Practica coproparasitoscopico Directo Kato Faust Willis Ritchie Conati Amiba en fresco Copas Stoll

Objetivo
Aprender a realizar todos los mtodos ms utilizados en un laboratorio. Tambin que se identifiquen los huevecillos, larvas, quistes y trofozoitos de los parsitos a observar.

Introduccin
Las parasitosis intestinales pueden sospecharse por la presencia de sintomatologa y datos epidemiolgicos, pero la nica forma de confirmar el diagnstico es la demostracin del parsito en cualquiera de sus formas evolutivas: diagnstico parasitolgico. El diagnstico parasitolgico se fundamenta en el conocimiento de la biologa del parsito: hbitat, ciclo evolutivo, lo que permite tomar la muestra biolgica y la tcnica de laboratorio adecuada. El examen parasitolgico de las heces: coproparasitologia, tiene como objetivo diagnosticar los parsitos intestinales. Se han descrito muchas tcnicas de examen de heces, algunas de ellas son de utilidad general, mientras que otras slo sirven en casos muy concretos, de modo que se elige la ms adecuada para un determinado tipo de muestra o para la deteccin de un determinado parsito. La consistencia de una muestra de heces es de gran importancia, indicando el tipo de organismo que puede contener. A de examinarse toda la superficie de la muestra en busca de parsitos macroscpicos. Con frecuencia pueden verse los oxiuros en la superficie de la muestra de heces, del mismo modo que las progltides. El examen inmediato de las heces completamente formes no es tan importante, pero han de mantenerse refrigeradas. La efectividad de la tcnica depende de varios factores: sensibilidad, especificidad, calidad de los equipos y reactivos utilizados, adecuada ejecucin y experiencia del operador.

Mtodo Directo
Material y equipo Microscopio ptico Portaobjetos Cubreobjetos Gotero con agua Aplicador Material Biolgico Materia Fecal

Reactivos Yodo Lugol

Tcnica

Con un aplicador se toma un poco de materia fecal y se coloca en un portaobjetos agregndole una gota de yodo lugol se mezcla perfectamente y posteriormente se le coloca un cubreobjetos y se lee a microscopio.

Mtodo de Kato
Material y equipo Microscopio ptico Portaobjetos Aplicador Cuadros de papel celofn Material Biolgico Materia Fecal Reactivos Solucin verde de malaquita

Tcnica
Se pone un da antes de la practica cuadros de papel celofn en la sustancia verde de malakita.

Ya en prctica se hace un frotis un poco grueso de materia fecal y se le coloca un cuadro de papel celofn con la sustancia antes mencionada y se deja reposar durante una hora.

Posteriormente se lee a microscopio y el total de huevos observados en la preparacin se multiplica por un producto constante de 20, el resultado se expresa en huevos por gramo de heces fecales (h/mg/h) y ese es el valor a reportar.

Mtodo de concentracin por centrifugacin y flotacin (Faust)

Este mtodo se utiliza solucin de Zn, cuya densidad especfica es de 1.180 (33%), que conforma un medio de densidad ms alta que la de los huevos: Necator 1.055, Tricocfalo 1.150, Ascaris frtil 1.110 y facilita que los huevos livianos de estos helmintos, con menor peso especfico que la solucin, se concentren y floten.

Material y equipo Microscopio ptico Tubo de ensayo

Vaso de precipitado de 50ml Gasas Embudo Gradilla Portas y cubreobjetos Asa Bacteriolgica Pipeta pasteur Agitador Material Biolgico Materia Fecal Reactivos Sulfato de Zinc

Tcnica
Se hace una suspensin homognea con 1gr de materia fecal y 10ml de agua en el vaso de precipitado.

Se filtra la suspensin a travs de la gasa colocada en el embudo, recolectndola en el tubo.

Se centrifuga el tubo a 2000 r.p.m. durante 1 min.

Se decanta el sobrenadante y se suspende el sedimento con agua, agitndolo. Se centrifuga constantemente repitiendo la misma operacin hasta que el sobrenadante se observe claro.

Se decanta el ltimo sobrenadante, se agregan 3ml de Sulfato de Zinc, se agita hasta resuspender todo el sedimento, y se centrifuga a 2000 r.p.m.

durante 1 min.

Con el asa se recoge la muestra de la pelcula superficial de la parte superior en dos o tres veces y se deposita en el portaobjetos, se aade una gota de yodo lugol y se le coloca un cubre objetos, finalmente se observa a microscopio.

