MICROBIOLOG A

BLOQUE I: GENERALIDADES Y TCNICAS MICROBIOLGICAS

TEMA 1: INTRODUCCIN HISTRICA
Lo ms caracterstico de la Microbiologa es que su objeto de estudio es invisible a simple vista. Denominamos microorganismo a todo ser vivo que a lo largo de su vida no sobrepasan los 1/10 mm de tamao y que desarrolla un ciclo de vida completo e independiente. La microbiologa consta de 2 grandes bloques evolutivos: Bacteria Procariotas Microorganismos Eucariotas Arquea

EL DESCUBRIMIENTO DEL MUNDO MICROBIANO

El avance de la Microbiologa dependi de avances en diversos campos, entre ellos la fsica y el descubrimiento de la microscopa. En el ao 1676, Antonie van Leeuwenhoek descubri el mundo microbiano gracias a un microscopio simple, inventado por Zacharias Jansen, con lentes que l mismo tallaba; se le considera el padre de la Microbiologa. Queda constancia de sus descubrimientos por las cartas que escribi a la Royal Society de Londres , en las que describa los microorganismos que iba descubriendo. El desarrollo de la Microbiologa dependi de todo esto, pero tambin de otros, como la aclaracin de la Teora de la Generacin Espontnea: se pensaba que los microorganismos procedan de la materia orgnica en descomposicin. Era una teora muy arraigada, apoyada por multitud de grandes personalidades como Aristteles. 1

Johann Van Helmontz (siglo XVII) apoyaba esta teora basndose en experimentos que realiz, como el de dejar ropa sucia y trigo en un lugar determinado; al tiempo, la ropa y el trigo desaparecen y aparecen ratones, lo que l atribuy a un proceso de organizacin de la materia para crear organismos nuevos. Confundi los efectos con las causas. En el siglo XVIII, John Needham prepar una sopa o extracto de carne y lo calent, pensando que todos los microorganismos moran con la ebullicin, y lo colocaba en un sitio cerrado con un tapn de corcho. Vio que aparecan microorganismos en el extracto y dedujo que procedan de la carne. Lazzaro Spallanzani hizo el mismo experimento, pero aisl el extracto hermticamente, y no aparecan microorganismos. Dedujo que los microorganismos que haba en el experimento de Needham pasaban desde el exterior a travs del corcho. Francesco Redi vio que si coga un trozo de carne, lo herva y lo dejaba pudrir en contacto con el aire, aparecan gusanos. Sin embargo, si lo tapaba, no. Si se dejaba al aire libre, las moscas dejaban huevos y entonces aparecan gusanos, y tapndolo las moscas no tenan acceso a la carne, por lo que desminti la generacin espontnea. Esta teora tuvo una controversia que dur siglos. Los que estaban a favor pensaban que en el aire exista un fluido vital que produca la aparicin espontnea de organismos. Franz Schulze puso los caldos expuestos al aire previamente en contacto con cido, que eliminaba los microorganismos, y vio que no aparecan microorganismos en el caldo. Theodore Schwann consigui el mismo resultado calentando el aire que entraba en contacto con la muestra. Los defensores de la teora alegaban que el fluido vital era sensible al cido y el calor. Un experimento clave para rechazar la teora lo realizaron en el siglo XIX Georg Friedrich Schroeder y Theodor von Dusch: cogieron caldo, lo hirvieron y lo colocaron en un matraz cerrado con algodn estril, por el cual entraba el aire, pero que retena a los microorganismos, por lo que stos no aparecan en el caldo. En el ao 1861, Louis Pasteur definitivamente rechaz la teora de la Generacin Espontnea. En primer lugar realiz un experimento para demostrar la funcin del algodn para retener microorganismos: filtr el aire a travs de un algodn y observ que haban quedado atrapados partculas semejantes a esporas de plantas, y que si se colocaba un trozo de este algodn en un medio estril, se produca crecimiento microbiano. A continuacin, introdujo soluciones de nutrientes en matraces y calent los cuellos de stos en una llama para darles distintas formas curvadas, manteniendo el extremo de los cuellos abiertos a la atmsfera. Luego hirvi las soluciones y las dej enfriar. No se produjo crecimiento aunque el contenido de los matraces haba estado expuesto al aire. Pasteur seal que no se haba producido crecimiento microbiano porque el polvo y los grmenes haban quedado atrapados en las paredes de los cuellos curvados. Si se rompan los cuellos, comenzaba el crecimiento inmediatamente. Por aquel entonces se consideraba que la putrefaccin era el origen de los microorganismos, cuando en realidad eran ellos los que originaban la descomposicin. Muchas veces la suerte ha determinado las evidencias clave: muchos microorganismos no mueren durante la ebullicin (son termoresistentes), y dio la casualidad de que, durante el experimento que realiz Pasteur, no haba este tipo de organismos, o su experimento no habra funcionado. 2

Todos estos experimentos demostraron que no existe la generacin espontnea, o que al menos sta no es posible en las condiciones actuales. Se fue viendo que exista una correlacin entre el crecimiento de los microorganismos en el medio y los cambios qumicos que se producan en ste. Se puso de manifiesto que los microorganismos eran la causa y no el efecto de estos cambios. Jns Jacob Berzelius, Justus von Liebig y Friedrich Whler, que pensaban que la materia era capaz de cambiar por s misma. Cagniard-Latour, Theodore Schwann y Friedrich Ktzing vieron que estos cambios, como el cambio de glucosa a alcohol, slo se producan si haba en el medio un tipo de microorganismos. Lo aclar Pasteur, que era Qumico pero apoy a los Bilogos, y dedujo que sin microorganismos no haba cambio, y que adems deba ser un determinado tipo. Adems hizo otra contribucin, descubriendo la existencia de microorganismos anaerobios. Dedujo el por qu de todo esto: fisiolgicamente, los microorganismos sacan energa de stos procesos. Secundariamente, el hombre puede sacar provecho de los productos finales. Otra cuestin que se puso en marcha, una vez descubierto el papel de estos microorganismos sobre la materia orgnica, fue si tambin podan estar implicados en las enfermedades infecciosas y fuesen causa de transmisin. En el siglo XVI, Girolano Fracastoro de Verona deca que vea grmenes en el aire que pasaban de una persona a otra y que sta era la causa de contagio de enfermedades pero nadie le hizo mucho caso porque la mayora pensaba que las causas se deban a otros factores, como fuerzas sobrenaturales o desequilibrios de los fluidos corporales. Los mdicos de aquella poca comenzaron a introducir tcnicas sanitarias incluso sin saber que los microorganismos eran la causa de las enfermedades infecciosas. En el siglo XIX, Oliver Wendell Holmes vio que muchas de las mujeres que daban a luz moran posteriormente. Comprob que tomando medidas de higiene durante el parto, descenda el riesgo de mortandad y lo atribuy a una contaminacin area que provocaba contagio. Ignaz Phillip Semmelweis comprob que introduciendo tcnicas sanitarias durante operaciones quirrgicas disminua la probabilidad de contagio. Robert Lister desarroll un mtodo de ciruga asptica: los instrumentos se esterilizaban con calor y se trataban los vendajes con fenol, que destrua las bacterias y evitaba las infecciones de las heridas. Hoy en da el fenol est en desuso ya que la mayor parte de bacterias es resistente a l. Robert Koch fue el primero en demostrar la relacin entre Bacillus anthracis y carbunco. En 1876 enunci los conocidos como Postulados de Koch: 1. El microorganismo causal debe estar presente en cada caso de enfermedad, pero ausente en los organismos sanos. 2. Hay que aislar y desarrollar en cultivo puro al mismo organismo sospechoso. 3. Al inocular el microorganismo aislado en un husped sano, se debe desarrollar la misma enfermedad. 4. El mismo microorganismo debe aislarse de nuevo a partir del husped enfermo. 3

Casimir Joseph Davaine vio que en todas las lesiones de carbunco de animales y humanos haba Bacillus anthracis, pero no saba si era un efecto o una causa. Estos postulados fueron comprobados por Pasteur. Koch fund la Escuela de Microbiologa de Berln, y Pasteur fund el Instituto Pasteur en Pars, y la Microbiologa empez a ser una ciencia. Hay an algunos casos en que la causa es un microorganismo pero no cumple los postulados, por ejemplo, los virus, que no se pueden aislar. Nacen as los Postulados de Rivers, que son los mismos que los de Koch, pero modificados para los virus. Hay bacterias que no cumplen los postulados de Koch, por ejemplo, Treponema pallidum, causante de la sfilis, que no puede aislarse porque no crece en medios biolgicos artificiales; o Mycobacterium leprae, que provoca la lepra. Aunque no los cumplen, se sabe que son los causantes. Exista la idea equivocada de que los microorganismos podan cambiar de forma, ya que cuando una muestra se observaba durante varios das, aparecan distintas formas que los investigadores relacionaban con cambios de forma del mismo microorganismo, y as naci la Teora del Pleomorfismo. Lo que en realidad suceda es que unos microorganismos moran y aparecan otros nuevos que se aprovechaban de los productos de desecho de los anteriores, y as sucesivamente, se daba un proceso de sucesin microbiana. Carl von Linneo, en su Systema Naturae, clasific a todos los microorganismos en un mismo grupo, llamado Chaos, ya que pensaba que, a causa del pleomorfismo no se podan clasificar. Ms tarde se aclar todo y se descubri que no cambian de forma ya que presentan un genotipo que determina su forma. Definimos cultivo puro como aquel que contiene una sola clase de microorganismos, que tericamente derivan slo de uno, y por lo tanto son totalmente idnticos. Se ingeniaron muchos mtodos para conseguirlo y separar unos microorganismos de otros, sobre todo en la Escuela de Berln de Koch. Un discpulo de Koch, Schroeder, dej media patata en el laboratorio, y al da siguiente vio que aparecan manchas y vio que eran conjuntos de microorganismos, y que en cada mancha apareca slo un tipo de microorganismo. Las manchas eran macropoblaciones s visibles a simple vista y manipulables. Todo esto permiti rebatir la Teora del Pleomorfismo, y contribuy a desarrollar tcnicas de cultivos puros, y tambin aparecen las placas de Petri. A finales del siglo XIX los investigadores se preguntaron si, a parte de la orgnica, los microorganismos eran capaces de transformar la materia inorgnica. Sergei Winogradsky descubri la existencia de vida auttrofa; Martinus Beijerinck descubri la fijacin de nitrgeno atmosfrico. A finales de siglo haba una serie de enfermedades todava con causa desconocida. Se saba que el agente que lo causaba era capaz de atravesar todos los filtros bacterianos conocidos entonces, por lo que su tamao era mucho menor que el de cualquier bacteria. A estos agentes se les llam virus, y no son considerados organismos porque no presentan organizacin celular. Estos descubrimientos se deben a las observaciones de Dimitri Ivanowsky y Beijerinck. La primera observacin fue en una enfermedad de plantas, la del mosaico del tabaco. No lograron ver los virus por microscopa ptica, pero intuan su existencia. 4

A finales del siglo XIX ya estaba establecido el origen de las enfermedades infecciosas. Ivanowsky descubri el primer virus: el TMV, o virus del mosaico del tabaco. Hizo extractos de una planta enferma del mosaico, y el sobrenadante lo col por un filtro bacteriano que retena a las bacterias. Si el lquido ya filtrado se inyectaba en una planta sana, sta enfermaba. Propuso que probablemente existan agentes ms pequeos que las bacterias, ya que superaban los filtros. Esto no demostraba que existiese un organismo vivo capaz de replicarse, ya que podra tratarse de una sustancia (leja, toxinas, etc.). Hoy en da se considera que el primer descubridor de los virus fue Beijerinck. Pens que tal vez se trataba de bacterias productoras de exotoxinas que seran filtrables, y que produciran la enfermedad, causando dao a distancia. Este sobrenadante, aunque se diluyera muchas veces, nunca perda su capacidad patgena. Se lleg a la conclusin de que este principio infeccioso se reproduca y era mucho ms pequeo que una clula. Se consideraron acelulares, por lo que no son considerados como organismos. Ms tarde se descubri que no slo haba virus vegetales sino tambin animales. Frederick Loeffler y Paul Frosch descubrieron, ya en el siglo XX, descubrieron el primer virus animal, el responsable de la fiebre aftosa o glosopeda. En 1916, Frederick W. Twort y Flix dHerelle descubrieron virus bacterianos. A finales del siglo XX se describieron agentes ms pequeos que los virus: en 1960, Theodor Diener descubri los viroides (pequeos agentes patgenos subvirales constituidos por cido nucleico solamente, RNA en general). Stanley Prusiner descubri otros agentes ms pequeos: los priones. Virus: cido nucleico + protenas Viroides: cido nucleico. Afectan a plantas Priones: no tiene cido nucleico. Afectan a animales Muchos de estos descubrimientos iniciales se estudiaron porque las enfermedades que producan tenan impacto econmico o en el hombre. Los microorganismos llamaron la atencin por la capacidad destructiva o daina que tenan. Haba, por tanto, que buscar remedios. Esto dio origen a 2 lneas de investigacin: la inmunizacin y la quimioterapia.

- INMUNIZACIN
Se basa en la profilaxis o tratamiento preventivo. El inicio de estas prcticas es antiguo: se iniciaron con las observaciones de Edward Jenner. Observ que la viruela era una enfermedad tanto humana como vacuna. Se dio cuenta de que las personas que ordeaban a las vacas afectadas de viruela no adquiran la viruela humana: de algn modo se hacan resistentes. As sac muestras de las heridas de la viruela vacuna y las inocul en humanos sanos. Naca de esta manera la primera vacuna, denominada as por Pasteur que lo hizo en honor a Jenner y sus estudios con las vacas. Actuaba contra enfermedades no slo de origen viral, sino tambin de origen bacteriano, como el carbunco. La vacuna contra la rabia fue elaborada por Pasteur. La rabia es un virus que ataca al sistema nervioso, primero actuando sobre los msculos de la zona de la garganta. Se le llamaba hidrofobia porque los afectados, aunque tienen sed, no pueden beber agua porque no controlan la epiglotis. 5

Una mujer llev a su hijo, Joseph Leister, ante Pasteur cuando un perro con rabia le mordi. Pasteur le dijo que an no haba probado su vacuna contra la rabia, pero la madre accedi a que vacunase a su hijo y le salv la vida. El chico qued tan agradecido que trabaj para Pasteur el resto de su vida. Pasteur tuvo suerte: la rabia es la nica enfermedad en la que se puede vacunar al paciente despus de haberse infectado, porque el virus tarda mucho en llegar al sistema nervioso.

- QUIMIOTERAPIA
Slo se aplica cuando ya se ha enfermado. Junto con la inmunizacin aument la esperanza de vida del hombre al doble. Parti de Paul Ehrlich, que, sugestionado por las ideas de Pasteur sobre la inmunizacin, pens que podan existir sustancias qumicas con toxicidad selectiva, capaces de daar a las bacterias pero no a las clulas. Las llamaba balas mgicas. Ehrlich y Sahachiro Hata empezaron a probar sustancias dainas para las bacterias de Treponema pallidum, que provoca la sfilis, pero que eran inofensivas para las clulas del cuerpo humano. Despus de 605 ensayos encontraron la sustancia correcta, a la que llamaron Salvarsan 606, y que contena pequeas trazas de arsnico. Se dispar toda una lnea de investigacin. Pocos aos despus, Donald D. Woods descubri las sulfamidas. Alexander Fleming, en 1926, estudiaba el Staphylococcus aureus cuando se dio cuenta de que su placa se haba contaminado al caer una espora de Penicillium notatum, un hongo que secretaba alguna sustancia que impeda el crecimiento del estafilococo en sus alrededores. Fue en los aos 40 cuando Ernst Chain y Howard Florey produjeron, por primera vez, la penicilina. Poco despus, Selman Waksman descubri la estreptomicina. Para que una sustancia sea considerada como un antibitico, debe estar producido por un microorganismo. Las sulfamidas, por ejemplo, no son un antibitico, sino simplemente un agente qumico. Todos los microorganismos que forman antibiticos son esporulados. El hecho de que produzcan estas sustancias no les supone ninguna ventaja ecolgica, ya que lo hacen de forma secundaria. As comenz la Era De Los Antibiticos. Los microorganismos son muy eficaces y eficientes, y por ello se hacen resistentes por el principio de Seleccin Natural. Es una seleccin mediada por los antibiticos. Siempre aparece algn microorganismo resistente por mutaciones. Aos 50: el 99,99% de Staphylococcus era sensible a la penicilina. Hoy en da: el 100% de este microorganismo es resistente a la penicilina.

MICROBIOLOGA ACTUAL
La Microbiologa Actual estudia a los microorganismos y sus actividades, tanto patgenos como no patgenos. Comprende conocimientos de distintos campos: Ecologa, Gentica, Bioqumica, Morfologa, 6

A su vez, la Microbiologa se puede dividir en otros campos: - Bacteriologa - Virologa - Micologa, Existe una aplicacin clnica para el control de bacterias y virus con impacto en humanos y animales. Tambin hay una aplicacin industrial, que saca provecho de las actividades de los microorganismos.

TEMA 2: LOS MICROORGANISMOS EN LA ESCALA BIOLGICA

Todos los organismos celulares participan de un componente qumico comn con 3 macromolculas complejas: - DNA: molculas capaces de replicarse y que son los depositarios de la informacin gentica. - RNA: transmisor que permite la traduccin en forma de protenas. - Protenas. Estas actividades qumicas comunes que comparten forman en su conjunto lo que llamamos metabolismo. - Catabolismo: se obtiene poder reductor al formar sustancias simples a partir de sustancias complejas. - Anabolismo: formacin de sustancias complejas a partir de sustancias simples. Kluyver fue el primero que enunci que todos los seres vivos presentan estas caractersticas: es el Concepto de Unidad Bioqumica. 1) Bajo tiempo de replicacin o generacin. 2) Tienen una estructura comn: la clula. 3) Diversidad de niveles de organizacin celular: - Organismos unicelulares: ms extendido en microorganismos. - Organismos pluricelulares: presente en gran parte de seres vivos superiores. 4) Organizacin cenoctica: presentan subunidades celulares no organizadas en membranas; no hay compartimentacin celular. Es lo menos extendido. Como hemos visto anteriormente, los microorganismos no se pueden incluir en ningn grupo biolgico conocido. La taxonoma est bien estabilizada, pero su encaje con el resto de organismos es dudosa. Charles Sedillot vio que era necesario crear un grupo aparte, y acu en 1878 el trmino microbio. Vio que la divisin del Mundo Vivo en 2 reinos, como ocurra a finales del siglo XIX, no poda ser mantenido. Los microorganismos precedieron a plantas y a animales en la Evolucin, y por tanto no pueden ser clasificados con propiedades de estas 2 lneas. Un discpulo de Darwin, llamado Ernst Haeckel, cre el reino de los Protistas, que dividi en: - Protistas superiores: hongos, algas, protozoos. - Protistas inferiores: bacterias. 7

Los Protistas formaron el tercer grupo dentro de la clasificacin del Mundo Vivo. Tenan la caracterstica comn de tener una organizacin celular simple, es decir, no forman tejidos. Robert H. Whittaker propuso una clasificacin consistente en 5 reinos. Carl Woese realiz una clasificacin de 3 reinos, que es la ms usada. Cuando se introdujeron tcnicas moleculares, se realizaron anlisis ribosomales, y se vio que haba otra clasificacin diferente posible, consistente en los siguientes dominios: - Eukarya - Prokarya Bacteria Archaea

Gracias a los anlisis de la unidad 16S ribosomal, en los aos 50, por microscopa electrnica, se vio que haba 2 claros modelos en la arquitectura interna de las clulas: - Clulas eucariotas: plantas, metazoos y protistas superiores. - Clulas procariotas: bacterias. Las diferencias estructurales se corresponden con las funcionales. La discontinuidad biolgica ms importante dio lugar a 2 filum con evolucin paralela pero independiente: Eucariotas y Procariotas. Pero dentro de los procariotas tambin haba 2 discontinuidades: Bacteria y Archaea. Se cree que primero aparecieron los Archaea: organismos anaerobios que han llegado hasta nuestros das y se encuentran slo en ambientes extremos que recuerdan a la Tierra primitiva. Son los que comenzaron la evolucin hacia los eucariotas.

DIFERENCIAS ENTRE PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

1) Organizacin del aparato gentico: - Los eucariotas lo tienen aislado o limitado por una membrana nuclear, de la cual carecen los procariotas. - El nmero de cromosomas en eucariotas es siempre mayor de 1, mientras que los procariotas tienen 1, que puede ser circular, y que se denomina genforo. - Los eucariotas presentan histonas: protenas bsicas que forman parte de la estructura de sus cromosomas, y que procariotas no tienen. - Presencia de nucleolo solamente en eucariotas. - Divisin celular regulada en eucariotas: se realiza siempre igual, por mitosis, que es un proceso regulado que no aparece en procariotas. - Sistemas de recombinacin gentica: los procariotas carecen de reproduccin sexual (fusin de gametos). Nunca en procariotas se forman diploides completos, slo parciales, por transferencia unidireccional de DNA. 2) Estructura citoplasmtica:

- Orgnulos eucariotas: presentan retculo endoplasmtico, aparato de Golgi, mitocondrias, cloroplastos, lisosomas Los procariotas carecen de orgnulos, aunque las mitocondrias y cloroplastos tienen origen procaritico. - Diferencias ribosomales: los ribosomas de eucariotas son 80S, y los de procariotas son 70S. Los eucariotas presentan ribosomas del tipo 70S en mitocondrias y cloroplastos. - Microtbulos: presentes slo en eucariotas. - Compartimentacin: slo se da en eucariotas. - Presencia de pptidoglucano (murena): slo se presenta en procariotas, formando parte de la pared celular, cuando la presentan. Tambin aparece en algunas archaeas, de manera modificada, y se llama pseudopptidoglucano. 3) Atributos funcionales: - En eucariotas aparecen procesos de fagocitosis, pinocitosis, fenmenos de secrecin, digestin extracelular, endosimbiontes, movimiento ameboideo y corrientes citoplasmticas; ausentes en procariotas. - Efecto diferencial de antibiticos: - Los -lactmicos (penicilinas, cefalosporinas,): no afectan a eucariotas pero s a procariotas ya que actan destruyendo la murena. - Los polinicos: son activos contra eucariotas pero no contra procariotas. - Ciclohexamida: detiene la sntesis de protenas en ribosomas 80S, por lo que slo afecta a eucariotas. - Tetraciclinas y aminoglucsidos: inhiben la traduccin en procariotas. -lactmicos
Polinicos Ciclohexamida Tetraciclinas, aminoglucsidos Eucariotas + + Procariotas + +

Hay procariotas resistentes a -lactmicos porque carecen de pared celular. Los mycoplasmas son un tipo de estos procariotas resistentes a -lactmicos.

POSICIN DE LOS MICROORGANISMOS EN EL PROCESO EVOLUTIVO

Cuando se desminti la Teora de la Generacin Espontnea , fue la poca en la que Darwin public su Origen de las Especies. Se plante la evolucin histrica y se vio que los microorganismos tenan un origen mucho ms antiguo: eran la base del origen de la vida. Se plantearon 2 teoras: - Teora de la Panspermia: fue defendida por Remius. Defenda que la vida en el planeta tuvo un origen exgeno (meteoritos, etc.). Desplaza la resolucin del origen de la vida a un origen remoto. - Teora del Origen Endgeno: defiende que la vida comenz en este planeta.

Esta ltima implica que las condiciones de vida en el planeta no eran las de ahora. Se han sucedido numerosas fases geolgicas, la primera de las cuales fue una poca sin oxgeno y con mucho amonaco, un ambiente muy reductor. Oparin apoy la idea de que en esas condiciones antiguas se generara materia orgnica, base de la vida. Mediante estudios posteriores se vio que la formacin del planeta ocurri hace aproximadamente 4.500 ma, pero no se form una corteza terrestre estable hasta hace 3.000 ma. En esa poca se formaba materia orgnica que no se descompona, ya que no haba ni oxgeno ni microorganismos, y que iba acumulando, permitiendo la aparicin de microorganismos. El hecho indudable es que hace 2.500 ma ya haba vida microbiana. Existen fsiles del Precmbrico de microbios llamados estomatolitos. stos empezaron a generar oxgeno creando la primera atmsfera estable. Eran organismos anaerobios y vivan en condiciones extremas. An se observan estas caractersticas en Archaeas. El origen de los virus es ms incierto. No han precedido a las clulas porque las necesitan para reproducirse, por lo que son posteriores a los procariotas.

TEMA 3 : MICROORGANISMOS
TCNICAS MICROBIOLGICAS

CULTIVO

DE

Todos los sistemas biolgicos tienen en comn que necesitan unos requerimientos nutricionales: se desarrollan sobre sustancias qumicas que les permiten conseguir energa (mediante oxidaciones biolgicas) y suministra sustancias para la biosntesis (reducciones que generan ATP y poder reductor). Requieren la presencia de: 1) Fuente de energa: se empieza a versatilidad microbiana. Los microorganismos pueden utilizar como fuente de energa: - Luz: organismos fototrofos. - Oxidaciones qumicas: organismos quimiotrofos. 2) Fuente de carbono: de 2 tipos: - Carbono inorgnico (CO2): organismos auttrofos. - Carbono orgnico: organismos hetertrofos. Los organismos quimiotrofos pueden obtener energa por oxidaciones de compuestos orgnicos (organismos quimioorganotrofos) o de compuestos inorgnicos (organismos quimiolitotrofos). Por ejemplo, los organismos quimiolitoautotrofos son organismos que no necesitan compuestos orgnicos. 3) Fuente de nitrgeno: de 2 tipos: - Nitrgeno atmosfrico - Sales (nitratos) o sales amoniacales, aminocidos, protenas 4) Fuente de sales inorgnicas: en organismos unicelulares son necesarios para mantener los equilibrios internos. Existen muchos tipos de sales, que pueden presentar: 10

Fsforo Potasio Sodio Magnesio Hierro Calcio Azufre

Suministran otros elementos necesarios para microorganismos, y algunas los necesitan como requerimiento estructural. - Bacterias halfilas: slo viven en ambientes con altas concentraciones salinas, superiores a las normales, como salinas, salmuelas, 5) Fuentes de vitaminas: necesarias para algunas bacterias, pero no todas. Algunas las producen. - Escherichia coli: habita en el intestino humano, y all produce la vitamina K. Los microorganismos que necesitan vitaminas suelen necesitar vitaminas del tipo B, sobre todo vitaminas B6 y B12. Requieren su presencia ya formada en el medio. 6) Agua: siempre tiene que haber una cierta concentracin de agua disponible, que a veces forma parte de compuestos pero es extrable. Nosotros somos organismos quimioorganohetertrofos. Cuando los microorganismos tienen los 6 requerimientos en el medio, se dedican a crecer, y lo hacen hasta que se acaba uno de ellos, al que llamamos factor limitante, y entonces deja de crecer. Si se le administra este factor limitante en pequeas dosis, el microorganismo crecer de manera proporcional a la cantidad administrada. El factor limitante, por tanto, determina el crecimiento poblacional microbiano. Lactobacillus se utiliza en valoraciones alimenticias de vitaminas. Necesita vitamina B6. Con una grfica patrn, podemos determinar la concentracin de vitaminas en un alimento en funcin del crecimiento de la problacin. Analticamente, esta tcnica es tan exacta como cualquier mquina y no requiere tratamientos o aislamientos de vitaminas, porque aunque vaya mezclada esta vitamina con otras sustancias esenciales, al existir estas ya en el medio en exceso, el crecimiento se rige slo por el factor limitante.

- CULTIVO Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

Los medios de cultivo son el sustrato en el que se desarrollan los microorganismos en el laboratorio. Se clasifican por: - Composicin qumica: - Cultivos sintticos o definidos: composicin qumica conocida exactamente y definidos cuantitativamente todos sus componentes. - Cultivos complejos o naturales: cuantitativamente se desconoce su composicin, pero s se sabe cualitativamente. 11

- Estado fsico: - Lquidos: exceso de agua, difusin libre de microorganismos - Slidos: para aislar cultivos - Semislidos El agar es una sustancia que se utiliza para solidificar las sustancias acuosas y que no modifica el medio. Es una sustancia orgnica procedente de un tipo de alga roja. Lquido
1% agar

Semislido
2% agar

1% agar

Slido

Antes del agar se utilizaba la gelatina, pero sta s es utilizada por microorganismos. Sin embargo, la presencia de agar puede inhibir el crecimiento de algunos microorganismos; se emplea entonces gel de slice.
Microorganismos inmviles Microorganismos mviles

Siembra en vertical en medio semislido

- Disposicin: - En placa - Tubo inclinado - Matraz - Tubo

medios slidos

medios lquidos

Independientemente de la composicin qumica, fsica o de la disposicin, los medios se dividen en funcin de su finalidad, pudiendo ser: - Enriquecidos: medio base al que se adiciona otro compuesto que facilita el crecimiento de un microorganismo concreto pero sin perjudicar a otros. - Ejemplo: medio + suero; medio + sangre. 12

- Selectivos: medio base al que se aade u omite alguna sustancia cuya adicin o ausencia inhibe el crecimiento microbiano de unos tipos pero no de otros. Favorece el aislamiento. - Ejemplo: medio + cidos biliares; medio + nitrgeno. - Diferenciales: medio base que incorpora reactivos o sustancias que nos permiten distinguir tipos de microorganismos por sus propiedades fisiolgicas. Por ejemplo, utilizando un medio base con un indicador de PH, podemos determinar si un microorganismo modifica el PH del medio, y nos indica que es un microorganismo que produce cidos como consecuencia de su metabolismo, es decir, es un microorganismo fermentativo. Si el PH no vara, es un microorganismo que realiza respiracin. Se puede crear un medio mezcla de 2 o de los 3, y son los ms utilizados. Por ejemplo, el medio McConkey (medio base + cidos biliares), que inhibe el crecimiento de las bacterias Gram+ y facilita el crecimiento de las Gram-, es un medio selectivo, pero si adems le incorporamos un indicador de PH, ser tambin un medio diferencial. El medio McConkey tiene lactosa y cidos biliares. Todos los microorganismos que crezcan en este medio sern microorganismos capaces de romper la lactosa en sus dos subunidades (galactosa y lactosa), es decir, presentan -galactosidasa. La glucosa es su fuente de energa. Es un medio que asla muy bien a las enterobacterias. Por lo tanto:
Organismos resistentes a c. biliares McConkey Organismos con -galactosidasa metabolismo respiratorio o fermentativo indicador de PH

En muchos casos, se pueden preparar los ingredientes por separado, se esterilizan y se aaden poco a poco o se venden ya fabricados y deshidratados; al aadirse agua ya tenemos el medio de cultivo. Hay ya medios especialmente diseados para un crecimiento de una bacteria determinada. 1) Cultivos bacterianos: el 99,9% de las bacterias crecen en ellos. Otros, sin embargo, no lo hacen porque necesitan medios vivos: Treponema pallidum, etc Los virus tampoco crecen en estos cultivos, ya que son parsitos celulares que necesitan clulas vivas. 2) Cultivos celulares: constan de una base de clulas vivas de animales o vegetales y se utilizan para el cultivo de virus. Tambin pueden ser bacterias para estudiar virus bacterifagos. - Medio Eagle: para clulas animales es el ms comn, con un 10% de suero bovino fetal, que permite el crecimiento de casi todos los virus

- MATERIAL DE CULTIVO -

13

a) Asa de siembra: asa con una prolongacin metlica que termina en un crculo. Puede convertirse en un asa de picadura. Es buena porque por la tensin superficial nos permite coger gotas. b) Asa de Digraski o Drigalski: es importante para la siembra de medios lquidos. Consta de una varilla de vidrio con una especie de tringulo al final y permite extender el contenido de una gota por toda la placa. c) Pipeta Pasteur: til para muestras lquidas. d) Matraz e) Tubos de ensayo f) Los cultivos se llevan a cabo cerca de un mechero o llama: esteriliza el aire de alrededor de la llama y nos permite esterilizar el material.

- TIPOS DE SIEMBRA 1) Medio slido: depende de cmo sea la muestra: - Muestra lquida: con el asa de siembra se recoge la muestra en forma de gota y se siembra por extensin. - Muestra slida: con el asa de siembra se realiza una siembra por estra; se recorre toda la placa formando estras, primero ms juntas y cada vez ms separadas. - Muestra semislida: con el asa de siembra. 2) Vertido en placa: se prepara el medio y se aade la muestra antes de poner el medio en la placa, y as el microorganismo crece en la superficie y en las capas internas.

- CULTIVO PURO En la naturaleza, las poblaciones bacterianas casi siempre se presentan en cultivos mixtos. En las enfermedades pueden ser cultivos puros, porque el microorganismo infeccioso puede eliminar a otro y ocupar rganos enteros. Es una poblacin con slo una clase de microorganismo que desciende de un microorganismo comn. Permiten el anlisis asilado de microorganismos. 1) Tcnica por siembra en superficie: se realiza por siembra en estra o por Digraski. En la siembra por estra, al principio descargamos muchos microorganismos, pero conforme vamos avanzando puede caer un microorganismo aislado que formar una colonia pura de microorganismos. Para asegurarnos de que es puro, cogemos una muestra de esa colonia y la sembramos en otro medio, para ver si es puro o no. 2) Tcnica de vertido en placa: el microorganismo queda dispersado por todo el medio, por lo que quedarn aislados unos de los otros. 3) Tcnica de enriquecimiento: no se utiliza un medio enriquecido, sino selectivo. Se basa en la aplicacin a microescala, se favorece el crecimiento de un microorganismo pero el medio no permite el crecimiento de otros microorganismos. Es el tipo ms eficaz de aislamiento de microorganismos. 4) Tcnica de dilucin seriada: slo se emplea en medios lquidos. Es estadsticamente vlido, pero a veces esta estadstica no se cumple. Este mtodo permiti a Lister realizar el aislamiento del primer microorganismo nico: Streptococcus lactis. 14

5) Micromanipulador: dispositivo que se pone en conjuncin con un microscopio, y consta de micropipetas y microagujas. Se puede apuntar a una clula determinada y aspirarla, para luego verterla en un medio de cultivo. Es muy sofisticado. Hay microorganismos con efectos beneficiosos tambin. El 98% es beneficioso, por lo que slo un bajo porcentaje es patgeno.

PRINCIPIOS DE MANTENIMIENTO Y CONSERVACIN DE MICROORGANISMOS

Se llevan a cabo una vez que los microorganismos estn ya aislados. Da lugar a colecciones de microorganismos patrn o microorganismos tipo , que se mantienen vivos. Hay que mantenerlos aislados, conservados y as ir coleccionndolos. CECT: Coleccin Espaola de Cultivos Tipo ATCC: American Type Cultives Colection Para mantenerlos vivos, podemos utilizar diversos mecanismos: a) Resiembras peridicas: por ejemplo, en tubos de agar inclinados . La resiembra consiste en coger un poco de una poblacin e inocularlo en otro tubo. b) Adicionar a los medios aceite mineral o parafina esterilizada : ayudan a retrasar la deshidratacin. c) Conservacin a bajas temperaturas: por ejemplo, en nitrgeno lquido (-196C); el inconveniente es que el agua intracelular se convierte en hielo que pueden causar cortes y daar a la clula. Por ello se aade glicerol, DMSO (dimetilsulfxido). As se evita la formacin de microcristales que pueden daar la estructura celular. d) Gliofilizacin: implica desecar rpidamente por sublimacin las clulas que se mantienen congeladas en un medio de alto vaco. As, le quitamos el agua a los microorganismos sin aplicar calor, y entran en un estado crptico latente. La presin atmosfrica acta como una especie de mbolo que empuja a las molculas de agua, impidiendo su movimiento debido a la energa cintica de las molculas. Los microorganismos recuperan su actividad biolgica al aadir agua. Estn en un estado llamado glifilo: en este estado, los microorganismos se pueden conservar durante aos, incluso dcadas.

TEMA 4: OBSERVACIN DE MICROORGANISMOS

Fue el desarrollo de la microscopa lo que permiti conocer un poco ms sobre los organismos.

FUNDAMENTOS DE LA MICROSCOPA

15

El ojo humano acta como un instrumento ptico. Mediante la acomodacin del ojo, nos da una idea del tamao del objeto y la distancia que tiene. Existe una limitacin: a partir de unos 25 cm de distancia, el ojo deja de acomodarse por mucho que se acerque el objeto. El ojo deja de ver un objeto de 0,1 mm a 25 cm de distancia; el ngulo de entrada sera de 1, que sera el ngulo mnimo con el que tiene que entrar un objeto para que se forme la imagen en la retina. Este ngulo se va perdiendo tambin cuando se aleja mucho el objeto.

Por eso, definimos a los microorganismos como entidades vivas con un tamao inferior a 0,1 mm durante su ciclo de vida. Los microscopios operan aumentndonos el ngulo de entrada de los objetos a estudiar. ste es el principio bsico de todo microscopio.

- CONCEPTOS DEL MICROSCOPIO 1. Magnificacin o aumento: aumento del ngulo de entrada (). Se obtiene mediante procedimientos pticos. 2. Contraste: slo podremos ver objetos cuando nos encontramos el objeto en un medio diferente. Se logra mediante procedimientos pticos dependiendo del microscopio, o mediante tinciones para resaltar el objeto del medio. 3. Claridad o nitidez: viene definida por la longitud de onda de la luz que se utiliza y tambin por cuestiones pticas. - Poder de resolucin de un microscopio. - Aumentos que logran que la lente objetivo x Aumentos que logra la lente ocular = Magnificacin o aumento. El poder de resolucin que define la claridad, se define como la capacidad de resolver entre 2 puntos que se encuentran muy prximos.
PR = 2 PR =

2senC

= apertura numrica. Es igual al ndice de refraccin entre la lente objetivo y el objeto a estudiar por el ngulo que forma el foco de luz con los rayos ms divergentes. = senC
C

El aceite de inmersin hace aumentar el denominador PR, disminuyendo el valor de PR. Podemos ver 2 puntos que estn separados entre s por una distancia muy pequea. Los podemos ver de forma clara y ntida. 16

Si el PR es muy grande, la claridez y nitidez es muy poca. Si la longitud de onda disminuye, no llega a ser visible aunque aumente el PR. El aumento es una propiedad exclusiva de las lentes que forman el microscopio.

TIPOS DE MICROSCOPA
Empleamos una =500nm (verde azulada) y una lente objetivo con 55 de semingulo, y la observacin la hacemos con aire (=1) o utilizamos aceite de imersin (=1,5), el PR ser diferente. Con el aceite de inmersin, en este caso, veremos objetos con un PR de hasta 0,2 m. Utiliza una que entra dentro del espectro visible (400-700nm). 1) Microscopio de fondo claro: Es el ms utilizado rutinariamente. El fondo es claro y la muestra a ver se contrasta mediante tinciones. Utiliza tambin aceite de inmersin para disminuir el PR. Est compuesto por un cuerpo o soporte de metal compacto, compuesto por una base y un brazo, donde se fija el resto de las partes. En la base hay una fuente de luz. En el brazo hay dos dispositivos giratorios para enfocar, de ajuste fino ( micromtrico) y ajuste grueso (macromtrico), que pueden mover la platina o portaobjetos para enfocar la imagen. El condensador se monta dentro o por debajo de la platina, y enfoca un cono de luz sobre el portaobjetos. 2) Microscopio de fondo oscuro: Se ve todo oscuro menos lo que se quiere observar, que se ve claro. Se basa en el efecto Tyndall. Se enfoca un cono hueco de luz sobre la muestra, de manera que no penetren en el objetivo rayos no reflejados y no refractados. Solamente la luz que haya sido reflejada o refractada por la muestra puede formar una imagen. De esta forma, el campo que rodea la muestra aparecer negro, mientras que el objeto quedar iluminado intensamente. Para clulas vivas no teidas. 3) Microspio de contraste de fases: Otra alternativa al microscopio de campo oscuro para la observacin de clulas vivas no teidas. Tiene un dispositivo ptico llamado Zernicke que logra el contraste haciendo pasar la luz por el objeto de manera que el microscopio transforma las variaciones de los ndices de refraccin y de la densidad celular, en variaciones de intensidad de luz fcilmente detectables. Existen otros 3 tipos de microscopa ptica ms moderna que dan una imagen tridimensional: 4) Microscopio de interferencia o de contraste diferencial: Crea una imagen sobre la base de la deteccin de diferencias en los ndices de refraccin y el espesor de la muestra. Mediante unos prismas se generan 2 ondas de luz polarizada plana en ngulo recto una respecto de la otra. Una de ellas pasa a travs de la muestra, mientras que la otra sirve de referencia y pasa por una zona clara. Tras atravesar la muestra, las 2 ondas se combinan e interfieren entre s formando una imagen. 5) Microscopio de fuerza atmica: Se pone un sensor prximo a las fuerzas y detecta fuerzas atmicas repulsivas digitalizando un modelo de la imagen. 6) Microscopio confocal: 17

- MICROSCOPA PTICA -

Utiliza un rayo lser que analiza la imagen en diferentes planos y luego nos da una imagen tridimensional. Con longitudes de onda ms pequea, existe la microscopa ultravioleta. 7) Microscopio ultravioleta: a) Microscopio de luz ultravioleta: no utiliza lentes de vidrio sino de cuarzo, ya que el vidrio no deja pasar la luz ultravioleta. Despus actan mecanismos accesorios de visualizacin. b) Microscopio de fluorescencia: expone un espcimen a luz ultravioleta y forma una imagen del objeto con la luz fluorescente emitida. La luz resultante pasa a travs de un filtro de excitacin que transmite slo la longitud de onda deseada.

