados fueron analizados para su posterior tratamiento.
Caracterizacin del suelo, bagacillo de caa, vermicomposta y leonardita
Seleccin de la fuente de nitrgeno Lavado de Suelo
Tratami ento de Lixiviados
Empleo de cidos hmicos Fermentacin Slida del Suelo
Fermentacin Slida del Suelo Lavado
Figura 8. Estrategia experimental para la remocin de HTPs del suelo de Poza Rica, V eracruz.
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5.6.1.
Caracterizacin del suelo contaminado, bagacillo de caa, extracto de leonardita y Vermicomposta
La caracterizacin de los elementos indicados anteriormente se llev a cabo empleando los mtodos analticos mostrados en la Tabla 9.
Tabla 9. Determinaciones analticas aplicadas a: el suelo, vermic omposta, leonardita y bagacillo de caa. Determinaci n Humedad Fsicas Capacidad de Retencin de Agua Densidad Unidades % % % Mtodo Gravimtrico Gravimtrico Gravimtrico Referencia AS-05* AS-06* AS-04* S VC EL BC
Materia orgnica Carbono total Carbono orgnico Qumicas Carbono inorgnico Nitrgeno Total Fsforo asimilable pH
% % % % % %
Oxidacin de la materia orgnica Oxidacin del carbono total Oxidacin del carbono orgnico Oxidacin del carbono inorgnico micro kjeldahl Extracci n del fsforo disponible Potenciomtrico
AS-07* TOC-Vcsn Shimadzu TOC-Vcsn Shimadzu TOC-Vcsn Shimadzu Fernndez, 2006 AS-10* AS-02*
cidos Hmicos cidos Flvicos
% %
Extracci n y asilami ento Extracci n y asilami ento Extraccin por sonicacin Extraccin
IHSS IHSS
HTP's Asfaltenos (Asf) H. Libres de Asfaltenos (HLA) H. Alifticos (HA) H. Aromticos (HAr) H. Policclicos Aromticos (HPA) Carbono de Biomasa Bacterias Actinomicetos Levaduras Biolgicas Bacterias hidrocarbonoclastas Levaduras hidrocarbonoclastas
mg/Kg de suelo mg/Kg de suelo
EPA 3550b ASTM D 656000 (2005)
% % %
Fraccionamiento Fraccionamiento Fraccionamiento
Fernndez, 2006 Fernndez, 2006 Fernndez, 2006
% UFC/g de muestra UFC/g de muestra UFC/g de muestra UFC/g de muestra UFC/g de muestra UFC/g de muestra
IrradiacinExtraccin Cuenta en placa Cuenta en placa Cuenta en placa Cuenta en placa Cuenta en placa Cuenta en placa
Islam y Weil 1998 Fernndez, 2006 Fernndez, 2006 Fernndez, 2006 Fernndez, 2006 Fernndez, 2006 Fernndez, 2006
Hongos hidrocarbonoclastas
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*NOM-021-S EMARNAT-2000, S Suelo, VC Vermi composta, EL Extracto de Leonardita, BC Bagacillo de caa
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5.6.2.
Seleccin de la fuente de nitrgeno y relacin C/N
La metodologa empleada se bas en las Normas de la Organisation for Economic Co-operation and Development (OECD) test guidelines for the testing of chemicals: Earthworm, acute toxicity tests (207) and Earthworm reproduction test (222). Se realizaron microcosmos con 100 gramos de suelo adicionado con Sulfato de Amonio como fuente de nitrgeno y Fosfato Monobsico de Potasio como fuente de fsforo, propuesta por diversos autores para propsitos de bioestimulacin de suelos contaminados (Atlas and Bartha, 1973; Espitia, 2002; Corona e Iturbide, 2005), hasta obtener una relacin C/N/P de 100/10/1 que corresponde a una relacin C/N 10. Se prob adems una relacin C/N/P de 100/4/1 que corresponde a una relacin C/N 25, con la finalidad de que no ocurra ni liberacin ni inmovilizacin de nitrgeno disponible (Tisdale, 1993). A cada microcosmo se le incorporaron 10 lombrices y la humedad se mantuvo a 60%.CRA-Suelo. El experimento se llev a cabo por duplicado.
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5.6.3.
Fermentacin slida del suelo contaminado
5.6.3.1. Dispositivo experimental En un contenedor de 504020 cm aprox., se elaboraron dos compartimientos de 203020 cm aprox. de malla 40 de plstico para retener el suelo del sistema y a las lombrices, alrededor de ellas se coloc unicel de una pulgada de ancho, con la finalidad adems de formar los dos tratamientos, de aislarlos del fro y mantener una temperatura entre 15 y 20C. Se colocaron piedras de mrmol en el fondo de las cajas con la finalidad de evitar anaerobiosis en el fondo de los tratamientos, permitir flujo de aire y evitar en lo posible que se formen colonias microbianas en la superficie de este soporte y que pudieran interferir con los resultados (Figura 9).
