SeBIOENSAYO CL TOXICIDAD EN ARTEMIA SALINA L.

determin la DE y Pr de etanol, nitrato de plata, cloruro de potasio, agua de De Los Santos Hernndez Rocio, Daz Lpez Alejandra, Granda Abstract Lucia, Guzmn Gasca Alma CL50 is Pr was determined Alvarado Ma. Guadalupe y Rulfo pilas, tiocianato de potasio, Beltrn Alma Jessyca. Gripo 2601 Eq: 5 acetato de plomo, nicotina, ethanol, silver nitrate, dicromato de potasio y potassium chloride, water, cloruro de mercurio en el dry batteries, potassium crustceo Artemia salina L. thiocyanate, lead acetate, mediante un bioensayo de nicotine, potassium toxicidad. Primero se realiz dichromate and mercuric la incubacin de los chloride in the crustacean huevecillos del animal de Artemia salina L. by a experimentacin, bioassay of toxicity. First colocndolo a las performed the incubation of condiciones adecuadas de eggs of experimental aereacin y luz y se esper animals, placing it to the al desolve. Una vez appropriate conditions of teniendo los nauplios aeration and light and was (Artemias jvenes) se expected to desolve. Once administraron having the nauplii (Artemia concentraciones del 1 al young) were administered 10% de las sustancias concentrations of 1 to 10% mencionadas en tubos de of the substances ensaye que contenan un mentioned in test tubes volumen especfico de agua containing a specific volume de mar artificial y una of artificial seawater and a cantidad de nauplios por number of nauplii per tube. tubo. Despus de 120 After 120 minutes, carried minutos se procedi a out a count of Artemia were realizar un conteo de las killed and total per tube, so Artemias que murieron y del was determined by the total por tubo, de esta graphical method the LC50 INTRODUCCIN Y MARCO TERICO forma se determino for each substance in the mediante el mtodo grfico hoy da una parte muy importante dentro Artemia salina using as Los estudios de toxicidad constituyen la CL50 para cada frmaco mercuric chloride. del desarrollo de un nuevosustancia y se extienden prcticamente a lo largo de todo el en mismo. El objetivo de los mismos es evaluar el riesgo o peligro la Artemia salina potencial que un como referencial o fsico puede ocasionar sobre la salud agente qumico utilizando humanael cloruro de mercurio. cuando es objeto de exposiciones agudas o crnicas". Y no se limitan slo a los frmacos sino que la mayor parte de las sustancias qumicas industriales (pesticidas, agroqumicos, cosmticos, plsticos, etc.) son objeto de estudios de toxicidad iguales o ms complejos que los realizados con los nuevos frmacos. Podra definirse la toxicidad como "el estudio cualitativo y cuantitativo de los efectos deletreos ocasionados por agentes qumicos o fsicos sobre la estructura y funcin de los sistemas vivos y la aplicacin de estos estudios para la evaluacin de la seguridad y la prevencin de daos al hombre y a las formas de vida tiles" (Hayes, 1975). El trmino cualitativo se refiere al tipo de rgano diana afectado, en comparacin con otras sustancias conocidas, mientras que el trmino cuantitativo se refiere a la relacin dosis-respuesta.
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Resumen