- MICROSCOPA ELECTRNICA
Se emplea haz de e- que actan como un rayo de luz o fuente de radiacin que puede enfocarse al igual que la luz de un microscopio ptico. Lo que observamos, a diferencia del microscopio ptico, no es la imagen directa sino una fotografa, que puede ser aumentada. Esta microscopa presenta mayor poder de resolucin en cuanto a capacidad de nitidez, lo que permite estudiar con mayor detalle la morfologa microbiana. 1) Microscopio electrnico de transmisin: Es un microscopio ptico invertido. El haz de e-, procedente de un filamento de tungsteno calentado se enfoca sobre la muestra con el condensador. Como los e- no pueden atravesar una lente de vidrio, se emplean electroimanes para concentrar ese chorro de esobre la muestra. La columna que contiene las lentes y la muestra deben estar en condiciones de vaco para obtener una imagen clara porque los e- se desvan al chocar con las molculas de aire. La muestra dispersa los e- que pasan a su travs, y este haz se enfoca con otro grupo de electroimanes para formar una imagen aumentada y visible sobre una pantalla flourescente. Limitaciones: slo funciona a alto vaco, lo que implica que las muestras a realizar deben estar deshidratadas anteriormente para evitar la ebullicin y evitar formas extraas llamadas artefactos que no existen en la realidad, por lo que este tipo de microscopio no sirve para ver muestras vivas. 2) Microscopio electrnico de barrido o scanner: Se diferencia de otros microscopios electrnicos en que produce una imagen a partir de eemitidos por la superficie de un objeto, en lugar de a partir de e- transmitidos. Realiza un escner con un estrecho haz de e- en forma de prisma, de adelante hacia atrs sobre la muestra. Cuando el haz incide sobre una zona concreta de la muestra, los tomos de la superficie emiten una nube de e- que son atrapados por un detector especial. Inciden sobre un centelleador, causando la emisin por ste de centelleos de luz que un fotomultiplicador transforma en una corriente elctrica y la amplifica. La seal se enva a un tubo de rayos catdicos y se produce una imagen como en la pantalla de televisin, que puede verse y fotografiarse. Slo permite ver superficies.

TINCIONES
Aunque los microorganismos se pueden examinar directamente con un microscopio ptico, a menudo hay que fijarlos y teirlos para aumentar la resolucin, acentuar las caractersticas morfolgicas y conservarlos para su estudio en el futuro. 18

Primero hay que fijar la muestra. La fijacin es el proceso por el cual se conservan y fijan en su posicin las estructuras internas y externas de las clulas de los microorganismos. Se realiza el frotis del objeto en un porta y se fija, lo que limita el movimiento Browniano de las partculas de suspensin e inactiva enzimas que podran alterar la morfologa celular. Para la tincin se emplean colorantes, que son compuestos orgnicos que presentan, desde el punto de vista funcional, 2 partes en sus molculas: - Radicales cromatforos: le dan color a la molcula y tienen grupos nitro (NO2) o grupos azo (-N=N-). - Grupo auxocromo: son las zonas reactivas, que presentan grupos amino (NH 3+), hidroxilo (OH) o carboxilo (COO-).

- CLASIFICACIN DE LOS TINTES POR SUS COMPUESTOS QUMICOS

a) Colorantes cidos: El grupo auxocromo es un anin y su cromforo ser un cido. Estos colorantes, debido a su carga negativa, se unen a estructuras celulares cargadas positivamente (elementos celulares bsicos). Ejemplo: eosina, fucsina, rojo congo, rosa de bengala b) Colorantes bsicos: El grupo auxocromo es un catin, por lo que se van a unir a molculas cargadas negativamente (elementos celulares cidos). Ejemplo: azul de metileno, cristal violeta, safranina, verde malaquita c) Colorantes neutros: Presenta un componente cido y otro bsico, o simplemente uno que no est cargado. Ejemplo: negro Sudn, que se disuelve mejor en componentes lipdicos que en el agua.

- MECANISMOS DE TINCIN
Al teir una clula se producen reacciones de intercambio inico. Existen 3 tipos de tinciones en Microbiologa: 1) Tinciones simples o directas: Utilizan un solo colorante y tie por igual a toda la bacteria. Los ms utilizados son el azul de metileno, cristal violeta y carbolfucsina. 2) Tinciones negativas o indirectas: No son verdaderamente tinciones. Se tie todo el fondo pero no la bacteria. Ejemplo: tincin de Fleming, consistente en utilizar tinta china que se aade al medio hacindolo opaco a la luz y no penetra en las bacterias. Equivaldra a la microscopa ptica de fondo oscuro. Existen microorganismos que al aplicrseles tinciones mueren por toxicidad. Para observar organismos vivos a veces hay que utilizar las tinciones negativas o indirectas. Por ejemplo, Treponema pallidum es difcil de observar en vivo con el fondo claro. 3) Tinciones diferenciales:

19

Emplean siempre ms de un colorante, y las clulas se tien de manera diferente dependiendo del tipo de microorganismo. Permite observar y establecer diferencias entre los microorganismos dependiendo de sus propiedades de tincin. Ejemplo: tincin de Gram, tincin de cido alcohol resistente.

Fue desarrollada por el mdico dans Christian Gram en 1884, y es el mtodo de tincin ms ampliamente utilizado en bacteriologa. Se trata de un mtodo de tincin diferencial que divide a las bacterias en dos clases: Gram positivas y Gram negativas. Se basa en la naturaleza de la pared celular. En el primer paso de esta tincin, el frotis se tie con cristal de violeta durante 2 minutos. Se tira el exceso y se aplica una solucin yodoyodurada o Lugol-Yodo (I2-IK) durante 1 minuto, se tira el exceso y se decolora el frotis lavndolo con etanol o acetona. Este paso produce el aspecto diferencial de la tincin de Gram. Finalmente, el frotis se tie de nuevo con safranina, se aclara con agua y se seca. Al darle cristal de violeta (CV) se forman complejos de este tinte en el interior de las clulas. Luego el Lugol-Yodo hace que se fije ms la unin del CV con la clula, formando un complejo llamado CV-I, que es ms insoluble en agua y en alcohol. Las clulas se decoloran dependiendo de su porosidad. En unos casos se extrae CV-I y en otros no. La decoloracin de contraste ( safranina) se utiliza para clulas a las que se ha extrado CV-I.
GramGram+

TINCIN DE GRAM:

Cv y Lugol-Yodo

Aclarar con etanol-acetona

Safranina y aclarado

Se distinguen 2 tipos de clulas: - Gram positivas: violetas - Gram negativas: rosas o rojas

- TINCIN DE CIDO ALCOHOL RESISTENTE

Es otro mtodo importante de tincin diferencial. Hay algunas bacterias difciles de teir, pero que una vez teidos es difcil decolorarlos. Se trata de teirlas con un tratamiento ms fuerte: calentando una mezcla de fucsina bsica y fenol ( mtodo de Ziehl-Neelsen). Una vez que la fucsina bsica ha penetrado en la clula con la ayuda del calor y el fenol, las clulas cido-alcohol resistentes no se decoloran fcilmente con una solucin acidoalcohlica, permaneciendo de color rojo. Este mtodo se emplea para identificar Mycobacterium tuberculosis y M. leprae. Se diferencian 2 tipos de clulas: - Ziehl-Neelsen positivas: moradas, no se decoloran - Ziehl-Neelsen negativas: azules Todas las ZN+ son Gram+, pero no todas las Gram+ son ZN+. 20

4) Tinciones especficas o selectivas: Tien partes especficas de las clulas: - Tincin para flagelos - Tincin para paredes celulares: tincin de Wirtz para bacterias esporuladas. Una determinada tincin simple o directa es el azul de metileno o de Loeffler es tambin una tincin especfica o selectiva. Hay unos componentes en procariotas que son los corpsculos metacromticos o grnulos de volutina o polifosfatos . Si hacemos que el azul de metileno entre dentro de las clulas, nos marcar en determinados puntos de la clula los acmulos de polifosfatos. Una tincin simple se utiliza como especfica en este caso.

TEMA 5: CONTROL MICROBIANO

CONCEPTOS
1. Esterilizacin: cualquier proceso fsico o qumico que destruye o elimina todas las formas de vida, tanto clulas vegetativas como esporas. Un medio estril, por tanto, es un medio desprovisto de vida. 2. Desinfeccin: cualquier proceso fsico o qumico que microorganismos en desarrollo o clulas vegetativas, pero no esporas. destruye o elimina

3. Antisepsia: prevencin de una infeccin o sepsis mediante antispticos, que son agentes qumicos que se aplican sobre los tejidos vivos para prevenir una infeccin, destruyendo o inhibiendo el crecimiento de agentes patgenos. Por su modo de accin, estos mtodos de control microbiano se pueden clasificar en: 1) Microbicidas: producen la muerte irreversible del microorganismo (agentes bactericidas, fungicidas,). 2) Microbiostticos: no mata al microbio sino que inhibe su crecimiento. Si lo quitamos del medio, el microorganismo puede volver a crecer (agentes bacteriostticos, fungistticos, ). Algunos pueden ser desinfectantes y/o esterilizantes, dependiendo del tiempo que se aplique, de la dosis y del tipo de clula (las clulas jvenes son ms sensibles que las viejas).

AGENTES ESTERILIZANTES Y/O DESINFECTANTES

AGENTES FSICOS
- CALOR
Se puede aplicar de dos formas: - Calor hmedo: ejerce su efecto porque coagula las protenas y las desnaturaliza. Es ms efectivo que el seco, porque el aumento de la temperatura se transmite mejor a travs del agua que del aire. - Calor seco: ejerce su efecto de oxidacin de los constituyentes celulares. 1. Calor hmedo 21

a) Ebullicin: consiste en someter un lquido a 100C. Es un proceso desinfectante porque los 100C no eliminan endosporas bacterianas. b) Autoclave: a diferencia de la ebullicin, es esterilizante. Bsicamente es una gran olla a presin con una resistencia en el fondo y una tapa que permite el cierre hermtico. Al aplicar calor, el agua se calienta y pasa a estado de vapor. Ese vapor que se va acumulando hace que aumente la presin por encima de la atmosfrica y se consigue un aumento de la temperatura de ms de 100C. PV Ley de Boyle Mariotte: = cte T Al aumentar la presin, aumenta la temperatura. La presin aumenta en 1,1kg/cm2 (1 atm ms que la atmsfera), lo que permite alcanzar una temperatura de 121C. Con esta temperatura ya se consigue eliminar las endosporas. Es un mtodo esterilizante por corriente de vapor a elevada presin. Se utiliza para esterilizar material contaminado, ropa, material quirrgico, catteres, guantes de goma, soluciones salinas, medios de cultivo cualquier material termoresistente. Un ciclo estndar de autoclave consiste en: 1,1 kg/cm2 121C durante 20 minutos

c) Tindalizacin o esterilizacin fraccionada: llamada as por John Tyndall. Es un mtodo esterilizante consistente en aplicar 3 procesos de ebullicin en 3 das consecutivos (1 por da): - 1er da: 100C 30min. Se eliminan clulas vegetativas. Luego se deja reposar 24h a T ambiente. - 2 da: 100C 30min. Elimina las clulas vegetativas que proceden de las esporas: el cambio radical de T puede ser un estmulo para que las esporas salgan de su estado de latencia. Se deja reposar otra vez. - 3er da: 100C 30min. Por si queda alguna espora. d) Pasteurizacin: introducida por Pasteur. Es un mtodo muy utilizado para evitar la contaminacin en alimentos como la leche, el vino y la cerveza. Es un proceso de calentamiento suave para eliminar los posibles patgenos del hombre que se transmiten por estos alimentos, como los de la leche (Mycobacterium tuberculosis, que muere a 60C, o Coxiella burnetti, que aguanta temperaturas superiores). - Pasteurizacin lenta o LTH (Low Temperature Holding): 63C 30min. - Pasteurizacin rpida o HTST (High Temperature Short Time): 72C 15seg. - UHT (Ultra High Temperature): se somete a 140-150C durante 2-5seg. Es la leche uperisada. 2. Calor seco a) Incineracin: proceso que consiste en aplicar a la llama de un mechero lo que queramos esterilizar. Produce oxidacin ultrarrpida que conduce a la muerte de los microorganismos.

22

b) Horno Pasteur: consigue temperaturas bastante altas y una esterilizacin media (180C durante 2 horas). Se utiliza para material termorresistente como material de vidrio, tijeras, bistur, objetos metlicos. El autoclave es ms efectivo al ser ms rpido, pero sus ventajas son el no corroer utensilios de cristal ni metlicos y puede utilizarse para esterilizar polvo, aceite y otros materiales diversos.

- RADIACIONES
Bloquean la correcta sntesis del DNA. Su accin depende del tipo de radiacin, el tiempo de exposicin y la dosis empleada. Las que causan la muerte de microorganismos pueden ser de 2 tipos: 1. Radiaciones ionizantes Agente esterilizante que utiliza una muy corta (<1nm). Presenta un gran poder de penetracin por lo que se pueden esterilizar materiales despus de haberse empaquetado. Los ms utilizados son: a) Rayos b) Rayos X 2. Radiaciones no ionizantes Presentan una mayor (>15nm) aunque la ms efectiva es la comprendida entre 200300nm. a) Luz ultravioleta: ejerce su efecto provocando errores en la duplicacin del DNA. Es bastante letal, pero no atraviesa eficazmente el cristal, las pelculas de suciedad, el agua ni otras sustancias, por lo que se utiliza para descontaminar superficies, como habitaciones.

- FILTRACIN
No afecta a la viabilidad del microorganismo: no destruye los microorganismos, sino que simplemente los retira o separa fsicamente del medio. Existen numerosos tipos de filtros: 1. Filtros de membrana Son filtros circulares de membranas porosas de acetato de celulosa o nitrato de celulosa. Tienen unos poros de unos 0,22m de dimetro que permiten el paso de la solucin pero no de clulas vegetativas, aunque no de virus. Es una esterilizacin. Se han de utilizar equipos de filtracin, como el consistente en un matraz con una abertura lateral o Kitasato, conectado a una bomba de vaco. Hay un embudo sobre el que se pone el filtro, que a su vez se posa sobre otro embudo. Se utiliza para soluciones o medios termolbiles. Como aplicacin adicional se puede utilizar este filtro para desarrollar colonias y hacer un recuento de las clulas que haba en un medio determinado. Es muy utilizado para el anlisis microbiano de aguas. 2. Filtros HEPA Son filtros de alta eficacia de retencin de partculas del aire.

23

 AGENTES QUMICOS
Se dividen en: - Esterilizantes - Desinfectantes y antispticos 1. Esterilizantes a) Gases: emplea gases como el xido de etileno y la -propiolactona. Ejercen su accin porque producen alquilaciones en protenas, es decir, la sustitucin de grupos H en protenas, alterando la estructura y funcionalidad de esas protenas). El xido de etileno tiene mayor poder de penetracin que la -propiolactona y se utiliza para esterilizar material ya empaquetado. b) Aldehdos: los ms utilizados son el formaldehdo y el glutaraldehdo. Ejercen su accin porque se combinan con los cidos nuclicos y las protenas, inactivndolos. Tambin posee efecto esporicida. Se utilizan para descontaminar edificios. 2. Desinfectantes y antispticos a) Inorgnicos: - Metales pesados: Hg (mercromina), Ag, Zn (fungicida), arsnico, Cu (sulfato de cobre para las piscinas). - cidos y lcalis: actan alterando la permeabilidad celular y coagulando protenas. El ms usado es la sosa (NaOH), pero est limitado por su alto poder corrosivo. - Compuestos oxidantes: como el perxido de hidrgeno (H2O2) o agua oxigenada. Acta oxidando compuestos de las membranas celulares y enzimas, y diluda se utiliza como antisptico. - Halgenos: como el cloro y el yodo. Son fuertementes oxidantes. El cloro (utilizado como cloro, cloro gas o hipoclorito sdico (leja)) se combina con el agua dando xido atmico, que acta oxidando protenas. Cl + H2O HClO HCl + HClO HCl + O

El yodo (usado como tintura de yodo, yodforos) tiene un efecto desinfectante mediante la inactivacin de proteinas y enzimas. Al aumentar su concentracin, tambin tiene efecto esporicida. b) Orgnicos: - Alcoholes: efecto bactericida y fungicida. Actan desnaturalizando protenas, disolviendo los lpidos de membrana y como agentes deshidratantes. Cuanto ms larga es su cadena carbonada, ms efecto bactericida, menos solubles en agua y menos efecto como agentes antimicrobiano presenta. - Fenol y compuestos fenlicos: el fenol fue el primer antisptico y desinfectante de uso generalizado. Hoy en da se usa poco ya que es muy txico. los compuestos fenlicos alteran protenas y la permeabilidad de la membrana plasmtica. Los ms usados son el hexaclorofeno, ortofenilfenol, ortocresol. - Colorantes: tambin tienen efecto antimicrobiano. - Colorantes derivados de la acridina: como el naranja de acridina, que interfiere en la correcta sntesis de DNA. -Colorantes derivados del trifenilmetano: como el cristal violeta, violeta de genciano, verde malaquita, bloquean la correcta sntesis del peptidoglicano de la pared bacteriana. Efecto mayoritario contra las bacterias Gram+. 24

- Detergentes: ejercen su accin porque lesionan la membrana plasmtica de las clulas desordenando la disposicin de protenas y fosfolpidos de membrana. Tienen una amplia utilidad como desinfectantes y son efectivos contra la mayora de las bacterias pero no contra las esporas. Los detergentes con ms capacidad desinfectante son: - Detergentes catinicos - Compuestos del amonio cuaternario: tienen en su estructura un positivamente. Por ejemplo, el cloruro de benzalconio. nitrgeno cargado

COEFICIENTE FENLICO (CF)

Es un parmetro que se calcula para cada uno de los desinfectantes con el que se mide la efectividad de ellos en comparacin con la del fenol. Se utiliza el fenol por ser el primer desinfectante que se us.
CF = 1 CF < 1 CF > 1 el desinfectante tiene la misma efectividad que el fenol es ms efectivo que el fenol es menos efectivo que el fenol

BLOQUE II : ESTRUCTURA Y FUNCIN EN LOS MICROORGANISMOS

TEMA 6: MORFOLOGA EXTERNA DE LA CLULA PROCARIOTA
TAMAO DE LOS PROCARIOTAS
Las medidas utilizadas son el nanmetro (nm) y la micra (m). El dimetro de las clulas procariotas es normalmente inferior a 2m. El tamao es un parmetro determinado genticamente y condicionado por los factores ambientales. Ejemplos de bacterias y sus tamaos: - Bacillus megaterium: 1,5 x 4 m. Es de las bacterias ms grandes. - Oscillatoria: 8 x 50 m. Es una cianobacteria. - Epulopiscium: puede alcanzar longitudes de 500m (0,5mm). Se descubri en 1993. - Thiomargarita: alcanza hasta 700m de dimetro. Se descubri en 1999. - Streptococcus pnemoniae: 0,8m de dimetro. - Haemophillus influenzae: 0,25 x 1,2 m. - Micoplasmas: 0,2m. - Nanobacterias o ultramicrobacterias: 0,05m. Consecuencias de tener un tamao pequeo: 1. Se necesita usar un microscopio para observar la muestra. 25

2. Si se quiere extraer una conclusin acerca de una caracterstica, hay que estudiar poblaciones del mismo tipo de bacteria. 3. Las bacterias en una solucin dispersan la luz (efecto Tyndall) y confieren turbidez a los medios. 4. Aumentan la viscosidad de los medios en los que habitan. 5. Presentan una alta relacin superficie/volumen (s/v), ya que, a mayor relacin, ms puntos de contacto con el medio presentan, y por tanto mayor capacidad de captar nutrientes y desecharlos, lo que les confiere adems una mayor tasa de crecimiento. R=1
s

/v = 3
s

4r2 /v = 4/3r3 =

R=2

/v = 1,5

MORFOLOGA DE PROCARIOTAS
Existen distintos tipos de morfologas: 1. Coco: clulas de forma esfrica 2. Bacilo: forma cilndrica o de bastoncillos con extremos de diferente manera (puntiagudos, redondeados, cuadrados,). 3. Bacilococo o cocobacilo: bacterias no tan alargadas como los bacilos ni tan esfricas como los cocos. An as siguen siendo ms anchas que largas. 4. Espirilo: morfologa en espiral o helicoidal, pudiendo presentar una o ms vueltas de hlice. A su vez se dividen en: a) Espirilo: clula helicoidal rgida b) Espiroqueta: clula helicoidal flexible 5. Vibrios: clulas con morfologa similar a una coma o a un bacilo curvado, asemejndose a una media vuelta de hlice. Existen otras morfologas diferentes, como clulas filamentosas, alargadas, que forman prolongaciones (tallos o pednculos).

- AGRUPACIONES DE CLULAS La mayora de los procariotas se dividen asexualmente por fisin binaria. Se forma un tabique transversal y se separan las 2 clulas. Hay agrupaciones de clulas caractersticas: 1. Cocos Diplococos: son asociaciones de parejas de cocos. Se produce cuando los tabiques de divisin son en un solo plano y paralelos. Ej: Neisseria. Estreptococos: los tabiques de divisin son en un solo plano y paralelos entre s. Ej: Streptococcus. Ttradas: los tabiques de divisin son paralelos o perpendiculares entre s dando lugar a agrupaciones en ttradas o mltiplos de 4. Ej: Pediococcus. 26

 Sarcinas: los tabiques de divisin aparecen en las 3 dimensiones del espacio, formando paquetes cbicos. Ej: Sarcina. Estafilococos: son agrupaciones de cocos irregulares. Los tabiques de divisin aparecen en cualquier direccin. Aspecto de racimo. Ej: Staphylococcus. Estreptococos Ttradas Coco Diplococos Sarcinas

Estafilococos 2. Bacilos Estreptobacilos: cadena de bacilos. Ej: Bacillus. En empalizada En forma de V, de L o formas ms peculiares. Estreptobacilus En empalizada

Bacilo

Otras formas

- RELACIN ENTRE FORMA Y MODO DE VIDA

La relacin superficie/volumen es mayor en bacilos y cocos, y an mayor en bacterias filamentosas. Sin embargo, los cocos suelen ser ms resistentes que los bacilos. La mayor relacin superficie/volumen se presenta en una bacteria, la bacteria de Walsby, que es cuadrada, y que se descubri en una charca salina.

- FENMENO DE MULTICELULARIDAD
La mayora de los microorganismos son unicelulares. No obstante, algunas forman grupos de bacterias, como: - Cianobacterias: son bacterias Gram-. - Actinomicetes: son bacterias Gram+.

ESTRUCTURAS EXTERNAS
Son: 27

Cpsula Pared celular Membrana plasmtica Fimbrias Protoplastos Flagelos

LA CPSULA
Es una capa de naturaleza viscosa o mucilaginosa que presentan algunos procariotas externamente a la pared celular. No es indispensable para la vida del microorganismo. Las cpsulas bacterianas pueden estar asociadas en mayor o menor grado a la pared celular, clasificndose as en: - Integrales: asociadas a la pared celular - Perifricas: asociadas dbilmente a la pared celular En base a su consistencia, las cpsulas pueden ser: - Rgidas: gran consistencia - Flexibles: baja consistencia La denominacin de cpsula se utiliza para aquellas capas integrales y rgidas. Sin embargo, las perifricas y flexibles se denominan capas mucilaginosas. Algunos autores les llaman cpsulas a las dos. La cpsula se puede poner de manifiesto por tincin negativa (tinta china).

- COMPOSICIN QUMICA Y ESTRUCTURA

Las cpsulas pueden tener naturaleza: 1. Polipeptdica: son poco comunes. Es un polmero formado por el aminocido glutmico. Se presentan, por ejemplo, en Bacillus anthracis. 2. Polisacardica: son las ms comunes. Se las conoce como glicoclix. A su vez se diferencia en: a) Fabricadas con gasto de energa interno por parte de la clula o de origen interno: son cpsulas constituidas por polisacridos sintetizados directamente por la clula. b) Fabricadas sin gasto directo de energa o de origen externo: la bacteria sintetiza la cpsula a partir de sustancias que encuentra en el medio que la rodea. GDPGal GTP ATP UTP ADP-

UDP- glc gal Estos compuestos se transportan fuera por un lquido isoprenoide y se van formando los distintos tipos de cpsulas. Acetobacter xylinum: presenta una cpsula de celulosa compuesta por unidades de glucosa (1-4).

28

 Agrobacterium tumefaciens: unidades de glucosa (1-2), que es un tipo de enlace exclusivo de esta bacteria. Escherichia coli: forma dmeros, produciendo cidos colnicos. Pseudomonas sp: utiliza polisacridos derivados de la glucosa, llamados cidos poliurnidos. Streptococcus pneumoniae: presenta una cpsula mixta, compuesta por muchos polisacridos diferentes con muchos tipos de enlaces, todos derivados de la glucosa.

- CPSULAS SIN GASTO DE ENERGA

Se sintetizan dependiendo de la naturaleza del medio, de si hay sustancias para sintetizarlas. Leuconostoc mesenteroides: su cpsula se utiliza como agente espesante en la industria agroalimentaria. Para formarla, necesita sacarosa, que debe estar presente exgenamente en el medio. Una enzima, la invertasa, separa la sacarosa en glucosa y fructosa, y la bacteria utiliza uno de los dos como fuente de carbono y con el otro forma la cpsula, dependiendo de la cepa que sea. Parte de la energa que obtiene al romper este enlace lo utiliza para pegar el monosacrido que no usa como fuente de carbono a una molcula de sacarosa. Sac-frc-frc-frc-frc-(frc)n Sac-glc-glc-glc-glc-(glc)n forma un compuesto llamado levano forma un compuesto llamado dextrano

Las cpsulas en general presentan numerosas funciones: 1. Receptores virales: la cpsula es el lugar donde los virus se pegan por una adhesin especfica. Hay reconocimiento especfico, determinado muchas veces por la naturaleza de la cpsula. 2. Propiedades de adherencia 3. Produce proteccin frente al sistema inmune 4. Produce mayor capacidad de invasin: por ejemplo, Streptococcus pnemoniae pasa desapercibido con la cpsula por el sistema inmune, pero es detectado sin ella. 5. En algunos casos, actan como antgenos de sustancias dainas. Los antgenos situados en la cpsula son antgenos V.

LA PARED CELULAR
Da forma a la bacteria. Les da la capacidad de vivir en medios donde vara la presin osmtica. La membrana s es susceptible a los cambios osmticos, ya que al estar reforzada, impide la lisis. En 1952, Salton se dio cuenta de que si se analizaban las paredes de las clulas desde el punto de vista de la composicin qumica, todas encajaban en 2 bloques: 1) 50-80% peptidoglicano Polisacridos cidos teicoicos Protenas (pueden no aparecer) 29

2) 1-10% peptidoglicano Protenas y fosfolpidos Lipoprotenas (LPP) Lipopolisacridos (LPS) Se vio entonces que la pared celular se poda clasificar en 2 tipos: a) Gram+: pared celular homognea, gruesa, con mucho peptidoglicano donde aparecen polisacridos y cidos teicoicos que las distinguen. b) Gram- : lmina muy fina de peptidoglicano que forma una capa rgida. Las protenas y los fosfolpidos forman una membrana externa. Despus el LPP va a anclar la membrana externa a la capa rgida, y el componente ms externo es el LPS. El peptidoglicano define a las clulas como procariotas. Todas las clulas con peptidoglicano son procariotas, aunque no todas las clulas procariotas tienen peptidoglicano. - Micoplasmas: son bacterias sin pared celular, y por lo tanto, sin peptidoglicano. - Arqueas: presentan pseudopeptidoglicano.

- EL PEPTIDOGLICANO
El peptidoglicano o murena es un gran polmero compuesto por muchas subunidades idnticas. Es una especie de celulosa, pero realmente es el precursor de sta porque apareci antes. El peptidoglicano es un heteropolmero que contiene 2 derivados de azcar: - N-acetilglucosamina (NAG) - cido N-acetilmurmico (NAM): derivado del NAG El esqueleto de este polmero est constituido por residuos alternantes de NAG y NAM.
CH2OH H OH H CH2OH OH H NH-CO-CH3 H OH COOH NH-CO-CH3

O OH H

NAG
CH2OH CH2OH CH2OH

NAM

(1-4)
O O

(1-4)

OH

NHCOCH3

COOH

NHCOCH3

NHCOCH3

30

NAG

NAM

NAG

El grupo COOH del NAM es muy reactivo y puede formar enlaces con aminocidos, que en procariotas pueden ser del tipo L y D. NAG NAM NAG NAM NAG NAM
L-ala D-glut c. mesodiaminopimlico D-ala (tiene un COOH terminal que puede unirse a otra cadena tetrapeptdica por un puente peptdico, o directamente al cido diaminopimlico de la otra cadena)

Las cadenas de subunidades de peptidoglicano estn entrecruzadas por sus pptidos. A menudo, el grupo carboxilo de la D-alanina terminal de una murena est conectado directamente al grupo amino del cido diaminopimlico de una murena de otra cadena paralela, pero en otras ocasiones se puede emplear en su lugar un interpuente peptdico.

- PARED CELULAR DE GRAM POSITIVAS

Normalmente, la gruesa pared celular de las bacterias Gram+ est constituida principalmente por peptidoglicano, cuyas murenas a veces estn entrelazadas por puentes peptdicos. Sin embargo, estas clulas contienen tambin una gran cantidad de cidos teicoicos, que son polmeros que se intercalan entre el peptidoglicano y la membrana. Algunos se unen a la membrana estableciendo enlaces con ella; a stos se les llaman cidos lipoteicoicos. Los cidos teicoicos pueden ser: a) Glicerolteicoicos: derivados del glicerol. Distintas molculas de glicerol se unen entre s por puentes difosfato entre el C1 de un glicerol y el C3 de otro glicerol. CH2 CHOH CH2OH O O P OH O CH2OH CHOH CH2

b) Ribitolteicoicos: derivados del ribitol. 2 molctulas de ribitol se unen entre s mediante un enlace difosfato entre el C1 y C5. Los grupos libres forman enlaces de tipo glicosdico con aminocidos. Los cidos teicoicos de las Gram+ se diferencian tambin por los grupos OH que tienen libres. Todo esto constituye una estructura cementante. Los cidos teicoicos tambin actan como antgenos que el sistema inmune de vertebrados reconoce como extrao.

31

- PARED CELULAR DE GRAM NEGATIVAS

La pared celular de las Gram- es ms compleja que la de Gram+. Presenta poca cantidad de peptidoglicano pero mucha de LPS y LPP. La estructura de la pared celular consta de varios estratos. 1. Membrana externa: situada por fuera de la capa fina de peptidoglicano y compuesta por numerosas protenas y fosfolpidos. 2. Capa rgida: fina capa de peptidoglicano. Est fuertemente unida a la membrana externa por LPP, que son molculas que tienen una porcin proteica y otra lipdica. La parte proteica presenta un COOH terminal que puede formar enlaces covalentes con la capa rgida; la parte lipdica se mete entre los fosfolpidos de membrana. Los LPP actan como un enganche estructural entre ambas capas, adems de conferirle impermebilidad a la pared celular por tener permeabilidad selectiva. 3. Espacio periplsmico 4. Membrana plasmtica La capa rgida presenta una serie de discontinuidades que permite que se establezcan uniones entre la membrana externa y la membrana plasmtica, que se denominan uniones de Bayer. No son estructuras estticas, sino que aparecen y desaparecen, dependiendo de las discontinuidades y de las interacciones entre ambas membranas. La causa por la que pierden el CV es porque ste sale por las uniones de Bayer o por las discontinuidades de la capa rgida. La membrana externa tiene protenas como las porinas u Omp (Outer Membrane Proteins o protenas de la membrana externa ). Estas protenas son trmeros formados por 3 unidades idnticas que se asocian dejando un poro en el centro que se cierra o abre en funcin del contacto con las distintas sustancias. Por ejemplo, la OmpC permite el paso de antibiticos. Modificando las porinas, las bacterias pueden hacerse resistentes a antibiticos. Gram+: realizan mucho gasto de energa porque secretan enzimas al exterior para luego recoger lo que stas digieren, pero a lo mejor no recogen nada porque no hay nada en el medio. Gram-: realizan menos gasto de energa porque tienen transportadores especficos, y las enzimas esperan en el protoplasma. Otro componente son los lipopolisacridos (LPS) , molculas complejas que consta de una parte lipdica y parte de carbohidratos. - La parte basal es la lipdica, llamada lpido A o LipA, que contiene cidos grasos y liposamina. - sta se contina con una zona llamada regin R, que es constante en todas las bacterias, con azcares de 7 carbonos o heptosas y oxiazcares. - Despus hay una porcin distal o antgeno O formado por una serie de azcares que se repiten y que varan segn la especie. Este LPS se ancla en la membrana externa por la zona LipA y el resto de la molcula (antgeno O y regin R) salen al exterior. El sistema inmune de vertebrados reconoce el antgeno O como extrao, y es adems txico, produciendo fiebre porque acta sobre los centros termorreguladores de la temperatura. Una enzima, la transpeptidasa, realiza enlaces entre 2 aminocidos (transpeptidizacin). Algunos antibiticos -lactmicos (como la penicilina) inhiben la 32

transpeptidizacin; las bacterias siguen con su pared celular pero no la tienen organizada a nivel de la membrana citoplasmtica: se inhibe la formacin de enlaces pero no los rompe. Las bacterias mueren si estn en fase de crecimiento, porque si los enlaces estn ya hechos no se ven afectados. Para atacar a las clulas ya crecidas hay enzimas, como la lisoenzima descubierta por Fleming, presente en la clara de huevo, en las lgrimas y la saliva. Acta rompiendo los enlaces (1-4) peptidoglicano entre NAM y NAG, en clulas en crecimiento y ya crecidas.
Sin lisozima Lisozima + MgSO4 1M

Protoplasto

Protoplastos: clulas a las que por tratamiento con lisozimas se les ha quitado la pared celular. Es una forma que se obtiene en el laboratorio y est totalmente desprovista de la pared celular. Adquieren una forma esfrica para obtener una mayor relacin superficievolumen. Esferoplastos: los que se consiguen en el laboratorio se denominan formas L. las formas naturales se producen por bacterias que viven en presencia de lisozimas o enzimas similares, en un medio estabilizado osmticamente. Queda parte de la pared celular. Si dejamos las formas L crecer en un medio sin lisozimas, se regeneran totalmente.

Lisis

Esferoplasto

TEMA 7: MORFOLOGA EXTERNA (II)

LOS FLAGELOS
La mayora de las bacterias mviles se desplazan mediante flagelos, que son estructuras huecas que actan como apndices locomotores y para los que existen tinciones especficas. Las clulas pueden presentarlos o no, y si los presentan pueden hacerlo de forma diversa que, adems, es un carcter taxonmico. Polar Subpolar Lofotrica Anfitrica Peritrica

33

Para comprobar si un microorganismos tiene flagelos, se puede hacer mediante siembra en picadura en un medio semislido o con tinciones. Guepardo: desplaza la longitud de su cuerpo 25 veces por segundo. Bdellovibrio: desplaza su cuerpo 60 veces por segundo, gracias a un flagelo polar envainado que mueve la pared celular tambin. Es el microorganismo ms rpido. Los flagelos est compuesto por 3 partes: 1. Filamento o flagelo externo: la parte ms larga y expuesta que se extiende desde la superficie celular hasta la punta. Es un cilindro rgido y hueco constituido por una protena sencilla, denominada flagelina. Esta protena se dispone siguiendo una estructura helicoidal cuya vuelta de hlice es especfica, y su peso molecular tambin vara entre especies. 2. Cuerpo basal: no contiene flagelina. 3. Curva o gancho: segmento curvado y corto, que une el filamento al cuerpo basal y acta como acoplamiento flexible. El gancho y el cuerpo basal son diferentes estructuralmente al filamento. El gancho, ligeramente ms ancho que el filamento, est formado por diferentes subunidades de protenas. El cuerpo basal es la parte ms compleja de un flagelo, y presenta 2 4 anillos unidos por un vstago central. Gram+: presentan 2 anillos S y M, uno interno en comunicacin con la membrana plasmtica y otro externo, unido probablemente a la capa de peptidoglicano. Gram-: presentan 4 anillos, S, M, L y P. Estos ltimos se insertan en la capa rgida y la membrana externa.
Membrana externa Peptidoglicano

L P S M

S M

Membrana plasmtica

Gram + Los anillos S y M son comunes a ambos tipos de bacterias.

Gram -

Alrededor del anillo interno M y anclado en la membrana citoplasmtica hay un par de protenas denominadas Mot, que gobiernan realmente el motor flagelar provocando la rotacin del filamento. Existe finalmente un conjunto de protenas demoninadas Fli que actan como un conmutador del motor invirtiendo la rotacin del flagelo en respuesta a seales intracelulares. Todo esto se realiza con gasto de ATP. El movimiento flagelar es, a veces, necesario para su supervivencia, por ejemplo para salir de ambientes desfavorables. Pseudomonas: microorganismo tpicamente aerobio que produce ATP en presencia de oxgeno por fosforilacin oxidativa. Cuando falta oxgeno en el medio, utiliza un proceso alternativo de obtencin de energa mediante el uso de L-arginina por la va de la arginina hidrolasa, hidrolizando la arginina en citrulina y amoniaco. L-arg Citrulina + NH3 Carbamil-P + Ornitina
ADP + P ATP

34

CO2 + NH3 Las bacterias se pueden mover por otros mecanismos diferentes a la rotacin flagelar. Las espiroquetas y las bacterias helicoidales se desplazan mediante movimientos de flexin y giro producidos por un filamento axial o axostilo. Este filamento tiene origen lofotrico y anfitrico. El nmero de filamentos que componen el filamento axial siempre es doble en el centro respecto a los extremos, y es un carcter taxonmico. Estos filamentos son de flagelina. Otros microorganismos, como las cianobacterias, se mueven sobre superficies por un movimiento que no depende de los flagelos.

PILI Y FIMBRIA
Presentes en todas las bacterias, tengan o no flagelacin. Son estructuras rectas, huecas. Las unidades estructurales son las pilinas, que son protenas especficas de cada tipo de bacterias. Las pilinas forman los pilis o fimbrias que sirven para la sujecin y fenmenos de adhesin, intercambios de DNA por conjugacin, tambin absorcin de bacterifagos, emisin de plsmidos Las pilinas que se van incorporando al flagelo se encuentran en el extremo. Se ha observado por experimentos de pulso y caza, marcando el compuesto radiactivamente: se vio que las pilinas crecen distalmente.

MEMBRANA CELULAR
Es el nico sistema interno que existe en las clulas procariotas. El modelo de mosaico fluido es compartido por las clulas procariotas. Las membranas bacterianas se diferencian normalmente de las de eucariotas en que carecen de esteroles, como el colesterol. En las membranas se sitan permeasas, enzimas biosintticas y tambin todos los mecanismos que generan ATP. Aunque el citoplasma bacteriano no contiene orgnulos membranosos complejos como mitocondrias o cloroplastos, se pueden observar varias clases de estructuras membranosas. Una comn es el mesosoma, que son invaginaciones de la membrana plasmtica con el fin de aumentar la superficie de la membrana, formndose vesculas, tbulos o lamelas. A veces sirve de anclaje del DNA en la replicacin del genforo.

TEMA 8 : MORFOLOGA INTERNA DE LA CLULA PROCARITICA

MATRIZ CITOPLASMTICA
Es la sustancia situada entre la membrana plasmtica y el nucleoide. Est compuesta fundamentalmente por agua (casi 70%). La de las clulas procariotas, a diferencia de la de eucariotas, carece de orgnulos limitados por una membrana unitaria. 35

El interior es granulado por la presencia de ribosomas, que son del tipo 70S. Los ribosomas 70S tienen dos subunidades: 50S y 30S, que estn compuestas de protenas y de RNA. RNA 23S 50S 30S RNA 5S RNA 16S + 21 protenas + 35 protenas

Muchas de estas protenas van a ser diana de muchos antibiticos. El RNA ribosomal de la subunidad 30S se utiliza como marcador biolgico para hacer anlisis cuantitativos y de relaciones entre bacterias.

- ESTRUCTURAS CARACTERSTICAS 1. Inclusiones de reserva: a) Reservas orgnicas no nitrogenadas: como los acmulos de glucgeno y almidn. Son unidades de glucosa unidas por un enlace (1-4). b) Reservas orgnicas no nitrogenadas que slo se encuentran en procariotas y no en eucariotas: como las reservas de poli--OH-butirato. CH3 CH CH2 COOH

OH Se puede unir una molcula de -OH-butirato con otro por enlaces ster, y as formar grandes polmeros. Estos acmulos se pueden ver por microscopa electrnica. Lo acumulan en forma de acmulos no solubles en el interior celular, as no vara la presin osmtica, y tambin evita que se cambie mucho la carga interna manteniendo el PH. c) Reservas orgnicas nitrogenadas: son especficas de procariotas y especficamente de cianobacterias. Se denominan corpsculos de cianoficina, y se trata de un acmulo de arginina y asprtico. Es un dmero que se repite muchas veces. Es una protena nica presente en cianobacterias y no se sintetiza en los ribosomas. Esta protena tiene funcin de reserva y estructural. d) Grnulos de volutina o corpsculos metacromticos: se tien con colorantes bsicos y son acmulos insolubles. Son polmeros lineales de ortofosfato unidos linealmente. Acumula el ATP en forma de polifosfatos actuando como reserva energtica de enlaces de alta energa. (P)n + ATP (P)n+1 + ADP

Este mecanismo no est presente en eucariotas. e) Reservas de azufre: suelen presentarse en microorganismos fototrofos. CO2 + H20 C 6 + O2

36

Es una fotosntesis anoxignica, en la cual no se desprende oxgeno sino azufre. Utilizan compuestos reducidos de azufre en lugar de una molcula de agua. CO2 + H2S C6 + S

Son inclusiones de desecho que corresponden a este azufre, que a veces se almacena fuera o dentro de las clulas. Es un carcter sistemtico. f) Siderforos: acumulacin de metales. Dentro de ellos, estn los magnetosomas, donde se acumulan xidos de hierro, especialmente magnetita. - Aquaspirillum magnetotacticum: se comporta como una brjula. Le sirve a la bacteria como mecanismo de orientacin. Tambin existen orgnulos procariticos limitados por membranas esencialmente proteicas. 1. Vacuolas gaseosas: Formadas por dos tipos de protenas, Gup C y Gup A. Esta membrana proteica delimita un espacio, una especie de vacoulas que encierran gases. La presencia de estos gases va a regular el nivel de flotacin de las clulas. Su movimiento no depende de los flagelos. Aparecen en microorganismos relacionados con ambientes acuticos. Se presentan en microorganismos fototrofos o quimiotrofos, pero siempre acuticos. Oscillatoria thiopedia Ancalomicrobium thothrix fototrofo quimiotrofos

2. Clorosomas o vesculas fotosintticas: Se descubrieron en el gnero Chlorobium. Son estructuras internalizadas y se piensa que son invaginaciones de la membrana que han perdido la porcin lipdica y se han independizado. En ellas se depositan los pigmentos fotosintticos de este grupo de bacterias. En bacterias fototrofas verdes o no purpreas; tambin las clorobacterceas presentan este tipo de estructuras. 3. Carboxisomas o cuerpos polidricos: En todos los microorganismos auttrofos, bien sean fotoauttrofos (cianobacterias) o quimioauttrofos. Son estructuras poligonales, de aspecto granulas y rodeados por una membrana estrictamente proteica. Presentan en su interior la Rubisco (ribulosa difosfato carboxilasa) . Cataliza la primera reaccin del Ciclo de Calvin fijando una molcula de CO2. 4. DNA bacteriano: El interior de la clula presenta una zona difusa que corresponde al nucleoplasma, el cual contiene el genforo bacteriano, compuesto de DNA circular normalmente y que carece de membrana. - Borrelia burgdorferi: fue la primera bacteria en la que se descubri que el DNA no era circular sino lineal. - Las bacterias del gnero Streptomyces tambin presentan DNA lineal. - Las dems bacterias tienen el DNA circular formando el genforo. DNA circular DNA lineal 2 horquillas de replicacin 1 horquilla de replicacin 37

5. Plsmidos: Son formaciones genticas extragenofricas. Existen de diversos tipos, con funciones diferentes, y algunas caractersticas de las clulas vienen determinadas por la presencia o ausencia de estos plsmidos. Algunas bacterias son resistentes a antibiticos por la presencia de plsmidos, otras son patgenas porque el plsmido produce las toxinas (lo que produce la aparicin de una cepa patgena y otra no patgena de la misma bacteria).