30cm 20cm 20cm
Figura 9. Dispositivo experimental para llevar a cabo la fermentacin slida del suelo.
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5.6.3.2. Diseo experimental factorial general
Un Diseo Experimental Factorial General (DEFG), se emple para evaluar los efectos de: Extracto de Leonardita (EL) a dos niveles: 0%/1%; la presencia de bagacillo de caa (BC) a dos niveles: 0%/6%; as como, la aplicacin y actividad de lombrices (L) a tres niveles: 0/20/40; en la remocin de HTPs (Fig 10). Los tratamientos control fueron: a) suelo al 60% CRA, b) suelo al 60% de la CRA y bioestimulado con vermicomposta (blanco del DEFG N/BC, N/EL,0) y c) Bioestimulacin con Sulfato de Amonio y Fosfato Monobsico de Potasio hasta una relacin C/N/P 100/4/1. Se realizaron blancos estriles de a b . y
Nmero de Lombrices 0 20 40
S/BC S/EL 0 S/BC N/EL 0 N/BC S/EL 0 N/BC N/EL 0 S/BC S/EL 20 S/BC N/EL 20 N/BC S/EL 20 N/BC N/EL 20 S/BC S/EL 40 S/BC N/EL 40 N/BC S/EL 40 N/BC N/EL 40
Figura 10. Diseo Experimental Factorial General (S Si/Presencia; N No/Ausencia)
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5.6.3.3. Acondicionamiento de los tratamientos Se colocaron cuatro kilogramos de suelo contaminado en un mezclador de 100 Kg de capacidad, marca Ortiz Conrado. Posteriormente dos litros de agua se adicionaron gradualmente hasta obtener una mezcla homognea con aproximadamente 60% de la capacidad de retencin de agua (CRA). Se adicion 250 g de bagacillo de caa (alimento para la lombriz, texturizante y fuente de microorganismos) cuando el tratamiento lo requera, este fue calculado de acuerdo al nmero mximo de lombrices por tratamiento (40 lombrices) y la cantidad de alimento ingerido por lombriz por da (anexo). Se mantuvo el pH en aproximadamente 7 y la temperatura del sistema alrededor de 20C. La humedad del suelo se mantuvo y monitore semanalmente empleando un medidor del contenido volumtrico de agua presente en el suelo TDR 200 Fieldscout de Spectrum Technologies. Cada semana se mezcl de forma manual todo el tratamiento, con la finalidad de homogenizar e incorporar aire al sistema. Los tratamientos fueron analizados peridicamente para determinar remocin de HTPs, produccin de cidos hmicos (AH), crecimiento microbiano como carbono de biomasa (Cb) y unidades formadoras de colonias (UFC). As mismo, se llev a cabo el fraccionamiento de los hidrocarburos al inicio y al final del tratamiento, para ser analizarlos mediante cromatografa de gases.
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5.6.4.
Lavado de suelo con substancias hmicas
5.6.4.1. Diseo experimental factorial completo Un Diseo Experimental Factorial Completo (DEFC) fue empleado para evaluar los efectos de la relacin EL(Extracto de Leonardita)/Agua/Suelo en la remocin de HTPs. Con la finalidad de elegir las mejores condiciones de remocin de HTPs en el lavado estas 3 variables independientes fueron consideradas a 3 niveles, que de acuerdo a los Diseos Factoriales corresponde a un diseo 3 3. La Tabla 10 resume el diseo factorial.
Tabla 10. Factores y niveles usados en el diseo factorial 3 3
Factores
Rango de los Niveles -1 0 1 X1 Extracto de Leonardita (g) 0.1 1 10 X2 Suelo (g) 5 10 15 X3 Agua (ml) 50 100 150
Cada tratamiento fue diseado de la siguiente manera: En frascos de 200 ml se adicionaron los componentes EL, suelo y agua de acuerdo al DEFC de la Tabla 10. A continuacin se llev a cabo el lavado, mediante agitacin orbital a 200 rpm durante 24 horas. Despus la mezcla se centrifug a 10 000 rpm durante 10 min. El suelo lavado (precipitado) se sec a 40C durante 24 horas. Por ltimo se cuantific HTPs residuales y extrados, del suelo lavado y el lixiviado respectivamente; empleando el mtodo EPA 3550b.
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5.6.5.
Fermentacin slida del suelo lavado
5.6.5.1. Acondicionamiento del suelo lavado
Cuatro kilogramos de suelo fueron lavados bajo las mejores condiciones determinadas en la seccin 5.6.4.1. El suelo se seco, tritur, homogeniz y se acondicion como se describi en la seccin 5.6.3.3. A continuacin se adicion o no BC, EL y lombrices en funcin del mejor tratamiento obtenido del DEFG de la seccin 5.6.3.2.