En este sentido, muchas veces es difcil separar efecto txico de efecto farmacolgico. Ya en el siglo XVI, Paracelso afirmaba que "todas las sustancias son txicas y ninguna sustancia es txica. Slo la dosis determina la toxicidad". Otro propsito de las pruebas de toxicidad es obtener informacin til para lograr la proteccin de los organismos acuticos de una especie determinada o, de todas las comunidades que integran la biota de un ecosistema, de los peligros ocasionados por las substancias peligrosas arrojadas al ambiente por el hombre. En el caso de peces, cuando el txico se encuentra disuelto en el agua, en lugar de la dosis se reporta la concentracin del txico en el agua y, esta es la variable contra la cual se grfica la respuesta txica. A las exposiciones a concentraciones que producen la muerte en 96 horas o menos se les denomina exposiciones agudas, mientras que las exposiciones de mayor duracin a concentraciones subletales se les denomina exposiciones crnicas. La duracin de estas exposiciones crnicas experimentales puede ser por un perodo del desarrollo, pueden ser vitalicias o extenderse por perodos de ms de una generacin. En el caso de los estudios de toxicidad aguda, la respuesta que se mide es la muerte de los individuos en estudio. La mayora de los estudios de toxicidad aguda en peces reportan los resultados calculando la CL50, que es la concentracin que resulta letal para el 50% de los peces expuestos durante un perodo especificado. Antes de las letras CL se acostumbra escribir la duracin de la exposicin expresada en horas. A las concentraciones del txico que estn por abajo de las respuestas subletales se les denomina nivel de no efecto. A la CL50 se le llama concentracin letal y las concentraciones mayores a la CL50 se dice que forman el rango letal. El tiempo de resistencia se define como la mediana del tiempo letal, LT50, el cual se refiere al tiempo de exposicin que es necesario para que muera la mitad de los individuos en las condiciones de experimentacin. En estudios fisiolgicos y en exposiciones crnicas se miden otras respuestas diferentes que la muerte. Se pueden medir la velocidad de ciertas funciones y la concentracin de metabolitos. Por ejemplo: la tasa de respiracin, la velocidad de nado, la tasa de consumo de oxgeno, la concentracin de electrolitos o de glucosa en suero, el nivel de glutatin heptico, etc. Tambin se miden los niveles de algunas enzimas. OBJETIVO Determinar la CE50 y la potencia relativa de la nicotina por medio del bioensayo en Artemia salina L. para determinar el grado de toxicidad de sta en el sistema de prueba. HIPTESIS Se espera que la sustancia ms toxica sea el cloruro de mercurio, acetato de plomo, Tiocianato de plomo, nitrato de plata, Tiocianato de potasio, dicromato de potasio, cloruro de potasio y etanol. En orden decreciente. METODOLOGA Material biolgico

Huevecillos lofilizados de Artemia salina L. Cristalera y equipo Pecera de vidrio de 2 L Tubos de ensaye Pipetas pasteur con bulbo Jeringas de 1 ml Foco sumergible de 5W Termmetro Pcera de 500 ml Matraz erlenmeyer de 1 L Vaso de precipitados de 100, 500 ml Pipetas graduadas Gradilla Aereador con manguera y filtro Reactivos Etanol Nitrato de plata Cloruro de potasio Agua de pila Tiocianato de potasio Acetato de plomo Procedimiento Para la incubacin de los huevecillos se arm el dispositivo de incubacin, se prepar 1 L de agua de mar artificial pesando 30 g de sal marina y disolviendo en 1 L de agua, se adicion una gota de anticloro y se dej reposar durante 5 minutos. De la solucin anterior se colocaron 300 ml en la pecera de incubacin y se coloc una cantidad de agua corriente en la pecera mayor, a una temperatura de 26 C y se permiti que ambas peceras alcanzaran el equilibrio, se conectaron los dispositivos de luz y aereacin y se adicionaron aproximadamente 10g de huevecillos en la zona oscura de la pecera de incubacin y se dej incubar por ms de 48 horas. Para la preparacin de las muestras se utilizaron los siguientes volmenes: Co muestr a (mg/m L) 0 1 Vol de disolucin nicotina (mL) Vol de agua de mar artificial (mL)

0 0.2

2.0 1.8

2 0.4 1.6 3 0.6 1.4 4 0.8 1.2 Etanol 5 1.0 1.0 Concentracin Log Probabilid 6 1.2 0.8 Co ad (p) 1.4 (g/mL) 7 0.6 0 0.07 1.6 80 0.4 2 0.30 0.025 1.8 9 0.2 10 10 2.0 0 4 0.60 0.08 20 Para la realizacin del bioensayo se coloc el 6 0.77 0.5 volumen de disolucin de prueba en cada 81 tubo de ensaye marcado y Artemias por 8 0.90 0 cada tubo. Se coloc el volumen de agua de 30 mar artificial indicado en la tabla y se 10 1 0 observ el movimiento de los organismos 12 1.07 0 por un periodo de 120 minutos. Al trmino 9 del periodo de observacin se contaron los 14 1.14 0 nauplios que sobrevivieron tomado en 6 cuenta que los nauplios que presentaron 16 1.20 0.4 movimiento, aunque fuera mnimo se 4 consideran como vivos y los inmviles se 18 1.25 0 consideran muertos. 52 20 1.30 0 10