- ENDOSPORAS BACTERIANAS Y FORMACIONES CRISTALINASLas endosporas se desarrollan dentro de clulas bacterianas vegetativas de tan slo algunos gneros como Bacillus, Clostridium, Sporosarcina, Sporolactobacillus, Thermoactinomyces, Estos microorganismos son fcilmente aislables en la naturaleza mediante la aplicacin de un choque trmico, que mata a todas las clulas vegetativas. Estas estructuras son extraordinariamente resistentes a situaciones estresantes ambientales, como calor, radiacin ultravioleta, desinfectantes qumicos y desecacin. De hecho, algunas esporas han permanecido viables miles de aos, y se han recuperado especies ya extintas del interior de insectos fosilizados en mbar. En el ambiente, las endosporas permiten la supervivencia de las bacterias cuando la humedad o los nutrientes son escasos. Son, adems, un ndice taxonmico. En Bacillus: Esporas centrales Esporas terminales Esporas subterminales

Las bacterias que forman endosporas slo lo hacen en el periodo estacionario, es decir, cuando ya no crecen ms. Existen distintas fases o estados: 1. Fase I: La clula duplica el DNA y se forma una especie de eje central en el centro de la clula. 2. Fase II: Sin que se rompa la pared, la membrana citoplasmtica se invagina como si fuese a formar un septo central pero no lo forma. 3. Fase III: 38

Se puede provocar o no la expansin de la pared celular

Las invaginaciones de la membrana contactan formando un septo, formndose la proespora. 4. Fase IV: Depende de cmo sea la bacteria y la disposicin final de la espora. Una de las dos partes de la clula comienza a englobas a la otra, que se deshidrata mientras la primera va avanzando sobre ella. Durante esta fase se empiezan a segregar materiales que son: a) Pared celular: tpicamente Gram +. b) Crtex: situado sobre la pared celular, de composicin similar a la pared celular pero carece de tetrapptidos. c) Cutcula: capa estrictamente proteica formada por un aminocido, la cistena. d) Exosporio: superpuesto a todo. Puede presentarse o no, dependiendo de la taxonoma. Son restos de la membrana de la clula lisada que quedan adheridos a la espora. 5. Fase V: Una vez formada la espora, la clula vegetativa se lisa por secrecin de lisozimas y la espora se libera y queda en el medio hasta que las condiciones vuelvan a ser favorables. Con un choque trmico volver a germinar

II

IV

III

Cutcula Crtex Pared celular Exosporio

Estas formas son muy resistentes a factores fsicos y qumicos, gracias a sus envolturas pero tambin a compuestos que slo aparecen en esporas: el cido dipicolnico. Normalmente se encuentra formando a dipicolinato clcico, que es exclusivo de procariotas 39

en su forma esporulada y les proporciona caractersticas refractibilidad. El cido dipicolnico deriva del cido asprtico. Asp Semialdehdo asprtico Piruvato cido Dihidropicolnico
CLULAS NORMALES

de

termoestabilidad

CLULAS EN ESPORULACIN

mDAP

cido Dipicolnico Dipicolinato Clcico

Lys

HOOC

COOH

cido dipicolnico

Nt

Lisis

t
metabolismo primario metabolismo secundario

40

Crecimiento bacteriano N de esporas

La resistencia al calor es paralela al nmero de esporas, al aumento de cido dipicolnico y al aumento de la refractibilidad. Los microorganismos lo hacen como mtodo de supervivencia. No hay aumento del nmero de microorganismos. Durante el perodo de metabolismo secundario se producen compuestos reguladores del proceso de esporulacin, como los antibiticos. Los microorganismos que producen antibiticos ya no crecen, sino que comienzan la esporulacin, as que los antibiticos no suponen una ventaja ecolgica. Todos los microorganismos que sintetizan antibiticos son formadores de esporas, tanto exosporas como endosporas. Existen numerosas diferencias entre la clula vegetativa y las esporas: 1) La estructura de las capas: las esporas tienen una pared celular tipo Gram +, exosporio, crtex y cutcula. 2) Concentracin de calcio: es superior en esporas. 3) Concentracin de cido dipicolnico: mayor en esporas. 4) ndice de refraccin: mayor en esporas. 5) Recursos de reserva: las esporas consumen todos sus productos de reserva durante la esporulacin. 6) Actividad enzimtica: es nula en esporas, y alta en clulas vegetativas. 7) Resistencia: mucho superior en esporas. 8) Concentracin de agua: en las esporas es prcticamente 0. 9) El paso de clula vegetativa a espora: (esporulacin) siempre forma unas estructuras llamativas denominadas protenas paraesporales o cuerpos cristalinos , que son txicas para larvas de insectos. Los compuestos producidos por Bacillus thuringiensis son utilizados en agricultura.

TEMA 9: EL CRECIMIENTO BACTERIANO

- DEFINICIN
El crecimiento se puede definir de 2 maneras diferentes: - Aumento de la capacidad, de los componentes qumicos y de las estructuras de una clula. - Aumento del nmero de clulas. Conocido como crecimiento poblacional. El crecimiento de una poblacin unicelular ocurre de manera exponencial: 2 4 8 16 32 64 41

Ocurre adems a una velocidad de divisin o generacin ms cortos que existen. Hay clulas que se dividen en unos 8 minutos Nt logNt

Crecimiento exponencial

Relacin lineal

MTODOS PARA DETERMINAR EL NMERO DE CLULAS EN UN MOMENTO DETERMINADO

Existen 3 procesos: 1. Contaje celular 2. Determinacin de la masa celular 3. Determinacin de actividades bioqumicas celulares

- CONTAJE CELULAR
1. Contaje microscpico directo: Se basa en la determinacin de clulas totales, tanto vivas como muertas, mediante la utilizacin de cmaras cuenta-glbulos como la de Thoma o Neubauer. Se componen de portaobjetos de vidrio que presentan una depresin donde colocamos la muestra, y sobre ella el cubreobjetos. La depresin tiene 0,1mm de profundidad y 1mm de lado. En total hay 16 cuadrados en el portaobjetos. Mirando por el microscopio observamos una disposicin de las bacterias en los 16 cuadrados. Podemos contar el nmero de bacterias de cada uno de los 16 cuadrados o realizar una media. 1mm x 0,1mm = 0,1mm3 = 10-4 cm3 = 10-4 ml El volmen de muestra que entra en el depsito una vez que lo raseamos con el cubre es de 10-4 ml. __ X 16 10-4 ml = x 1,6 10-5 cls/ml d X = 1 cuadrado D = dilucin (si se ha hecho) 2. Contaje mediante contadores Coulter: Existe un pequeo orificio donde se aplica un campo elctrico, y la corriente que va pasando se registra en un ordenador. Cada vez que pasa una clula aumenta la resistencia al paso de la corriente. Esta interrupcin se registra, se procesa y nos da el nmero de clulas de la muestra. Este mtodo tampoco diferencia entre clulas vivas o muertas. 3. Contaje en placa: 42

Utilizada para contar el nmero de clulas vivas. Se realiza primero una siembra por extensin de una determinada cantidad de muestra, y vemos el nmero de colonias que aparecen. Este nmero de colonias ser un reflejo del nmero que haba antes. El contaje en placas de colonias muestra una vez ms cmo se pueden utilizar las placas de medio con fines microbiolgicos. 4. Determinacin de colonias: Para determinar la concentracin de bacterias en grandes cantidades de lquido (por ejemplo, 1000 litros de agua). Si cogemos como muestra una pequea cantidad, por ejemplo 0,1mm, si la suspensin est muy diluda puede que no haya ninguna bacteria, y pensemos que en el resto tampoco hay ninguna. Para esto hay que concentrar la muestra, por ejemplo filtrando con membranas bacteriolgicas. stas retienen las bacterias, que se van concentrando. La membrana se siembra entera en un medio, y las bacterias desarrollarn colonias encima de la membrana. 5. Tcnica del nmero ms probable (NMP)

- DETERMINACIN DE LA MASA CELULAR 1. Turbidometra: a) Fotometra: se utiliza el fotmetro. Entre un foco receptor de la luz y un receptor de esa luz, si colocamos un tubo con una suspensin podemos estudiar la luz que dispersa. Si el tubo contiene agua, la clula fotoelctrica recoger una intensidad de luz igual que al principio. Si el tubo contiene bacterias en dispersin, llegar una intensidad (I) de luz menor que la inicial. Este aparato mide la cantidad de luz no dispersada, que es inversamente proporcional a la cantidad de clulas que hay. b) Nefelometra: se utiliza el nefelmetro. Las clulas fotoelctricas estn dispuestas de tal manera que recogen la luz dispersada, midiendo su intensidad.

a)

b)

D.O. (Densidad ptica a una determinada)

Recta de calibracin

[C]

43

Esta grfica nos sirve para cada vez que coloquemos un tubo en el fotmetro o en el nefelmetro. Construimos rectas patrones y ya no nos hace falta contar el nmero de clulas si sabemos la densidad ptica. 2. Determinacin del peso seco: Se basa en coger una membrana bacteriolgica y filtrar la muestra. Pesamos la membrana en seco antes de filtrar, y tras filtrar la muestra desecamos la membrana a peso constante, ya que la membrana retiene microorganismos y agua, y el agua debe ser eliminada.
Peso de la membrana desecacin

t Peso de la membrana sin filtrar Peso de la membrana despus de filtrar Masa microbiana

3. Determinacin de un constituyente celular: Por ejemplo, la cantidad de nitrgeno total, DNA Si esta cantidad aumenta, significa que aumenta la masa celular. 4. Determinacin de las actividades bioqumicas celulares : A elevadas concentraciones de los microorganismos, aumenta el consumo de oxgeno. Si la cantidad de bacterias aumenta, tambin lo har la cantidad de sustancias de desecho. Por lo tanto, estas actividades son proporcionales a la masa celular. Ejemplo: en algunas industrias determinadas realizan la prueba de la reductasa. Se usa Azul de Metileno: si se trata de un medio anaerobio se volver blanco, pero su es aerobio ser ms azul. El hecho de que cambie de color nos ayuda a saber la masa celular ya que la leche contiene oxgeno disuelto. Si aadimos una concentracin determinada del colorante a la leche, y calculamos el tiempo que tarda de pasar de azul a blanco, podemos determinar el tiempo de reductasa [microorganismos] [microorganismos] tiempo de reductasa rpido tiempo de reductasa lento

Se puede utilizar esto como ndice de crecimiento microbiano.

44

Al determinar el peso de una masa microbiana, y sabiendo el nmero de clulas que hay, podemos saber el cunto pesa un microorganismo solo. Independientemente de cmo midamos el crecimiento microbiano, podemos estudiar su evolucin inoculando un medio lquido.
Trofofase N cls (N) Idiofase lisis

Lac

Log

Estacionaria

CULTIVOS ASINCRNICOS Y SINCRNICOS

En la industria a veces nos interesan los microorganismos en su fase exponencial o Log. Para conseguirlo podemos realiza 2 mtodos: 1. Cultivo asincrnico o discontnuo : se trata de aprovechar al microorganismo en esta fase, y cuando pase a otra entonces empezar otra vez otro cultivo.

A = exceso de medio B = equilibrio C = dficit de medio 2. Cultivo continuo: se puede conseguir mediante 2 tcnicas: a) Quimiostato b) Turbidostato No vamos a diferenciar entre los 2. Si queremos mantener al microorganismo en fase exponencial, podemos poner un dispositivo ptico para medir la densidad ptica. Si le acoplamos un sistema que nos abra una vlvula con medio de cultivo nuevo, cuando alcance una densidad ptica determinada, se abrir y caer una gota porque est nivelado. Al caer 45

medio nuevo, la densidad ptica baja porque el medio se diluye. Al crecer las clulas, vuelve a subir la densidad ptica. Es un crecimiento exponencial continuo. Densidad ptica = KN K = n Si una industria est interesada en un producto, como el cido ctrico, tiene que conseguir un cultivo continuo, apartar las clulas y as obtener el cido ctrico. A nivel industrial, el cultivo continuo es muy importante. Volumen constante Cultivo continuo Concentracin celular constante

Hasta ahora hemos visto el crecimiento a nivel poblacional pero no nos ayuda a estudiar el individual. Todas las clulas no crecen igual, hay asincrona: todas se dividen pero no al mismo tiempo. Si logrramos que todas se dividiesen a la vez, actuaran como una gran clula, y estudiando una poblacin es como si estudisemos una sola clula. El cultivo continuo permite tener una poblacin en fase exponencial pero asincrnica. El ciclo de los procariotas se divide en unas fases segn los procesos que realizan con el DNA: Clula hija G1 D G2 G0 G1 (fase gap) S : fase de sntesis de DNA. Se inicia con un cromosoma bacteriano y termina con 2. G2 Divisin o citoquinesis G0 : la clula no se divide Hay un crecimiento asincrnico: algunas clulas estarn en G1, otras estarn en S, Para conseguir un crecimiento sincrnico, debemos estudiar la fase exponencial: LogN S D G2 G1 S

46

En la grfica podemos ver que las clulas se dividen como en pulsos. Cada paso de la escalera en la grfica es un paso de generacin. Los cultivos sincrnicos no duran mucho: tarde o temprano aparecer asincrona. Un cultivo asincrnico es una suma de muchos cultivos sincrnicos, cada uno en una fase. El efecto sumatorio de esa sincrona es lo que nos da la lnea recta. Para obtener un cultivo sincrnico tenemos 2 tcnicas diferentes: 1) Mecanismos de induccin 2) Mecanismos de seleccin

- MECANISMOS DE INDUCCIN Consiste en manipular las condiciones ambientales. a) Cuando un procariota se est dividiendo, se dan numerosos procesos bioqumicos dependientes de elementos del medio. Si le quitamos uno, podemos detener al procariota en una fase determinada. Por ejemplo, si quitamos del medio un elemento necesario para la sntesis de DNA (fase S), tarde o temprano todas las clulas estarn bloqueadas en el mismo punto. b) Otro mtodo es manipulando la temperatura: algunas fases son termosensibles. Si una fase se debe realizar a una temperatura determinada, y la modificamos, todas las clulas se quedarn paradas porque no podrn realizar esa fase. c) Tambin podemos aadir un factor limitante cuando tenemos a todas las clulas en G 0 porque hayamos bloqueado una fase: entonces todas las clulas comenzarn a crecer al mismo tiempo.

- MECANISMOS DE SELECCIN
Consisten en separar a las clulas fsicamente y sembrar slo aquellas que se encuentren en la misma fase. a) Tcnica de Helmstetter-Cumings (Baby Machine): se basa en que si cogemos clulas que estn creciendo asincrnicamente y las hacemos pasar por una membrana con un tamao de poro ms pequeo de lo normal, las clulas que se estn dividiendo quedarn retenidas en el poro, mientras que las hijas caern sobre una bandeja que tenemos bajo la membrana. Esta bandeja tiene un sensor que recoge cada 2 segundos las clulas hijas que han cado, y as tenemos una cierta cantidad de clulas en la misma fase. b) Tcnica de Mitchinson: se basa en que a lo largo del ciclo celular, segn las fases por las que pasen, las clulas sufren cambios de densidad. Se centrifuga en sustratos no metabolizables las clulas de un cultivo discontinuo o asincrnico. Obtenemos as distintas bandas con distintas densidades. Sembrando cada banda obtendremos muchos cultivos sincrnicos diferentes.

47

5%

60%

5%

60%

60% 5% 5%

60%

60% gota ser de

Si ponemos las clulas en La 1 el tubo, bajarn hasta 60% de sacarosa; la que encuentren su misma 60% porque ya habr densidad. bajado una gota de 5%. La ltima ya ser del 5%

Nos permite obtener, a partir de un cultivo asincrnico exponencial, un cultivo sincrnico para cada fase del ciclo (una fase por banda). Este tubo que presenta bandas de gradiente continuo o discontinuo (es mejor el de gradiente continuo) tarda horas en homogeneizarse.

TEMA 10 : CRECIMIENTO

FACTORES

AMBIENTALES

La actividad y el crecimiento de los microorganismos est condicionado por los factores ambientales: se desarrollan en las condiciones fsicas y qumicas del ambiente que les rodea. As, el ambiente determina la distribucin y abundancia de los microorganismos. Conociendo sto podremos saber cmo controlarlos.

TEMPERATURA
TEMPERATURAS CARDINALES DISTINTIVAS
Afecta al crecimiento y la supervivencia de microorganismos. Afecta a la velocidad de las reacciones enzimticas y sto afecta a la velocidad de desarrollo: al aumentar la temperatura, aumenta la velocidad de las reacciones enzimticas y tambin el crecimiento. Existe una temperatura a partir de la cual se ve afectada la velocidad y la supervivencia, porque si la temperatura es muy alta, las protenas y cidos nucleicos se desnaturalizan y las estructuras pueden sufrir daos irreversibles. Para cada especie microbiana existen 3 tipos de temperaturas: 48

1. Temperatura mxima: por encima de la cual no hay crecimiento. A partir de esta temperatura la membrana se colapsa, las protenas se desnaturalizan e incluso se puede llegar a la lisis celular. No suele estar muy lejos o ser muy superior de la temperatura ptima. 2. Temperatura ptima: aquella en la cual la velocidad de crecimiento es mxima. 3. Temperatura mnima: por debajo de la cual no hay crecimiento. Las membranas se gelifican, pierden fluidez y el transporte a travs de la membrana se ralentiza o cesa. Es la causa principal que impide el crecimiento microbiano. Para cada microorganismo existe un rango. La amplitud de este rango vara. As, diferenciamos entre organismos: a) Estenotermos: presentan un intervalo de temperaturas relativamente pequeo o estrecho. b) Euritermos: presentan un intervalo amplio. En relacin con su temperatura ptima, establecemos la siguiente clasificacin: 1. Crifilos o psicrfilos: microorganismos capaces de crecer a 0C. Su temperatura mnima es inferior a 0C. sto es independiente de que su temperatura ptima est en una zona templada. a) Psicrfilos obligados: su temperatura ptima es 15C, y su temperatura mxima ronda los 20C. b) Psicrfilos facultativos: tambin llamados psicrotrofos o psicrotolerantes. Su temperatura ptima es de 20-25C, y pueden crecer por encima de los 20C. Ambos tienen en comn que su temperatura mnima siempre va a ser menor de 20C. Los psicrfilos poseen encimas que funcionan mejor a bajas temperaturas y que se inactivan a temperaturas superiores a 30 40C. las membranas celulares tienen una mayor concentracin de cidos grasos poliinsaturados. El grado de saturacin de los cidos grasos determina la fluidez de la membrana:
Mayor saturacin Menor saturacin Menor fluidez membrana Mayor fluidez membrana Menor funcionalidad a bajas T Mayor funcionalidad a bajas T

Las bajas temperaturas no matan a los microorganismos ya que son bacteriostticos: slo se inhibe su crecimiento. Ejemplos de bacterias psicrfilas: Listeria monocytogenes Pseudomonas 2. Mesfilas Comprenden a la mayora de microorganismos. Su temperatura ptima oscila entre 25-40C, y crecen a temperaturas intermedias. Ejemplos: Escherichia coli 3. Termfilas Son generalmente arqueas y bacterias. Crecen a altas temperaturas, superiores a 55C. Su temperatura ptima es mayor de 45C. Entre los termfilos podemos diferenciar: a) Estenotermfilos: no pueden crecer a temperaturas menores de 37C. Presentan una baja capacidad adaptativa, por lo que sus nichos ecolgicos son muy estrictos. 49

b) Euritermfilos: pueden crecer a temperaturas mayores de 37C, y presentan un rango ms amplio. Ejemplos: Bacillus coagulans Bacillus stearothermophilus Thermoactinomyces Habitan en ambientes expuestos al sol, sobre medios oscuros, sobre materiales en fermentacin, fuentes termales, etc. 4. Hipertermfilos o termfilos extremos Su temperatura ptima supera los 65-80C. Pueden vivir a temperaturas superiores a 100C, por lo que resisten la ebullicin. Viven en geisers, fuentes hidrotermales, zonas abisales, algunos de estos microorganismos son arqueas. Ejemplos: Thermococcus Pyrodictium Ambas son arqueas. Los estudios que se han realizado sobre la distribucin de los microorganismos dependiendo de la temperatura han demostrado que los procariotas sobreviven mejor que los eucariotas, y dentro de los procariotas, los ms resistentes son los no fotosintticos.

PRESIN OSMTICA
Hay microorganismos que resisten la escasez de agua, como los microorganismos esporulados. Pero tambin hay formas vegetativas que viven en estas condiciones. Los microorganismos ms pequeos son ms importantes que los grandes: los cocos son ms resistentes que los bacilos, y las Gram+ son ms resistentes que los Gram-. Las caractersticas estructurales determinan el modo o medio de transmisin. Un microorganismo que se transmite por el aire lo har porque si estructura se lo permite. Streptococcus pneumoniae: es un coco Gram+ que se transmite por el aire. Treponema pallidum: causa la sfilis. Es una espiroqueta muy sensible a la falta de agua y no transmite por el aire, sino por contacto directo. Llamamos gliofilizacin a la congelacin por sublimacin. Hay que tener en cuenta la presin osmtica. La gliofilizacin no permite el crecimiento porque se elimina el agua. Por ejemplo, en los alimentos que se salazonan, al salar el alimento aumentamos la presin osmtica, por lo que baja el agua y no crecen microorganismos. En las mermeladas, el medio es hipertnico y los microorganismos tienden a hacerlo hipotnico perdiendo agua. A efectos prcticos, una disolucin hipertnica con una alta concentracin de solutos puede equipararse a un medio seco. En ambos casos la disponibilidad de agua es mnima, aumenta la presin osmtica y se tiende a extraer el agua celular. Muchos microorganismos no pueden tolerar el descenso de la actividad o disponibilidad de agua (aw) y mueren. Otros s resisten este descenso: 50

1. Halfilos Son capaces de vivir en ambientes con elevadas concentraciones de sales. a) Halotolerantes: pueden soportar una cierta reduccin en la aw ambiental (es decir, un aumento de la concentracin de solutos). Ejemplo: Staphylococcus aureus b) Halfilos moderados: son generalmente organismos marinos. Ejemplo: Vibrio fischeri c) Halfilos extremos: son capaces de crecer en ambientes con elevadsimas concentraciones de sales. Requieren un 15-30% de NaCl para su crecimiento ptimo. Ejemplo: Halobacterium salinarium: es una arquea bacilar halfila extrema con un alto requerimiento de NaCl. Presenta forma bacilar cuando la concentracin de sales es alta. Si baja, puede adquirir forma de coco, y si sigue bajando termina por lisarse. Necesita la presencia de Na en el medio para mantener su pared celular. No tiene peptidoglicano, sino microprotenas, y su pared est mantenida por enlaces inicos y Na. En general los halofilos requieren Na en el medio, pero la cantidad de este elemento puede reducirse hasta la mitad si aadimos al medio otros iones como el Mg. 2. Osmfilos Son microorganismos que pueden vivir en ambientes con altas concentraciones de azcar. Ejemplos (hongos): Penicillium Sacharomyces balii 3. Xerfilos Xeros en griego significa ambiente seco. Estos microorganismos utilizan un soluto compatible como el glicerol. Llamamos soluto compatible a aquel que no interfiere en la bioqumica celular y que se acumula en el citoplasma para controlar la actividad del agua. Son muy solubles en agua. Por ejemplo: sacarosa, polialcoholes, halosa, aminocidos y derivados, etc. Tambin puede utilizarse el in Na. Estos solutos pueden ser sintetizados por el microorganismo o tomarlos del exterior y concentrarlos (K, betana,).

PRESIN HIDROSTTICA
El agua ejerce un efecto derivado de su propio peso. Los microorganismos se clasifican segn la presin hidrosttica en 3 categoras: 1. Barotolerantes 51

Capaces de vivir en presiones elevadas, de entre 1-500 atm, aunque crecen mejor a presiones bajas e incluso las atmosfricas. Ejemplos: Cepas de Escherichia Coli Cepas de Pseudomonas 2. Barfilos Crecen mejor a presiones elevadas. Tambin pueden crecer a 1atm. La presin ptima estara entre 400-500atm. Ejemplo: Thermococcus barophilus 3. Barfilos extremos o estrictos Crecen a muy elevadas presiones. No pueden crecer a presiones inferiores a 400atm, y su presin ptima ronda las 700-800atm (grandes profundidades). Ejemplo: Pseudomona bathecetes: requiere una presin de 1000atm.

PH
Los microorganismos se pueden agrupar segn su PH ptimo en: 1. Acidfilos Hongos y levaduras. Necesitan un PH de 1-5,5. Ejemplo: Thiobacillus thiooxidans: necesita un PH inferior a 2. Oxida sulfuros y azufre, produciendo cido sulfrico. 2. Neutrfilos Comprenden la gran mayora de las bacterias y algas eucariotas. Viven en PH de 5,58,5. 3. Basfilos Por ejemplo, las cianobacterias. El PH ejerce su efecto sobre los microorganismos pero tambin sobre los posibles nutrientes que hay en el medio. por ejemplo: Coco Gram+ que habita en un medio con cido actico. Dependiendo del PH estar: - PH cido: cido actico metabolizable - PH neutro o bsico: cido actico en forma de acetato, que quizs no pueda entrar dentro de la clula porque los cidos teicoicos se lo impiden. La propia actividad de los microorganismos puede cambiar el PH del medio: un microorganismo que produce cidos provocar la bajada del PH del medio; un microorganismo capaz de metabolizar compuestos nitrogenados liberar iones de amonio que harn que suba 52

el PH exterior; si el microorganismo consume compuestos cidos del medio, ste se neutralizar.

- SOLUCIONES TAMPONADAS (BUFFER)

Se utilizan para mantener el PH del medio. - Peptonas y aminocidos - Sales de fosfato: tienen la ventaja de que, adems de taponar los medios de la mayora de las bacterias, aportan fsforo.

POTENCIAL XIDO-REDUCCIN (O)

El o es una medida de la capacidad de una sustancia para ceder electrones, y se expresa en voltios. A elevados o o potenciales redox, menor capacidad de ceder electrones y menos energtica es; as, a menores o o potenciales redox, mayor capacidad para ceder electrones y ms energtica es. Ejemplo: un valor de +0,08v se considera alto respecto a -0,5v Las sustancias reductoras (capaces de ceder electrones) tienen valores de o bajos y son sustancias energticas. Las sustancias oxidantes (capaces de aceptar electrones) tienen valores mayores de o y son sustancias menos energticas. El aceptor final de electrones del metabolismo es generalmente el oxgeno, pero en los microorganismos este aceptor terminal no siempre es el oxgeno.

RELACIN DE LOS MICROORGANISMOS CON EL OXGENO

Los microorganismos, dependiendo de su requerimiento en oxgeno, se clasifican en: a) Aerobios: requieren y dependen del oxgeno, que acta como aceptor final de electrones. Suponen el 21% del total de microorganismos. - Aerobio obligado: completamente dependiente del O2 atmosfrico para crecer. - Microaerfilo: requiere niveles de O2 por debajo de 2-10% para crecer, y es daado por el O2 atmosfrico (20%). b) Anaerobios: - Anaerobio facultativo: no requiere O2 para crecer, pero crece mejor en su presencia. - Anaerobio aerotolerante: crece igualmente bien en presencia como en ausencia de O2. - Anaerobio obligado: no tolera el O2 y muere en su presencia. El rendimiento energtico es diferente en la fermentacin que en la respiracin. La fuente de energa o de N que utiliza el microorganismo va a determinar el requerimiento de O2. Slo van a ser microaerfilos cuando utilicen el H como fuente de energa y poder reductor. La hidrogenasa es lbil en presencia de O2.

- CULTIVO DE MICROORGANISMOS SEGN EL REQUERIMIENTO DE O2 53

Los microorganismos aerobios se cultivan en un medio slido, en placas de Petri y por siembra en superficie. En un medio lquido, se siembran en condiciones especiales de forma que se incluya O 2 en el medio. Los microorganismos anaerobios se siembran: a. En medios especiales anaerobios que contienen agentes reductores como el tioglicolato y la cistena, que van a eliminar el O 2 disuelto presente en el medio. Estos microorganismos no crecern en la superficie. A veces se aade un colorante indicador de la actividad redox como la resazorina, que es de color rosa cuando se oxida e incolora cuando se reduce. Una buena indicacin de que no haya O2 es que sea incolora. b. En cmaras o sistemas anaerobios , donde se retira el aire por una bomba de vaco y el O2 residual se elimina con nitrgeno gas. A veces incluso se aade CO2 si el microorganismo lo necesita para crecer. c. Jarra de GasPak: utilizado para un nmero reducido de placas. El ambiente de la jarra se hace anaerobio utilizando una lmina generadora de gas (CO 2 y H2). El oxgeno se elimina de la cmara, al combinarse con hidrgeno para formar agua, reaccin catalizada por un catalizador que contiene pastillas de paladio. Una tira indicadora anaerobia de azul de metileno pierde el color en ausencia de O2. Este sistema tambin se puede llevar a cabo con una bolsa de plstico. Si se trabaja con organismos anaerobios, se utiliza una cabina especial anxica que lleva guantes incorporados y permite trabajar desde el exterior.

- DEFENSAS MICROBIANAS ANTE EL O2 El O2 puede aceptar electrones y reducirse parcialmente. Los electrones de sus rbitas exteriores no estn apareados. Hay constituyentes celulares como las quinonas o las protenas FeS que pueden promover la reduccin incompleta del O 2 que conduce a formas txicas del O2, como: a. Anin superxido O2- : tiene un electrn desapareado. b. Perxido de hidrgeno (H2O2) c. Radical hidroxilo (OH) Estos productos de reduccin del O 2 son extremadamente txicos y tienen un gran poder de oxidacin que destruye rpidamente los componentes celulares. Los microorganismos que viven en presencia de O 2 deben defenderse del O2-. Para ello, los microorganismos aerobios obligados y aerobios facultativos contienen normalmente la enzima superxido dismutasa (SOD) y la catalasa, que catalizan la destruccin de los radicales superxido y perxido de hidrgeno respectivamente. La peroxidasa tambin puede utilizarse para eliminar el perxido de hidrgeno. 2 O2- + 2H+
SOD

O2 + H2O2 2 H 2O + O 2 2 H2O + NAD+

Catalasa 2 H2O2 Peroxidasa H2O2 + NADH + H+

54

Los microorganismos aerotolerantes pueden carecer de catalasa, pero no acumulan el perxido de hidrgeno porque utilizan las peroxidasas. Se forma agua pero no se libera oxgeno. Puede utilizarse el NADH.

TEMA 11 : ENERGTICA MICROORGANISMOS QUIMIOTROFOS

DE

LOS

La actividad que mantiene la vida del organismo implica muchas reacciones bioqumicas complejas. Muchas reacciones que se dan en las bacterias son comunes de organismos procariotas y eucariotas. Tambin hay reacciones exclusivas de bacterias. Definimos metabolismo como el conjunto total de reacciones qumicas que se dan en la clula, y que son posibles gracias al flujo de energa y a la participacin de enzimas. El metabolismo puede dividirse globalmente en dos partes fundamentales: 1. Catabolismo: molculas grandes y complejas son descompuestas en molculas ms pequeas y sencillas, liberndose energa en el proceso. 2. Anabolismo: sntesis de molculas complejas a partir de molculas ms sencillas con consumo de energa. El ATP es una molcula de alta energa. La separacin de su fosfato terminal se produce con un G muy negativo. ATP + H2O ADP + Pi + energa

El ATP es una moneda de energa, ya que permite el acoplamiento entre la energa derivada de las reacciones catablicas y la que requieren las reacciones anablicas. La composicin qumica de la clula viva est en constante cambio. El flujo equilibrado de molculas qumicas y energa es lo que mantiene la vida en la clula. Slo una parte de la energa liberada en las reacciones catablicas resulta til para las reacciones de biosntesis. Otra parte se pierde al ambiente en forma de calor: la energa trmica no es utilizable. Por tanto, existe una continua necesidad de un aporte exgeno de energa. En funcin de la energa podemos clasificar a los microorganismos: 1. Fototrofos: emplean la luz como fuente de energa. 2. Quimiotrofos: utilizan la oxidacin de compuestos qumicos. a. Quimiolitotrofos: utilizan la oxidacin de compuestos inorgnicos. b. Quimioorganotrofos: utilizan la oxidacin de compuestos orgnicos.

QUIMIOORGANOTROFOS
PROCESOS REDOX
Es un intercambio de electrones entre compuestos: un compuesto cede electrones (se oxida) y otro los acepta (se reduce). Esta capacidad de ceder o aceptar viene determinada por el potencial redox. 55

Como fuente de energa y poder reductor, un quimioorganotrofo puede utilizar un compuesto A, pero debe estar reducido. Este compuesto orgnico se va a oxidar y va a ceder electrones a un compuesto B en un solo paso o en varios. Esta oxidacin siempre va acompaada de una reduccin. Este acoplamiento de reacciones se denomina proceso redox. El par redox con un potencial ms bajo va a ceder electrones al par redox con un potencial ms alto. En esta transferencia de electrones se libera energa. Los H+ van a ir al unsono. Cuando se oxida una sustancia, los H + liberados son transferidos por coenzimas. Las dos coenzimas ms utilizadas son el NAD y el NADP, en sus formas oxidadas y reducidas. Las clulas tomas nutrientes que les sirven como fuente de energa. Los transforman desde compuestos altamente reducidos a compuestos oxidados. La glucosa puede ser utilizada para conseguir energa, oxidndola hasta conseguir CO 2 y H2O. La clula acopla la energa liberada por la oxidacin de la glucosa a la generacin de ATP. Hay microorganismos que en vez de glucosa utilizan etanol, pero proporciona menos energa. La transferencia del poder reductor generado durante el metabolismo se puede hacer de tres formas: 1) Fermentacin: El sustrato va a dar lugar a dos compuestos derivados del original: uno que acepta electrones y otro que los dona. Es un proceso redox interno, no hay un aceptor final de electrones. Un derivado de lo que se fermenta acta como donador y el otro como aceptor. 2) Respiracin aerbica: El O2 se transforma en H2O. 3) Respiracin anaerbica: El aceptor final es distinto al O2. Puede ser orgnico o inorgnico. Hay una diferente clave a la hora de generar energa: - En la fermentacin, un grupo fosfato se aade a un intermediario y se va a transferir al ADP para generar ATP. Es una fosforilacin a nivel de sustrato. - En la respiracin tambin hay fosforilacin a nivel de sustrato. La membrana est activada energticamente. Parte de esa energa se pierde para formar ATP a partir de ADP, mediante la fosforilacin oxidativa.

FERMENTACIN
Es un proceso productor de energa en el cual un sustrato energtico es oxidado sin un aceptor externo de electrones. Habitualmente, molculas inorgnicas sirven como donadoras y aceptoras de electrones. Es una oxidacin parcial, donde los productos finales todava contienen energa y pueden ser utilizados por otros organismos. 56

Es, adems, un proceso redox interno en el que los productos derivados de la fuente de energa actan, unos como donadores y otros como aceptores de electrones. Es un proceso metablico que libera energa a partir de un azcar u otra molcula orgnica, que no requiere oxgeno ni una CTE. No significa que a veces no ocurra en presencia de oxgeno. Es un mecanismo anaerbico, en el sentido de que no requiere oxgeno, de produccin de energa no implicado en la CTE. Dependiendo del tipo de fermentacin, el piruvato se transformar en un producto o en otro. Estos productos a su vez dependen de las condiciones ambientales y del producto inicial. Los microorganismos degradan los azcares a piruvato y otros productos intermediarios mediante 3 vas: I. Va glucoltica o de Embden-Meyerhof II. Va de las pentosas fosfato III. Va de Entner-Doudoroff Previamente a la rotura propia de la glucosa, en cualquiera de las 3 vas, la glucosa se fosforila pasando a Glc-6P. La entrada de la glucosa a las clulas procariotas suele ser un proceso de transporte por translocacin de grupo. En eucariotas puede entrar mediante transporte activo o difusin facilitada.

- VA DE EMBDEN-MEYERHOF O VA GLUCOLTICA
Es indudablemente la va ms comn de la degradacin de la glucosa a piruvato. La va en conjunto puede dividirse en 2 fases: 1. En la etapa inicial de 6 carbonos, la glucosa es se transforma en gliceraldehdo-3P. En la etapa inicial no se produce energa; de hecho, se consumen 2 molculas de ATP. 2. Consiste en la oxidacin del gliceraldehdo-3P a piruvato. Se produce NADH y ATP, este ltimo por una fosforilacin a nivel de sustrato, debido a que la fosforilacin de ADP est acoplada a la degradacin exergnica de una molcula de sustrato de alta energa. Por cada glucosa se obtienen 2 molculas de gliceraldehdo-3P. 1 Glucosa 2 Piruvato + 2 ATP + 2 NADH

Las otras vas tienen en comn la transformacin de la glucosa hasta gluconato.

- VA DE ENTNER-DOUDOROFF Comienza con la formacin de Glc-6P y 6-fosfogluconato. Se produce: 1 Glucosa 1 ATP + 1 NADH + 1 NADPH + 2 Piruvato

- VA DE LAS PENTOSAS FOSFATO

57

Supone una serie de interconversiones de azcares catalizados por transcetolasas y transaldolasas. Debemos partir de 3 molculas de Glc-3P, sabiendo que 2 de ellas continan en el ciclo. Los pasos desde gliceraldehdo-3P hasta piruvato son iguales al resto de las vas. 1 Glucosa 1 Piruvato + 3 CO2 + 1 ATP + 6 NADPH + 1 NADH 1 Glc 2 ATP (14) 686 Kcal 7,3 Kcal/mol

Oxidacin completa de la Glc ADP + Pi = ATP

14 (100/686) 2%

- TIPOS DE FERMENTACIN 1. Fermentacin alcohlica: el producto mayoritario es el etanol. Levaduras, Zymomonas. 2. Fermentacin propinica: el producto mayoritario es el propionato. Propionibacterium. 3. Fermentacin butanodilica: el producto mayoritario es el 2,3-butanodiol. Enterobacter, Serratia, Bacillus. 4. Fermentacin cido mixta: los productos finales son mayoritariamente cidos. Da lugar a la excrecin de etanol y de una mezcla compleja de cidos, en particular, los cidos actico, lctico, succnico y frmico. Escherichia, Enterobacter, Salmonella, Proteus. 5. Fermentacin butrica: los productos mayoritarios son el acetato, isopropanol, butanol, butirato. Clostridium. 6. Fermentacin lctica: se produce mayoritariamente lactato. Streptococcus, Lactobacillus, Bacillus. En algunas fermentaciones se puede generar algo ms de ATP a partir de ADP, pero siempre por fosforilacin a nivel de sustrato. Adems de etanol, tambin se producen productos cidos y muchos producen gases (CO 2 y H).

RESPIRACIN AERBICA
Es un proceso de obtencin de energa en forma de ATP en la que los compuestos qumicos son oxidados y el aceptor final de electrones es el oxgeno. Se obtiene ATP por fosforilacin oxidativa, adems de por fosforilacin a nivel de sustrato. Es un proceso de oxidacin completa en el que se ceden los electrones al O 2, el cual se oxida a H2O. El piruvato se convierte en acetil-CoA incorporndose al Ciclo de Krebs. Los coenzimas reducidos en este ciclo cedern los electrones a una CTE cuyo aceptor final es el O 2, que se reduce a H2O. 58

La salida de algn intermediario necesita de reacciones anaplerticas que aseguran la continuidad del ciclo. Reacciones anaplerticas: Acetil-CoA Glioxilato Piruvato + CO2 + ATP + H2O PEP + CO2 + H2O Malato Acetil-CoA + ADP + Pi Acetil-CoA + Pi

Los coenzimas reducidos ceden los electrones a la CTE, a transportadores que tienen un potencial bajo que pasa a alto. En la transferencia de electrones a lo largo de la CTE se va a obtener energa. Hay 4 complejos enzimticos: I. NADH Dhasa II. Succinado Dhasa III. Citocromo b-c1 IV. Citocromo oxidasa Cada complejo enzimtico acopla la energa liberada por la transferencia de electrones a lo largo de la CTE. Con los H+ se produce una separacin a medida que se transfieren los electrones. Parte de la energa se atrapa en forma de ATP por fosforilacin oxidativa. Se forma un gradiente de H +, una separacin de cargas, que se disipa por una ATPasa de membrana que emplea este gradiente de H+ para sintetizar ATP. El NADH es impermeable a las mitocondrias: necesita sistemas de lanzadera de equivalentes de reduccin. En eucariotas, en la CTE, 1 NADH produce alrededor de 2,5 molculas de ATP. En procariotas, la produccin aerbica de ATP puede ser an menor ya que las cadenas son diferentes, dependiendo de las condiciones ambientales.