5.6.6.
Lixiviado
Al lixiviado obtenido se le analizara el contenido de HTPs, para poder tratarlo posteriormente.
5.6.7.
Anlisis estadstico
La evaluacin de los resultados de los diseos experimentales del ensayo de remocin de hidrocarburos del suelo contaminado en cultivo slido, as como; el lavado de suelo contaminado con soluciones de cidos hmicos; se realiz mediante Design Expert (versin 6.0) con un nivel de significancia del 95% (p<0.05).
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6. CONCLUSIONES
Caracterizacin de los materiales
Todos los materiales empleados presentaron crecimiento microbiano hidrocarbonoclasta, lo cual indica que cada material puedo contribuir a la remocin de HTPs del suelo contaminado.
Seleccin de la fuente de nitrgeno La lombriz Eisenia andrei, no sobrevive a la relacin C/N: 10 25, adicionando sulfato de amonio, nitrato de sodio, nitrato de potasio o urea, como fuente de nitrgeno, propuesta para la remocin de hidrocarburos de este suelo. Fermentacin slida del suelo Se obtuvo un 63% de remocin de HTPs con el tratamiento adicionado con BC, EL y 40 lombrices, en un periodo no mayor a 3 meses. Se removieron los hidrocarburos alifticos en un 85.5%, los policclicos aromticos en un 78.4%, los saturados en un 73.2%y los asfaltenos en un 35.8%; con el tratamiento adicionado con BC, EL y 40 lombrices. El empleo de VC como bioestimulante, permite una remocin del 23% de HTPs. La presencia de Bagacillo de caa y Extracto de Leonardita en los tratamientos, mejora la remocin de hidrocarburos e incrementa la actividad de la flora microbiana. Los niveles de remocin de hidrocarburos se ven favorecidos ante la presencia de la lombriz y mejora con el nmero de individuos presentes en presencia de alimento.
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Lavado de suelo con cidos hmicos
Se removi un 35.7% de HTPs mediante el proceso del lavado con cidos hmicos (Con una concentracin de 2g/L de Extracto de Leonardita), 65% del total de hidrocarburos extrables del suelo.
Fermentacin slida del suelo lavado
Se obtuvo un 47% de remocin de HTPs con el tratamiento adicionado con BC, EL y 40 lombrices, en un periodo no mayor a 3 meses.
Se removieron los hidrocarburos alifticos en un 69.9%, los policclicos aromticos en un 64.3%, los saturados en un 52.6%y los asfaltenos en un 15.7%; con el tratamiento adicionado con BC, EL y 40 lombrices.
La velocidad de remocin de HTPs se ve seriamente afectada por el proceso de lavado,, siendo 10 veces menor que el mejor biotratamiento de suelo sin lavar, bajo las mismas condiciones.
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http://www.epa.gov/tio/remed.htm. http://www.bp.com http://www.frtr.gov/matrix2/top_page.html
6
LICENCIATURA: CATEDRTICO: ATERIA: Seminario de investigacin contaminado
INGENIERA QUMICA PETROLERA. Bilogo: Vctor Villegas UNIVERSIDAD POPULAR DE LA CHONTALPA. M TRABAJO: Biorremediacion de suelo
Alumno: Ramiro Snchez Sols. BIOL: Vctor Villegas
SEMESTRE 6 D.

Biorremediacion de Un Suelo Contaminado Con Hidrocarburos Empleando Acidos Humicos y Lombrices

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H. Crdenas Tabasco. Diciembre de 2012

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Alumno: Ramiro Snchez Sols. Villegas

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123 124 131

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SHs AHs M.O.S. HPAs HTPs S EL BC VC CRA

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Figura 1. Columna de suelo y la organizacin de sus diferentes horizontes.

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Figura 2. Componentes principales de los agregados del suelo.

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Componentes del suelo

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Figura 3. Propiedades fisicoqumicas de las substancias hmicas (SH), Stevenson

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Bacterias reductoras de humus

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Propiedades detergentes de las Substancias Hmicas

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