Mtodo de concentracin por sedimentacin (Willis)

Recomendado especialmente para la investigacin de Geo-helmintos. Consiste en preparar el material fecal con Solucin saturada de ClNa. Los Huevos de helmintos de peso especfico menor que la solucin saturada de ClNa tienden a subir y adherirse a una lmina colocada en contacto con la superficie del lquido

Material y equipo Microscopio ptico Vaso de precipitado de 50ml Gradilla Portas y cubreobjetos Agitador Vaso de 20ml Material Biolgico Materia Fecal Reactivos Solucin saturada de cloruro de sodio Yodo lugol

Tcnica
Se toma 2gr aproximadamente de materia fecal. Se coloca la muestra en un tubo y se mezcla con la solucin saturada de ClNa hasta el tope del mismo.

Se coloca un cubreobjetos sobre la boquilla de tubo de tal manera que quede en contacto con la suspensin y se deja reposar durante 15 min.

Despus de ese tiempo, se toma el cubre objetos y se coloca en un porta el cual contiene ya una gota de lugol previamente puesta. Se observa a microscopio.

Mtodo de concentracin por sedimentacin (ritchie)

Es un mtodo de concentracin fecal muy parecido al de Faust, solo que esta vez se sedimentar en el fondo nuestra materia fecal a examinar, y es til para encontrar huevecillos, quistes y trofozoitos muy pesados. Material y equipo Microscopio ptico Cubre objetos Porta objetos Pipetas Pasteur Vaso de precipitados Agitador Tubos de ensayo Centrifugadora Embudo Gradilla Pipeta de 10ml Material Biolgico Materia Fecal Reactivos Solucin Salina Formaldehdo al 10% Yodo lugol ter Etlico

Tcnica
Se pesan 1g de materia fecal y se hace una mezcla homognea, en un vaso de precipitados con 10ml de solucin salina.

Se hace pasar a travs de un embudo (con una gasa) a un tubo de ensayo.

Se centrifugan los tubos a 2000 R.P.M. durante 1 min. y se decanta el sobrenadante, se resuspende en solucin salina y se vuelve a centrifugar hasta que el lquido sea transparente.

Se decanta nuevamente y esta vez se le agregan 10ml de formaldehdo al 10% y se homogeniza, se deja reposar durante 10 min.

Se aaden despus 5ml de ter se tapan los tubos y se agitan durante 30 seg. Se centrifugan a 1500 r.p.m.

Despus de centrifugar se observan 4 capas.

Se introduce la pipeta pasteur hasta la capa de sedimento en el fondo del tubo para extraer una gota de sedimento y colocarla en un porta. Se aade una gota de yodo lugol y se le coloca un cubre. Se observa a microscopio a 10x y 40x

Mtodo de conatin
Es un procedimiento de concentracin de aclaracin y tincin, que permite teir al quiste, aclarar y colorear el contenido de 4 esporozoitos permitiendo una observacin clara.

Material y equipo Microscopio ptico Porta objetos Tubos de ensayo Centrifugadora Gradilla Mechero Frasco gotero Incubadora

Material Biolgico Sedimento de materia fecal obtenido por el mtodo de ritchie

Reactivos Solucin Isotnica de Cloruro de sodio Hidrxido de sodio .2 normal Metanol Carbol -Fusina Bsica Acido sulfrico al 10% Verde brillante al 1%

Tcnica
Colocar el sedimento obtenido a partir del mtodo de ritchie y aforar a 1 ml con agua destilada. Agregar a este sedimento 3ml de hidrxido de sodio .2 normal y se agita.

Incubar a 37 durante 30 min. y se centrifuga a 2000 r.p.m. durante 1 min.

Lavar 2 veces con solucin salina isotnica y centrifugar a 2000 r.p.m. durante 1 min.

Con el sedimento se realiza un frotis y este es teido con la Tcnica de Kinyou Tincin de Kinyou El frotis se deja secar al aire y se fija con el etanol hasta la evaporacin. Se pasa ligeramente por la flama.

Se tie con carbol- fusina por 3 min. despues se decolora con acido sulfiurico al 10% y se contrasta con la sustancia verde brillante al 1% durante 30 seg.Se lava y se observa a 100x.

MTODO DE AMIBA EN FRESCO:

Es un mtodo, sencillo de realizar y que nos ayudar en la bsqueda de protozoarios, as como sus quistes y trofozoitos. Material y equipo Microscopio ptico Cubre objetos Porta objetos Pipetas Pasteur Vaso de precipitados Tubos de ensayo Pinza para tubo Mechero Tela de alambre Tripie Termmetro Material Biolgico

Materia fecal

Reactivos Yodo lugol

Tcnica
Se colocan aproximadamente 1g de materia fecal dentro de un tubo de ensayo agradndole solucin salina

Se le agrega agua al vaso de precipitados y se calienta con el mechero, se deja de calentar hasta que tenga una temperatura de 37 C. Se coloca el tubo tapado dentro del vaso de precipitados con ayuda de las pinzas, evitando y se deja reposar 5 minutos.