RELACIN ENTRE FERMENTACIN Y RESPIRACIN ANAEROBIA (EFECTO PASTEUR)

La produccin de ATP aerbica es ms eficiente que la anaerbica. El efecto Pasteur se observa en anaerobios facultativos con metabolismo respirofermentativo, como presentan muchas levaduras. Este efecto describe un fenmeno regulador que confiere una ventaja, ya que en presencia de oxgeno consumen menos glucosa para obtener energa que en condiciones anxicas. En ausencia de oxgeno, estos microorganismos fermentan la glucosa mediante la glicolisis. Uno de los intermediarios de la glicolisis es el gliceraldehdo 3-fosfato (GA3P). La fermentacin es un proceso de xido-reduccin interna. En condiciones xicas, el microorganismo desreprime los citocromos que van a aceptar los electrones del NADH2, que se reoxida y y se obtiene agua. 59

 Cmo afecta el cambio de metabolismo al consumo de glucosa? En la fermentacin, baja el PH por la produccin de cidos. 1 Glucosa 1 Glucosa
FERMENTACIN

2 ATP 38 ATP (19 veces mayor)

RESPIRACIN AEROBIA

Para lograr la misma energa, se consume 19 veces ms en ausencia de oxgeno que en presencia del mismo. En relacin con la cantidad de glucosa, para una misma concentracin de glucosa, se consigue un mayor nmero de clulas en presencia que en ausencia de oxgeno. A nivel bioqumico, qu provoca el cambio de un nivel a otro? Por una parte, el nmero de equivalentes de reduccin, cuando se pasa de condiciones anxicas a xicas, se reduce. El NADH 2 no va a estar disponible para reducir el acetaldehdo a etanol. Por otra parte, la relacin ATP/ADP aumenta del paso de condiciones anxicas a xicas. Este aumento hace que se produzca una bajada en la actividad de una enzima (PFK) que es clave. Es un punto irreversible. Est inhibido por el ATP y el citrato (intermediario del ciclo de Krebs). Si hay mucha cantidad de ATP y citrato significa que se va a conseguir mucha energa y no hace falta que se aumente la velocidad de la glicolisis. En el paso de condiciones xicas a anxicas se produce una inactivacin parcial de la enzima que provoca una ralentizacin de la glicolisis.

RESPIRACIN ANAERBICA
Se diferencia en el aceptor final. La realidad indica que la cadena de transporte de electrones no se parece a la aerbica. El microorganismo que realiza la respiracin anaerbica utiliza el mismo compuesto orgnico, la glucosa. El aceptor final puede ser orgnico o inorgnico, pero nunca oxgeno. La respiracin anaerbica no es tan eficaz en cuanto a sntesis de ATP. Los aceptores terminales de electrones poseen un potencial redox menos positivo. O (O2/H2O) = + 0,82 V La produccin de energa est relacionada con la diferencia entre los potenciales del donador y del aceptor. A mayor diferencia, mayor produccin de energa. O (NAD+/NADH H+) = -0,32 V Se puede conseguir mayor cantidad de ATP que en la fermentacin pero menos que en la respiracin aerobia. Algunos microorganismos son anaerobios estrictos. Otros no lo son y pueden alternarla con la respiracin aerbica. Otros pueden, dependiendo de las condiciones ambientales, llevar a cabo: O2 Respiracin aerbica 60

Aceptores alternativos al O2 (NO3,) Condiciones anxicas y ausencia de aceptores de e- para sus cadenas electrnicas

Respiracin anaerbica Fermentacin

- ACEPTOR DE ELECTRONES El aceptor de electrones puede ser orgnico o inorgnico. 1) Inorgnicos: a. No3: O = 0,43 V. Se reduce a NO 2. La utilizacin de NO3 como aceptor final es una desasimilacin o un uso desasimilativo, y es lo que se denomina desnitrificacin. La reduccin de NO3 a NO2 no es eficaz para producir energa porque se requiere gran cantidad de NO3 para el crecimiento. NO3 + 2e- + 2H+ NO-2 + H+

Txico El microorganismo trata de eliminar el nitrito y llevarlo hasta nitrgeno gas, que escapa a la atmsfera. Cada molcula de NO2 admite 5 electrones. 2NO3 + 10e- + 12H+ N2 + 6H2O

Ejemplos de bacterias desnitrificantes: Pseudomonas denitrificans, Spirillum itersonii, algunas especies del gnero Bacillus. b. SO4-2: se trata de bacterias sulfatoreductoras (anaerobias estrictas). Oxidan el SO4-2 , y los electrones van a parar al sulfato, que se reduce a sulfdrico (H2S). si en el ambiente hay hierro se forma FeS, que precipita. Ejemplos de bacterias sulfatoreductoras: Desulfovibrio. Estas bacterias, al oxidar estos compuestos, pueden llegar a oxidarlos hasta acetato, CO 2 u otros compuestos. El propio CO2 o el acetato pueden ser utilizados por otros microorganismos, como las arqueas metanognicas. Ejemplo de arquea metanognica: Methanobacterium. Otras pueden utilizar el azufre y reducirlo a H2S. Ejemplo: Thermoprocteus, Desulfuromonas. 2) Orgnicos: a. Fumarato: Puede ser reducido hasta succinato. Lo realizan bacterias anaerobias facultativas, como Escherichia coli. Otros microorganismos lo llevan a cabo siendo siempre fermentadores, como Bacteroides, Clostridium o Streptococcus fecalis. Un problema que presentan estos organismos fermentadores es que obtienen mucho poder reductor, y para solucionarlo acoplan la reduccin de fumarato para poder disponer otra vez de NAD+. La reduccin no va asociada a una cadena de transporte electrnica. b. Glicina: 61

No se considera respiracin anaerbica porque lo llevan a cabo algunos Clostridios y es una parte de lo que denominamos Reaccin de Stickland o fermentacin de pares de aminocidos. c. TMAO: Es reducido hasta TMA por bacterias anaerbicas facultativas, y emplean el O2 del TMAO como alternativa al O2. Estas bacterias, sin luz ni oxgeno, utilizan el xido de TMA. Este TMAO es un soluto en funciones de excrecin de exceso de nitrgeno en peces, y llega a suponer un 1-5% del peso seco de los peces. Est ausente en las especies de agua dulce y terrestres. Es responsable en gran parte del olor a mar ya que la TMA presenta un olor fuerte caracterstico. d. DMSO: Se reduce a DMS. El DMSO es un producto natural de medios acuticos y el DMS presenta un fuerte olor y sabor a picante. Lo utilizan Escherichia coli, Campylobacter y bacterias rojas.

BIOLUMINISCENCIA
Es un tipo de quimioluminiscencia o de generacin de luz mediante reacciones qumicas. La transferencia de electrones permite la emisin de luz. En moluscos, crustceos, insectos, la emisin de luz se debe a bacterias simbiticas, como Vibrios (Vibrio fischeri, Vibrio harveyi) y Fotobacterias (Photobacterium phosphoreum, Photobacterium leiognathi, Photobacterium Nostoi). Slo se produce bioluminiscencia en presencia de oxgeno. Los microorganismos la consiguen desviando electrones de la cadena de transporte de electrones y de la sntesis de ATP. Para ello necesitan una enzima especial, la luciferasa, y un aldehdo aliftico de cadena larga de ms de 8 carbonos, la luciferina. Tambin participa el oxgeno y un mononucletido de flavina (FMN). La luciferasa se activa cuando el FMNH2 se oxida. La luciferasa pasa a un estado activo y cuando vuelve a su estado fundamental, irradia luz con una 490 nm. La bioluminiscencia se activa cuando se corta la cadena de transporte de electrones. Si aplicamos un compuesto como el cianuro, sta se activa.

- SNTESIS DE LUCIFERASA
Es una sntesis regulada, ya que es costosa desde el punto de vista energtico. Est regulada por mecanismos de autoinduccin: las bacterias producen una sustancia especfica que es un autoinductor llamada lactona de homoserina acilada (AHL). sta se va acumulando en el medio, y entra en las bacterias cuando se alcanza un nivel crtico. Es entonces cuando se induce la luciferasa. Slo se produce luz si la densidad de poblacin es lo suficientemente alta para que se acumule AHL. Esto se denomina sensibilidad o percepcin del Cuorum. Se produce una respuesta fijada genticamente cuando la densidad de poblacin alcanza un nivel crtico. Existen diversos mecanismos de sensibilidad al Cuorum que regulan estos procesos: a) Secrecin de ciertas sustancias viscosas: como los biofilms, que permite la adhesin bacteria-bacteria y bacteria-sustrato. b) Produccin de exotoxinas por Staphilococcus aureus. 62

TEMA 12 : FOTOSNTESIS
La mayora de los organismos fototrofos y litotrofos son auttrofos. Fototrofos Quimiolitotrofos Fuente de energa: luz Fuente de energa: compuestos orgnicos

FOTOSNTESIS
La realizan los microorganismos fototrofos. Siempre asociamos la fotosntesis a las plantas superiores, pero debemos saber que ms de la mitad de la fotosntesis del planeta la realizan los microorganismos. Es un mecanismo que consigue captar la energa luminosa en energa qumica. Eso permite la fijacin del CO2 para conseguir compuestos orgnicos. Se compone de 2 fases: 1) Luminosa: requiere la presencia de luz, y se genera ATP y poder reductor en forma de NADPH, que van a ser utilizados en la fase oscura donde el CO 2 se fija en compuestos inorgnicos. 2) Oscura: no requiere luz, y funciona siempre que haya NADPH y ATP disponibles. Existen 2 tipos de fotosntesis: 1) Oxignica: es tpica de plantas superiores, algas eucariotas y cianobacterias. La fuente de poder reductor es el agua. se reduce el NADP a NADPH gracias a la fotolisis del agua, y como producto se desprende oxgeno. Este compuesto reductor slo puede obtenerse en presencia de luz. 2) Anoxignica: es tpica de bacterias rojas, bacterias verdes y heliobacterias, por lo que se le denomina fotosntesis bacteriana. La fuente de poder reductor no es el agua, sino el azufre, sulfhdrico no se desprende oxgeno como producto. La generacin de poder reductor no va asociada a la presencia de luz.

PIGMENTOS
Captan energa luminosa. a) Clorofilas: es el pigmento que aparece en la fotosntesis oxignica. Emite luz verde ya que absorbe la luz roja y azul. b) Bacterioclorofilas: presenta un espectro de absorcin diferente, con una mxima de absorcin en longitudes de onda ms largas (> 700-800 nm). Esto supone una mejor adaptacin de estas bacterias a sus nichos ecolgicos.

63

Ambos pigmentos son similares: son porfirinas con ncleos tetrapirrlicos (4 anillos pirrlicos) que contienen en el interior un in metlico (Mg+2). Tienen tambin una cadena carbonada de unos 20 tomos de carbono que puede ser de fitilo o de geranil-geranilo. La clorofila a y la bacterioclorofila a se diferencian en los sustituyentes pero la estructura principal es igual. Estos pigmentos se localizan: a) Clorofilas: - Plantas superiores: la clorofila se localiza en las membranas de los tilacoides. - Cianobacterias: se sitan en los tilacoides, que son un sistema de membranas multilaminares llamadas as por su analoga con los tilacoides de las plantas. Se presentan de forma concntrica en la periferia del citoplasma. b) Bacterioclorofilas: - Bacterias rojas: se localizan es un sistema de membranas que se forma por la invaginacin de la membrana citoplasmtica. A veces forman lminas ( lamelas) o tubos (vesculas), todo ello continuo con la membrana citoplasmtica. - Bacterias verdes: se sitan en un sistema de membranas formadas en parte por la membrana citoplasmtica y en parte por los clorosomas (vesculas elipsoidales que contienen los pigmentos fotosintnticos y que estn fijadas a la membrana plasmtica pero que no se continua con ella. - Heliobacterias: se presentan en la membrana citoplasmtica.

PIGMENTOS ACCESORIOS
Son otro tipo de pigmentos que tambin absorben energa luminosa. Aunque la clorofila no puede absorber la energa luminosa de manera eficaz en el espectro comprendido entre el azul-verde y el amarillo (aproximadamente entre 470-630 nm), los pigmentos accesorios absorben la luz en esta regin y transfieren la energa captada a la clorofila. As consiguen que la fotosntesis sea eficaz en un espectro ms amplio de longitudes de onda. Los pigmentos accesorios son:

- CAROTENOIDES
Son largas cadenas isoprenoides con enlaces dobles conjugados en cuyos extremos se sitan ciclohexenos. Absorben en la zona azul del espectro (450-550 nm). Son insolubles en agua pero solubles en disolventes orgnicos. Se presenta en mismo nmero que las clorofilas. Estos pigmentos captan y trasmiten la energa lumnica pero no participan directamente en las reacciones de fotofosforilacin. Los carotenoides son: a) Carotenos: son hidrocarburos isoprenoides. - Fucoxantina: es caracterstica de algas pardas. - -caroteno: es caracterstico de algas en general. b) Xantfilas: contienen oxgenos en los anillos terminales. - Clorobacteno: se presenta en bacterias verdes. - Licopeno: abunda en bacterias rojas. - Espiriloxantina.

- FICOBILIPROTENAS 64

Son cromoprotenas solubles en agua que contienen tetrapirroles lineales llamados ficobilinas, que estn conjugadas con protenas.

Ficobiliprotena = ficobilina + protena

Las ficobiliprotenas estn formando agregados de elevado peso molecular que se denominan ficobilisomas, que se localizan en las membranas tilacoidales. El contenido celular de ficobilisomas aumenta cuando disminuye la intensidad luminosa; sto es un proceso de compensacin. No estn presentes en plantas; slo se encuentran en algas rojas eucariotas y cianobacterias. Hay diferentes tipos de ficobiliprotenas: a) Ficoeritrina: es un pigmento rojo caracterstico de algas rojas y que tiene su mximo de absorcin comprendido entre 550-560 nm, que corresponde a la zona azul. b) Ficocianina: es un pigmento azul tpico de cianobacterias, con un mximo de absorcin de entre 620-640 nm. - Ficocianobilina: es la ficocianina de la ficobiliprotena. Los pigmentos accesorios proporcionan numerosas ventajas a los microorganismos: 1. Amplan el rango de longitud de onda que pueden absorber, ya que absorben en el rango de 470-630 nm, en el cual no absorben los pigmentos principales pero s los accesorios. 2. Transfieren energa a la clorofila o bacterioclorofila , por lo que hacen mz eficaz la fotosntesis en un espectro ms amplio. 3. Aumentan la velocidad de captacin de luz por ser un nmero alto de molculas. 4. Los carotenoides son agentes fotoprotectores que protegen a los microorganismos de la fotooxidacin que produce la luz sola intensa, la cual puede daar seriamente el aparato fotosinttico. El absorber la luz daina es una ventaja para los microorganismos que viven en presencia de luz.

ESTRUCTURA GENERAL DEL APARATO FOTOSINTTICO

El aparato fotosinttico es el aparato fotoqumico responsable de la fotosntesis, o unidad funcional y estructural encargada de convertir la energa solar en energa qumica. Se compone de 3 partes: 1. Complejo antena (CA): Constitudo por los pigmentos antena (200-300 molculas de clorofila o bacterioclorofila junto a pigmentos accesorios). Estos pigmentos son los responsables de absorber la luz de determinadas longitudes de onda, que es un factor que determina el hbitat de los microorganismos, y canalizarla al centro de reaccin o fotosistema. 2. Centro de reaccin (CR): En l se encuentra la clorofila o bacterioclorofila del denominado par especial, que es el que se va a fotoactivar en presencia de luz: se oxida y dona electrones a una primera molcula que es el aceptor primario de electrones (I) y est 65

estrechamente relacionado con el fotosistema. El aceptor primario puede ser una feofitina o una bacteriofeofitina.

Feofitina clorofila, pero en vez de Mg+2 tiene un par de tomos de H+

3. Cadena de transporte de electrones (CTE): El primer transportador de electrones de la cadena (Z) recibe los electrones del aceptor primario (I). Z puede ser una quinona o una ferrosulfoprotena. eeluz PI P*I P+IP+ I e Z ZEl fotosistema oxidado (P+) necesita un electrn para poder volver al estado fundamental, y puede proceder de la CTE o del exterior. El trmino de reacciones luminosas es algo inadecuado: la nica reaccin que precisa la luz es la inicial (PI a P*I).

FOTOSNTESIS ANOXIGNICA O BACTERIANA

Presenta un solo fotosistema y emplea bacterioclorofila. No utiliza agua, por lo que no desprende oxgeno. Se realiza exclusivamente en condiciones anxicas. La realizan bacterias rojas, bacterias verdes y heliobacterias. La bacterioclorofila se oxida cuando llegan fotones de luz roja o infrarroja. Se encarga positivamente y los electrones pasan a la CTE. Esto les permite sintetizar ATP, ya que aprovechan la potencia fotomotriz gracias a las ATPasas de membrana. Como este proceso se desencadena por la luz, se denomina fotofosforilacin. Los electrones viajan de los potenciales ms electronegativos a los ms electropositivos.

- BACTERIAS ROJAS
El centro de reaccin se denomina P870 y contiene 4 molculas de bacterioclorofila, 2 de las cuales constituyen el par especial, y 2 molculas de bacteriofeofitina (I). Absorben una longitud de onda de 870 nm. En el estado basal presenta un potencial de 0,5 V. Tras la excitacin de la luz, P870 pasa a P870 excitado (P*870), que presenta un potencial de unos -0,8 V. La excitacin tarda 3 billonsimas de segundo. Cada electrn viaja a la bacteriofitina (I) reducindola, y luego llega a una quinona. La bacteriofeofitina es capaz, en su estado reducido, de reducir a la quinona. No hay una sola quinona, sino que hay un pull de quinonas. La primera quinona (que sera Z) cede 2 electrones. Desde la quinona los electrones se van a transportar en la membrana a travs de una serie de citocromos (citocromo b/c1 y FeS). Este proceso tarda una milsima de segundo. Los electrones pasan al citocromo c2, que es periplasmtico, y es el intermediario del transporte de electrones: devuelve los electrones al fotosistema P870. 66

La disposicin de estos electrones en la membrana permite la sntesis de ATP. A la vez que pasan los electrones por esta cadena circular se traslocan protones al periplasma. La sntesis es el resultado de la formacin de una fuerza fotomotriz producida por el gradiente de electrones y la actividad de una ATPasa de membrana que acopla la formacin de ese gradiente con la formacin de ATP. Por lo tanto, por cada electrn que pasa a la CTE, pasan 2 H+ al periplasma. El proceso se denomina fotofosforilacin cclica porque los electrones circulan en un crculo cerrado. Se parece algo a la respiracin en cuanto a que el flujo de electrones en la membrana crea una fuerza fotomotriz que permite la produccin de ATP, pero aqu no hay entrada de electrones, sino que stos viajan por una ruta cerrada.

- BACTERIAS VERDES DEL AZUFRE Tanto el centro de reaccin como el mecanismo de fotosntesis son parecidos a los de las bacterias rojas. Tanto las bacterias verdes del azufre como las heliobacterias comparten ciertos mecanismos primarios que las hacen ms parecidas entre ellas y las diferencian de las bacterias rojas. Presentan bacterioclorofilas: - Bacterias verdes: su centro de reaccin se denomina P840 que presenta Cla. - Heliobacterias: el centro de reaccin es el P798 que tiene Clg. En ambos casos se aprecian formas de Cla: Cla en bacterias verdes e hidroxiCla en heliobacterias. En las dos situaciones, una protena, la FeS, acta como Z, con un potencial de -0,6 V. En el caso de las bacterias rojas, el equivalente es la quinona, con un potencial de -0,15 V. Adems, otro elemento importante es la ferredoxina (Fd), tambin presente en microorganismos con fotosntesis anoxignica. Obtencin de ATP: Lo obtienen del mismo modo que las bacterias rojas: por fotofosforilacin cclica. Obtencin de poder reductor: Utilizan NADPH como poder reductor. La fuente primaria de este poder reductor pueden ser compuestos orgnicos (lactato, malato, succinato) o inorgnicos (S, H, SH2). Durante este crecimiento autotrfico, oxidan al donador externo de electrones, reduciendo el NADP a NADPH. Hay que tener en cuenta los potenciales redox de los donadores para saber por qu en algunos casos estas bacterias realizan un transporte inverso de electrones y en otros no.

- TRANSPORTE DE ELECTRONES
Existen 3 mtodos de transferir electrones desde los donadores al NADP:

67

1) Transferencia directa desde el compuesto altamente reducido al NADP. Por ejemplo, el H (-0,41 V) reduce directamente al NADP. El poder reductor lo obtienen de forma independiente al fotosistema. 2) En bacterias rojas, cuando crecen utilizando compuestos orgnicos como donadores externos o compuestos reducidos del S con potenciales ms altos que el del par NADP/NADPH, directamente no pueden reducir al NADP. Los electrones de ese depsito o pull de quinonas son forzados a moverse de forma inversa, en contra de gradiente electroqumico para reducir al NADP. Los electrones que salen del ciclo para reducir al NADP son sustituidos por los electrones que proceden de los donadores externos. Se necesita un transporte de electrones inverso; el fotosistema aporta la fuerza fotomotriz para generar el transporte inverso de electrones. 3) Las bacterias verdes del azufre y las heliobacterias presentan un transporte de electrones que permite reducir el NADP aunque empleen donadores externos con potenciales ms altos que el del par NADP/NADPH. En ambos casos, la cadena de transporte de electrones se produce entre la bacterioclorofila del centro de reaccin al primer transportador de electrones, la protena hierro-azufre (FeS), que es lo suficientemente electronegativa como para reducir a la ferredoxina y es, por tanto, ms reductora que la quinona, que acta en bacterias rojas. La ferredoXina puede reducir directamente al NADP a NADPH, sin que haga falta transporte inverso de electrones. Todo depende del potencial O : O (Z) < O (NADP/NADPH) O (Z) > O (NADP/NADPH) Transporte normal de electrones Transporte inverso de electrones

Las bacterias verdes del azufre y las heliobacterias, aunque emplean distintas clorofilas, son parecidas en cuanto al mecanismo primario de fotosntesis. La ferredoxina reducida en las bacterias verdes del azufre no solamente reduce directamente al NADP sino que tambin participa en la fijacin del CO 2. Siguen el ciclo de TCA inverso. En las bacterias que no son del azufre (por ejemplo, Chloroflexus), el Z presenta un potencial que impide la reduccin directa del NADP: necesita un transporte inverso de electrones como las bacterias rojas. Las bacterias del azufre son fototrofos obligados. Las bacterias que no son del azufre tienen un metabolismo ms flexible: pueden respirar, fermentar, En otras, el O2 inhibe la formacin de bacterioclorofila de modo que no podrn sintetizar en condiciones anxicas. Cuando utilizan compuestos orgnicos como fuente de carbono, cuando fotosintetizan, no en presencia de oxgeno, se les pueden considerar fotohetertrofas. La fotosntesis es incompatible con oxgeno.

FOTOSNTESIS OXIGNICA
68

Se emplea la Cla y utilizan agua como donador de electrones, y se desprende oxgeno. La realizan plantas, algas eucariotas y cianobacterias. Existen 2 fotosistemas: 1. Fotosistema I (PSI) llamado P700: capta la luz infrarroja. 2. Fotosistema II (PSII) llamado P680: capta la luz roja. Llegan 2 fotones a la antena o centro de reaccin del PSII. La antena transfiere la energa luminosa a la Cla del par especial del PSII y sta pasa a un estado excitado. Entonces se comporta como un reductor fuerte y puede reducir a la feofitina (I), y queda oxidada. En su estado basal, P680 tiene un O = 1 V; cuando llega el electrn, O = - 0,8 V. El electrn que pasa a la feofitina es repuesto por el que cede el agua. Desde la feofitina, los 2 electrones pasan a la quinona, despus a la plastoquinona y despus a un complejo de citocromos (Citb6, FeS y CitF). De este complejo, pasan a la plastocianina, que contiene cobre, y pasan finalmente al P700. Para que P700 sea capaz de captar electrones, tiene que estar oxidado. Esto sucede siempre y cuando la antena del PSI haya absorbido la luz adecuada, pasando de un potencial de 0,5 V a un potencial de 1,4 V. Entonces ser capaz de captar electrones.
eeee-

Via cclica 2 caminos Via no cclica

P*700

A o FeS

FeS

Fd

- VIA NO CCLICA La ferredoxina reduce al NADP a NADPH y se oxida, pudiendo seguir aceptando electrones. Los electrones salen del sistema. Se requiere la participacin del PSII para reponer electrones. Se forma NADPH y los protones proceden del agua. Se sintetiza ATP: las ATPasas de la membrana tilacoidal van a aprovechar la fuerza protomotriz del intercambio de electrones entre la plastoquinona y el complejo Citbf. A esta sntesis de ATP se denomina fotofosforilacin no cclica. Est impulsada por la luz. La trayectoria del flujo de electrones tiene forma de Z tumbada. Se desprende oxgeno a partir de la fotolisis del agua: entonces parte de los protones se destinan a reducir el NADP y parte a mantener el gradiente de protones del espacio tilacoidal. El agua se necesita por ltimo para reducir al PSI: se produce NADPH gracias a los electrones que cede el P700. La reposicin de esos electrones la realiza el agua de forma indirecta. El agua es un reductor muy dbil: los electrones liberados de la fotolisis reducen primero al P680 y esos electrones procedentes del P680 pasan por la cadena de electrones y van a pasar al P700. As, se produce una reduccin directa de P680 e indirecta de P700.

- VIA CCLICA
Cuando hay suficiente NADPH, los electrones son devueltos al sistema a travs de un citocromo, el Citb583, que capta los electrones de la ferredoxina y los pasa a la plastoquinona. 69

En esta va no se forma NADPH, se sintetiza ATP. No se desprende oxgeno y slo interviene un fotosistema. Normalmente los fotosistemas actan juntos, de forma coordinada. Sin embargo, en algas y cianobacterias, bajo ciertas circunstancias, son capaces de realizar fotofosforilacin cclica utilizando slo el PSI. Sera una fotosntesis anoxignica llevada a cabo por fototrofos oxignicos, ya que hacen falta condiciones anxicas y una sustancia reductora (un sulfuro o H, por ejemplo). En las algas el reductor no es normalmente el H, ya que sintetizan hidrogenasa y oxidan el H para poder reducir el NADP a NADPH.

QUIMILITOTROFA
Los organismos quimiolitotrofos utilizan compuestos inorgnicos como fuente de energa. Los donadores de electrones son los mismos compuestos inorgnicos. A diferencia de los auttrofos, se trata de NADH y no de NADPH. El aceptor final es el oxgeno: es una oxidacin aerbica. No hablamos de respiracin ya que es un trmino exclusivo de quimiorganolitotrofos. Muchos son auttrofos. Diferenciamos distintos grupos, dependiendo de los donadores de electrones.

- OXIDANTES DEL HIDRGENO Oxidan el H aerbicamente. Estas bacterias pertenecen a diferentes grupos de bacterias. Son bacterias microaerfilas y auttrofas facultativas. Algunas de estas bacterias, como algunas cepas de Escherichia Coli, son mixotrofas (quimiolitoheterotrofas), es decir, su fuente de energa es un compuesto inorgnico (el H) y la fuente de carbono es orgnica (no pueden fijar CO2) Estas bacterias poseen enzimas hidrogenasas, que pueden ser: a) Hidrogenasa particulada: se encuentra en la membrana y es la ms comn. Aparece en el gnero Nocardia. b) Hidrogenasa soluble: aparece en Pseudomonas y Paracoccus. Hay bacterias que presentan ambos tipos, como el gnero Alcaligenes. La hidrogenasa es sensible a altas concentraciones de oxgeno; por eso, estas bacterias suelen ser microaerfilas. Esta enzima cataliza la reaccin inicial del hidrgeno. Los protones y electrones resultantes son transferidos a una quinona o a una NAD+, a la que reduce. Posteriormente, y en ambos casos, pasan a una CTE y finalmente reducen el O 2 a H2O. Se genera entonces poder reductor y ATP. El ATP se sintetiza por el paso de electrones por la CTE, lo cual genera un gradiente de electrones que es utilizado por las ATPasas de membrana para producir ATP. Los tomos de hidrgeno se transfieren a una quinona, luego a la CTE y finalmente reduce el O2 a H2O. El O2 no acta como una fuente de poder reductor directa. El NADH se consigue por un transporte inverso de electrones, con gasto de ATP. 70

Los microorganismos con hidrogenasas particuladas presentan un crecimiento ms lento que los que tienen ambos tipos, ya que en estos ltimos, la hidrogenasa soluble est implicada en la obtencin de poder reductor, mientras que la particulada se utiliza para generar ATP.

- OXIDANTES DEL AZUFRE No todas estas bacterias son aerobias estrictas: en ocasiones sustituyen el O 2 por nitratos como aceptor final (por ejemplo, Thiobacillus denitrificans). Estas bacterias utilizan como fuente de poder reductor y de energa el azufre o sus derivados (S-2, S0, S2O3-2) aunque hay algunos que pueden utilizar hierro en su estado Fe +2 (por ejemplo, Thiobacillus ferrooxidans) Dentro de este tipo, hay bacterias auttrofas obligadas (que slo fijan el CO 2) y otras auttrofas facultativas (no fijan el CO2 en presencia de fuentes de carbono orgnicas). Dependiendo del tipo de microorganismo, cogen S -2, S0 o S2O3-2 y lo convierten en SO3-2. Los electrones pasan a una CTE, donde se genera ATP, hasta llegar a una molcula de O 2 a la que reducen formando H2O.

- OXIDANTES DEL HIERRO Oxidan Fe+2 a Fe+3. Son microorganismos (por ejemplo, Thiobacillus ferrooxidans) que viven en suelos cidos, ya que estos suelos evitan la oxidacin espontnea de Fe +2 a Fe+3, que se produce en suelos normales. En este grupo tambin hay arqueas, como Sulfolobus, que es una arquea termoacidfila, aerobia estricta y quimiolitotrofa facultativa .

- NITROSOFICANTES / NITRIFICANTES a) Nitrosoficantes: transforman NH3 a NO2-. Por ejemplo, Nitrosomas. b) Nitrificantes: transforman el NO2- a NO3-. Por ejemplo, Nitrobacter. Son bacterias aerobias estrictas y la mayora son tambin auttrofas obligadas. Dentro de las nitrificantes hay algunas que son auttrofas facultativas.

- CARBXIDOBACTERIAS O BACTERIAS CARBOXIDOTRFICAS

Oxidan el CO a CO2. Estn desperdigadas en diferentes taxones, como Pseudomonas, Azotobacter o Alcaligenes. Todas son adems oxidantes del hidrogeno, aunque no todas las oxidantes del nitrgeno son carbxidobacterias.

CICLO DE CALVIN
La mayora de litotrofos fijan el CO2, ya sean auttrofos facultativos u obligados. 71

Tanto el ATP como el NAD(P)H son utilizados en la fijacin del CO2, y la mayora de las bacterias lo realizan por el Ciclo de Calvin. Es lo ms habitual pero no es el nico. En procariotas, el CO2 se fija en los carboxisomas. Dentro del Ciclo de Calvin encontramos 3 fases: 1) Fijacin: Es la etapa inicial, donde el CO2 se fija en la ribulosa-1,5-bifosfato, proceso llevado a cabo por la enzima Rubisco. Partimos de 6 CO2 y 6 ribulosa-1,5-bifosfato, para formar 12 molculas de 3fosfoglicerato. 2) Reduccin: Es el proceso por el cual se forman 12 molculas de gliceraldedo-3P. De estas 12 molculas, tan slo 2 salen para ser utilizadas en la sntesis de glucosa o similares, mientras que las 10 restantes siguen en el ciclo. 3) Regeneracin del aceptor de CO2. En resumen, el proceso total puede resumirse como:

6 CO2 + 12 NADPH + 18 ATP

No todas las bacterias lo hacen as:

C6H1206 + 18 NADP+ + 18 ADP

- Las bacterias verdes del azufre: fijan el CO2 por el ciclo TCA inverso, que es similar al de Krebs. La ferredoxina es un elemento clave en este ciclo. - Las bacterias verdes no del azufre: fijan el CO2 en la va del hidroxipropionato. Un intermediario de este ciclo es el hidroxipropionil-CoA.

TEMA 13 : UTILIZACIN DE LA ENERGA EN PROCESOS ESPECIALES

MECANISMOS DE PERMEABILIDAD Y TRANSPORTE
Tanto si se trata de un medio natural como de un medio artificial, la concentracin de nutrientes intracelular es siempre mayor que la extracelular. Incluso mucho de esos solutos internos son diferentes a los solutos externos. Esta diferencia de concentraciones es creada y mantenida por la membrana plasmtica y las protenas asociadas a ella. La membrana plasmtica es permeable a pequeos compuestos no polares, como el agua, y a compuestos solubles en fases hidrfobas; es impermeable a iones, molculas cargadas y molculas grandes, que precisarn de la intervencin de protenas asociadas o insertas en la membrana plasmtica para poder atravesarla. En el caso de las bacterias Gram- encontramos: 1) Membrana citoplasmtica

72

2) Membrana externa: tambin participa en la regulacin del paso de nutrientes y solutos. Es semipermeable. El modo de regulacin es diferente al de la membrana plasmtica. 3) Periplasma: la composicin de solutos es diferente tanto a la composicin de solutos interna de la clula como a la externa.

DIFUSIN PASIVA O SIMPLE

Es el mecanismo ms sencillo de transporte y no requiere gasto de energa. El flujo neto de solutos que se transporta se lleva a cabo por la existencia de un gradiente de concentracin: el transporte se realiza a favor de gradiente de concentracin. Con este transporte se aproximan las concentraciones intra y extracelulares. La velocidad de este transporte es directamente proporcional a la diferencia de concentracin: a mayor diferencia, mayor velocidad. A diferencia del resto de mecanismos de transporte, ste es inespecfico, es decir, que slo acta para aquellas sustancias para las que la clula es permeable inespecficamente (por toda su superficie, sin existir zonas donde se favorezca ms o menos este transporte). Mediante esta difusin simple se transporta: - Agua - Gases: N2, O2, CO2, - Nutrientes: atraviesan la membrana externa de las Gram- por difusin simple.

DIFUSIN FACILITADA
Tambin se realiza sin gasto alguno de energa y permite la difusin de solutos para los que la membrana es impermeable. El flujo de sustancias tambin es a favor de gradiente de concentracin. La difusin facilitada es especfica. La membrana es permeable slo por determinados puntos, donde se sitan las permeasas o Carrier Proteins , y es all por donde las sustancias pasan. La presencia en la membrana o la sntesis de estas permeasas es inducida por la presencia previa en el medio de la sustancia a transportar. La permeasa se une al soluto, formndose un complejo en la superficie externa de la membrana, que al rato se disocia mientras la permeasa deposita a la sustancia transportada en el citoplasma. Es un transporte de naturaleza enzimtica, por lo que es ms rpido que la difusin pasiva. Adems, muestra una especificidad de sustrato. La velocidad de flujo de ese sustrato va a tender a un lmite a medida que aumenta la concentracin del sustrato. La velocidad del flujo de esa sustancia responde a una cintica tpica de una reaccin enzimtica catalizada por una enzima Michaeliana.

Ventrada = Ventrada mxima

[S]exterior Kmentrada + [S]exterior

73

[S]interior Vsalida = Vsalida mxima Kmsalida + [S]interior

Hay saturacin: se obtiene la velocidad mxima en concentraciones saturables. Es un proceso reversible, pero la clula metaboliza los nutrientes rpidamente, por lo que la permeasa no tiene tiempo de sacarlos al exterior, y as se favorece el transporte. Esta difusin facilitada es ms comn en eucariotas que en procariotas. En eucariotas entran azcares con este transporte, mientras que los procariotas lo utilizan para transportar glicerol. Los procariotas transporta azcares por transporte activo o por translocacin de grupo.

TRANSPORTE ACTIVO
- TRANSPORTADOR DE TIPO ABC El transporte activo gasta energa para transportar microorganismos cuyas fuentes de nutrientes son escasas. nutrientes en aquellos

Pueden encontrarse en el interior celular concentraciones del orden de 100 1000 veces mayores. El transporte activo tiene capacidad de almacenar sustancias en contra de gradiente. Se requiere un transportador proteico que puede saturarse, pero necesita el aporte de energa metablica. En presencia de inhibidores metablicos que bloquean la produccin de energa se observa que se inhibe el transporte activo pero no la difusin facilitada. El transporte activo se puede realizar de 2 maneras: 1. Utilizando ATP o similares: Se utiliza energa de la hidrlisis de ATP para realizar el transporte de la sustancia en contra de gradiente. Son transportadores denominados ABC (ATP Binding Cassette). En bacterias Gram- existen las protenas de unin o Binding Proteins , que se encuentran en el periplasma y que se unen con facilidad a los sustratos a los que van a transportar. Actan junto con protenas de transporte de la membrana o transmembranales. Al unirse al sustrato a transportar, se produce un aumento en la concentracin del soluto en el periplasma, aumentando la concentracin efectiva de esa sustancia. La protena se encarga de transportarla al interior celular. Las Binding Proteins aumentan la velocidad del transporte. Las sustancias que se transportan en E. Coli son: azcares (maltosa, arabinosa, galactosa, ribosa) y aminocidos (leucina, glutmico, histidina). Tambin aparece este transporte en Gram+, pero las Binding Proteins son exclusivas de Gram-. En Gram+ este transporte no se conoce mucho. Hay unas protenas equivalentes en funcin a las Binding Proteins, que se encuentran unidas a los lpidos de la cara externa del citoplasma. 2. A expensas de un gradiente de concentracin: 74

Es ms comn. Es un gradiente de protones o de sodio. En muchos casos, la energa liberada por el microorganismo se utiliza para establecer un aumento del gradiente de protones a travs de una membrana, situando una mayor concentracin fuera que dentro. Una vez establecido ese gradiente de protones puede ser aprovechado para la incorporacin de otras sustancias al interior celular. Las protenas transportadoras de este transporte deben tener sitios especficos para las sustancias a transportar y otros para unir los protones y el sodio. A medida que esa sustancia se transporta, el gradiente se ir reduciendo. Siempre se est regenerando esta fuerza protomotriz, que continuamente se est produciendo. Las protenas de membrana responsables de este transporte no actan conjuntamente con las Bindings Proteins. Se transportan sustancias como la lactosa. Existen 3 tipos dependiendo el modo de transporte: 1. Uniporte: Slo interviene una sustancia. Los uniportadores transportan una sustancia a travs de la membrana, ya sea para su entrada o para su salida. Este transporte est dirigido por un gradiente de electrones. Se transporta por ejemplo potasio, que aprovecha la diferencia de cargas de la membrana. 2. Antiporte: Es el transporte simultneo de 2 molculas en sentidos opuestos por un antiportador. Esta diferencia de cargas a los lados de la membrana pueden permitir un antiporte electroneutro (1 Na+ y 1 H+) o un antiporte electrognico (1 soluto sin carga y 1 H+). 3. Simporte: Es el transporte simultneo de 2 sustancia en el mismo sentido; uno va a favor de gradiente y otro se transporta con ella. Tambin puede ser electroneutro (1 anin con 1 protn) o electrognico (1 sin carga con 1 protn). Para transportar una determinada molcula no hay un solo mecanismo de transporte. En E. Coli hay 5 sistemas de transporte diferentes para la galactosa, 3 para la leucina o el glutmico, 2 para el potasio, La diversidad proporciona una ventaja ante posibles cambios ambientales, garantizando as el transporte.

TRANSLOCACIN DE GRUPO
Hay algunas sustancias que al entrar en la clula se modifican convirtindose en una sustancia impermeable para la clula. Esto permite que la clula mantenga una alta concentracin de esa sustancia modificada en el interior a expensas de la sustancia no modificada del exterior.

75

Realmente, al ser simultneo con el transporte, no se establece un gradiente de concentracin porque son sustancias diferentes. Es un mecanismo conservador desde el punto de vista del gasto de energa (gasta menos) porque normalmente las sustancias, al entrar en la clula, se fosforilan, gastando energa (1 ATP para transportarla + 1 ATP para fosforilarla), mientras que el proceso de modificacin slo gasta un ATP. Esta translocacin de grupo es especfica de procariotas, y es tpica de enterobacterias y otras bacterias fermentadoras. El sistema ms usado es el mecanismo de las fosfotransferasas. Se transporta: a) Glucosa: consta de una enzima ( EI) y de una protena ( HPr); ninguno de los dos son especficos para la glucosa. Despus hay otras 3 enzimas (2A, 2B y 2C), que son especficos para cada tipo de azcar a transportar. La sntesis de estas enzimas est inducida por la presencia de la sustancia a transportar. 2A
Libre

2B
Asociada a la membrana

2C
Inserta en la membrana

El fsforo llega a la glucosa a travs de estas enzimas y procedentes del PEP. b) cidos grasos: se pueden transportar y a la vez tener unido el CoA, necesario para la utilizacin de estos cidos grasos. El sistema Acetil-CoA-sintetasa interviene en la entrada de cidos grasos, introducindolos en la forma activada. c) Bases nitrogenadas: pueden entrar y ser convertidas por un sistema denominado Fosforibosintransferasa, que cataliza el transporte y la unin de ciertas bases a fosforibosilpirofosfato, que entran en forma de nucletido. Algunas bacterias pueden incorporar ciertas bases como adenina, guanina, xantina, lipoxantina y uracilo al interior en forma de nucletidos. d) Protenas: hay protenas que se transportan fuera de la clula . Las protenas requieren un transporte especial, por translocasas.