RESULTADOS

Nitrato de plata Concentracin (g/mL) 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20

Log Probabilid Co ad (p) 0 0 0.30 0.33 10 0.60 0.375 20 0.77 0.375 81 0.90 0.833 30 1 0.666 1.07 0 9 1.14 0.833 6 1.20 0 4 1.25 0 52 1.30 0 10

Cloruro de potasio Concentracin (g/mL) 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20

Log Probabilid Co ad (p) 0 0 0.30 0.5 10 0.60 0.6 20 0.77 0.9 81 0.90 0.8 30 1 1 1.07 1 9 1.14 1 6 1.20 1 4 1.25 0 52 1.30 0 10

Agua de pila Concentracin (g/mL) 0 2 4 6 8 10 12 Tiocianato de 14 potasio Concentracin 16 (g/mL) 0 18 2 20 4 6 8 10 12 14 16 18 20

Log Probabilid Co ad (p) 0 0 0.30 0 10 0.60 0 20 0.77 0 81 0.90 0 30 1 0.5 1.07 0.1 9 1.14 0.25 6 Log Probabilid 1.20 1 Co ad (p) 4 0 1 1.25 1 0.30 0.83 52 10 1.30 1 0.60 1 10 20 0.77 0.6 81 0.90 0.16 30 1 0 1.07 0 9 1.14 0 6 1.20 0 4 1.25 0 52 1.30 0 10

Acetato de plomo Concentracin (g/mL) 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20

Log Probabilid Co ad (p) 0 0.14 0.30 10 0.33 0.60 20 0.125 0.77 81 0.14 0.90 30 0.16 1 0 1.07 9 0.33 1.14 6 0 1.20 4 0 1.25 52 0.875 1.30 10 1

Nicotina Concentracin (g/mL) 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20

Log Probabilid Co ad (p) 0 0 0.30 10 0 0.60 20 0.14 0.77 81 0.25 0.90 30 0.125 1 0.125 1.07 9 0.25 1.14 6 0.22 1.20 4 0.22 1.25 52 0.25 1.30 10 0.33

Dicromato de potasio Concentracin (g/mL) 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20

Log Probabilid Co ad (p) 0 0 0.30 10 0 0.60 20 0.6 0.77 81 0.83 0.90 30 0.7 1 1 1.07 9 1 1.14 6 1 1.20 4 1 1.25 52 1 1.30 10 1

Cloruro de mercurio (std) Concentracin (g/mL) 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20

Log Probabilid Co ad (p) 0 0 0.30 10 0 0.60 20 0 0.77 81 0 0.90 30 0.16 1 0.42 1.07 9 0.57 1.14 6 0.83 1.20 4 1 1.25 52 1 1.30 10 1

Cloruro de mercurio ANLISIS DE RESULTADOS

25.11

Como se puede observar en la tabla anterior todas las sustancias salieron con una Pr menor a 1, lo cual indica que todas las sustancias son ms toxicas que la estndar. La sustancia en la cual se necesita una dosis menor para ser letal es el cloruro de potasio que corresponde a 1.995g/mL adems de tener el valor de Pr menor y el que necesita ms dosis pare ser letal a comparacin con el estndar en el acetato de plomo. CONCLUSIONES La sustancia ms toxica es el cloruro de potasio ya que se necesita menores dosis de este reactivo para que se manifieste el efecto letal en la artemia salina, tal vez porque afecte algunas de sus funciones ya que el agua de mar contine grandes cantidades de sal (NaCl).