Se le agrega 1 gota de lugol y se observar a microscopio a 10X y 40X.

MTODO DE SEDIMENTACIN SIMPLE EN COPAS:

Material y equipo Microscopio ptico Cubre objetos Porta objetos Pipetas Pasteur Vaso de precipitados Tubos de ensayo Gasa Embudo

Material Biolgico Materia fecal Reactivos Solucin de detergente Solucin verde de malakita

PREPARACIN DE SOLUCIONES: Solucin de detergente: se pesan 5gr. de detergente y se disuelven en100ml de agua de grifo. Solucin verde de malakita: se pesa 1gr de verde de malakita y se disuelve en 100 ml de agua de grifo.

Tcnica:
Se homogeniza la materia fecal con agua de la llave

se hace pasar a travs de la gasa colocada en un embudo colocado en el tubo de ensayo.

Enseguida se colocan 5 ml de verde de malkita, se agita y se le agregan 5ml de detergente de solucin y se agita nuevamente. Finalmente se deja reposar 15 min. Se decanta el sobrenadante y se le agrega agua, se deja reposar otros 15 min.

Con la pipeta pasteur se toma una gota o dos de sedimento y se observa a microscopio a 10x y 40x.

MTODO DE DISOLUCIN STOLL:

Material y equipo Microscopio ptico Cubre objetos Porta objetos Agitador Vaso de precipitados Pipeta graduada 100ml Perlas de vidrio (canicas) Pipeta de Stoll de 1 a 2 ml Graduada en 0.01 Material Biolgico Materia fecal Reactivos Hidrxido de sodio .1 normal

PREPARACIN DE SOLUCIN:

Hidrxido de sodio .1 normal: se disuelven 4gr. de hidrxido de sodio en una pequea cantidad de agua, en un matraz volumtrico de 1l. luego se completa a 1000.

Tcnica:
Se llena en la probeta graduada de 100 ml con 56 ml de hidrxido de sodio 0.1 N.Con la varilla de vidrio se agrega las materia fecal hasta elevar el nivel del liquido a 60 ml.

Se aaden 15 o 20 perlas de vidrio, se tapa con firmeza y se agita de 1 a 2 min. hasta crear una mezcla homognea. Puede ser necesario que las heces duras se dejen reposar un poco de tiempo.

Cuando las heces estn disueltas por completo, se toman 0.15ml del centro de la suspensin o 0.075 ml de la suspensin y se colocan en un portaobjetos y con aumento de 10x se cuentan los huevos de toda la suspensin.

El numero de huevos y larvas contados se multiplican por 100 si la materia fecal es dura, 200 si la materia fecal es mas liquida. el resultado se expresa, huevos o larvas por ml de heces (huevos/ml/h)

Guia de parasitos Protozoarios

E. HISTOLITICA Cuando esta maduro el quiste mide De 12 a 15 m, es esfrico y Presenta de 4- 6 nucleos. E. COLI. Mide entre 15 y 25m y presenta 8 nucleos.

ENDOLIMAX NANA Mide entre 6 y 8 m de forma Esfrica u oval, tiene 4 nucleos.

LODAMOEBA BUTSCHLII La forma varia de esfrica a ovalada, mide de 5 16m el quiste presenta una vacuola de glicgeno en el citoplasma.

Giardialambia
Quiste de forma ovoide o elipsoide mide entre 8 y 19 um cuando esta madura tiene 4 ncleos. La pared qustica es lisa e incolora

Trichomona vaginalis

De forma periforme mide de 7 y 23 um de longitud por 12 um de ancho, presenta 4 flagelos anteriores un quinto sobre la membrana ondulante tiene un solo ncleo

Nematodos (gusanos redondos)

scaris lumbriocoide Mide unas 50 a 60 um por 20 a 40 um posee una doble cubierta trasparentes, con una cara plana y una convexa

Trichuris trichura El huevo tiene forma de barril con aspecto ovoide, con dos polos con tapones mucosos, mide 50 a 60 por 25 a 35um.

Uncinarias La forma infectante es una larva filarforme, su va de infeccin es por piel, principalmente por la planta de los pies

Cestodos (gusanos segmentados)

Taenia solium es un platelminto parsito de la clase Cestoda, que vive en el intestino delgado de los seres humanos, donde mide normalmente de 3 a 4 m

Taenia sagitana Es parecida a la taenia solium solo que esta llega a medir un poco menos

Himenolepis diminuta Esfrico con cascara gruesa mide 70um de longitud por 8um de dimetro, no presenta filamentos polares

Himenolepis nana Es redonda u ovalado mide de 40um a50um de dimetro, posee una membrana trasparente que rodea un hembrion hexcanto.