FIJACIN DE NITRGENO
- MECANISMO Y DISTRIBUCIN DEL PROCESO Se limita a procariotas. El nitrgeno deber ser reducido hasta amoniaco antes de su incorporacin. La fijacin del nitrgeno la realizan las Nitrogenasas o Complejos Nitrogenasas, que se caracterizan por su extrema sensibilidad al oxgeno, en cuya presencia se inactivan irreversiblemente, y requieren energa en forma de ATP. Esto no significa que no se pueda fijar nitrgeno en el caso de los microorganismos aerbicos, pero stos han desarrollado mecanismos que permiten aislar a las nitrogenasas de la accin del oxgeno. Los mecanismos para fijar nitrgeno en presencia de oxgeno son: 76

1) Estructuras celulares especficas o heterocistos: en cianobacterias. 2) Rhizobium: bacteria que induce en el simbionte la leghemoglobina, que protege del oxgeno a estas enzimas fijadoras de nitrgeno. 3) Fijadores libres (no simbiticos) que adems son aerobios estrictos (como es el caso de Azotobacter): la nitrogenasa es resistente porque se protege mediante la formacin de complejos por un mecanismo de proteccin conformacional (forman complejos con una protena determinada). Presentan una tasa respiratoria muy elevada, ya que metabolizan rpidamente el oxgeno para evitar su contacto con la nitrogenasa. La fijacin de nitrgeno no est asociada a un tipo de microorganismo concreto.

- SISTEMA NITROGENASA

Participan 2 protenas: 1. Componente 2, ferroprotena o reductasa de la nitrogenasa: Tiene un peso molecular de 64000 Da. Se le denomina ferroprotena porque tiene 4 tomos de Fe por cada molcula. 2. Componente 1, moliptoferroprotena o dinitrogenasa: Tiene un peso molecular de 220000 Da. El hierro y el molibdeno forman parte de un cofactor que ocupa el centro activo del componente, donde sucede la reduccin real del nitrgeno a NH 3+. Por cada tomo de Mo tiene 7 de hierro y 9 de azufre unidos a un homocitrato. Existen 2 copias de este cofactor por cada molcula de nitrogenasa.

7 Fe + 9 S/1 Mo + homocitrato

- MECANISMO DE ACCIN Para fijar nitrgeno se necesita poder reductor y ATP. El ATP se canaliza por un sistema de transporte de electrones, que pueden ser transferidos por una ferredoxina o por una flavodoxina, ambas protenas FeS. Los electrones pasan al Componente 2, lo que sucede paralelo a una hidrlisis masiva de ATP. Por cada nitrogenasa reducida se hidrolizan 16 ATP. Al unirse todo el ATP al Componente 2, se reduce el potencial redox. Esto lo capacita para reducir al Componente 1, y es aqu donde realmente se produce la reduccin de hidrgeno a NH3+, el cual se incorpora a distintos componentes de la clula (especialmente a los cidos orgnicos). Es un proceso secuencial: el nitrgeno se convierte en HN y NH2 antes de pasar a NH3+. La reduccin del nitrgeno molecular a amonio es bastante exergnica. Es un proceso costoso y requiere gran gasto de ATP. Se necesita:

N2 + 8 H+ + 8 e- + 16 ATP

2 NH3 + H2 + 16 ADP + 16 Pi

El ATP procede de la fermentacin, respiracin, fotosntesis, etc, dependiendo del microorganismo. Las cantidades necesarias de ATP y poder reductor son tan importantes que slo se manifiestan en los estados de rendimiento energtico del crecimiento. Si en el ambiente hay NH3+ disponible, no se fija nitrgeno.

77

La nitrogenasa es poco especfica a nivel de sustrato. Hay otros compuestos que pueden ser reducidos por la nitrogenasa (azida, cianuro, NO, nitrilo,). Para poder medir su actividad se emplea como sustrato el acetileno. Las reacciones que realiza la nitrogenasa s son especficas. Acetileno HCCH
2e- 2H+

Etileno

H2CCH2

- HIDROGENASA
En todos los microorganismos fijadores de nitrgeno hay tambin una hidrogenasa ligada a la membrana. Existe la posibilidad de que tenga una funcin protectora del sistema nitrogenasa, que es sensible al oxgeno. El oxgeno que se forma podra utilizarse para formar agua.

- REGULACIN DE LA FIJACIN DE NITRGENO La nitrogenasa es sintetizada en aquellas condiciones en las que es necesaria para el crecimiento, es decir, cuando la clula carezca de una fuente utilizable de nitrgeno. Los iones amonio, que es la forma habitual de encontrar el nitrgeno, reprimen la sntesis de nitrogenasa. La actividad de la enzima ya presente tambin puede verse reducida en presencia de amonio en algunas bacterias. Hay al menos 3 rutas de fijacin de amoniaco: 1. Mediante la formacin del aminocido alanina en una reaccin de aminacin reductora catalizada por la alanina deshidrogenasa. Piruvato + NH4+ + NAD(P)H + H+ L-alanina + NAD(P)+ + H2O 2. Sistema glutamato-deshidrogenasa: se utiliza en condiciones de elevadas concentraciones de amonio. El amoniaco reacciona con el -cetoglutarato y se forma glutarato. Se consume NAD(P)H y se forma, adems del glutarato, agua. Estos aminocidos se pueden sintetizar a partir del glutamato y otros cetocidos. Participan transaminasas. -cetoglutarato + NH4+ + NAD(P)H + H+ Glutamato + NAD(P)+ + H2O

3. Sistema glutamina-sintetasa glutamato sintasa: en condiciones de bajas cantidades de amonio. Se produce glutamato. Es la ruta principal, tiene gran afinidad por los iones amonio y determina que la concentracin de estos iones sea baja en la clula ya que en seguida los incorpora en la ruta. Tambin participan transaminasas. Cuando, de repente, aumenta la concentracin de amonio en el medio, se produce una inactivacin de la glutamina-sintetasa. As, se evita el gasto intil de ATP que realiza esta ruta, y en este caso operara el sistema glutamatodeshidrogenasa. La capacidad de fijar nitrgeno se puede transferir entre bacterias mediante contacto directo, por conjugacin. Este hecho, y el que los genes nif, responsables de la fijacin de nitrgeno, se siten en plsmidos, hacen que se pueda transferir esta capacidad entre bacterias, e incluso de bacterias a organismos eucariotas. Pero, adems de la nitrogenasa, existen ms requerimientos para la fijacin de nitrgeno, como un sistema de ferroprotenas y de proteccin de la nitrogenasa. 78

SNTESIS DE PEPTIDOGLICANO

Es un proceso que consta de 3 fases: 1. Sntesis de peptidoglicano propiamente dicha en el citoplasma: las unidades repetitivas del peptidoglicano se sintetizan unidas a UDP. 2. Las unidades se transfieren a un lpido transportador que facilita su transporte a la membrana. 3. En la cara externa de la membrana se polimerizan, dando lugar a peptidoglicano mediante una serie de enzimas presentes en la cara externa de la membrana. El peptidoglicano forma una red bidimensional que rodea a las clulas en forma de saco. Su sntesis requiere que esas unidades se enlacen en 2 dimensiones: 1) Una de ellas enlazando NAG-NAM mediantes enlaces (1-4) 2) Otra dimensin mediante la unin de una cadena con otra por un enlace peptdico entre el carboxilo del ltimo aminocido con el grupo amino de un diaminocido situado en la posicin 3 de la otra cadena. Sin embargo, no siempre sucede esto, y hay cadenas que no van enlazadas. La composicin qumica del peptidoglicano es tpica de bacterias. En arqueas aparece el pseudopeptidoglicano. Entre bacterias, el peptidoglicano se diferencia en la frecuencia de los enlaces y en la composicin de las cadenas peptdicas.

En el citoplasma, lo primero que ocurre es una fosforilacin, producindose fructosa-6fosfato o glucosa-6-fosfato. Despus, se produce una aminacin: la fructosa-6P o la glucosa-6P pasan a glucosamina6P con adicin de glutamina. Mediante aporte de CoA se forma N-acetilglucosamina-6P, que pasa a Nacetilglucosamina-1P y finalmente, con gasto de UTP, pasa a UDP-N-acetilglucosamina (UDP-NAG). sta reacciona en un proceso de reduccin al PEP, formndose UDP-NAM. A continuacin se van incorporando los diferentes aminocidos. En el citoplasma se sintetiza como un pentapptido (5 aminocidos) con 2 alaninas terminales en vez de una. As, se forma UDP-NAM-pentapptido. ste debe atravesar la membrana, pero sta es impermeable a molculas energticas. Un lpido, el bactoprenol, lo transporta por la membrana. El bactoprenol es un lpido isoprenoide de 55 carbonos que est fosforilado. Interacta con el UDP-NAM-pentapptido, unindose al NAM por un enlace fosfodister, producindose entonces una liberacin de UMP al citoplasma. La forma bactoprenol-pentapptido reacciona con UDP-NAG, y el NAG se incorpora. En esta forma se transporta y se libera el bactoprenol. Las cadenas se unen por enlaces peptdicos por las enzimas transaminasas. A veces la transpeptidacin no es directa y se realiza a travs de puentes interpeptdicos de pentaglicina (Ejemplo: Staphylococcus aureus). Las enzimas autolisinas realizan cortes en puntos concretos, y van cortando las uniones que conectan zonas ya existentes de cadena e insertando nuevas unidades, permitiendo as el crecimiento de la clula, hasta que llega un momento en que se tabica. 79

- FASE 1 -

Existen numerosos agentes antimicrobianos que afectan a la sntesis de peptidoglicano. Algunos de estos agentes son: a) Fosfomicina o fosfonomicina: es un anlogo estructural del PEP que bloquea la formacin del UDP-NAM, que procede del UDP-NAG. Est producida por un actinomiceto: Streptomyces fradiae. b) D-cicloserina: es un anlogo estructural y funcional de la D-alanina. Acta haciendo que el peptidoglicano forme una malla inestable que al final provoca la lisis osmtica. La produce Streptomyces orchidaceus. Presenta un bajo ndice teraputico porque es muy txico a nivel del sistema nervioso central. Normalmente slo se utiliza para casos extremos de tuberculosis. c) Bacitracina: pptido cclico que presenta un anillo de tiazolina. Bloquea el paso de desfosforilacin del bactoprenol-pirofosfato a bactoprenol-P. Se utiliza de forma tpica en quemaduras, laceraciones aunque tambin es txico. Lo producen Bacillus subtilis o B. licheniformis. d) Vancomicina: es un antibacteriano de amplio espectro y tambin es txico. Se utiliza en casos de infecciones de estafilococos resistentes. La produce Streptomyces orientalis. e) Ristocetina: es parecida a la vancomicina. Ambos son glucopptidos que actan formando un complejo con el extremo de D-alanil-D-alanina, bloqueando el entrecruzamiento de pptidos en la pared celular. Producida por Nocardia lurida. f) Lisozima: no es un antibitico. Acta escindiendo el peptidoglicano a nivel de las uniones (1-4), debilitando la pared celular y provocando lisis osmtica. Aparece en secreciones animales, y es la primera lnea de defensa de stos frente a infecciones bacterianas. g) -lactmicos: - Penicilinas: estructura anloga al extremo D-alanil-D-alanina. - Cefalosporinas: inhiben la transpeptidacin. Producen lisis osmtica. Para que estos antibiticos acten hace falta que haya crecimiento bacteriano, para que se est sintetizando el peptidoglicano. Si estn en estado estacionario, no hacen nada.

BLOQUE III: TAXONOMA Y ECOLOGA MICROBIANA

TEMA 14 : MICROORGANISMOS CLASIFICACIN DE LOS

La taxonoma se define como la ciencia de la clasificacin biolgica. Consta de 3 partes: 1) Clasificacin: organizacin de los organismos en grupos o taxones, en funcin de sus semejanzas o parentesco evolutivo. 2) Nomenclatura: se encarga de la asignacin de nombres a los taxones, de acuerdo con una serie de normas establecidas. Nos permite disponer de un lenguaje cientfico internacional. 3) Identificacin: es el lado prctico de la taxonoma. Nos permite determinar que microorganismo pertenece a un determinado taxn ya conocido. 80

La sistemtica se emplea para referirse a la taxonoma. Es el estudio cientfico de los organismos, cuyo objetivo principal es agruparlos taxonmica. Abarca disciplinas como la Ecologa, Fisiologa, Bioqumica, Biologa Molecular, Epidemiologa,

LUGAR DE LOS MICROORGANISMOS

Han existido a lo largo de la Historia diversos sistemas de clasificacin. 2 de ellos son: I. Clasificacin de 5 reinos: propuesta por Robert Whittaker en 1969, est totalmente desfasada. Considera a los procariotas como antecesores de los eucariotas. Monera: bacterias Protista: protozoos, algas (unicelulares o pluricelulares no diferenciadas en tejidos) Animalia: consiguen nutrientes mediante su ingestin Plantae: consiguen nutrientes por fotosntesis Fungi: consiguen nutrientes por absorcin de materia orgnica II. Clasificacin de 3 reinos: descrita por Carl R. Woese en 1990. Basado en estudios del RNA ribosmico 16S. Considera que los procariotas, a pesar de ser distintos en apariencia, presentaban distintas caractersticas entre ellos. Ha demostrado que hasta aquel momento se haba sobrevalorado la importancia evolutiva de metazoos. La mayor diversidad biolgica se daba en procariotas. Eukarya Prokarya Bacteria Archaea

Tal eran las diferencias entre los propios procariotas que en vez de reinos pasaron a llamarse dominios: eukarya, bacteria y archaea. Dentro de ellos, a su vez, podan haber ms reinos. - Imperios: sinnimo de dominio que fue aceptado en 1995. - En 1996 Pace defini un nuevo reino dentro de arqueas.

Se ha calculado que la Tierra tiene unos 4600 ma. de antigedad. Se han descubierto fsiles procariotas de unos 3500-3800 ma. en estromatolitos y rocas sedimentarias. Los estromatolitos son rocas estratificadas formadas por la incorporacin de sedimentos minerales en comunidades microbianas laminadas. Los modernos estn formados por cianobacterias, por lo que se supone que algunos estromatolitos fosilizados se formaron de forma similar. El agua lquida apareci hace 3800 ma. Los microorganismos eran procariotas fototrofos anaerbicos. La fotosntesis oxignica se desarroll ms tarde, hace unos 2500-3000 ma. La diversidad de microorganismos aument a medida que el oxgeno se hizo ms abundante. Parece probable que los eucariotas modernos se originaron por procariotas: los fsiles ms antiguos son restos de procariotas, mientras que los fsiles de eucariotas son ms recientes. Se piensa que los eucariotas aparecieron hace unos 1500-1400 ma. Existen varias teoras sobre la aparicin de eucariotas: 81

EVOLUCIN Y DIVERSIDAD MICROBIANAS

1. Hiptesis: los ncleos, mitocondrias y cloroplastos se originaron por invaginacin de la membrana plasmtica, generando orgnulos de doble membrana con material gentico, y a partir de ah sufrieron especializacin. El proceso de cambio de los orgnulos es muy lento y por eso conservan caracteres de los procariotas. Los orgnulos de eucariotas son muy similares a los procariotas. 2. Teora de la endosimbiosis: es la ms aceptada. Las clulas eucariotas evolucionaron a partir de clulas procariotas que vivieron unas dentro de otras. Estudios de secuenciacin molecular de los RNA ribosmicos aportaron pruebas que demuestran la semejanza entre orgnulos eucariotas y procariotas (pequeas unidades de DNA circular covalentemente cerrado, tpico de procariotas, ribosomas tipo procariota, secuencias de RNA ribosmico muy parecidas a las de bacterias, etc.). A partir del antecesor universal, denominado progenonte, se diferenciaron las bacterias, arqueas y procariotas. Una bacteria aerbica se aloj en el citoplasma de un eucariota primitivo aportndole energa a cambio de un ambiente estable y protegido, asegurndole un aporte de nutrientes. Sera el precursor de las actuales mitocondrias.

- ORIGEN DE LOS CLOROPLASTOS

Se produjo por la adquisicin por endosimbiosis de un organismo fototrofo oxignico, que liber al eucariota primitivo del requerimiento de compuestos orgnicos para conseguir energa. El endosimbionte perdi autonoma al cederle parte de su material gentico al ncleo primitivo. Tras la incorporacin de endosimbiontes, se produjo una explosin de diversidad en eucariotas, hace unos 1500-1400 ma. Desde entonces hasta ahora, se ha producido un desarrollo y evolucin de los metazoos mayor (han evolucionado ms y conseguido mayor xito evolutivo). Los cloroplastos parece ser que se originaron de predecesores de proclorofitos y cianobacterias.

- ORIGEN DE LAS MITOCONDRIAS

Parece ser que surgieron de un grupo de bacterias antecesoras de Agrobacterium, Rhizobium o Rickettsia. stas viven intracelularmente. Es origen de este eucariota primitivo o urcarionte es confuso; no se sabe si evolucion directamente del progenonte o tuvo un antecesor del tipo arquea. Las semejanzas bioqumicas entre eucariotas y arqueas hacen ms creble la segunda hiptesis.

- ORIGEN DEL NCLEO

Se explica por el aumento de tamao del genoma. Hizo que no fuera posible su replicacin como una sola molcula, y se fragment en cromosomas, y todo se rode de una membrana. 82

Toda la vida comparta un antecesor universal, segn se deduce de estudios de secuenciacin de RNA ribosomal y otras macromolculas. La vida tom 2 caminos: uno fue el dominio bacteria y otro el dominio arquea y eukarya. Arqueas y eucariotas estn ms prximos filogenticamente entre ellos que con las bacterias. Despus formaron 2 linajes independientes: arquea (menos evolucionado) y eukarya (ms evolucionado). Las arqueas estn ms cerca de la raz porque muchos organismos de este grupo viven en ambientes extremos y podran representar reliquias evolutivas de las primeras formas de vida en la Tierra. Los organismos actuales dentro de arqueas son ms similares a los que se supone que fueron los primitivos; son los que han cambiado menos.

NOMENCLATURA
La clasificacin implica la necesidad de una nomenclatura cientfica porque los nombres comunes o vulgares son dudosos por su duplicidad. Carl von Linn o Linneo (s. XVIII) fue un botnico sueco que estableci el sistema binomial: a cada organismo se le da 2 nombres: - Nombre genrico o gnero - Nombre especfico o especie (suele ser un adjetivo) Los nombres proceden del latn o del griego, o si no se latinizan aadiendo un sufijo adecuado. En ocasiones se puede abreviar el nombre genrico cuando ya se ha escrito previamente.

La clasificacin implica agrupar a los individuos en taxones. La clasificacin de microorganismos se rige por una jerarqua taxonmica. Se establecen subdivisiones, rangos o niveles.
Especie Gnero Familia Orden Clase Phylum Dominios o Reinos

JERARQUA TAXONMICA

Los nombres de cada nivel suelen tener sufijos especficos: Familia - ceae Orden - ales Esta jerarqua taxonmica se basa en caractersticas filogenticas. Cada especie de un grupo retiene caractersticas del antepasado. La dificultad de clasificar a los microorganismos viene dada porque la mayor parte de la informacin procede de fsiles, y la mayora de microorganismos no fosiliza con facilidad. La falta de evidencias fsiles hace que la filogenia se base en otros datos: estudios de hibridacin de cidos nucleicos (en eucariotas concuerdan bastante bien con el registro fsil). En procariotas, algunos taxones se utilizan ms que otros: el ms utilizado es el de la familia. La especie es el taxn bsico. El trmino especie entre los procariotas es diferente que con organismos superiores. En organismos superiores es un grupo de individuos con capacidad de cruzarse entre s. En procariotas, sin embargo, se conoce como el grupo de cepas con un elevado grado de semejanza fenotpica, diferenciable de otro grupo de clulas. Esto no quiere decir que todas las clulas de una especie sean idnticas: tienen un cierto grado de diversidad genotpica 83

interna. Es cuestin de los taxnomos determinar qu grado de diversidad genotpica puede ser admitida dentro de una misma especie. No se ha aceptado universalmente, aunque se ha propuesto, que 2 procariotas pertenezcan a la misma especie si sus RNA ribosomales 16S tienen un 97% o ms de secuencias idnticas. Eso implica que su porcentaje G+T sea similar y presenten un grado de hibridacin del DNA mayor del 97%. Una estirpe o cepa es una poblacin clonal, formada por descendientes de una misma clula, pero no se descarta una divergencia a partir de la original. Se deben identificar las capas con nmeros, eptetos Un clon es una poblacin de clulas genticamente idnticas y descendientes de una misma clula.

- PROCARIOTAS La taxonoma es bastante complicada. Hay un comit internacional de taxonoma bacteriana que establece normas para adjudicarles nombres a bacterias y adjudicarlas a un taxn. International Committee of Systematic Bacteriology (ICSB) International Code of Nomenclature of Bacteria (Revista donde se publican las normas que rigen a los procariotas) Si se asla un microorganismo y se considera que es diferente a otros, hay que decidir si es lo suficientemente distinto para establecer una nueva especie o un nuevo gnero. Tiene que ser aceptado por la comunidad cientfica: para lograr una atribucin taxonmica formal hay que dar un cultivo puro a una coleccin de cultivos tipo, y se conserva como patrn de referencia. Se debe publicar una descripcin de las caractersticas y los datos de clasificacin. Adems se debe proponer un nombre, y todo esto se publica en una revista: International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology (IJSEM) Una vez publicada, se puede incluir en el Bergeys Manual of Systematic Bacteriology , que es el tratado oficial de sistemtica de procariotas. Hay 2 tipos de manuales Bergey: - Manual de determinacin: desde 1923. Es estrictamente fentico. - Manual de sistemtica: emplea un sistema fentico, pero tambin aspectos que revelan parentescos evolutivos.

TAXONOMA CLSICA
- CARACTERSTICAS MORFOLGICAS, ESTRUCTURALES, FISIOLGICAS, METABLICAS Y ECOLGICAS
1. Morfotipos La morfologa da informacin pero difcil de utilizar para la clasificacin. Permite establecer morfotipos dentro de una misma especie. 84

Al microscopio hay pocas diferencias entre organismos que, aunque sean totalmente diferentes, tienen una morfologa similar. Sirve de ayuda la presencia de ciertas estructuras (endosporas, flagelos,) y las tinciones diferenciales (Gram, Ziehl-Neelsen,). Pero a veces estas tinciones no se pueden aplicar o presentan utilidad limitada, como en Mycoplasmas o Arqueas. 2. Biotipos Mediante pruebas bioqumicas, que son tiles para poder separar gneros o especies a veces estrechamente relacionados. Es muy importante la utilizacin de medios selectivos, diferenciales y sistemas de deteccin rpida: por ejemplo, el uso o no de un determinado azcar puede ser un carcter taxonmico (el uso de lactosa en enterobacterias como: Escherichia coli y Enterobacter (lac+) y en Salmonella y Shigella (lac-)). Se establecen biotipos: cepas que aparecen dentro de una especie por caractersticas bioqumicas y fisiolgicas. Se establecen dentro de una misma especie, dependiendo de sus caractersticas bioqumicas. 3. Serotipos Se realizan pruebas serolgicas: estudio de respuestas inmunolgicas detectadas en el suero. Los microorganismos son antignicos, y si se disponen de soluciones de anticuerpos, podemos determinar un microorganismo por la reaccin antgenoanticuerpo. Se puede tratar un microorganismo con un anticuerpo y ver si se produce reaccin. Pueden realizarse pruebas de aglutinacin.

+ antisuero A (-)

+ antisuero B (+) Se produce aglutinacin

+ antisuero C (-)

Si un mismo anticuerpo reacciona con distintas cepas o especies, permite estudiar la posible relacin entre ellas. Las pruebas serolgicas permiten establecer serotipos. 4. Fagotipos Pruebas de tipificacin con fagos o pruebas de fagotipia. Consiste en ensayos donde se determina a qu fago es sensible una determinada bacteria. Se emplea bsicamente para la identificacin porque los fagos suelen infectar a miembros de una determinada especie o cepa (existe alta especificidad). Es una placa se siembra uniformemente una bacteria. En una cuadrcula se pone, en cada cuadro, un fago determinado. Se observan calvas o halos de lisis.

TAXONOMA MOLECULAR Y GENTICA

Pruebas que permiten la clasificacin y/o identificacin. Estas pruebas son: a) Secuenciacin de aminocidos: 85

Es importante porque da mucha informacin. La secuencia de aminocidos de una protena determinada es un reflejo de la secuencia de bases del gen que la codifica. Cuanto ms separados evolutivamente estn 2 organismos, ms posibilidades de mutaciones hay en el DNA, y por tanto, ms posibilidades de que haya diferencias. Se pueden comparar secuencias de aminocidos de 2 organismos distintos para comparar semejanzas filogenticas. Slo se puede utilizar en grupos de organismos que comparten una protena en comn. Ejemplo: comparacin de secuencias del citocromo c. b) Anlisis de protenas: Se comparan los patrones de todas las protenas existentes en las clulas de 2 organismos distintos. Se obtiene mediante electroforesis en geles de poliacrilamida-SDS (PAGE). Todas las protenas se disuelven en un determinado detergente, se ponen en el gel, se aplica una corriente elctrica. Las protenas van a ir migrando segn el tamao y carga. Se tie el gel y se comparan. Sirve para la clasificacin. Tambin sirve para identificar, siempre y cuando se disponga de bases de datos de referencia para compararlos. Tambin tiene sus dificultades, ya que a veces las protenas no se separan bien unas de otras por tener la misma carga o tamao. En este caso se realiza una electroforesis bidimensional, donde el gel se somete a 2 electroforesis perpendiculares: una las separa por cargas y la otra por tamao. Primero se coloca la muestra con un tampn de PH especial que establece un gradiente de PH y las protenas migran en ese gel segn su punto isoelctrico. Colocamos ese gel sobre otro mayor y sometemos a electroforesis perpendicular a la primera, que va a separar por tamaos. Hay que anular las diferencias de cargas mediante detergentes. c) Determinacin de la composicin de bases de los cidos nucleicos: Se puede realizar mediante: Hidrolizando DNA y analizando las bases mediante HPLC (High Perfomance Liquid Cromatography) o cromatografa lquida de alta resolucin. - Calculando el porcentaje G+C. Se puede realizar mediante un gradiente diferencial de ClCs. La densidad del DNA aumenta de forma lineal con el contenido en G+C. En el DNA hay 2 cadenas: el DNA con aumento del porcentaje G+C tiene ms puentes de hidrgeno que uno con el porcentaje ms bajo. Las cadenas con mayor porcentaje tendrn tambin una mayor temperatura de fusin. La fusin de DNA se puede seguir por espectrofotometra. La absorbancia aumenta a medida que se van separando las cadenas. Comparando el porcentaje G+C se pueden sugerir diferencias evolutivas entre especies. El porcentaje es muy variable, sobre todo en procariotas. Los fenotipos similares con un porcentaje G+C parecido indican parentesco. Pero puede ser que organismos con porcentaje similar tengan secuencias de DNA muy diferentes: se necesitan datos complementarios. El porcentaje G+C permite confirmar datos de otras pruebas: si se determina por criterios fenotpicos que 2 organismos estn relacionados pero el porcentaje G+C es muy diferente, entonces es que no se parecen tanto. 86

d) Secuenciacin del RNA ribosomal 16S: Se pueden comparar los patrones de restriccin utilizando una enzima o enzimas de restriccin. Los fragmentos de restriccin obtenidos se someten a electroforesis, obteniendo patrones de restriccin, y los comparamos. Podemos tratar de determinar la secuencia de bases de un gen concreto mediante el uso de distintas enzimas de restriccin, lo que proporciona mucha informacin para la clasificacin. Primero hay que seleccionar el gen a comparar. Se ha utilizado mucho el gen del RNA ribosmico 16S. para que un gen pueda ser usado como cronmetro debe: - Estar distribuido universalmente. - Realizar una funcin homloga. El gen del RNA ribosomal 16S est distribuido por todos los organismos y su estructura est sometida a unos requerimientos muy precisos: requiere una estructura secundaria determinada para funcionar, y cualquier modificacin la hace no funcional. Esto permite comparar organismos muy separados en la evolucin, porque este gen cambia un poco. RNAr 70S 30S 50S 16S 5S 23S 1500 nucletidos 120 nucletidos 2900 nucletidos

Las subunidades 16S y 23S contienen varias regiones que estn muy bien conservadas. Esto es til porque permite hacer un alineamiento de secuencias, pero al mismo tiempo tiene la suficiente variabilidad de bases en el resto de regiones para establecer diferencias. La subunidad 5S tambin se utiliza pero su bajo tamao limita su funcionalidad. Se puede realizar de forma directa, utilizando la transcriptasa inversa, por el mtodo de secuenciacin de Sanger o por PCR. Forma directa Mtodos PCR Una vez identificados, los comparamos. La subunidad 16S se puede emplear para clasificar pero tambin para identificar bacterias por la tcnica del ribotipado. No implica la secuenciacin, es rpida y especfica. Requiere ser marcada la sonda del RNA ribosomal. El RNA se somete a enzimas de restriccin y posteriormente se analiza con una sonda de RNA ribosomal. Se crea un modelo de restriccin, que es nico para cada organismo. El RNA ribosomal se amplifica con PCR, se trata con enzimas y se aplica una sonda para crear un modelo de restriccin. El perfil o patrn de restriccin generado se digitaliza y compara con otros de la base de datos. Slo se hace cuando se sospecha qu microorganismo tenemos. 87 Transcritasa inversa Sanger

e) Fusin e hibridacin de cidos nucleicos: Al calentar el DNA de 2 microorganismos, las 2 cadenas se van a separar en 2 cadenas simples. Si se dejan enfriar y se mezclan, si hay alguna similitud podrn hibridar. Se puede determinar el grado de semejanza de 2 microorganismos dependiendo del grado de hibridacin. Si la hibridacin es total, se trata del mismo microorganismo. A mayor grado de hibridacin, mayor relacin. Tambin puede hacerse con el RNA de uno y el DNA de otro. Este tipo de pruebas permiten adems la identificacin rpida de algunas bacterias de las que se hayan desarrollado sondas (fragmentos de DNA especficos de un organismo) adecuadas. Primero, el DNA de una bacteria se fragmenta con enzimas de restriccin. Se selecciona un trozo, se clona, se obtienen cientos de fragmentos, se marcan con istopos radiactivos o con fluorescencia y ya tenemos hecha la sonda. Las bacterias se recolectan en un filtro donde se produce la liberacin del DNA por lisis celular. Juntamos ambos y vemos si hay hibridacin. f) Recombinacin gentica: Se puede hacer por: - Transformacin - Conjugacin - Transduccin Para identificar a Neisseria gonorrhoeae, tomamos su DNA de esta bacteria. Necesitamos un auxtrofo de Neisseria gonorrhoeae para prolina. Mezclamos el DNA del supuesto Neisseria gonorrhoeae y una suspensin celular de Neisseria gonorrhoeae pro- y las colocamos en medio mnimo.

TAXONOMA NUMRICA
Tambin llamada Taxonoma andasoniana por Michael Adanson (s. XVIII). Crea que si se observaban los organismos y se les numeraban los caracteres, dndoles a todos el mismo valor y sin importar su relevancia, se podra identificar a los microorganismos con exactitud. 88

La finalidad es expresar en trminos numricos las semejanzas entre organismos, en funcin de los caracteres compartidos en relacin con los caracteres estudiados.

- COEFICIENTE DE SEMEJANZA, Sj, COEFICIENTE DE JACCARD

N de caracteres comunes + ambos (+,+) Sj (%) = N de caracteres presentes al menos en uno de ellos (+,+), (+,-), (-,+) x 100

Se realizan pruebas en parejas. El porcentaje queda reducido a un solo valor. El coeficiente de semejanza indica las coincidencias positivas, mientras que el coeficiente de coincidencia indica las coincidencias tanto positivas como negativas.

- COEFICIENTE DE COINCIDENCIA, EMPAREJAMIENTO SIMPLE

Ss (%) = N de caracteres comunes (+,+) + (-,-)

Ss,

Ssm,

COEFICIENTE

DE

Todos los caracteres examinados (+,+), (+,-), (-,+), (-,-)

x 100

Si se compara un nmero grande de organismos, hay que hacerlo por parejas, lo que es un trabajo costoso y largo. Ahora se emplean ordenadores, que permiten crear agrupamientos y dendogramas para representar las relaciones de estos organismos de forma grfica. En la grfica: - Nivel de relacin de especies: a partir del 80-82% de semejanza, se trata de la misma especie. - Nivel de relacin de gnero: a partir del 55%. Se establece un coeficiente para determinar si 2 organismos son la misma especie o gnero. Cada autor usa un porcentaje diferente.

TEMA 15: ESPIROQUETAS Y OTRAS BACTERIAS HELICOIDALES Y CURVADAS

BERGEY. VOLUMEN I. SECCIN 1: Comprende bacterias Gram- quimioheterotrofas y mviles (flagelo).

- Constituyen el orden Spirochaetales. - Se dividen por fisin binaria. - Son aerobias, anaerobias o microaerfilas. - Hbitat variable: acutico, terrestre, materia orgnica en descomposicin, parsitos animales. Son helicoidales. La espiral puede ser ms o menos laxa y son bastante largos. Presentan un cuerpo o protoplasma cilndrico, que est rodeado de peptidoglicano y es rgido y helicoidal. Por fuera se encuentra la vaina externa como envoltura o membrana externa. Tiene 3 capas y es bastante flexible. 89

ESPIROQUETAS

- MORFOLOGA

Son bacterias muy mviles por la presencia de 2 filamentos axiales formados por fibrillas axiales o flagelos periplsmicos o endoflagelos , en nmero variable, de 2 a <100. Estos filamentos axiales se fijan cerca de los extremos o polos celulares, y se extienden aproximadamente hasta 2/3 de la longitud celular, de modo que se entrecruzan. Estos flagelos circulan por el periplasma. Las fibrillas axiales son rgidas y rotan unidas a cada extremo celular. Al girar forman una especie de onda helicoidal en la superficie celular, que provoca desplazamiento. El movimiento es diferente, dependiendo de: - Vaina en contacto con la superficie: no se permite el giro completo de la vaina; la clula se desplaza con un movimiento serpenteante, casi paralelo al eje de la bacteria. - Vaina sin contacto con la superficie (medio acutico,): la vaina tambin gira. Es un mecanismo muy bien adaptado a lquidos viscosos, donde se dificulta el movimiento de flagelos tpicos. Varias especies parsitas estn restringidas a tejidos o lquidos animales. Muchos presentan movimientos flexuosos bruscos, como una especie de ltigo.

FAMILIA SPIROCHAETACEAE
GNEROS: SPIROCHAETA:
Anaerobias / Anaerobias facultativas. Acuticas (agua dulce o marinas). Inocuas, vida libre. Bastante grandes: 5-250 m de longitud. 2-40 fibrillas axiales.

ORDEN SPIROCHAETALES

CRITISPIRA:

- Anaerobias facultativas?: slo se ha encontrado como comensal en el tracto digestivo de algunos moluscos, especficamente en el estilo cristalino, pero se desconoce su motivo fisiolgico. - Acuticas, inocuas, comensal (estilo cristalino). - No se ha podido cultivar. - 30-180 m de longitud. - 100 fibrillas axiales.

TREPONEMA:

- Anaerobias (mayora) / Microaerfilas (Treponema pallidum) - Comensales: - Treponema oralis - T. denticola - T. saccharophilum - Patgenas: - T. pallidum: provoca sfilis, es plana y delgada, con una vaina muy delgada. - 5-20 m de longitud - 2-16 fibrillas axiales 90

 BORRELIA:

- Anaerobias (mayora) / Microaerfilas. - Muchas patgenas: - Borrelia recurrentis: provoca fiebres recurrentes, una enfermedad sistmica debilitante que se transmite por un insecto vector, normalmente un piojo, y que si no se trata con tetraciclinas u otros antibiticos, provoca la muerte en un 40% de los casos. - B. burglorferi: provoca la enfermedad de Lyme, que se transmite por las garrapatas como insecto vector. - Otras: de importancia veterinaria.

FAMILIA LEPTOSPIRACEAE
GNEROS: LEPTOSPIRA:
- Anaerobios facultativos / Microaerfilos. - Slo 2 especies, pero muchos serotipos dentro de ellas. - Utiliza como fuente de carbono y poder reductor nicamente cidos grasos de cadena larga. - Inocua, vida libre: - Leptospira biflexa: alrededor de 60 serotipos. - Patgena: - Leptospira interrogans: alrededor de 220 serotipos. En el hombre y otros animales causa leptospirosis, que es, quiz, la zoonosis (enfermedad de animales que puede afectar al hombre) ms comn del mundo. Entra por las vas mucosas, heridas, abrasiones de la piel, puede llegar a alojarse en el hgado y riones, provocando ictericia, y por la orina contamina a otros animales. Hay antibiticos para l pero es difcil de eliminar. Existen vacunas. En el hombre es una enfermedad occidental. Serotipo canicola: no afecta generalmente al hombre. Serotipo icterohemorragiae: afecta al hombre.

BACTERIAS GRAM-, HELICOIDALES/VIBRIOIDES, MVILES, AERBICAS/MICROAERFILAS

- Hbitat: acutico (la mayora), terrestres, tracto intestinal/cavidad oral del hombre. - Inocuas o patgenas. - Caractersticas morfolgicas: - Bacilos helicoidales - Nmero de vueltas de hlice variable: < 1 vuelta vibriales > 1 vuelta helicoidales - Movimiento: flagelos polares generalmente en penachos (lofotricas en muchos casos) en ambos poros celulares. - Tienden a ser microaerfilos. 91

- Spririllum volutans: bacteria helicoidal, 1,6-60 m de largo, microaerfila, flagelos lofotricos normalmente en ambos extremos celulares. Volutans hace referencia a que poseen grnulos de polifosfato o de volutina.

GNEROS: SPIRILLUM:

AQUASPIRILLUM:

- Alrededor de 20 especies. - Aerfilas y microaerfilas. - Hbitat: aguas continentales. - Aquaspirillum magnetotacticum: tiene de 5-40 partculas de magnetita que forman una cadena dentro de la bacteria, y le sirven para alinearse segn las lneas geomagnticas N-S.

OCEANOSPIRILLUM:
- Aerobia marina. - Hay 10 especies.

AZOSPIRILLUM:

- Gnero terrestre. - azo significa azote, que en francs se traduce como nitrgeno. - Azospirillum lipofirum: fijadora de nitrgeno. Establece una relacin simbitica con las races de muchas plantas (gramneas, tropicales pero nunca leguminosas). Es una bacteria bastante estudiada porque se inocula en las plantas para favorecer el crecimiento.

CAMPYLOBACTER:

- Microaerfilo pero tendiendo a la anaerobiosis. - Flagelacin monotrica polar. - 2 especies conocidas: - Campylobacter fetus: provoca abortos en animales domsticos. - Campylobacter jejuni: produce enteritis transmitida por alimentos. - Se aislaron con ms frecuencia que otros gneros causantes de trastornos gastrointestinales.

HELICOBACTER:

- Microaerfilo. - 1-6 flagelos en un solo polo. - Helicobacter pilori: se asocia con lceras pilricas e incluso como causa de cncer de estmago. Se transmite por agua y alimentos contaminados y en ocasiones ha causado brotes epidemiolgicos. Coloniza la mucosa y provoca inflamacin.

BDELLOVIBRIO:

- Morfologa vibrioide. - Aerobia estricta. - Forma de coma, 1,4 m largo. 92

- Flagelo envainado (la vaina es una prolongacin de la pared celular). - Son microorganismos presentes en agua, suelos, - Atacan a otras bacterias (entricas, fotosintticas, Rhizobium, Azotobacter, Escherichia, pero generalmente Gram-). Una misma especie de Bdellovibrio es capaz de utilizar a una gran variedad de Gram- como presas. - Bdellovibrio bacteriovorus: vida libre, luego resulta atrada por quimiotaxis por otra clula. Choca con ella y desplaza a la presa. Modifica la membrana externa de la presa por la accin de enzimas hidrolticas, pierde el flagelo, atraviesa la pared celular, se acomoda en el periplasma y constituye una estructura como de esfera llamada Bdelloplasto (esta parte del ciclo dura 15-20 min). Inhibe la sntesis de RNA, DNA, protenas Rompe la membrana citoplasmtica. Comienza la sntesis de su DNA, se alarga en el bdelloplasto y posteriormente se fragmentar (dura 40-60 minutos). El nmero de bdellovibrios vara dependiendo del tipo de presa. Esta fisin mltiple es bastante infrecuente en procariotas. Una vez fragmentadas, desarrollan el flagelo, provocan lisis bacteriana y se liberan. El ciclo entero puede durar 2-4 horas. No son parsitas sino depredadores de bacterias (digieren el contenido celular). Junto con protozoos y bacterifagos constituyen un modo de control del crecimiento bacteriano en medios naturales. Los bdellovibrios son fciles de detectar y aislar: sobre un csped de presa, se inocula, se incuba y una vez desarrollado se inocula una suspensin de agua o suelo. Aparecen calvas o halos (distintas a los de los fagos) si hay bdellovibrios. Fagos: necesitan bacterias vivas en desarrollo. Bdellovibrios: necesitan bacterias vivas con o sin crecimiento. A travs de las calvas aislamos bdellovibrios. Tambin sufren ataques de fagos (bdellofagos) generalmente lticos y con DNA de una cadena. Hay ms bacterias depredadoras, pero quiz el modo de ataque y desarrollo en el periplasma es nico en bdellovibrios. Otras depredadoras como Vampirovibrio ataca a algas (Chlorela), y desde fuera chupa el contenido del alga, y no presenta flagelo envainado. - Bdellovibrio starrii. Comparten estilo de vida: movimiento rpido, gran velocidad (70-100 veces su longitud por segundo = 0,5 metros por hora). Es capaz de reproducirse en el interior de bacterias (en el periplasma) y las devora. Si no hay bacterias presa, hace otro ciclo vital totalmente diferente.

BACTERIAS MVILES

GRAM-,

CURVADAS,

INMVILES

RARAMENTE

- Mayoritariamente son acuticas y no patgenas. - Morfologa rara (circular, forma de S, C, O).

FAMILIA SPIROCHAETASOMACEAE
GNEROS:
93

 SPIROSOMA:

- Forma curvada o de anillo con curvatura completa. - Quimioheterotrofas, aerbica, acutica, ampliamente distribuida, inmvil (aunque presentan vacuolas de gas para favorecer la flotacin).

MICROCYCLUS

TEMA 16: BACILOS Y COCOS GRAM NEGATIVOS AERBICOS.

Si son mviles es debido a la presencia de flagelos. Hbitat: variado (suelo, agua, patgenos). Microorganismos de inters clnico, ambiental e industrial. Bacterias en general quimioheterotrofas, excepto la familia Halobacteriaceae, que puede ser fotohetertrofa en condiciones anaerobias. Generalmente son aerobios estrictos, excepto ciertas especies, como Pseudomonas (denitrificantes) o Halobacteriaceae (que presentan metabolismo fotohetertrofo en condiciones de anaerobiosis). Obtencin de ATP por fosforilacin oxidativa en la CTE. No fermentan. Lo normal es que respiren, excepto el gnero Gluconobacter que slo obtiene ATP por fosforilacin a nivel de sustrato. Rutas metablicas especiales para oxidar compuestos atpicos. Todas ellas convergen en el ciclo de Krebs. Habitualmente usan la ruta de Entner-Doudoroff (Pseudomonas, Rhizobium, Agrobacterium). Gluconobacter usa la ruta de las pentosas-fosfato y no tiene ni ciclo de Krebs ni CTE.

FAMILIA PSEUDOMONADACEAE
GNEROS PSEUDOMONAS.
Bacilos con flagelacin polar. Producen pigmentos hidrosolubles que excretan al medio: P. aeruginosa y otras producen un pigmento verde-amarillento que produce fluorescencia bajo la radiacin ultravioleta. Hbitat variado: desde el suelo a otros ambientes naturales. En condiciones apropiadas, en hospedadores debilitados con las defensas bajas, puede infectar heridas, quemaduras, tracto urinario, produciendo incluso meningitis. Generalmente son parsitos oportunistas. Muchas especies son psicrfilas y proporcionan sabores, colores y olores a ciertos alimentos refrigerados en mal estado. Utilizan como fuente de carbono: pesticidas, tolueno, alcanfor y derivados del petrleo, gracias a que presentan enzimas que degradan esos componentes poco corrientes. Esto causa problemas en hospitales o lugares donde se producen 94

medicamentos, porque crecen en adhesivos, jabones o compuestos con carbonos cuaternarios usados en antispticos. Muchos de los microorganismos de este gnero son resistentes a la mayora de antibiticos de uso comn, aunque hay antibiticos a los que son sensibles. Esta resistencia est relacionada con el tamao pequeo de las porinas de su pared celular y a genes que confieren resistencia debido a plsmidos R. Suelen producir bacteriocinas, protenas de elevado peso molecular que afectan a especies cercanas a las que las producen, llamadas piscinas, que estn codificadas por plsmidos bacteriocinognicos. Generalmente aerobias, aunque pueden sustituir el oxgeno por nitratos como aceptor final de la CTE. Aunque algunos utilizan el nitrgeno como aceptor final de electrones (P. denitrificans), estos microorganismos son los responsables de la prdida de nitrgeno til.

P. mali: produce meloidosis. P. syringae: fitopatgeno que afecta a los rboles frutales; adelgazamiento de los frutos. P. fenorenses: deterioro en los alimentos refrigerados.

ZOOGLEA
Morfologa bacilar y flagelacin polar. Es importante para el tratamiento aerobio de aguas residuales porque oxida grandes cantidades de materia orgnica del efluente (lquido del tratamiento secundario) hasta CO2 y agua.

XANTHOMONAS
Importancia comercial: incluye especies que se cultivan porque su cpsula contiene goma xantano, que se usa como espesante para alimentos y pinturas.

X. campestris.

FAMILIA AZOTOBACTERACEAE
GNEROS AZOTOBACTER
Bacterias bacilares, grandes, casi ovales y con un tamao parecido a las levaduras. No estn aislados, sino que van en parejas o cadenas. Es bastante frecuente el pleomorfismo y la flagelacin peritrica. Pueden ser mviles por este tipo de flagelacin o inmviles. Fijadores de nitrgeno libre en el suelo ( Azospirillum). No excluye que puedan crecer en sustratos con nitrgeno, urea, amonaco aunque este ltimo reprime la fijacin. Presenta la tasa respiratoria ms alta de todos los microorganismos, debido a la proteccin de la nitrogenasa con respecto al oxgeno. Se mantiene la concentracin 95

de oxgeno muy baja (respiran rpido) para que no entre en contacto la nitrogenasa con el oxgeno y as evitar su inactivacin. Forma cistes: formas de resistencia con respiracin casi inapreciable, resistentes a la radiacin ultravioleta, radiaciones ionizantes, desecacin, desintegracin mecnica y calor (aunque no resisten tanto a este ltimo como las endosporas). No estn totalmente latentes, porque ante la presencia de fuentes de energa exgenas, stas son rpidamente oxidadas.

AZOMONAS
No forma cistes. Generalmente acutico y siempre mvil por flagelacin peritrica.

FAMILIA RHIZOBIACEAE
- FIJACIN DE NITRGENO Presentan un sistema Nitrogenasa, que presenta 2 componentes: una protena FeS y una MoFe. Este sistema es sensible al oxgeno y tiene que protegerse, por lo que no se libera al citosol. Estos organismos crecen en simbiosis en el interior de las clulas del ndulo de la raz de las legumbres como bacteroides fijadores de nitrgeno , y son totalmente dependientes de la planta para fijar el nitrgeno, ya que la planta regula la concentracin de oxgeno y a la vez suministra nutrientes como fumarato, succinato, malato, que son donadores de electrones indispensables para obtener el ATP, necesario para fijar el nitrgeno. La bacteria, a su vez, le suministra a la planta el nitrgeno asimilado. La bacteria convierte el nitrgeno atmosfrico en amonaco, que es el primer producto estable y que puede ser utilizado por la planta en forma de glutamina, por la accin de la glutamina-sintasa. Adems de glutamina, se sintetizan otros aminocidos, amidas y ureidos (alantoina y cido alantoico ). Los genes Nor en bacterias no se encuentran en el cromosoma sino en los plsmidos Sym. A veces tambin se encuentran situados en los genes Nif, responsables del proceso de fijacin de nitrgeno. Estos plsmidos Sym contienen los genes responsables de la especificidad de una cepa bacteriana respecto a una especie vegetal. La especificidad no se refiere exactamente a una cepa con una planta, pero podemos hablar de una elevada especificidad debido principalmente a los factores Nor. Los Nor tienen una estructura formada por unidades de NAG repetidas n veces con radicales diferentes (R1 y R2) que son los que confieren la especificidad. Se pueden establecer grupos de inoculacin cruzada: son grupos de cepas que pueden infectar a determinadas especies de leguminosas. Esta capacidad se puede transferir entre cepas.

GNEROS AGROBACTERIUM
Bacilos con flagelacin peritrica y que son citopatgenos de dicotiledneas. 96

 Hay 4 especies:

Agrobacterium rhizogenes: da lugar a races pilosas, que son masas tumorales o malignas en las races, debido a la presencia en la bacteria del plsmido Ri. Agrobacterium radiobacter: avirulenta. Agrobacterium rubi Agrobacterium tumefaciens: va a dar lugar a tumores en forma de agallas llamados agallas de corona, producidos en bacterias que presentan el plsmido Ti. El microorganismo transfiere el plsmido Ti (Tumor Induction), el cual contiene informacin gentica de la bacteria, al material gentico de la planta, especficamente a un cromosoma determinado. Una vez inducida la condicin tumoral, la presencia de esta bacteria es innecesaria.

El proceso se desarrolla en una serie de etapas: 1) Etapa de infeccin: reconocimiento y adherencia. Las clulas de A. tumefaciens se adhieren a las heridas de las plantas, ya que estas heridas producen la liberacin de compuestos fenlicos que las bacterias reconocen y que a la vez permiten la adherencia de sta a la planta. El receptor de la planta es del tipo pectinas, y en la bacteria es un tipo de polisacrido que contiene -glucanos y que forma parte del LPS de la pared celular. Tras ese reconocimiento, la bacteria sintetiza microfibrillas de celulosa para ayudarse a anclarse a la planta, formando unos grandes agregados bacterianos en la pared celular que facilitan la colonizacin. 2) Etapa de procesado del fragmento de T-DNA del plsmido Ti . El plsmido Ti es bastante grande (200Kb), mientras que la regin T-DNA comprende unas 10Kb. El fragmento de T-DNA es el que se transfiere al cromosoma vegetal. Dentro de esta regin encontramos: - ONC (oncogenes): codifican enzimas que intervienen en la produccin de citohormonas, que estimulan la divisin celular y forman el tumor. - OPS (opinas): son genes que llevan la informacin gentica para sintetizar opinas, que actan de fuente nutritiva para las bacterias invasoras. El plsmido Ti contiene: - Regin VIR (virulencia): son genes que se inducen por molculas seal de la planta. - Genes de transferencia (que codifican el puente conjugativo). - Genes responsables de la degradacin de opinas , para su posterior uso por la bacteria. - Genes del sistema de doble componente. 3) Sistema regulador de doble componente. Ciertos genes del plsmido Ti controlan la formacin del tumor mediante un sistema regulador de doble componente , que estimula la formacin de un puente conjugativo y la escisin del T-DNA. El T-DNA se moviliza gracias a los genes de transferencia, que permiten la integracin del T-DNA en el ncleo de la planta. 97

- VirA: quinasa que acta a manera de sensor. Las sustancias fenlicas estimulan su produccin. Fosforila otro producto del gen VirG usando ATP. - VirD: endonucleasa que corta en una zona justo al lado de lo que se va a transferir (T-DNA). - VirE: protena de unin que se une a un lado de la cadena. Una vez cortado el T-DNA se une al fragmento y lo transporta a la clula vegetal. - VirB: forma el puente entre la bacteria y la clula vegetal para que se integre el T-DNA. 4) Integracin de T-DNA en el genoma. 5) Gnesis de tumores y produccin de opinas. El T-DNA codifica hormonas para la planta que inducen la divisin de las clulas de la misma, produciendo un tumor. Tanto la bacteria como todos los procesos que lleva a cabo, han sido muy estudiados por su capacidad como vector en biotecnologa de plantas . As se han creado plantas transgnicas resistentes a determinados herbicidas.

Son microorganismos metfilos (obtienen carbono y poder reductor de compuestos con un solo carbono). Sin embargo pueden utilizar compuestos de 2 o ms carbonos siempre que los carbonos no estn directamente unidos. Metanotrofos: la familia Methylococcaceae forma parte de este grupo. C1 + CH4 (utilizan compuestos de 1 carbono, y entre ellos el CH 4). Son de 2 clases: Estrictos. Facultativos: adems de C1 y CH4 utilizan otros compuestos, como la glucosa. Metilotrofos: utilizan compuestos C1 pero no CH4. Estrictos: Methylophilus (nico hasta ahora descrito). Facultativos: grupo que abarca a muchos microorganismos, como Alcaligenes, Pseudomonas, Bacillus, bacterias nitrificantes, El compuesto ms abundante en la naturaleza de todos stos es el CH4. Puede proceder de depsitos de carbono, petrleo o producido en grandes cantidades por arqueas metanognicas que viven en condiciones anxicas. El metanol tambin es abundante y puede proceder de rotura de pectinas, protenas muy abundantes en las paredes vegetales. Las metilaminas aparecen en tejidos animales y vegetales. La familia Methylococcaceae utiliza metanol y formaldehido.

FAMILIA METHYLOCOCCACEAE

Bacterias metanotrofas:

Aerbicas: viven en condiciones xicas adyacentes a ambientes anxicos donde se genera carbono. Algunas cepas son microaerfilas y pueden fijar N. Cat+ / Ox+ Ciclo de Krebs: algunas lo tienen completo y otras incompleto. 98

 Poseen una alta concentracin de esteroles, que son raros en procariotas, y les suponen un compuesto esencial en el complejo de membrana. Catabolismo: oxidacin del metano al CO2. SMMO (Metano-monooxigenasa soluble): es ms rara. Requiere oxgeno y emplea NADH. No es comn a todos los metanotrofos. PMMO (metano-monooxigenasa particulada): es ms comn y no utiliza NADH. MDH (metanol-Dhasa) FDH (frmico-Dhasa) FADH (formaldehido-Dhasa) No existe produccin neta de NADH. Se genera por transporte inverso de electrones , por lo que hay un descenso de rendimiento en el crecimiento del microorganismo. Es bastante habitual entre los Quimiolitotrofos. Oxidan el metano, etanol o formaldehido en la ruta. En compuestos de ms de un carbono, siempre los productos finales son el formaldehido (que oxida al CO 2) o el CH4. Los metanotrofos se subdividen en 2 grupos, segn la asimilacin del carbono: 1. Grupo 1: ruta de la ribulosa monofosfato. Comienza con la ribulosa-5P. Se fija formaldehido dando una molcula de 6 carbonos, la hexulosa-6P, mediante la enzima hexulosa-6P-sintasa. La hexulosa-6P, por una isomerasa, se convierte en Frc-6P, que da 2 molculas de GA3P, una de las cuales se escapa del ciclo y se utiliza como punto de partida de la biosntesis de compuestos orgnicos. Estas enzimas son exclusivas de este grupo de organismos. 2. Grupo 2: ruta de la serina. Es una ruta compleja. Se asimila formaldehido y CO2 en proporciones 2:1. Los metilotrofos facultativos tambin pueden llevar a cabo la asimilacin de formaldehido a travs de esta ruta. Uno de los intermediarios es la serina. Partimos de glioxilato, y a l se incorpora el grupo amino en forma de amoniaco, convirtindose en glicina. sta se convertir en serina, la cual es el punto donde se asimila el formaldehido. La serina se convierte en hidroxipiruvato liberando el grupo amino. Luego se reduce a glicerato, y por incorporacin de ATP se convierte en 2-PGA, parte del cul puede salir del ciclo y parte se convierte en PEP. El PEP se convierte en oxalacetato mediante la incorporacin de CO2. El oxalacetato pasa a malato, a malil-6CoA, que se escinde en acetil-CoA y glioxilato. Parte del acetil-CoA puede tambin ser utilizado para la biosntesis. Los metanotrofos, cuando crecen en presencia de metano, presentan una serie de membranas complejas: Grupo 1: a manera de vesculas o discos de forma compacta. Grupo 2: en forma de laminillas perifricas.

99

La fijacin del nitrgeno la realizan todos los metanotrofos del grupo 2, y slo unos pocos del grupo 1. Ejemplos: Grupo 1: Methylococcus, Methylobacter, Methylomonas. Grupo 2: Methylocystis, Methylosinus, Methylobacterium. Metanotrofos estrictos: Methylococcus, Methylomonas, Methylosinus.

Methylocystis,

Bacterias del cido actico: gran inters industrial. Efectan una oxidacin incompleta de azcares y de alcoholes dando los correspondientes cidos orgnicos. Cuando emplean etanol, van a producir actico. Tolerancia elevada a las condiciones de acidez. Crecen a PH inferior a 5. Gneros: Acetobacter Gluconobacter Ambos son bacilos y pueden ser mviles o inmviles; en el caso de ser mviles, Acetobacter tiene flagelacin peritrica o ausente y Gluconobacter polar o ausente. Capacidad oxidativa: ninguno sigue la ruta de Etner-Doudoroff, pero s llevan a cabo la ruta de las pentosas-fosfato, aunque modificada. Gluconobacter llega a un punto en el que no puede seguir oxidando cuando llega a acetato. Sin embargo, Acetobacter s que puede, y lo oxida hasta CO2 y H2O. Carecen de PirDhasa, por lo que no pueden llevar a cabo el paso de Pir a Acetil-CoA. PP CTE TCA Pir Acetaldehdo (+CO2) Acetil-CoA Acetato (Gluconobacter)

FAMILIA ACETOBACTERACEAE

Ruta no fosforilativa: Gluconato (a partir de Glc) Cetocidos derivados del gluconato (a partir de Glc) Gluconobacter: suboxidante Acetobacter: superoxidante

Estas bacterias son fciles de aislar de zumos de frutas, sidra, vino y se emplean en la fabricacin del vinagre. Usan normalmente el etanol, y en presencia de oxgeno, lo convierten en vinagre. Ese etanol puede proceder de una fermentacin de azcares previa realizada, por ejemplo, de levaduras. Ese etanol pasa a acetaldehdo y de aqu a acetato. Los electrones van a parar a una CTE. Este tipo de organismos son tambin problemticos para la industria alimentaria, causando que ciertos alcoholes se acetifiquen (se agrian). Son bacterias aerbicas, por lo que esto slo lo llevan a cabo en presencia de oxgeno. 100

 Estos microorganismos tambin pueden efectuar una oxidacin incompleta como es el caso de azcares. Esta propiedad de suboxidacin es aprovechada para la fabricacin del cido ascrbico (vit C). se forma a partir de sorbosa, que es difcil de sintetizar qumicamente, pero que se obtiene fcilmente por mtodos microbiolgicos. La sorbosa se obtiene a partir de bacterias del cido actico que oxidan el sorbitol a sorbosa. Es un proceso de bioconversin. Otra propiedad importante de las bacterias del cido actico es su capacidad de sintetizar celulosa, pero se trata de una celulosa pura, no mezclada con pectinas, hemicelulosa o lignina. En vez de depositarla en la pared celular, en el caso de estas bacterias, la celulosa se forma como una matriz externa de la pared celular. Se trata de una maraa de microfibrillas de celulosa. Esta celulosa se emplea como espesante. Cuando crecen en un matraz o Erlen-Meyer sin agitacin, se ve que originan una pelcula de celulosa donde van a estar estas bacterias. Crecen donde hay oxgeno, es decir, en la superficie del lquido.

FAMILIA LEGIONELLACEAE
GNEROS LEGIONELLA
Gran importancia clnica. Puede vivir dentro de los fagocitos, que son clulas de defensa de los organismos. Legionella inhibe la fusin del fagosoma con el lisosoma para formar el fagolisosoma. Forma bacilar, a veces filamentosa. Mviles por flagelacin polar o subpolar, dependiendo de la especie. Hay 6 especies, y todas estn directa o indirectamente implicadas como causa de neumona en el hombre.

Legionella pneumophila: Fue aislado siendo la causa de una neumona que ms tarde se denomin legionelosis. El nombre se debe a que en 1976 murieron por causa de legionelosis miembros de la legin americana. Tardaron en averiguar la causa de aquel brote de neumona porque intentaban cultivar el agente en medios convencionales. Finalmente lo identificaron al darse cuenta de que no crece en medios de cultivo habituales y que tiene mala tincin. Se aislaron a partir de cobayas infectadas con tejido procedente de pacientes infectados. Ya existen medios especiales de crecimiento para este microorganismo. Es una enfermedad que se trata con antibiticos. Hbitat: aguas naturales, pero normalmente en el interior de amebas, a las que emplea a modo de fagocitos naturales. Coloniza ambientes como tuberas de suministro de sistemas de refrigeracin. Legionella secuestra el fagosoma y lo dirige al RE, donde la bacteria prolifera, ya que es un orgnulo rico en nutrientes.

101

FAMILIA NEISSERIACEAE
GNEROS NEISSERIA
Son diplococos inmviles que, en algunos casos, presentan cpsula polisacardica, lo que les confiere virulencia. A menudo presentan fimbrias, que les ayudan a colonizar las membranas mucosas. Aerobias estrictas y slo crecen a temperatura corporal. Existen algo ms de 11 especies, no todas patgenas. Son habitantes normales de la nasofaringe. Las patgenas ms importantes son: N. gonorrhoeae: causante de la gonorrea. N. meningitidis: responsable de algunos casos de meningitis bacteriana.

MORAXELLA
Bacteria ovoidal, entre coco y bacilo. Puede formar cadenas cortas o parejas. Inmvil, algunas presentan cpsulas polisacardicas y tambin pueden presentar fimbrias, pero en este caso no hace a ninguna especie especialmente virulenta. Se les considera patgenos oportunistas porque aparecen en organismos inmunodeprimidos.

M. lacunata: produce conjuntivitis.

BRUCELLA
Cocobacilos inmviles de gran inters clnico. Pueden sobrevivir a la fagocitosis y permanecer latentes meses e incluso aos dentro de los fagocitos. Incluye 6 especies, parsitas obligadas de mamferos. Todas causan la llamada brucelosis, fiebre de Malta o fiebres ondulantes. 4 de estas especies pueden causar enfermedades en el hombre:

B. abortus: Provoca abortos en el ganado vacuno. Puede ser transmitida a travs de la leche o derivados. Causa un tipo de enfermedad benigna en el hombre. Es la ms comn en EEUU. B. melitensis: Aparece en el reservorio de camellos, cabras Es la ms frecuente en el resto del mundo. Puede causar incapacidad y la muerte. B. suis: Afecta al ganado porcino. Se puede transmitir por contacto y tambin puede ser mortal. B. canis: Transmitida por el contacto con perros. Causa una enfermedad de tipo benigno en el hombre.

BORDETELLA
Tambin llamado bacilo de Bordet y Gengon. Bacilo pequeo e inmvil. 102

 Las estirpes virulentas tienen cpsulas y las avirulentas no. La especie ms conocida es:

B. pertussis: Especie encapsulada que causa la tos ferina en el hombre. Provoca abscesos virulentos de tos que conllevan a una falta de oxgeno, produciendo inspiraciones jadeantes. No resiste la fagocitosis, aunque otras especies s pueden.

FRANCISELLA
Bacilos pequeos e inmviles, sin forma definida. Es Gram pero se tie mal con la safranina, lo que produce una tincin Gram dbil. Las estirpes virulentas presentan cpsula. Es nutricionalmente exigente: requiere medios complejos. Puede sobrevivir a la fagocitosis.

F. tularensis: Produce tularemia, zoonosis propia de roedores y lagomorfos. La sintomatologa depende de la va de adquisicin (abrasiones en la piel, picaduras, ingestin, inhalacin,). Provoca la inflamacin de los ganglios linfticos, pus, neumona, laringitis, Resiste a bajas temperaturas, inferiores a 0C. se encuentra en el suelo, agua, plantas Junto con Bacillus anthracis y Yersinia pestis constituyen el Grupo A (alto potencial de uso como arma biolgica contra grandes cantidades de poblacin).

TEMA 17: BACILOS GRAM NEGATIVOS ANAERBICOS FACULTATIVOS

Se agrupan en 3 familias: 1. Enterobacteriaceae 2. Vibrionaceae 3. Pasteurellaceae Grupo importante desde el punto de vista clnico. Todas las familias son -proteobacterias, Cat+. En condiciones anxicas fermentan slo carbohidratos (monosacridos, disacridos y polialcoholes). Hay una excepcin: Erwinia puede fermentar polisacridos y otros compuestos ms complejos, para lo que necesita sintetizar enzimas especiales, causa de que puedan daar estructuras vegetales. Requerimientos nutricionales mnimos: hay excepciones: Proteus, Shigella y Erwinia necesitan cido frmico. Salmonella requiere triptfano (S. typhi). Photobacterium requiere metionina. Acumulan glucgeno, excepto Photobacterium que acumula poli--hidroxibutirato. El uso de determinados disacridos tiene caractersticas sistemticas: Escherichia y Enterobacter: son lactosa +. Salmonella, Shigella y Proteus: son lactosa -. 103

 Shigella presenta especies o cepas que contienen enzimas ( -galactosidasas) para la utilizacin de la lactosa, pero no las utilizan. Glucolisis: realizan la ruta de Embden-Meyerhoff. Presentan una peculiaridad bioqumica que no se da en otras fermentaciones bacterianas, y es que el Pir se escinde de tal manera que da acetil-CoA y cido frmico. El frmico es un producto final mayoritario, pero no siempre se acumula porque algunas bacterias poseen un sistema enzimtico hidrogenoliasa-frmico que transforma el frmico en CO2 y H2, que se produce en cantidades equimoleculares, pero el H2 es insoluble en agua y el CO2 es soluble en forma de carbonatos o bicarbonatos. La campana de Durham es un tubo de vidrio donde se introduce gas, y al cabo del tiempo vemos acumulacin de gas en su interior. El hecho de que se produzca H 2 no es exclusivo, ya que tambin se produce en bacterias endosporuladas como Clostridium o Bacillus, pero no se produce de igual manera: los endosporulados no producen frmico directamente, sino que producen acetil-CoA, CO 2 y H2. Realizan distintos tipos de fermentacin: 1) Fermentacin cido-mixta Da como productos el etanol y 4 cidos: lctico, frmico, actico y succnico . Se producen ms productos cidos que neutros (4:1). Se produce CO2 y H2 en cantidades equimoleculares (1:1) a partir del cido frmico. La produccin de gas no es algo exclusivo. La realizan: Escherichia, Proteus, Salmonella (mayora de especies), Shigella, Yersinia, Vibrio (mayora de especies) Se detecta por la prueba de Rojo de Metilo. 2) Fermentacin butanodilica Da como producto final el 2,3-butanodiol principalmente. No produce tantos cidos como la fermentacin cido-mixta. Siempre se produce CO 2 pero no siempre H2, por lo que la concentracin de CO2 siempre ser mayor. La realizan: Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Erwinia, Aeromonas, Photobacterium,

La acetona es un intermediario de la fermentacin butanodilica que se detecta por la prueba de Voges-Proskauer.

FAMILIA ENTEROBACTERIACEAE
Familia de enterobacterias. Pueden ser mviles (siempre por flagelacin peritrica) o inmviles. Presentan fimbrias, que pueden ser del tipo I (les permite unirse a superficies mucosas) o del tipo II (pilis sexuales, capaces de transmitir informacin gentica; muchas veces supone la transferencia de resistencia a antibiticos). Producen bacteriocinas, que permiten mantener el equilibrio ecolgico entre las bacterias del intestino. Afectan a otras especies o gneros prximos. Pruebas bioqumicas de aislamiento e identificacin: Medio McConkey 104

 Pruebas IMVic Pruebas API Son importantes para determinar contaminacin alimenticia (Salmonella) o para detectar una posible contaminacin de origen fecal del agua (por colorimetra). Prueba de la oxidasa: carcter sistemtico. Diferencia familias: Enterobacteriaceae: oxidasa + (presentan citocromo c) Vibrionaceae: oxidasa (no presentan citocromo c) Pruebas serolgicas: para la identificacin de antgenos de la superficie. Hbitat: en el tracto intestinal, sin causar daos. Patgenas: Salmonella typhi: causa fiebres tifoideas. Shigella dysenteriae: causa disentera o shigellosis. Yersinia pestis: causa la peste bubnica. Erwinia: es citopatgena. Patgenas oportunistas: causan enfermedades en individuos inmunodeprimidos. Proteus (algunas especies). Enterobacter Serratia

GNEROS ESCHERICHIA
Forma de cocobacilo. Mvil (flagelacin peritrica) o inmvil. Fermentacin cido-mixta: produce gas. Indol +. La especie ms conocida es E. Coli: produce colicinas. Es muy comn como comensal en el tracto intestinal de organismos homeotermos, donde produce vitamina K. No es patgeno aunque puede causar infecciones en el tracto urinario, y ciertas cepas pueden producir diarreas. Cepas: Enteropatgenas Enterohemorrgicas Enteroinvasivas Enterotoxgena Enteroagregante

E. Coli es un indicador de contaminacin fecal . El problema es no es que est E. Coli, sino que con la contaminacin fecal hay ms organismos patgenos, e incluso virus.

PROTEUS
Bacilos muy mviles por flagelos peritricos. Fermentacin cido-mixta: producen gas. 105

 Peculiaridad: se puede extender muy rpidamente por la superficie del agar, fenmeno conocido como dispersin. Esta dispersin se produce en olas dispersivas separadas por periodos de crecimiento, lo que crea sobre la placa patrones de crecimiento zonal o migracin concntrica. Hbitat: suelo, restos animales en descomposicin, intestino de hombre y otros animales, estircol, aguas contaminadas. Patgeno oportunista: infecciones del tracto urinario y diarreas. Invasor secundario de heridas, causando sobreinfeccin.

P. vulgaris P. mirabilis

SALMONELLA
Bacilos normalmente mviles (flagelacin peritrica). A menudo presentan cpsula. Realizan fermentacin cido-mixta; producen normalmente gas. Son citrato +. Tambin producen sulfhdrico. Hbitat: tracto intestinal de hombre, ganado vacuno, animales de granja, En condiciones insalubres contamina alimentos. Son patgenos potenciales.

agua contaminados por heces de seres humanos o animales infectados. Existe una vacuna para individuos de alto riesgo. La salmonelosis es una enfermedad gastrointestinal menos grave que la fiebre tifoidea. Los miembros del gnero Salmonella no deberan considerarse de especies distintas: hay ms de 2000 serotipos distintos, que a su vez se subdividen en biotipos. Por lo tanto, es ms preciso hablar de serotipos que de especies. La especificidad antgeno-anticuerpo es alta y en ellas participan los antgenos O (de la parte polisacardica de la membrana externa), K (protenas capsulares) y H (flagelares). Dependiendo de estos antgenos se establecen los distintos serotipos. Estos antgenos estn disponibles comercialmente para determinar el serotipo de un individuo infectado.

S. typhi: provoca las fiebres tifoideas, y se adquiere por la ingestin de alimento o

SHIGELLA
Bacilos inmviles. Realizan fermentacin cido-mixta; no producen gas. 4 especies.

S. dysenteriae: produce disentera bacilar. YERSINIA

Cocobacilo de pequeo tamao. 106

 La mayora de especies no son mviles a temperatura corporal. Si la temperatura es menor de 30C, forman flagelos peritricos. Realizan fermentacin cido-mixta: no producen gas.

Y. pestis: siempre es inmvil. Es la causante de la peste bubnica (bubn = ganglios

linfticos inflamados). Se transmite a travs de las pulgas de roedores.

ENTEROBACTER
Bacilos cortos. Mviles (flagelacin peritrica). Realizan fermentacin butanodilica; producen gas. La mayora de las especies licuan la gelatina. Hbitats diversos: suelo, agua, superficies animales, interior animales

E. aerogenes: especie prototipo de este gnero. E. cloacae KLEBSIELLA

Ambas producen infecciones del tracto urinario y respiratorio. Son patgenos oportunistas.

Bacilos inmviles. Presentan cpsula. Pueden estar aislados o formando parejas, cadenas cortas, Llevan a cabo fermentacin butanodilica con produccin de gas. Forman grandes colonias de consistencia mucosa en medios slidos. Tienen la propiedad nica dentro del grupo de enterobacterias de fijar nitrgeno en condiciones anxicas. K. pneumoniae: es el principal causante de la septicemia patgena en pediatra, enfermedad asociada a la presencia en la sangre de un microorganismo patgeno o toxinas. Puede causar neumona. Afecta a individuos con alcoholismo crnico o enfermedades del tracto respiratorio.

SERRATIA
Bacilos mviles con flagelacin peritrica. Forman colonias coloreadas (rojizas, rosadas,) Realizan fermentacin butanodilica; no producen gas. No son patgenas aunque pueden aparecer en el intestino de insectos, vertebrados, No muy ocasionalmente pueden encontrarse en el intestino humano. Otras especies son patgenos oportunistas:

S. marcescens: provoca infecciones urinarias o respiratorias . Se ha encontrado en catteres, soluciones presumiblemente estriles. Producen prodigiosinas (pigmentos con estructura derivada del anillo pirrlico tripirrol lineal a los que se les debe sucesos calificados como milagros en la edad media). No hay pruebas de que este 107

pigmento est implicado en la transformacin de energa, y su funcin es desconocida.

ERWINIA
Flagelacin peritrica. Fermentacin butanodilica; no producen gas. Relacionados con plantas; la mayora son responsables de la putrefaccin de las plantas. Muchos de ellos son fitopatgenos. Otros son saprfitos (constituyentes de la biota epfica):

E. anylovora: causa necrosis en el peral y otras plantas relacionadas. E. carotovora: destruye los residuos de reserva de las plantas mediante enzimas peptidolticos. E. herbicola: produce pigmentos amarillentos que aparecen en las hojas de plantas aparentemente sanas.

FAMILIA VIBRIONACEAE
Todos son mviles por flagelacin monotrica o anfitrica. La fermentacin que llevan a cabo es variable, dependiendo de la especie e incluso de la cepa. Todos son oxidasa +. Viven en ambientes acuticos (continentales o marinos). Gneros: Vibrio Aeromonas Photobacterium

GNEROS VIBRIO
Bacilos ligeramente curvados. Fermentacin cido-mixta. Flagelos polares envainados. Algunas especies son bioluminiscentes (V. harveyi, V. fischeri) Algunos son patgenos: V. cholerae: causante del clera. Produce una neuroaminidasa que rompe el epitelio cementante del tracto intestinal y una exotoxina (colergeno), que es una exo- y enterotoxina. Es uno de los pocos Gram productores de exotoxinas. Un individuo con clera va perdiendo lquidos y electrolitos por una alteracin de la permeabilidad de la pared intestinal, lo que provoca espasmos, diarrea, vmitos, 108

fiebre, e incluso la muerte, por el aumento de la concentracin de protenas que hay en el organismo, debido a la deshidratacin.

V. parahaemolyticus: provoca gastroenteritis leves. Vive en aguas marinas costeras,

Afecta al hombre por ingestin de marisco crudo o poco cocido.

AEROMONAS
Cocobacilos con flagelacin polar. Realizan fermentacin cido-mixta o butanodilica , dependiendo de la cepa. Viven en medios de agua dulce. Existen 4 especies, 2 de las cuales son: A. hydrophila: puede ser patgeno de ranas o del hombre. A. salmonicida: produce enfermedades en salmones y otros peces.

PHOTOBACTERIUM
Bacilo mvil: de 1 a 3 flagelos no envainados. Dependiendo de la cepa, realizan fermentacin butanodilica o cido-mixta. Hbitat marino. 3 especies, algn miembro de las cuales viven en simbiosis con peces y producen bioluminiscencia: P. fosforeum P. leiognathi P. angustum

FAMILIA PASTEURELLACEAE
Bacilos pequeos e inmviles. Fermentacin cido-mixta sin produccin de gas. Suelen ser oxidasa +. Son patgenos de vertebrados. 2 gneros: Pasteurella Haemophilus

GNEROS PASTEURELLA
Da nombre a la familia. Cepas pleomrficas, sin forma fija. Son patgenos de animales domsticos (clera aviar, neumona), animales de corral, ganado vacuno,

P. multocida: tiene numerosos biotipos. Uno de los biotipos causa el clera aviar. 109

 HAEMOPHILUS
Requerimiento de sangre en su medio de cultivo, ya que el grupo hemo de la sangre se presenta en partes importantes de la CTE. Morfologa diversa: bacilos filamentosos, forma bacilar, pleomorfismo. Parsitos obligados en las superficies mucosas. Varias especies:

H. influenzae: se crey en principio responsable de la gripe. Puede afectar a nios pequeos, provocando meningitis, artritis, endocarditis, pericarditis, neumona ,

TEMA 18: BACILOS GRAM NEGATIVOS ANAERBICOS RECTOS, CURVADOS Y HELICOIDALES.

Bsicamente es la familia Bacteroidaceae.

FAMILIA BACTEROIDACEAE
Bacilos rectos, curvados o helicoidales. Fermentadores.

GNEROS BACTEROIDES
Bacilos inmviles, ms o menos alargados. Fermentadores: utilizan la ruta del succinato o propionato para dar al final cido propinico. Hbitat: rumen de rumiantes y tracto intestinal del hombre, aunque tambin la cavidad oral, tracto respiratorio superior Fuera de los animales, aparece en sedimentos. Se han descrito enfermedades abdominales y plvicas causadas por Bacteroides: a partir de una herida punzante o una intervencin quirrgica puede causar peritonitis.

FUSOBACTERIUM
Bacilos muy alargados, estrechos y con extremos puntiagudos. Fermentador de aminocidos o azcares. Hbitat: tracto intestinal, rumen de rumiantes, boca (en las encas, causando abscesos dentales), tracto respiratorio. 110

 Tienen como caracterstica que presentan lantionina, que es un diaminocido, en el peptidoglucano.

BACTERIAS CON REDUCCIN DESASIMILATORIA DE SULFATOS O DE AZUFRE

Utilizan sulfatos o azufre como aceptores finales de electrones en la CTE para obtener energa. Realizan respiracin anaerbica. Hay una bacteria que lleva a cabo esta reduccin desasimilatoria de sulfatos pero que no pertenece a este grupo: Desulfotomaculum. Son Gram -, quimioheterotrofas, anaerobias estrictas. Utilizan compuestos orgnicos como donadores de electrones. Utilizan formas oxidadas del azufre como aceptores finales de electrones para formar sulfhdricos o sulfuros. SO4-2 S
0

S-2 (H2O)

Producen al ao del orden de un milln de toneladas de H2S, causante del color negro de fangos por la produccin de sulfuros metlicos. Son bacterias sulfatoreductoras de gran importancia ecolgica. Son miembros terminales de la cadena alimentaria anaerbica . Viven en el tracto intestinal de animales y del hombre, en el rumen de rumiantes, sedimentos anxicos con alto contenido en materia orgnica (fondos de pantanos, fondos de lagos, suelos de plataformas ocenicas,). La acumulacin de sulfuros provoca la formacin de una capa de bacterias verdes y rojas del azufre, que utilizan ese H2S, siempre a una cierta profundidad donde les llegue la luz. Realizan el ciclo anaerbico del S. Hbitat: zonas costeras (zonas inhabilitadas por el olor y el efecto txico de los sulfuros). La produccin de H2S en los suelos encharcados puede matar animales, plantas y otros organismos. Los sulfuros pueden combinarse con el hierro de los citocromos u otros componentes celulares que contengan hierro y provocar daos. Pueden provocar prdidas econmicas porque pueden acelerar la corrosin de tuberas con hierro, sistemas de calefaccin, Existen 2 tipos, en base al metabolismo (utilizacin o no de acetato): 1. Tipo I: Desulfovibrio: bacilo curvado, flagelacin polar. Desulfomonas: bacilo alargado e inmvil que vive en el intestino de mamferos. 2. Tipo II: 111

 Desulfococcus: formas mviles e inmviles. Desulfobacter: bacilo algo curvado, que puede ser inmvil o mvil por flagelacin polar. Desulfuromonas: bacilo con flagelacin polar que reduce azufre. Cuando estas bacterias disponen de sulfato y de hidrgeno, algunas pueden crecer de forma similar a los Quimiolitotrofos pero siempre guardando las distancias, porque viven en ausencia de oxgeno. En estas condiciones, algunas especies pueden vivir autotrficamente usando el CO2 como nica fuente de carbono mediante la va del acetil-CoA, que puede funcionar en un sentido o en sentido inverso. Hay tambin bacterias sulfatoreductoras que crecen como mixotrofas . La mayora son quimioorganoheterotrofas (utilizan como donadores de electrones y fuente de carbono los productos de la fermentacin de otras bacterias como lactato, malato). No son fermentadores. Estos donadores se transformarn en piruvato, que se oxida hasta acetato. En funcin de utilizar o no el acetato: Tipo I: no pueden oxidar el acetato y lo excretan como producto final. Ser utilizado por bacterias del mismo ambiente, que lo oxidarn a CO 2, el cual ser utilizado por otras bacterias para formar metano. Tipo II: son capaces de crecer sobre acetato y lo oxidan hasta CO 2. La mayora son marinas. Normalmente el CTA es el principal medio de oxidacin del acetato en los microorganismos, pero no en stos. En estas bacterias, este CTA no funciona como tal oxidando el acetato. Se conocen 2 vas para oxidarlo: a) Va del acetil-CoA o de Ljunddahl- Wood: es el utilizado por la mayora. Emplea como enzima clave la CO-Dhasa. Sobre ella reaccionan el H y el CO2. El grupo CH3 se incorpora a esta enzima y se forma acetil-CoA que pasa a acetato. b) Ciclo del cido ctrico modificado (CAC): se utilizan la mayor parte de enzimas del CTA pero tienen una enzima que permite la reaccin del acetato con el succinil-CoA para dar acetil-CoA y succinato. La citrato-liasa permite la sntesis de ATP por fosforilacin a nivel de sustrato acoplando el acetil-CoA al citrato. Este ATP adicional hace posible el crecimiento de estas bacterias en hbitats con el acetato como nica fuente de carbono.

- BACTERIAS SULFATOREDUCTORAS Forman sulfuros. La oxidacin de sulfato requiere 8 electrones y se realiza en distintas etapas. 1. Reduccin desasimilatoria del sulfato: El in sulfato (SO4-2) es estable y debe ser activado con ATP antes de ser reducido. El enzima que permite este paso es la ATP-sulfurilasa (APS). Se forma adenosinafosfosulfato, que se reduce a sulfito con liberacin de ADP. 2. Se aade otro sulfato al APS y se forma fosfoadenosinafosfosulfato (PAPS). Hay organismos que son capaces de reducir el sulfito pero no son capaces de llevar a cabo la primera parte porque carecen del sistema APS, es decir, reducen el sulfito a sulfhdrico pero no el sulfato a sulfito. 2e2e2e112

SO2-2 (Sulfito)

3 SO3-2

S3O6-2

S2O3-2

S-2

SO3-2

SO3-2

Los electrones llegan por una cadena de citocromos que realizan un transporte de citocromos, transportando los electrones desde la fuente de energa hasta el fsforo del APS y al sulfito. El transportador principal o uno de los principales es periplasmtico y muy electronegativo. Es el Citc3, que es especial de estas bacterias. el Citc 3 acepta electrones de una hidrogenasa periplasmtica y los transfiere a un complejo proteico periplasmtico pero asociado a la membrana llamado HmC. Los electrones son transportados a travs de la membrana hasta una FeS citoplasmtica que los conduce a la ATPasa y reductasas. Las bacterias del tipo I tienen, adems, un Citb especial. En estas bacterias el ciclo del hidrgeno es importante porque el hidrgeno tiene una funcin clave en el metabolismo. Procede del medio o generado por los donadores orgnicos de electrones como el lactato. Pueden pasar 2 cosas: 1) Si hay sulfato disponible, el hidrgeno es oxidado por una hidrogenasa relacionada con el Citc3, que transfiere electrones al interior y permite la reduccin de los sulfatos. Cuando el hidrgeno se oxida, los protones se quedan fuera de la membrana, lo que crea una fuerza protomotriz que permite la sntesis de ATP. El resultado es conocido como Ciclo del H, y es especialmente importante en bacterias que no pueden utilizar el acetato. 2) Si no hay sulfato disponible , el hidrgeno es transferido entre especies, de bacterias sulfatoreductoras a ser utilizado por bacterias metanognicas. Las bacterias dependern de una fosforilacin a nivel de sustrato.

COCOS GRAM NEGATIVOS ANAERBICO

Estn todos incluidos en una familia: Veillonellaceae.

FAMILIA VEILLONELLACEAE
Anaerobias estrictas. Forma de coco (aislados, en parejas, cadenas, racimos). Inmviles. No forman endosporas.

GNEROS VEILLONELLA
Fermentan lactato, malato cidos orgnicos en general. Uno de los productos mayoritarios es el propionato. 113

 Son los anaerobios ms abundantes en la boca y tracto intestinal de animales (hombre incluido).

V. parvula: predomina en la placa dental.

TEMA 19: CHLAMYDIAS

RICKETTSIAS

Parsitos intracelulares . Se confundieron con virus, pero a diferencia de ellos: DNA y RNA. Ribosomas. Pared celular: Rickettsias con peptidoglucano; Chlamydias sin peptidoglucano. Integridad celular que no pierden durante la multiplicacin: se dividen por fisin binaria. Sintetizan macromolculas. Son parsitos intracelulares obligados, a excepcin del gnero Bartonella (anteriormente denominado Kochalimaea), que est de hecho fuera del orden Rickettsiales. Viven y se multiplican slo dentro de organismos celulares. En sto se asemejan a los virus. Tanto por aspectos morfolgicos como bioqumicos, se clasifican como bacterias. Slo pueden ser cultivados sobre tejidos vivos, excepto Bartonella. Sntesis de ATP: Rickettsia puede sintetizarlo mientras que Chlamydia puede sintetizarlo potencialmente pero no lo hace. El ATP lo pueden tomar ambas del hospedador en una reaccin de intercambio de ADP (que sale de la bacteria) por ATP (del hospedador).

ORDEN RICKETTSIALES

Antes Bartonella se encontraba en este orden por criterios fenotpicos, pero tienen poca base filogentica, as que ahora se agrupa dentro de Rhizobiales, aunque los gneros Rickettsia, Coxiella y Bartonella se explican juntos. Son patgenos de animales, incluido el hombre. Morfologa variada: tamao pequeo, bacilos, cocos, pleomorfos. 2 m de longitud como mximo. Rickettsia posee una membrana permeable especial, que hace que su desecacin sea muy acusada y no puedan resistir las condiciones externas. Esto explica la necesidad del empleo de vectores para su propagacin (el vector llega a la sangre del infectado, y luego se infecta con picaduras o heces a otro): pulgas, piojos, garrapatas, Coxiella puede ser transmitida por garrapatas, por alimentos o por el aire (aerosoles, estornudos), sin necesidad de un vector. Es resistente porque produce una forma similar a una endospora que explica su resistencia a ciertas temperaturas (por ejemplo, a la pasteurizacin rpida). 114

La entrada de Rickettsia y Coxiella a clulas del hospedador es un proceso activo, ya que ambas partes deben estar vivas y activas. Penetran en la clula activadora por un proceso de fagocitosis inducida. Entran incluso en clulas que normalmente no son fagocticas, como las clulas endoteliales del sistema muscular. Entran sin romper las membranas, formando una vacuola que se va a fundir en el citoplasma. Se divide por fisin binaria, sobre todo en el citoplasma, aunque algunas pueden pasar al ncleo y dividirse all. Hay diferencias entre Rickettsia y Coxiella: Rickettsia puede escapar del fagosoma degradando la membrana fagosmica por unas lipasas, a la vez que se est formando, por lo que no constituye una fase intermedia. Coxiella permanece en el fagosoma, y posteriormente ese fagosoma se funde con el lisosoma, lo que es necesario para activar a Coxiella, y su metabolismo se hace ms rpido. Al fusionarse ambos disminuye el PH, permitindole a Coxiella la transferencia de nutrientes al interior. La clula hospedadora puede reventar en el caso de Rickettsia, liberando a los individuos, o liberarse en vacuolas, produciendo una lisis focal. El hospedador, se lise o no, sufre daos derivados de la toxicidad de la pared de Rickettsia. Coxiella, en cualquiera de los casos, produce lisis. Las Rickettsias son respiratorias y prefieren oxidar compuestos intermediarios del CTA. La capacidad para respirar compuestos como el glutamato les proporciona la energa de mantenimiento y la de crecimiento. Por eso son parsitas. Tienen una capacidad biosinttica limitada : la mayora de los nutrientes los toman de la clula hospedadora, como el CoA. Tienen, adems, un sistema de intercambio de adenilato: intercambian ADP endgeno por ATP exgeno: gran parte de la energa necesaria la toman del metabolismo y de la fosforilacin oxidativa del hospedador. Al desarrollarse en el interior del hospedador, son resistentes a determinados antibiticos, aunque pueden tratarse con tetraciclinas y cloranfetamol. El gnero Rickettsia est dentro del orden Rickettsiales, que, a su vez, est dentro de las -proteobacterias. Bartonella est dentro del orden Rhizobiales, tambin proteobacterias. Dentro de las -proteobacterias hay bastantes analogas: se estudia si Rickettsia se dio a partir de bacterias asociadas a plantas que evolucionaron para asociarse a animales. Coxiella es un miembro del orden Legionellaes. Pertenece al grupo de las proteobacterias. La semejanza en forma de vida que presenta Coxiella con Rickettsia y Bartonella se debe ms bien a convergencia evolutiva.

No utiliza cidos orgnicos, glucosa ni otros azcares. Slo respira cido glutmico y glutamina, que introduce en el ciclo de Krebs, y el poder reductor generado pasa a la CTE para sintetizar ATP. Esto le proporciona energa de mantenimiento. Produce distintos tipos de tifus:

FAMILIA RICKETTSIA

R. rickettsii: provoca la fiebre manchada de las montaas rocosas . Se llama as en honor a Howard Taylor Ricketts (1871-1910), que estudi las caractersticas de esta enfermedad, y que a pesar de utilizar tcnicas cuidadosas, muri de tifus. 115

Crece en el citoplasma y tambin en el ncleo. La garrapata americana es el primer vector, y como segundo vector o reservorio est el conejo y similares. Puede pasar de generacin a generacin de garrapatas a travs de sus huevos por transmisin transovrica. Es la nica Rickettsia que hace esto. La fiebre manchada de las montaas rocosas se caracteriza por un inicio repentino de cefalea, escalofros, aumento de fiebre, exantema cutneo de color rojizo. Aparece en tobillos y muecas normalmente, y se extiende al tronco. Si no tiene tratamiento, destruye los vasos sanguneos de los rganos.

R. prowazekii: provoca el tifus epidmico o exantemtico, de distribucin mundial. Lo estudi Stanislav von Prowazek (1875-1912), investigador checoslovaco que muri por este tifus. El vector es el piojo humano. Utiliza de reservorio las ardillas voladoras. Existe tratamiento (tetraciclinas,) y vacunas para personas con riesgo. R. typhi (R. mooseri): agente etiolgico del tifus endmico o murino. El nombre se le dio en honor al investigador que diferenci a R. mooseri de R. prowazekii, llamado Hermann Mooser (1892-1971). El vector es la pulga de rata, y el reservorio son los roedores. Puede permanecer indefinidamente en la rata, pero si la pulga contacta con el hombre, entonces la transmite. Es una enfermedad bastante extendida, aunque ms bien focal (Etiopa, Malasia, CentroAmrica). Cuando una pulga chupa la sangre de una persona, las heces contaminan la picadura, y si estn atestadas de R. typhi entonces provocan infeccin. La tasa mortalidad es <5%. R. tsutsugamushi: provoca la fiebre fluvial japonesa o Scrub , que se da en el sureste asitico, Japn y Oceana. Lo transmite una garrapata como vector primario, y como reservorio se encuentra el ratn de campo.

GNEROS EHRLICHIA
Patgeno de vertebrados (perros, caballos,). Infecta a leucocitos y a veces a plaquetas. El vector principal son las garrapatas, aunque hay vectores secundarios.

E. chaffeensis: produce erliquiosis, que tiene una sintomatologa parecida a la fiebre de las montaas rocosas.

WOLBACHIA
Bacterias patgenas de artrpodos. Siguen su ciclo de vida en los artrpodos.

ANAPLASMA
Patgeno de vertebrados: afecta al ganado vacuno, caprino, ovino Vive dentro de los glbulos rojos. Su vector primario es la garrapata; sus hospedadores secundarios son otros insectos como la mosca. 116

 COXIELLA
Puede respirar glucosa, cidos orgnicos, que introduce en el CTA y el poder reductor lo pasa a la CTE para generar ATP. La especie ms conocida es: C. burnetii: descubierta por Frank Mcfarlane Burnet (1899-1985). Causa la fiebre Q (Q = Query = Interrogacin), llamada as porque fue desconocida su causa durante mucho tiempo. La fiebre Q es realmente una zoonosis, que afecta a animales salvajes y domsticos. Las garrapatas de distintas especies pueden transmitir la bacteria por picaduras. Normalmente los infectados permanecen asintomticos. En el hombre se transmite por inhalacin de polvo contaminado por Coxiella burnetii procedente de orina y heces animales. Es una enfermedad que puede aparecer de forma epidmica en trabajadores de mataderos, ganaderos, veterinarios, En el hombre, tras la inhalacin, se produce una proliferacin local en los pulmones que provoca distintos sntomas respiratorios como sntomas de gripe, neumona o fiebres intensas, aunque raramente es mortal. Presenta un riesgo a largo plazo porque puede provocar endocarditis a los varios aos (aprox. 5 aos). Durante todo ese tiempo puede permanecer en el hgado produciendo hepatitis. La fiebre Q no se acompaa de exantemas. Se puede identificar por deteccin de anticuerpos en sangre. Son importantes las medidas de control y deteccin, como las vacunas a personas de alto riesgo o la pasteurizacin de la leche de vaca y oveja.

BARTONELLA
Desde 1998, el gnero Rochalinaea se ha agrupado al gnero Bartonella, y, posteriormente, el gnero Grahamella tambin se ha refundido con Bartonella. Se han establecido hasta la fecha 23 especies, de las cuales 9 son patgenas del hombre. Utiliza insectos como vectores: garrapatas, mosquitos, mosca de la arena y como reservorio, utiliza a mamferos. Hbitat: clulas endoteliales. Cada 5 das aproximadamente, una parte de la poblacin de Bartonella se libera a la sangre e infecta a los glbulos rojos. No pueden utilizar glucosa pero s algunos cidos orgnicos como el cido succnico. El glbulo rojo tambin es pasivo: no contribuye a la entrada de bacterias. Bartonella daa la membrana de los glbulos rojos pero no incita la fagocitosis como hacen Coxiella y Rickettsia. No se puede considerar un parsito intracelular obligado: ms bien es facultativo. Puede cultivarse en medios libres del hospedador y de media complejidad (agar + sangre; agar + suero bovino). Las 2 especies ms conocidas son:

B. quintana: produce la fiebre de las trincheras o fiebre de los 5 das. Se le llam Quintana porque afect a 1/5 o por 5 das a la gente durante la 1 Guerra Mundial. Presenta una localizacin epicelular de las clulas endoteliales. Es una enfermedad de distribucin mundial que en los ltimos tiempos ha resurgido en gente de baja 117

clase social (vagabundos, etc). El conductor es el piojo humano, y el reservorio el hombre.

B. henselae: produce la enfermedad por araazo de gato o EAG. El reservorio principal es el gato domstico, y el vector es la pulga de gato o el contacto directo (hay discrepancia). El gato permanece asintomtico. Se transmite por araazo del gato, provocando ampollas rojas, fiebre, inflamacin de ganglios, suele desaparecer a los 2-5 meses. Tiene distribucin mundial. Bartonella henselae vive dentro de los glbulos rojos. Produce enfermedades oportunistas en individuos con VIH. El diagnstico se realiza mediante pruebas serolgicas, y el tratamiento consta de antibiticos (nacrnidos, tetraciclinas,) o agentes antimicrobianos (TMP-SMZ).

Dentro de este orden existen 4 familias, pero slo veremos 1.

ORDEN CHLAMYDIALES

FAMILIA CHLAMYDIACEAE
Presenta 2 gneros: Chlamydophila Ch. psittaci Ch. pneumoniae Chlamydia Ch. trachomatis Las Chlamydias en general representan un paso ms all en la evolucin degenerativa. Son parsitos intracelulares del hombre, mamferos y aves . Tienen menos funciones propias que la clula hospedadora, por lo que fueron considerados como formas intermedias de virus y bacterias. Desde el punto de vista bioqumico, son la forma ms simple de organizacin celular. La familia Chlamydiaceae: Son bacterias inmviles y con genoma pequeo (4-6 108). Ciclo vital con fase de resistencia , que les permite la transmisin a travs del aire. La forma infecciosa se denomina cuerpo elemental (EB) y la vegetativa se conoce como cuerpo reticulado (RB). EB: forma resistente a la desecacin. Tiene forma de coco (0,2-0,4 ) con material genmico electrodenso y pared celular rgida, y estn especializados en la replicacin. RB: no son infecciosos y estn especializados en la divisin binaria. Tienen forma de bacilo (0,6-1,5 ) pero con menor cantidad del material genmico electrodenso. Presentan ribosomas y pared celular ms flexible. Aunque su envoltura es similar a las Gram -, no poseen peptidoglucano ni otros aminoazcares. Los EB alcanzan la estabilidad osmtica mediante la formacin de enlaces cruzados entre las protenas de la membrana externa llamadas protenas ricas en Cys o CRP. Estas protenas establecen puentes disulfuro, que se reducen qumicamente y permiten la transformacin de EB a RB. 118

Las Chlamydias se transmiten por el aire sin necesidad de vectores, en forma de EB. El ciclo de vida comienza con la fijacin de los EB a la superficie de una clula hospedadora. Cuando entra en contacto, induce la fago- o endocitosis. El resto del ciclo vital tiene lugar en el fago- o endosoma. Algn componente de los EB impide que se fusione el endosoma con el lisosoma. Hay un cambio en la membrana del endosoma que impide, adems, la entrada de metabolitos. En el gnero Chlamydia, esos endosomas se fusionan formando un cuerpo o grnulo de inclusin nico. Esto no ocurre en Chlamydophilas. El EB aumenta de tamao, pierde su rigidez y comienza la sntesis de macromolculas. Apenas tienen rRNA, por lo que es probable que gran parte de la sntesis se destine a la formacin de ribosomas. A las 8-19 horas tras el inicio de la infeccin, comienza a dividirse ya como RB. Los RB se vuelven a transformar en EB, y contina este proceso hasta que la clula se lise (C. puttati), lo que ocurre a los 2-3 das, o bien pueden salir por un proceso de endocitosis inversa (C. pneumoniae y C. trachomatis). Su capacidad biosinttica es menor que en el caso de Rickettsia, por lo que se pens que eran parsitos. Cuando se estudi el genoma de C. trachomatis, se vio que tiene la capacidad de sntesis de peptidoglucano, aunque carecen de este compuesto. De hecho, son sensibles a antibiticos que inhiben la formacin de peptidoglucano. La falta de este peptidoglucano es consecuencia de una prdida evolutiva de la funcin. Los RB, cuando el hospedador les proporciona los adecuados precursores, sintetizar macromolculas. Tambin son capaces de sintetizar al menos aminocidos, aunque la mayora son tomados del hospedador. Presentan un funcional de intercambio de ADP endgeno por ATP exgeno. Los EB tienen una actividad metablica mnima: no intercambian ADP por sintetizan protenas. Las Chlamydias forman una rama independiente, prxima a Plactomicetales. pueden algunos sistema ATP ni

GNEROS CHLAMYDOPHILA
Presenta 2 operones ribosomales. No presenta glucgeno. Forma varios grnulos de inclusin.

C. psittaci: causa la psitacosis, que puede afectar a humanos y a otros animales. Es una enfermedad epizotica (epi = brote repentino de la enfermedad). Es una enfermedad sobre todo de pjaros, aunque tambin infecta a vacas, ovejas No slo se transmite por pjaros psitcidos (loros, periquitos,), sino que tambin por palomas, pollos, es, por tanto, una ornitosis. Se transmite por las heces de estas aves, provocando infecciones gastrointestinales y otras enfermedades, afectando a distintos rganos. La inhalacin de EB puede provocar alteraciones respiratorias en el hombre. 119

C. pneumoniae: provoca sndromes respiratorios en el hombre.

CHLAMYDIA
Forma un solo grnulo de inclusin con localizacin paranuclear, donde retiene glucgeno que utiliza como fuente de energa extra. Un nico opern ribosomal.

C. trachomatis: posee muchos serotipos que se pueden englobar en 3 biotipos: 1. Biotipo causante del tracoma, enfermedad infecciona crnica de la conjuntiva y de la crnea, que se caracteriza por un aumento en la vascularizacin y desecacin de la crnea. Es el motivo ms comn de ceguera en el hombre. 2. Biotipo causante del linfogranuloma venreo , donde el hospedador es slo el hombre. Es ms invasivo que el anterior y es una enfermedad de transmisin sexual. Puede causar uretritis no gonoccica , que afecta al tracto genitourinario. Provoca tambin las enfermedades de transmisin sexual ms frecuentes. 3. Biotipo que slo afecta al ratn.

MICOPLASMA

Divisin Tenericutes Clase Mollicutes Orden Mycoplasmatales Constituyen un grupo evolutivo muy compacto y relacionado entre s. Fueron confundidos con las formas L (clulas pleomrficas sin pared celular). Nunca puede revertir a formas con pared celular. No requieren altas concentraciones salinas. No tienen pared celular definida, por lo que presentan una elasticidad celular que les permite atravesar filtros de membrana. Los medios de cultivo de tejidos animales no se pueden esterilizar por filtracin, por lo que se utilizan antibiticos para evitar el crecimiento de Mycoplasma. Son muy deformables, muy pleomrficas y fciles de daar. Cuando las condiciones no son adecuadas, las clulas de Mycoplasma se transforman en clulas filamentosas. Son resistentes a antibiticos que inhiben la sntesis de la pared celular. Esta capacidad se aprovecha para preparar medios selectivos que aslen Mycoplasmas. La presin de turgencia se mantiene porque muchos Mycoplasmas poseen esteroles en la membrana que les proporciona una cierta rigidez. Tambin mantienen el citoplasma a igual presin que la exterior, porque bombean sodio activamente al exterior celular, evitando as la lisis. Si se bloquea este bombeo de sodio, se produce hinchamiento celular y lisis. Algunos Mycoplasmas contienen lipoglicanos (heteropolisacridos de cadena larga que estn unidos covalentemente a los lpidos de membrana y que estn incrustados en las membranas de estos Mycoplasmas). Se parecen algo a los LPS de la pared de 120

Gram -. Estos lipoglicanos son muy abundantes tanto en Mycoplasmas que requieren colesterol como en los que no lo requieren. Adems, facilitan la adherencia a los receptores superficiales de las clulas. Los Mycoplasmas estn filogenticamente ms cerca de los Clostridios (Gram +) que de los Gram -. Se dividen por fisin binaria o fragmentacin mltiple. No suelen ser mviles, aunque tienen la capacidad de deslizarse por superficies cubiertas por lquidos. Los que son helicoidales pueden rotar y flexionarse. Tamao pequeo, de 0,3-0,8 , o incluso menor (0,1 , formas que no pueden ni crecer). Son los organismos celulares de vida libre y multiplicacin propia ms pequeos conocidos. Las colonias de medio slido suelen ser muy pequeas (0,5 mm) y son realmente microscpicas. Tienen aspecto de huevo frito porque la zona central es ms elevada, y es una masa esfrica de clulas parcialmente incrustada en el medio y rodeada de una masa con crecimiento ms superficial. Mycoplasma suelen ser anaerobios aerotolerantes, quimioheterotrofos la mayora, fermentadores estrictos la mayora (fermentacin similar a la que llevan a cabo las bacterias del cido lctico). Ureaplasma es una excepcin, ya que respira. Los Mycoplasmas tienen unos requerimientos nutricionales complejos : cidos grasos, bases pricas o pirimidnicas, aminocidos, esteroles (en algunos casos), Se pueden cultivar en medios artificiales complejos con esteroles. Aunque no lo requieran, se ha visto que, si se les suministra, lo utilizan. A excepcin de Thermoplasma, que es termoacidfilo y de vida libre, los Mycoplasmas son parsitos, comensales o saprfitos. Algunas son patgenas de animales, hombres y plantas.

Requieren colesterol para crecer. Hbitat: siempre relacionados con animales. Son parsitos.

FAMILIA MYCOPLASMATACEAE

GNEROS MYCOPLASMA
Ms de 100 especies. Anaerobios aerotolerantes. Contienen lipoglicanos. Son fermentadores. Son patgenos de mamferos y aves.

M. penumoniae: es la especie ms conocida. Produce en el hombre la neumona atpica primaria. Suele infectar primero las vas respiratorias superiores, pasando luego a las inferiores, y adhirindose a la mucosa, donde produce H2O2, que es txico. Las manifestaciones de la enfermedad son muy variables: desde asintomtico hasta neumona grave. M. mycoides: provoca la pleuroneumona contagiosa bovina. M. gallisepticum: en aves, produce una enfermedad respiratoria crnica en pollos. 121

 UREAPLASMA
6 especies. Forma cocoide; puede formar grupos, cadenas cortas, Es oxidativa y respira. No tienen lipoglicanos. Provoca infecciones del tracto urinario.

U. urealyticum: hidroliza urea para dar lugar a CO2 y amoniaco por la enzima ureasa. Durante el parto es bastante problemtico porque puede causan infecciones. Tambin es responsable de algunas enfermedades de transmisin sexual como la uretritis no gonoccica.

FAMILIA ACHOLEPLASMATACEAE
No requieren colesterol, pero pueden usarlo. Hbitat: es parsito de animales y tambin de insectos y plantas.

GNEROS ACHOLEPLASMA
3 especies. Anaerobios aerotolerantes. S presentan lipoglicanos. Son fermentadores. No todos son patgenos.

Requieren colesterol. Afectan a plantas, insectos (hemolinfa, intestino, glndulas salivares), mamferos y aves.

FAMILIA SPIROPLASMATACEAE

GNEROS SPIROPLASMA
20 especies. Morfologa helicoidal. Son mviles: realizan giros y flexiones. Presentan fibrillas intracelulares que podran favorecer el movimiento. No presentan lipoglicanos. Estn asociados a distintas condiciones patgenas de plantas. Es probable que se transmita de una planta a otra por artrpodos. S. citri: afecta a ctricos principalmente, pero tambin puede afectar al maz. Otras especies son patgenas de insectos, roedores, pollos produciendo otras enfermedades (letargia del coleptero, spiroplasmosis de la abeja melfera,). 122

 THERMOPLASMA
No requieren colesterol. Contienen lipoglicano. Presentan un requerimiento absoluto de extracto de levadura. Son termoacidfilas (T opt = 55-59C); son acidfilas estrictas (PH entre 1-2). A PH neutro se lisa. Vida libre, inocuas. Se aislaron por primera vez en pilas abandonadas de carbn.

T. acidophilum

TEMA 20: POSITIVOS

Son quimioheterotrofos. Se dividen por fisin binaria. 2 gneros de gran importancia clnica: Staphylococcus. Streptococcus.

COCOS

GRAM

Principal familia de esta seccin. Son Cat+ (permite distinguirlos del gnero Streptococcus, que es Cat-). Halotolerantes: Planococcus puede soportar hasta una concentracin de sales del 12%, que es muy elevada. Suelen ser pigmentados por la presencia de pigmentos no difusibles del tipo carotenoide.

FAMILIA I: MICROCOCCACEAE

GNEROS PLANOCOCCUS
Forman planos, tros y raramente ttradas. Mviles por la presencia de flagelos: 1 2, o incluso 3 4. Aerobios estrictos. Ox-. Slo respiran. Forman colonias de color amarillo-anaranjado. Hbitat principalmente marino.

MICROCOCCUS
Forman parejas, ttradas, grupos irregulares. 123

Son inmviles. Aerobios estrictos. Slo respiran. Ox+. Crecen en altas concentraciones de sales (>5%). Son saprfitos. Hbitat: piel de mamferos; hbitat secundario: suelo, agua, productos crnicos,

M. luteus M. roseus

STAPHYLOCOCCUS
Forman racimos o grupos irregulares. Son inmviles. Anaerobios facultativos. Realizan fermentacin lctica en condiciones anxicas. Algunos de los miembros de este gnero pertenecen a la microbiota de la piel. Otros son patgenos potenciales, causantes de infecciones e intoxicaciones alimentarias. El ser coco y Gram + les confiere potencial patogenicidad porque les permite vivir en condiciones de baja humedad y alta concentracin salina. Esto tambin le sucede a Micrococcus. Pueden estar en las secreciones nasales, piel, alimentos con baja humedad y/o alta presin osmtica (condiciones que tienden a inhibir el crecimiento de la mayora de los microorganismos), como la carne curada. La capacidad para vivir en altas concentraciones salinas permite su fcil aislamiento: por ejemplo, en un medio rico con agar, concentracin salina del 7% y condiciones xicas, la mayora de las colonias predominantes sern cocos Gram +. Producen pigmentos, que actan como fotoprotectores.

S. epidermis: forma no patgena, no pigmentada, que vive en la piel y en la mucosa. S. aureus: forma patgena y pigmentada. Presenta pigmentos carotenoides, que le proporciona un color amarillo-dorado caracterstico, y que parecen estar implicados, adems de la fotoproteccin, en la defensa frente a la fagocitosis: los fagocitos emplean formas txicas del oxgeno para destruir a las bacterias ingeridas, oxidando sus elementos celulares. Los carotenoides secuestran el oxgeno en su estado triplete. Est asociado a situaciones patgenas: infecciones cutneas (acn, granos, fornculos, imptigo). Gracias a este microorganismo, Fleming descubri la penicilina. Es un patgeno nosocomial. Puede presentar resistencia mltiple a antibiticos, resistencia condicionada por plsmidos. Su patogenicidad est producida por exotoxinas: 124

 Hemolisinas: rompen la membrana del glbulo rojo, debilitando las defensas y facilitando la disponibilidad del hierro para los microorganismos. Normalmente son -hemolisinas. Leucocidinas: destruyen a los leucocitos (incluidos los fagocitos), por lo que disminuyen la capacidad de resistencia de la clula hospedadora. La mayora de los microorganismos que producen leucocidinas son pigenos, es decir, que producen pus (acmulo de fagocitos muertos que se depositan cerca del foco de infeccin y que dan lugar a la aparicin de fornculos y abscesos). Hialuronidasa: hidroliza el cido hialurnico, que es un compuesto esencial intercelular que acta como cemento. Abre caminos entre los tejidos. Coagulasa: S. aureus es coagulasa+, por lo que coagula el fibringeno del plasma y lo transforma en fibrina, lo que lleva a la formacin de cogulos alrededor de los microorganismos que actan como barreras, hacindolos ms inaccesibles a las defensas de la clula hospedadora. Fibrinolisina: produce la lisis de la fibrina. Se une al plasmingeno y activa la formacin de plasmina, que disuelve la fibrina de los cogulos. Les permite salir de esa zona coagulada. Toxinas exfoliantes: provocan la descamacin de la piel, ocasionando el sndrome de la piel escardada. Enzimas hidrolticos: implicados en procesos de inflamacin. Enterotoxina: presente en algunos casos de intoxicaciones alimentarias. TSST (Toxina Responsable del Shock Txico): es una infeccin grave relacionada con el uso de tampones vaginales. Algunas de estas toxinas (hemolisinas, coagulasas, fibrinolisina, enterotoxinas,) y carotenoides se transmiten mediante plsmidos. S. epidermidis y S. aureus se diferencian por la prueba de la coagulasa: S. epidermidis es coagulasa , mientras que S. aureus es coagulasa +. Las diferencias entre Micrococcus y Staphylococcus: Staphylococcus produce exotoxinas que le otorgan la capacidad de ser patgeno del hombre y otros animales, pudiendo causar graves infecciones. Mediante la prueba OF podemos distinguir microorganismos por su necesidad de oxgeno: Micrococcus slo crece en el tubo O; Staphylococcus crece y produce cidos en ambos tubos. Micrococcus se compone de especies con un alto %G-C (66-73%), mientras que Staphylococcus presenta un menor %G-C (30-39%). Micrococcus es Cat+, mientras que Staphylococcus es Cat-.

FAMILIA II: DEINOCOCCACEAE

125

GNERO DEINOCOCCUS
Cocos inmviles, que forman parejas o ttradas. Est, filogenticamente, separado o nico. La pared celular presenta una estructura compleja de varias capas. Presentan carotenoides de color rojo o rosa. Siempre respiran; nunca fermentan. Son Cat+. Son muy resistentes a la desecacin, mutgenos, radiacin ultravioleta.

D. radiodurans: es muy resistente a la radiacin ultravioleta, desecacin, mutgenos ya que poseen un mecanismo de reparacin del DNA muy potente.

OTROS GNEROS
1. 2. 3. 4. Streptococcus. Leuconostoc. Rediococcus. Aerococcus.

Son anaerobios aerotolerantes: nunca respiran; an en presencia de oxgeno, siempre fermentan. Se pueden aislar adicionando azida sdica u otro veneno de la respiracin en condiciones aerbicas. Streptococcus y Leuconostoc forman cadenas (se dividen en 1 plano); Rediococcus y Aerococcus forman ttradas (se dividen en 2 planos). Streptococcus y Rediococcus son homofermentadores; Leuconostoc y Aerococcus son heterofermentadores. Los heterofermentadores carecen de la aldolasa, que en la glucolisis: GA3P Glc Frc-1,6-bifosfato Aldolasa DHAP Como no pueden realizar esta ruta, siguen la va de la fosfocetolasa. Si somos capaces de detectar CO2, ser un microorganismo heterofermentador. Si tenemos un cultivo de un microorganismo homo- y heterofermentador, los homofermentadores crecern ms, presentarn mayor biomasa.

GNEROS STREPTOCOCCUS
5 grupos, dentro de los cuales se han establecido los Grupos Inmunolgicos de Lancefield, en base a la presencia de carbohidratos antgeno especfico. I. Grupo pyogenes: 126

Especie principal: S. pyogenes. Patgenos del hombre y otros animales. Presentan cpsula, lo que dificulta la fagocitosis. Protena M o antgeno M: son proyecciones pilosas de la pared celular que les proporciona resistencia a la fagocitosis. La estructura antignica de la Protena M es similar a la de un antgeno presente en tejidos humanos, por lo que cuando un organismo tiene una infeccin con este microorganismo y produce anticuerpos, stos puede reaccionar contra el propio organismo, ocasionando una reaccin inflamatoria destructiva. Producen 2 -hemolisinas: ELO (estreptolisina O): se inactiva frente a oxgeno y rompe esteroles. ELS (estreptolisina S): es estable frente a oxgeno y rompe otros lpidos de membrana. Tambin producen leucocidinas, hialuronidasas, fibrinolisina (llamada estreptoquinasa), y la toxina eritrognica, responsable del cuadro clnico caracterstico de la escarlatina. Son la causa del 50% de los casos de anginas. Es necesario el tratamiento teraputico con antibiticos, pudiendo provocar, si no se trata, enfermedades tardas como glomerulonefritis postestreptoccicas o fiebres reumticas. Es una enfermedad provocada por la toxina que produce un fago atemperado. Se trata de una exotoxina muy potente que lesiona los capilares subcutneos ocasionando vasodilatacin y exantema. La glomerulonefritis aguda post-estreptoccica o de Bright es consecuencia de una hipersensibilidad del tipo III . Se debe al depsito en los glomrulos de concentraciones antgeno-anticuerpo y acumulacin de protena M . Afecta a riones, corazn, sangre y protenas de la orina. Afectan al tracto respiratorio. Tambin pueden provocar infecciones sistmicas fulminantes caracterizadas porque afectan al tejido subcutneo. Existen 2 tipos de exotoxinas pirgenas estreptoccicas (spe): a) Spe A: acta como sper-antgeno, estimulando la produccin de cantidades masivas de citocinas por los linfocitos. Daan las clulas endoteliales de los vasos sanguneos, lo que provoca una prdida importante de lquido y la muerte de los tejidos por falta de oxgeno. b) Spe B: es una proteasa de cistena que acta hidrolizando protenas. Provoca la muerte en el 30% de los casos. II. Grupo viridans: Especie principal: S. viridans. Son estreptococos orales y -hemolticos. Pertenecen a este grupo otros estreptococos como:

S. mutans S. salivarius

127

III. Grupo faecalis: Especie principal: S. faecalis (= Enterococcus faecalis). Pueden ser -hemolticos, -hemolticos, -hemolticos o no hemolticos. Son anaerobios aerotolerantes, pero pueden crecer a altas concentraciones de NaCl (hasta 6,5%). En presencia de azida sdica no mueren, ya que respiran en estas condiciones, como un anaerobio facultativo. Hbitat: tracto intestinal y urinario. Pueden ser utilizados como indicadores de contaminacin fecal . Las pruebas se denominan estreptometras. IV. Grupo lactis: Especie principal: S. lactis (= Lactococcus lactis). No son ni hemolticos ni patgenos. Hbitat: plantas y derivados lcteos.

S. cremaris V. Grupo pneumoniae: Especie principal: S. pneumoniae (= Diplococcus pneumoniae). Constituyen el gnero Diplococcus. Se disponen en parejas y estn encapsulados. Tambin se conocen como neumococos. Son -hemolticos y producen una toxina llamada toxina neumolisina. Pueden producir otitis, sinusitis, neumona estreptoccica (enfermedad endgena producida a partir de la propia microbiota de las vas respiratorias) y meningitis bacteriana.

BACILOS Y COCOS GRAM POSITIVOS FORMADORES DE ENDOSPORAS

Pueden presentar un estado de vida latente o criptobiosis mediante la formacin de esporas. Los grupos aqu englobados tienen en comn el hbitat, pero guardan poca relacin en otros aspectos. Hbitat: suelo. Los patgenos suelen producir exotoxinas que invaden el cuerpo, a excepcin de Bacillus anthracis, que es un microorganismo inmvil pero que invade masivamente el cuerpo del hospedador produciendo bacteremia (proceso por el cual las bacterias invaden el torrente sanguneo). Incluso estas especies patgenas son organismos del suelo, saprfitos, pero que pueden infectar al hospedador por la produccin de toxinas.

128

 La esporulacin va acompaada de la sntesis de sustancias antimicrobianas de bajo PM, y realmente se desconoce la funcin de estos antibiticos durante la esporulacin.

AEROBIOS NO ESTRICTOS
GNEROS SPOROLACTOBACILLUS
Similar a Lactobacillus, pero endosporulado. Cat+. Homofermentador: produce cido lctico.

SPOROSARCINA
Forma agrupaciones de cocos en paquetes cbicos de 8. Forman esporas. Slo hay 2 especies:

S. ureal: similar metablica y fisiolgicamente a Bacillus pausterii.

BACILLUS
Cat+ / Ox+. Termfilos o mesfilos: los termfilos pueden crecer a 65C en su forma vegetativa. Peptidoglicano: presencia o ausencia del puente interpeptdico.

B. thermophilus B. stearothermophilus: pared oval y gruesa. B. acidocaldarius: termfilo y acidfilo. Forma oval y pared fina.

I. Grupo I Espora oval de pared delgada, de dimetro menor que el de la clula y posicin central. No tienen puentes interpeptdicos. 2 tipos: 1) No acumulan pHB y la clula vegetativa tiene una anchura < 0,8m:

B. subtilis: produce un antibitico, la subtilisina. B. licheniformis: anaerobio facultativo. Tambin produce glicerol. Es el nico Bacillus que es desnitrificante y puede sustituir el oxgeno por nitrato en la respiracin como aceptor final.

Ambos son productores de antibiticos y tambin producen bacitracina. 2) Acumulan pHB y la clula vegetativa tiene una anchura > 1m. 129

B. anthracis: Produce el carbunco. Aerobio estricto e inmvil. B. thuringiensis: produce una protena o cuerpo paraesporal que es txica para insectos. Hay una relacin entre la morfologa y la actividad: Forma bipiramidal: cepas activas frente a lepidpteros. Forma esfrica: cepas que afectan a algunos mosquitos. Forma irregular: cepas no txicas.

En contacto con el contenido alcalino del digestivo del insecto, se fragmenta y se libera en forma de unidades de protoxina de unos 250KDa, que se van a convertir en la toxina activa de 68KDa por accin de una proteasa que produce rotura proteoltica. En su forma activa es capaz de unirse a clulas del intestino del insecto y forma unos poros hexagonales que producen la salida de ATP, entrada de agua y salida masiva de lquido a la hemolinfa del insecto. El insecto morir por inanicin. La enfermedad es esencialmente una infeccin por la toxina, que se hace activa dentro del insecto. Se denominan comercialmente toxinas Bt. Mediante ingeniera gentica se han podido modificar regiones que dan resistencia al hospedador y se han podido introducir en plantas transgnicas. Se hacen preparaciones de esporas como insecticidas biolgicos. Esta aplicacin tiene gran inters para el control biolgico de plagas.

B. popillae B. megaterium B. cereus

II. Grupo II Espora oval de perfil estrellado, dimetro mayor al de la clula y posicin central o terminal. No forman puentes interpeptdicos.

B. macerans: espora en posicin terminal. B. polymyxa: espora en posicin terminal. Produce antibiticos.

Ambos son anaerobios facultativos con fermentacin butanodilica. Fijan nitrgeno en condiciones anxicas. III. Grupo III Espora esfrica en posicin terminal. El tercer aminocido del peptidoglicano es una L-Lys y el peptidoglicano presenta puentes interpeptdicos. Bacilos aerobios estrictos que respiran aminocidos y cidos orgnicos, pero no carbohidratos. 2 especies importantes: 130

B. sphaericus B. pasteurii: es ureoltico: hidroliza la urea gracias a la ureasa hasta amoniaco y CO2. Un medio que contenga urea y a este microorganismo va a convertirse en un medio muy alcalino, ya que se produce amoniaco. Es el microorganismo con la mayor capacidad ureoltica de todas las bacterias, lo que le condiciona una ventaja ecolgica.

ANAEROBIOS ESTRICTOS
Viven en ambientes anxicos en su forma vegetativa, ya que en la forma de espora pueden estar en ambientes xicos.

GNEROS DESULFOTOMACULUM
Muy parecido a Desulfovibrio. Capaz de reducir sulfatos, pero no respira, slo fermenta. Elimina el exceso de equivalentes de reduccin de productos de fermentacin mediante la reduccin de sulfatos. Genera ATP por fosforilacin a nivel de sustrato. No es una bacteria sulfatoreductora porque no respira.

CLOSTRIDIUM
Bacilo anaerobio estricto. Cat- / Ox-. Hbitat: suelo. Puede estar en estado vegetativo o de espora (ambientes anxicos y xicos). Slo fermenta, pero posee una muy variada capacidad fermentativa. Puede utilizar diversos sustratos. Atendiendo a esto, se establecen 5 grupos: 1. Fermentadores de carbohidratos: 1.1. Producen butirato: a) Fermentacin aceto-butrica: Se basa en la conversin de azcares (Glc) hasta Pir por la va de Embden-Meyerhoff. Este Pir se oxida a acetil-CoA y CO2, y tambin se produce hidrgeno. El exceso de electrones se utiliza para producir compuestos ms reducidos como butirato e hidrgeno. La produccin de hidrgeno se realiza para mantener el equilibrio redox. Pir H2O 2 eFd ox 2 eFd red 131 Hidrogenasa H2 2 H+

Adems de producir butirato producen acetato, que permite la sntesis de ATP por fosforilacin a nivel de sustrato. Es una ruta que puede ser cclica. Parte del acetato reacciona con el butiril-CoA para dar acetil-CoA.

C. lactoacetophilum

b) Fermentacin acetona-butanol: A veces se producen compuestos adicionales neutros , como la acetona y el butanol. Entonces se denomina fermentacin acetonabutanol. Esta formacin de compuestos adicionales neutros sucede como consecuencia de un descenso en el PH. Como productos iniciales tenemos butirato y acetato, pero cesa la acumulacin de cidos, y se acumulan estos productos neutros, que se producen por la reduccin de butirato e hidrgeno formados en los ltimos estados. Estos compuestos adicionales neutros se producen gracias al hidrgeno, que sirve para reducir el NAD a NADH. 2. Fermentadores de aminocidos +/- protenas: Llevan a cabo una putrefaccin o descomposicin microbiana de la materia orgnica que hace referencia fundamentalmente a protenas. Es muy frecuente que la fermentacin la hagan por pares de aminocidos, denominndose entonces reaccin de Stickland. Uno de los aminocidos se oxida y el otro se reduce. Slo los aminocidos Trp y Tyr pueden realizar ambas funciones. Esta reaccin permite que los aminocidos puedan ser utilizados como fuente de energa. Un ejemplo es el caso de la fermentacin acoplada de la Ala y Gly: estos aminocidos no pueden ser fermentados individualmente por el resto de los Clostridium. Como consecuencia de esta reaccin: Ala + 2 Gly 3 NH3 + 3 CH3COOH + CO2 1 mol ATP / 3 mol aas catabolizados La Ala es desaminada oxidativamente hasta Pir, el cual se transforma finalmente en acetato. El NADH utilizado en la transferencia y reduccin de la Gly hasta acetato procede de la oxidacin de Ala.

C. botulinum: lleva a cabo la reaccin de Stickland. C. histolyticum C. tetani Reaccin de Stickland y, adems, fermentan aas especficos individuales

3. Fermentadores de carbohidratos o aminocidos: Fermentan aminocidos en ausencia de carbohidratos. Convierten normalmente los carbohidratos en cido butrico. Muchos que fermentan aminocidos son proteolticos, y producen una amplia gama de proteasas. La protelisis es un paso preliminar para conseguir los aminocidos a partir de las protenas. No todos los Clostridium que fermentan aminocidos son proteolticos. 4. Fermentadores de compuestos con un anillo nitrogenado (bases pricas, pirimidnicas). 132

5. Fermentadores de etanol a cidos grasos: Producen butirato fermentado una mezcla de etanol y acetato.

C. kluyveri: en presencia de acetato y etanol produce butirato y gas.

- CLOSTRIDIUM PATGENOS -

C. botulinum: causante del botulismo (intoxicacin alimentaria grave). Produce la exotoxina botulnica. Se une a la sinapsis de neuronas motores, reduciendo la liberacin de acetilcolina presinptica perifrica . Puede causar la muerte por insuficiencia cardaca o respiratoria . Produce la parlisis flcida, que evita que el msculo se contraiga. C. perfringens: causa la gangrena gaseosa en el 80% de los casos (el otro 20% lo producen otras especies de Clostridium). Es una enfermedad necrotizante de los msculos (mionecrosis) por una serie de enzimas que destruyen tejidos. Cuando las toxinas generadas por este tipo de microorganismos se ingieren, pueden causar tambin una intoxicacin alimentaria, pero que es menos grave que la causada por C. botulinum. C. tetani: causa el ttanos, por una neurotoxina denominada tetanopasmina, se trata de una endopeptidasa que escinde una protena de la membrana de las vesculas presinpticas. Impiden la exocitosis y la liberacin de algunos neurotransmisores como la glicina, actuando en las neuronas inhibidoras en el caso de las neuronas motoras de la mdula espinal. Ocurre una estimulacin incontrolada de los msculos esquelticos llamada parlisis espstica. Produce, adems, una segunda toxina, la tetanolisina, que contribuye a la destruccin tisular.

Tanto la gangrena gaseosa como el ttanos se adquieren por heridas en condiciones anxicas. Es la toxina, no el microorganismo, lo que invade el organismo.

TEMA 21: BACILOS GRAM POSITIVOS NO FORMADORES DE ENDOSPORAS

CON MORFOLOGA REGULAR

GNEROS LACTOBACILLUS
Anaerobio aerotolerante. 133

 Siempre fermentan, y siempre carbohidratos. Nunca respiran, por lo que no tienen CTE. Como consecuencia producen fundamentalmente cido lctico. Cat- / Ox- / Peroxidasa+. Son la versin bacilar de Streptococcus lacti. Obtienen poco ATP y crecen lentamente. Forman pequeas colonias blancas: no poseen ni pigmentos, ni citocromos ni carotenoides. Son fcilmente distinguibles, pulverizando la placa con CaCO3, que es de color blanquecino. Se disuelve el CaCO3 por el cido lctico, dando lactato clcico, que es translcido, y aparecer en forma de halo alrededor de las colonias. Son muy tolerantes a los cidos (PH4-5). El PH es un factor selectivo, ya que elimina competidores en un medio rico en nutrientes. Se encuentran en plantas, ciertos alimentos y bebidas preparadas (vino, cerveza,) donde pueden llegar a producir grados de acidez no deseados. Tambin aparecen en la leche debido a las vacas y/o materia comida por ellas. Junto con los estreptococos lcteos son importantes en la produccin de productos lcteos. 2 tipos: a) Homofermentadores: Glc
Va de Embder-Meyer

2 Pir

2 lac (+ 2 ATP)

b) Heterofermentadores: Glc
Ruta de fosfocetolasa

Ru5P

1 lac + 1 etanol + 1 CO2 (+ 1 ATP)

Para diferenciar entre un homofermentador y un heterofermentador, debemos detectar la produccin de CO2.

L. bulgaris L. plantarum L. casei L. brevis L. acidophilus: presente en la boca, nariz y vagina.

LISTERIA
Bacilo corto, mvil a 25C pero inmvil a temperatura corporal por inactivacin de los flagelos. Anaerobias / Aerobias facultativas (fermentacin lctica). Cat+ / Ox-.

L. monocytogenes: patgeno intracelular -hemoltico que produce la listeriosis, enfermedad que no tiene una manifestacin concreta (se parece a la gripe, neumona, fiebres tifoideas,) y puede provocar meningitis, septicemia, Afecta 134

al hombre y otros animales. En embarazadas provoca infecciones uterinas que acaban en abortos en el 30% de los casos y daos fetales. Puede ser ingerido por productos alimentarios infectados. Tiene distintos factores virulentos: Produccin de fosfolipasas. Protena activadora de la actina. Listeriolisina (LLO): toxina hemoltica y citoltica que se fija al colesterol y que se secreta a PH cido y cuando la concentracin de hierro es baja, condiciones que se dan en los fagosomas. Sobreviven a la fagocitosis y a bajas temperaturas (hasta 4C). No slo entra a las clulas fagocticas, sino que tambin entra a las no fagocticas, como las clulas parenquimales, por fagocitosis inducida o endocitosis. Se adhiere a receptores de la D-galactosa, se forma una vacuola y lisa esa vacuola mediante la LLO. Permanece entonces en el citoplasma, donde se replica y se desplaza por un tipo de movilidad muy interesante: secuestra componentes celulares y forma colas de actina (por las protenas activadoras de la actina), lo que les permite desplazarse. Tiene un mecanismo de polimerizacin de la actina similar a la de la clula hospedadora. Pasan de una clula a otra sin ponerse apenas en contacto con el medio exterior, por lo que para combatirla se precisa inmunidad mediada por clulas.

CON MORFOLOGA IRREGULAR

Engloba a bacterias corineformes o corinebacterias . Son bacterias pleomrficas: en relacin con la edad del cultivo. Son bacterias Gram+ con elevado %G+C. Inmviles. Aerobias / Anaerobias facultativas / Anaerobias tolerantes / Anaerobias estrictas / Microaerfilas.

GNEROS CORYNEBACTERIUM
Anaerobias facultativas (fermentacin propinica). Cat+. Producen cidos miclicos, presentes en la pared celular (tincin cido-alcohol resistente). El tipo de divisin celular es caracterstica de este gnero: al dividirse, las clulas hijas sufren un movimiento de desgarro o chasquido que las coloca en posicin angular a las clulas hijas, una junto a la otra. Una vez que ya se ha formado el septo, la capa interna se invagina formando el septo, dividiendo a las 2 clulas, pero sigue engrosndose y somete a tensin a la capa externa, que contina manteniendo juntas a las clulas. Se rompe por un punto, por lo que la clula se curva al lado opuesto al punto de ruptura. Se llama divisin angular o crepitante. Las clulas se mantienen en ngulo durante un tiempo y unidas por la capa externa. Especies patgenas: 135

C. diphtheriae: tambin conocido como bacilo de Klebs-Leffler. Produce la difteria. Para aislar a esta especie, se utiliza un medio que contiene agar-cistinaTeO2K (telurito potsico). ste ltimo inhibe el crecimiento de la mayora de bacterias de la nasofaringe, pero no de sta. El telurito potsico se transforma en teluro, que da un color metlico. La exotoxina diftrica est codificada por el fago , que contiene el gen tox, responsable de la produccin de la exotoxina. Las cepas virulentas producen la exotoxina cuando llegan al estado lisognico, ya que es el paso a este estado lo que activa la virulencia. La exotoxina entra en la clula hospedadora y acta inactivando el EFII. La expresin del gen tox depende del estado fisiolgico de la bacteria, sobre todo del contenido de hierro (a altas concentraciones frricas se impide la produccin de la exotoxina). Una vez producida la exotoxina, el microorganismo se queda en la boca, produciendo inflamacin y un exudado llamado pseudomembrana diftrica, que bloquea el paso de aire por los conductos respiratorios. Existen 3 biotipos, dependiendo de la potencia de la exotoxina: POTENCIA GRAVIS
Colonias ms grandes, color gris oscuro y superficie de las colonias rugosa.

INTERMEDIUS
Colonias ms pequeas, color gris oscuro y forma de las colonias puntiforme.

MITIS
Colonias ms pequeas an, color negro brillante y de aspecto convexo.

C. bovis: afecta a animales. C. equis: afecta a animales. C. betae: afecta a la remolacha.

Especies no patgenas: C. pseudodihtheriticum: presente en las mucosas del tracto respiratorio superior. C. xerosis: aparece en boca, piel y nariz. C. glutamicum: se utiliza en procesos industriales para producir cido glutmico (aditivo alimentario).

ARTHROBACTER
136

 Hbitat: suelo. Es un agente mineralizante de la materia orgnica en el suelo. Aerobio estricto. Dimrfico: en la fase estacionaria tiene forma de coco, pero cuando est creciendo, al final, presenta forma bacilar. Divisin angular: puede formar ramificaciones irregulares. Cuando escasean los nutrientes, se divide sucesivamente o se produce fragmentacin mltiple, pasando a la forma estacionaria.

PROPIONIBACTERIUM
Pleomrfico. Similar a Corynebacterium. Se refiri a las Propionibacterium y a Bifidobacterium como corinebacterias aerobias, pero Propionibacterium es anaerobio aerotolerante y suele vivir en condiciones de baja concentracin de oxgeno. Aparece en productos lcteos (se aisl por primera vez del queso suizo, en el cual ayuda a su curacin), tracto genital, intestinal, rumen y piel.

P. acnes: relacionado con el acn vulgar. La actividad hormonal estimula la produccin excesiva de sebo; las glndulas sebceas forman lpidos que pueden ser degradados parcialmente por enzimas de algunas bacterias, como P. acnes, que producen lipasas, y producen, a partir de esos lpidos, cidos grasos, que son irritantes, atraviesan la piel y producen inflamacin localizada.

Fermenta azcares: produce propionato, CO2 (en mayor o menor medida), acetato Puede producir succinato dependiendo del contenido en CO2. Glc Pir + NADH ciclo donde se forma propionato.
EM

Va a ser reoxidado como parte de un

El Pir acepta un grupo carboxilo del metil-maleonil-CoA por una reaccin de transcarboxilacin. Se forma oxalacetato y propionil-CoA; este ltimo reacciona con el succinato y le transfiere su CoA, formndose propionil-CoA, que se isomeriza a metilmaleonil-CoA. La reoxidacin del NADH se lleva a cabo en 2 puntos del ciclo. Partiendo de lactato: 3 lac 3 Pir + 2 propionato + 1 acetato + CO2

El lactato se oxida hasta Pir. Parte del Pir se oxida y parte se reduce. La parte del Pir que se oxida lo hace hasta acetil-CoA y CO2. Desde acetil-CoA hasta acetato se forma ATP. Se equilibra con la produccin reductora del propionato. Pir 137

Oxidacin Acetato

Reduccin Propionato

Lactobacillus homofermentativo, junto con Streptococcus y Propionibacterium, forman el queso suizo. En la cuajada (previa al queso) producen cido lctico a partir de la glucosa. Las propionibacterias se desarrollan muy rpidamente aqu porque fermentan el lactato produciendo acetato y propionato (que dan el aroma caracterstico al queso) y CO2 (cuya acumulacin forma los agujeros del queso). Pueden producir succinato dependiendo del contenido de CO2 en el medio de cultivo. Su formacin ocurre por una carboxilacin del PEP, que origina oxalacetato, el cual, de forma secundaria, pasa a succinato. Es una va independiente a la de formacin de propionato y acetato.

BIFIDOBACTERIUM
Anaerobios obligados / Anaerobios aerotolerantes (algunas especies o cepas, soportan el oxgeno siempre y cuando haya CO2). Extremos algo espatulados o bifurcados. Inmvil.

B. bifidum: constituye la fraccin mayoritaria de la microbiota intestinal del recin nacido que es alimentado con lactancia materna. Tambin aparece en menor medida en adultos, principalmente en el intestino y la boca. Tienen requerimientos nutricionales complejos: necesitan aminoazcares (NAG, NAM,) que estn de forma normal en la leche. Si se les priva de aminoazcares, se forman ramificaciones que le dan aspecto de micelio rudimentario.

Otras especies: aparecen en insectos o en el agua.

Son bacterias parecidas a las del cido lctico: a partir de un azcar producen lactato, que no es el resultado de una fermentacin homo o heterolctica. No producen CO2. 2 Glc 3 acetato + 2 lactato + 5 ATP

ACTINOMYCES
Anaerobio aerotolerante. Ramificaciones transitorias. Hbitat: aparece en los hombres y animales, en la boca, garganta, tracto genital femenino, intestino, Fermentativo: fermenta azcares.

A. israelii: principal agente biolgico de actinomicosis facial, torcica o abdominal. Tambin puede provocar endocarditis, cervicitis, 138

Bacilos inmviles. Aparicin ocasional de crecimiento filamentoso. Apariencia de micelio que aparece en la fase estacionaria y se fragmenta cuando entra en la fase de crecimiento activo. Aerobios. Paredes celulares con aumento de la concentracin de lpidos, que les proporcionan consistencia y aspecto creo a las colonias. En medios lquidos son responsables de que aparezcan formando grumos. Reducen su permeabilidad, aumenta la resistencia a antispticos, desinfectantes, El aumento del tamao de cidos miclicos aumenta su resistencia. cidos miclicos: 3 hidroxicidos grasos biramificados de cadena bastante larga en micobacterias (60-90 carbonos). Presentan otros lpidos complejos. Son difciles de teir, por su alto contenido en lpidos en la pared celular. Son cidoalcohol resistentes. Se tien por la tincin de Ziehl-Nielssen. Las bacterias nocardiformes tambin tienen cidos miclicos. Antes, las micobacterias se agrupaban con las nocardiformes. Especies no patgenas: son de crecimiento rpido.

MICOBACTERIAS

M. phlei M. fortuitum M. smegmatis

Especies patgenas: son de crecimiento lento.

M. leprae: produce la lepra o enfermedad de Hansen. M. tuberculosis: tambin conocido como Bacilo de Koch. Produce la tuberculosis.

TEMA 22: FOTOTROFAS

BACTERIAS

Son Gram-, salvo algunas excepciones. En funcin de la fotosntesis, se pueden como clasificar como: a) Fototrofos anoxignicos: Bacterias rojas o prpuras. Bacterias verdes. Bacterias de afiliacin incierta. b) Fototrofos oxignicos: pueden llevar a cabo fotosntesis anoxignica bajo determinadas condiciones. 139

 Cianobacterias. Algunas bacterias fototrofas (rojas y verdes no del azufre ) pueden vivir en la oscuridad. Poseen un metabolismo fotoheterotrofo pero pueden ser fotoautotrofas o quimioheterotrofas facultativas. En la oscuridad, siempre y cuando estn en condiciones microaerfilas, pueden actuar como quimioheterotrofas y unas pocas como quimioautotrofas. Algunas especies pueden incluso fermentar. La mayora de bacterias fototrofas son fotoautotrofas (fijan CO2), para lo que tienen que gastar ATP y poder reductor. La fijacin de CO 2 no es igual: unas usan el ciclo de Calvin (bacterias rojas y cianobacterias), otras (bacterias verdes del azufre ) usan el ciclo TCA inverso, y otras (bacterias verdes no del azufre ) usan la va del hidroxipropionato. 1. Ciclo de Calvin: Se produce en el estroma de los cloroplastos, en individuos auttrofos. Consta de 3 fases: 1) Carboxilacin: fijacin del CO2 por la enzima Rubisco. 2) Reduccin: de 3 PGA a GA3P. 3) Regeneracin del aceptor de CO 2: a partir de 12 GA3P, slo 2 salen del ciclo para generar hexosas por una serie de reacciones. Balance: elevado gasto de ATP y poder reductor. 2. Ciclo TCA inverso: Lo realizan las bacterias verdes del azufre, que son las nicas bacterias auttrofas que realizan esta ruta. Tambin la realiza Sulfolobus, que es una arquea. Es un ciclo reductor. 3 CO2 + 12 H + 5 ATP Triosa-fosfato

Podran fijarse 4 CO2 por cada vuelta. Son 2 reacciones desfavorables que la llevan a cabo enzimas unidas a la ferredoxina reducida: son 2 carboxilaciones reductoras. 3. Va hidroxipropionato: La realizan las bacterias verdes no del azufre (Chloroflexus,). Uno de los intermediarios es el hidroxipropionil-CoA. Glioxilato.

BACTERIAS FOTOTROFAS ANOXIGNICAS

Las bacterias rojas y verdes no pueden llevar a cabo la fotolisis del agua, tienen que obtener poder reductor a partir de un compuesto reducido (sulfuros, compuestos reducidos del azufre, hidrgeno,). Pueden crecer fototrficamente slo en condiciones anxicas porque sus pigmentos fotosintticos no actan en condiciones xicas. 140

 En condiciones microaerfilas, algunas bacterias rojas pueden emplear estos donadores de electrones para soportar un metabolismo quimiolitotrofo. Fundamentalmente las bacterias no del azufre son las que tienen mayor diversidad metablica. Formas unicelulares normalmente. Cuando son mviles es por la presencia de flagelos; a veces presentan tambin vacuolas de gas. Slo presentan un fotosistema.

BACTERIAS ROJAS
Rojo es el color que presentan casi todas. Depende del contenido en carotenoides. Presentan poli--hidroxibutirato como sustancia de reserva. Como pigmentos mayoritarios contienen BCla o BClb. Pueden fijar nitrgeno en condiciones anxicas.

BACTERIAS ROJAS DEL AZUFRE

Tambin llamadas bacterias cromaticeas. En el Bergey, estn incluidas en las -proteobacterias. Presentan metabolismo fotoautotrfico. Como poder reductor utilizan compuestos reducidos de azufre o hidrgeno. A veces realizan un TCA inverso para reducir NADP a NADPH (para reducir CO2). La oxidacin del sulfhdrico para donar electrones al TCA inverso acumula azufre como glbulos refringentes en el interior celular. Es transitoria porque ese azufre va a pasar a sulfato. Hbitat: aguas ricas en sulfuros por la accin de bacterias sulfatoreductoras que reducen los sulfatos a sulfuros. Generan el ciclo anaerobio del azufre en condiciones anxicas. Inmviles / Mviles (flagelos polares). Algunas pueden presentar vacuolas de gas: Sin vacuolas de gas:

Chromatium Thiospirillum Thiocapsa Thiosarcina

Con vacuolas de gas: Lamprocystis: cocos mviles. Thiodictyon: bacilos aislados o en mallas irregulares. Thiopedia: cocos que forman placas planas bastante regulares. 141

 Tambin llamadas rodospirilceas (Rhodospirillum). Filogenticamente incluidas en las -proteobacterias. Presentan metabolismo fotohetertrofo: en presencia de luz y condiciones anxicas, pueden usar compuestos orgnicos como donadores de electrones para la fotosntesis. Su metabolismo es flexible. Cuando no utilizan compuestos orgnicos (condiciones autotrficas) usan el ciclo de Calvin para fijar CO2. Algunas son desnitrificantes: respiracin anaerbica, donde emplean nitrato como aceptor final de electrones en lugar de oxgeno. Pueden ser desnitrificantes y a la vez fijar nitrgeno. Mviles (flagelos polares o peritricos).

BACTERIAS ROJAS NO DEL AZUFRE

Rhodospirillum rubrum: flagelacin polar. Fisin binaria. Rhodobacter: fisin binaria. Rhodopseudomonas: flagelacin polar. Gemacin. Rhodomicrobium: gemacin. Forma ovoidea y flagelacin peritrica. En el extremo de una hifa tienen una yema. Es una morfologa similar a la de Hifomicrobium. Rhodoferax: anaerobia facultativa. Fija cidos orgnicos, malato, Pir acompaado de una reduccin de hierro (hierro como aceptor final de electrones). Tiene de curioso que es capaz de transferir los electrones generados directamente a un electrodo mientras se nutre de esos azcares. La eficacia de la conversin energtica de los cidos orgnicos para producir energa elctrica es de ms del 80%.

BACTERIAS VERDES
BACTERIAS VERDES DEL AZUFRE
Dependen del contenido de carotenoides. La mayora de las bacterias verdes lo son del azufre. Presentan clorosomas: estructuras ovaladas con membrana que las hacen independientes. Los pigmentos mayoritarios son: en la membrana, la BCLa; en los clorosomas, la BCLc, d y e. Fijan nitrgeno en condiciones anxicas. Son tambin denominadas clorobiceas siendo el gnero representativo Chlorobium. Las bacterias verdes se encuentran en los gneros de las ramas ms profundas del dominio Bacterium en el Bergey. Metabolismo fotoauttrofo obligado. La fuente de poder reductor son compuestos reducidos del azufre o, a veces, el hidrgeno. Oxidan el sulfhdrico o sulfuro y depositan el azufre extracelularmente. 142

 Sin vacuolas de gas: en fondos de los estanques o lagos poco profundos para recibir la luz, lodos ricos en sulfhdrico, Son bacterias pequeas e inmviles.

Chlorobium: bacilo curvado que pueden formar cadenas cortas. Prosthecochloris: forma ovoide. Tambin forma cadenas cortas.

Con vacuolas de gas: Pelodictyon: forma redes.

Llamadas cloroflexadas debido a Chloroflexus. Tambin pertenecen a los gneros de las ramas ms profundas del dominio Bacterium en el Bergey. Metabolismo fotohetertrofo: en condiciones anxicas con luz, utilizan compuestos orgnicos como donadores de electrones. Metabolismo flexible: tambin pueden presentar metabolismo fotoautotrofo facultativo (fijan el CO2 y el hidrgeno como donador de electrones). Algunas pueden ser quimiohetertrofas facultativas. Se parecen en el metabolismo diverso a las bacterias rojas no del azufre. Tambin presentan clorosomas. BCLc o BCLd. En autotrofa, llevan a cabo el ciclo del hidroxipropionato.

BACTERIAS VERDES NO DEL AZUFRE

GNEROS CHLOROFLEXUS
Termfilo. Requerimientos nutricionales complejos. Forma filamentosa. Movimiento por deslizamiento.

HELIOTHRIX
rRNA 16S similar a Chloroflexus. Forma filamentosa y deslizante. Se considera una rareza porque solo tiene BCla y no tienen clorosomas.

GNEROS DE AFILIACIN INCIERTA

GNEROS HELIOBACTERIAS
143

 Son Gram+. Parecidas a Clostridium: pertenecen a la misma clase, mismo orden y distinta familia. Se tien mal por su bajo contenido en peptidoglucano . El gnero Heliobacterium forma endosporas. Metabolismo fotoheterotrofo estricto y siempre viven en condiciones anxicas. Pigmentos: presentan un tipo de BCl que se llama Bclg, que es similar a la Bcla. La BClg no se encuentra en los clorosomas ni en las membranas celulares, sino en la membrana citoplasmtica. Fijan nitrgeno. Anaerobias estrictas. Hbitat: zonas tropicales (arrozales, donde las condiciones de temperatura y humedad son extremas). Movimiento por desplazamiento o flagelos, dependiendo de la especie.

Heliobacterium: todos son bacilos, algunos deslizantes y otros con flagelos. Heliobacillus: flagelos peritricos. Heliophilum: bacilos con flagelos polares pero que se mueven en grupos.

ERYTHROBACTER
Pertenece al grupo de -proteobacterias, pero realiza fotosntesis anoxignica, aunque vive en presencia de oxgeno. Otras bacterias similares a sta forman parte de los tapetes microbianos: se trata de bacterias fotoheterotrofas anxicas aerbicas que ocupan pequeos nichos ecolgicos ricos en nutrientes, y se pens que su metabolismo principal era quimioheterotrofos, pero en realidad son fotoheterotrofos, aunque no se sabe si es posible que fijen CO2. Constituyen ms del 8% de las comunidades bacterianas en los ocanos abiertos. Son Gram-. Color rojo-anaranjado por la presencia de carotenoides. Fisin binaria. Cat+ / Ox+. Hbitats marinos. Algunos autores todava dicen que son quimioheterotrofos, que respiran y que curiosamente tienen BCla. Cada da ms se sabe que son fotoheterotrofos aerbicos anoxignicos, ya que, cuando se les iluminan, dejan de respirar. No crecen anaerbicamente con luz ni quimiolitrotrficamente con oxgeno. Tienen una regulacin opuesta a las bacterias rojas tpicas. La biosntesis de Bcla y carotenoides est estimulada por oxgeno. Es incapaz de tener un crecimiento anoxignico anaerobio.

- HBITATS DE LAS BACTERIAS CON FOTOSNTESIS ANOXIGNICA Muchas restricciones ecolgicas. 144

 Son marinos. En general viven en ausencia de oxgeno y en presencia de compuestos reducidos, orgnicos e inorgnicos, distintos del agua, para llevar a cabo la fotosntesis. Tipos de hbitats: 1) Balsas poco profundas, laguna costera con alto contenido en hidrgeno, H2S, CO2. No hay oxgeno en el fondo pero llega la luz. La parte superior est cubierta por organismos fototrofos oxignicos (cianobacterias, algas,) que captan la luz roja y azul, as que deben captar luz a diferentes (captan la luz no aprovechada por organismos de fotosntesis oxignica: la BCl capta la luz infrarroja). 2) Lagos meromcticos: tienen una escasa circulacin vertical, estratificados casi permanentemente, con escasa corriente. En el fondo hay agua ms densa, con alto contenido en sal. El desarrollo de las bacterias rojas y verdes , especialmente del azufre, puede producirse durante todo el ao. Tambin aparecen en lagos holomcticos, donde la estratificacin es estacional por las diferentes temperaturas del ao. La actividad fotosinttica es lo suficientemente elevada para constituir una autntica fuente de materia orgnica en este lago. Puede ser ms intensa que en capas superiores, donde hay algas. Es ms normal la presencia de estas bacterias en balsas o estanques que en grandes masas de agua, donde hay ms corrientes y cambios de estratificacin. Las bacterias rojas y verdes se sitan en la franja o zona donde termina la franja o zona aerbica, cuando empieza la alta concentracin de sulfuros y sulfhdricos. A esta profundidad slo llega una 450nm (verde-azulada), por lo que captan la luz por los carotenoides, que captan la luz que llega muy filtrada a esta profundidad.

BACTERIAS FOTOTROFAS OXIGNICAS

GNEROS CIANOBACTERIAS
Anteriormente conocidas como cianofceas. Color verde-azulado debido a la presencia de la ficocianina (mx = 700nm). Tambin pueden presentar ficoeritrina (mx = 500nm). Ambos son pigmentos accesorios. Existe un fenmeno de absorcin cromtica: si la bacteria crece en presencia de luz verde, su contenido en ficoeritrina ser mayor que el de ficocianina. Presentan PSI y PSII; la Cla se encuentra en los tilacoides. En condiciones anxicas, algunas pueden llevar a cabo la fotosntesis anoxignica facultativa (slo usan el PSI) y obtienen ATP por fosforilacin. El poder reductor lo obtienen de los sulfuros (el sulfhdrico pasa a azufre; ese sulfhdrico es un potente inhibidor del PSII). El azufre lo depositan fuera de la bacteria. Existe una relacin entre las bacterias fotosintticas y las algas: las algas tambin, en condiciones anxicas, emplean slo el PSI, pero stas obtienen el poder reductor del hidrgeno. 145

 Realizan el ciclo TCA inverso; la ruta de las pentosas-fosfato juega un papel esencial en la concentracin de carbohidratos. La fotoheterotrofa es rara: es una caracterstica casi reducida a los organismos con fotosntesis anoxignica. Fijan CO2 por el ciclo de Calvin. Algunas pueden crecer lentamente sin luz como quimioheterotrofas. Otros, en vez de utilizar el agua, pueden oxidar sulfuros y llevar a cabo fotosntesis anoxignica. Son formas unicelulares o filamentosas: si son filamentos se les denomina tricomas, que estn en contacto por una amplia zona a otras clulas. Mviles (no por flagelos); pueden presentar capas mucilaginosas que les permiten deslizarse. Las cianobacterias marinas poseen vacuolas de gas para la flotacin. Hbitat: muy variado (agua dulce, salada, termfilas, terrestres,). Entre las que viven en el suelo algunas son endosimbiontes (Anabaena azollae) de un helecho llamado Azolla. En el sureste asitico se suelen hacer crecer en las zonas de cultivo de arroz, para que Azolla produzca nitrgeno. Fisin binaria, fisin mltiple, fragmentacin (slo en bacterias filamentosas, las cuales forman hormogonios, que son tricomas ms pequeos y finos que se separan del resto por deslizamiento), gemacin, Las formas de resistencia que presentan algunas formas filamentosas se denominan acinetos: son estructuras inmviles, resistentes a la sequa, oscuridad, con pared gruesa que se rompe cuando existen condiciones favorables. Las cianobacterias son los nicos microorganismos capaces de fijar oxgeno (fotosntesis oxignica) y a la vez capaces de fijar nitrgeno. Las cianobacterias fijadoras de nitrgeno son filamentosas, tienen heterocistes (clulas redondeadas que se distribuyen de forma regular a lo largo del filamento o en los extremos y que presentan una alta concentracin de glucolpidos en la pared para disminuir la difusin del oxgeno). Los heterocistes no se forman cuando los microorganismos viven en presencia de nitrgeno en el medio, sino cuando no hay; es entonces cuando sintetizan una capa gruesa, se desechan las ficobilinas y el PSII, lo que implica que no funcione la fotosntesis oxignica. Entonces sintetizan nitrogenasa y se forman conexiones polares especializadas entre los heterocistes y las clulas vegetativas normales que estn a su lado. El heterociste presenta un bajo contenido en ficobilinas, no presenta el PSII y, adems, tampoco presenta la enzima Rubisco, por lo que no puede fijar ni CO 2 ni producir O2. Tiene un PSI funcional y puede sintetizar ATP, pero va a depender de las clulas vegetativas para obtener el poder reductor. Los heterocistes proporcionan productos de la fijacin del nitrgeno, como glutamina y amoniaco. Si no hay heterocistes, no se puede fijar nitrgeno a la misma vez que se realiza la fotosntesis oxignica. Algunas formas filamentosas no tienen heterocistes y pueden fijar nitrgeno, siempre y cuando lleven a cabo fotosntesis anoxignica. Las cianobacterias utilizan como materia de reserva carbonada el glucgeno. Algunas presentan cianoficina, que es un polmero sencillo de asprtico y arginina, que puede constituir hasta el 10% de la masa celular. Se trata de un producto de reserva nitrogenada muy comn en cianobacterias. Durante periodos de oscuridad, esta cianoficina puede servir tambin como fuente de energa, ya que la arginina del polmero puede ser hidrolizada transformndose en ornitina, CO2, NH3 y ATP. Se lleva a cabo por la enzima arginina-dihidrolasa. 146

Las ficobilinas tambin sirven como fuente nitrogenada. Pueden constituir el 10% de masa celular. 5 gneros:

GNEROS OSCILLATORIA
Bacterias filamentosas sin heterocistes. Fijan nitrgeno: esta fijacin se produce en unas clulas del centro del filamento que no tienen actividad del PSII, evitando la produccin de oxgeno.

ANABAENA
Bacterias filamentosas con heterocistes y acinetos, pero sin hormogonios.

NOSTOC
Bacterias filamentosas con heterocistes, acinetos y hormogonios.

GLOEOTHECE
Bacteria que forma una especie de vaina que engloba a varias clulas. No posee heterocistes. Puede fijar nitrgeno: para ello sintetiza la nitrogenasa, slo en periodos de oscuridad, ya que con luz se degrada la nitrogenasa y no fija nitrgeno.

SYNECHOCOCCUS
Una de las bacterias fototrofas ms importantes del medio marino. Se calcula que hasta el 25% de la produccin primaria del ambiente marino tpico se debe a ella.

TEMA 23: BACTERIAS QUIMIOLITOTRFICAS AERBICAS

Bacterias Gram -. Obtienen el ATP mediante fosforilacin oxidativa de compuestos inorgnicos y emplean el oxgeno como aceptor final de electrones. Algunos son anaerobios facultativos, pudiendo emplear compuestos orgnicos. Como poder reductor utilizan compuestos inorgnicos, aunque los anaerobios facultativos utilizan orgnicos. Como fuente de carbono utilizan CO2 atmosfrico, fijando el carbono por el ciclo de Calvin. Hay tambin mixotrofos que siempre requieren una fuente orgnica de carbono, ya que no pueden fijar CO2. Atendiendo al donador de electrones inorgnico para la produccin de energa a partir de su oxidacin, diferenciamos: 1) Bacterias nitrificantes: 147

Pueden crecer quimiolitotrficamente a expensas de compuestos reducidos del nitrgeno. En la naturaleza no existen organismos capaces de llevar a cabo el paso directo de amoniaco a nitrato. a) Nitrosificantes: oxidantes de NH3 o productoras de nitrito (oxidan el amoniaco a nitrito). b) Nitrificantes: oxidantes de nitrito o productoras de nitrato (oxidan el nitrito a nitrato). Ambos grupos se encuentran en suelo y agua. Estn ampliamente distribuidas, pero no en grandes cantidades. Si hay una gran cantidad de amoniaco en el medio, s hay abundancia. Tambin aparecen en otros tipos de ambientes, como en la interfase aerbicaanaerbica de lagos estratificados.

Crecen a PH bsico.

BACTERIAS NITROSOFICANTES

La oxidacin del amoniaco requiere la presencia de O2 en una primera etapa catalizada por la amoniaco-monooxigenasa (AMO), situada en la membrana. Adems, se requieren protones procedentes del NADH. El primer producto es la hidroxilamina. En esta primera fase no se produce energa. La hidroxilamina pasa al periplasma donde se oxida a nitrito, paso catalizado por la hidroxilamina-oxidasa-reductasa (HAO). Como consecuencia de esta oxidacin, se liberan 4 electrones que pasan al citocromo c periplasmtico. 2 electrones pasan a la va ubiquinona, y en la membrana reducen el O 2 a H2O. Los otros 2 electroes restantes viajan a la oxidasa terminal a travs de otro citocromo c situado en la membrana, y este transporte de electrones va a permitir la sntesis de ATP gracias al gradiente protnico que se crea, aunque se genera poca cantidad de ATP. Obtienen el poder reductor a partir de compuestos inorgnicos por un transporte inverso de electrones con gasto de ATP. El o de nitrito a amoniaco es muy alto para reducir el NAD+ a NADH. Las bacterias oxidantes de amoniaco tienen semejanza con las bacterias oxidantes del metano, ya que tienen sistemas de membrana internos.

Nitrosococcus Nitrobacter Nitrosomonas: bacilo. Nitrosolobus: forma lobular. Nitrosospira: espiral muy compacta.

148

BACTERIAS NITRIFICANTES

Oxidan el nitrito a nitrato, provocando acidificacin, ya que producen cido ntrico. Pero, en general, la produccin de nitrato es ms importante a PH alcalino o neutro. Esta oxidacin de nitrito a nitrato se realiza en una sola etapa catalizada por la nitritoxido-reductasa (NOR). Los electrones pasan, en primer lugar, a travs de una cadena corta a un citocromo c para luego llegar a un citocromo terminal ( Cyt aa3), que reduce el O2 a H2O. Se genera un ATP por cada nitrito que se reduce a nitrato. El poder reductor generado se obtiene por transporte inverso de electrones, gastando ATP. El o del par nitrito-nitrato es muy elevado y no puede reducir directamente el NAD+ a NADH. Tienen muy poca cantidad de energa, que se manifiesta en un bajo rendimiento en el crecimiento (se dividen slo una vez cada da). Parece que la mayor parte de estas bacterias pueden crecer tambin de forma quimiohetertrofa.

Nitrobacter Nitrococcus Nitrospira

Es el proceso por el cual se produce la oxidacin anxica del amoniaco . Es una oxidacin altamente exergnica y est ligada al metabolismo energtico de los organismos que lo realizan. Implica la oxidacin de NH4+ con nitrito como aceptor de electrones. El NH 4+ cede los electrones al nitrito, que los acepta dando lugar a nitrgeno gas.

- ANAMOX -

Brocadia anammoxidans: es un ejemplo de bacteria que realiza ANAMOX. Es una bacteria auttrofa y no pertenece a los grupos de bacterias que hemos visto: est separada filogenticamente. Pertenece al filum de un gnero llamado Planctomyces, que da nombre al reino Planctomicetes. Estas bacterias carecen de peptidoglucano y presentan unos compartimentos rodeados de membrana en el interior celular, en los que se encuentra una estructura anloga al ncleo de clulas eucariotas. Esta bacteria tiene un compartimento principal denominado anamoxosoma, donde se produce la reaccin ANAMOX. Este nitrito de la reaccin procede de la oxidacin de amoniaco de las bacterias nitrosoficantes. Tanto bacterias nitrosoficantes como las que realizan la reaccin ANAMOX viven en aguas residuales (ricas en amoniaco). En estos ambientes se encuentran partculas en suspensin con zonas xicas y anxicas.

BACTERIAS OXIDADORAS DEL AZUFRE

149

 Tambin conocidas como bacterias incoloras del azufre para distinguirlas de las bacterias verdes y rojas del azufre . Son quimiolitotrofas: la capacidad de crecer quimiolitotrficamente a expensas de compuestos reducidos del azufre tambin es compartido por arqueas como Sulfolobus. Hbitat: suelos y aguas de PH cidos. Presentan extremada tolerancia al cido. Usan compuestos reducidos del azufre (sulfuros, tiosulfatos, azufre,) como fuente de energa y poder reductor. Otros utilizan hierro como donador de electrones. Las que son quimiolitotrofas facultativas pueden utilizar tambin compuestos orgnicos. Pueden fijar el CO2 por el ciclo de Calvin. Las hay facultativas, utilizando azcares, por lo que no siguen el ciclo de Calvin. No todas las bacterias oxidadoras del azufre son aerobias estrictas: algunas son anaerobias facultativas.

Thibacillus: bacilo con flagelacin polar. Cuando forma azufre a partir de tiosulfato, lo deposita fuera de la clula. Thibacillus ferrooxidans: oxida tanto hierro como azufre. Thiobacillus denitrificans: utiliza nitrato como aceptor final de electrones. Thiomicrospira: bacilo pequeo con flagelacin anfitrica. Deposita azufre fuera de la clula y es un quimiolitotrofo estricto. Thiospira: espirilo grande con flagelacin anfitrica que acumula azufre dentro de la clula.

Dependiendo del tipo de microorganismo, pueden utilizar un compuesto u otro reducido del azufre. Tiosulfato S2O3-2 Sulfuro Sulfito S2 SO3-2

El sulfuro es oxidado hasta sulfito mediante la sulfuro oxidasa. El sulfito puede oxidarse a sulfato de dos formas para producir ATP: 1) Mediante la sulfito-oxidasa: permite la liberacin de 2 electrones, que se transfieren a una CTE para obtener ATP por fosforilacin oxidativa. Esta va metablica se presenta en todas las bacterias de este grupo. 2) El sulfito reacciona con AMP en una primera etapa, donde se liberan 2 electrones y se forma adenosn-fosfosulfato (APS). Es una reaccin catalizada por la APSreductasa. Estos 2 electrones liberados van a la CTE y se forma ATP por fosforilacin oxidativa. Estos electrones son transferidos al oxgeno a travs de un sistema de citocromos. Tambin se obtiene ATP por fosforilacin a nivel de sustrato a travs del adenosn-fosfosulfato. Esta va solo se ha detectado en pocas especies del gnero Thiobacillus. 150

El tiosulfato se rompe en sulfito y azufre elemental. El sulfito pasa a sulfato con sntesis de ATP. El otro tomo de azufre del tiosulfato se convierte en azufre elemental insoluble, pero que, a su vez, puede ser oxidado cuando la concentracin de tiosulfato es muy baja o inexistente. Tanto sulfuros como azufre elemental pueden reaccionar con grupos sulfhidrilos celulares, como los del glutatin. Estos complejos pueden ser tambin oxidados para convertirse en sulfito. En cualquier caso, al producirse protones, se reduce el PH del medio, incluso por debajo de 1, debido al sulfhdrico. Los electrones generados en la oxidacin pasan a una CTE. Van entrando por distintos puntos dependiendo del o del compuesto que cede los electrones. Estos electrones llegan al oxgeno, que se va a reducir a agua. Tambin se produce la sntesis de ATP por ATPasas de membrana. Para fijar CO2 hace falta ATP y poder reductor. El NADH se obtiene por transporte inverso de electrones. El CO2 se fija por el ciclo de Calvin.

BACTERIAS HIDRGENO

OXIDADORAS

DEL

No constituyen un grupo taxonmico. Pueden ser Gram+ o Gram-. La nica que es oxidadora del hidrgeno obligada es Hydrogenobacter: se trata de un bacilo alargado, que puede ser mvil o inmvil.

Hydrogenobacter thermophilus: inmvil. H. subterraneus: mvil.

H. acidophilus: mvil. Todas las dems son mixotrofas o auttrofas facultativas. Si utilizan CO2, lo hacen por el ciclo de Calvin. Probablemente cambian su metabolismo para garantizar sus requerimientos nutricionales. La concentracin de hidrgeno no muy elevada en ambientes con oxgeno. Se trata de bacterias que viven en ambientes xicos: el hidrgeno proceder de ambientes anxicos prximos o ambientes aerbicos. Tambin por esto, en cuanto a requerimiento de oxgeno, la gran mayora son microaerfilas. Poseen una hidrogenasa capaz de captar el H2 del ambiente y oxidarlo hasta H + y electrones. Suele tener nquel como factor metlico, y es sensible a altas concentraciones de oxgeno. Algunas tambin fijan nitrgeno (nitrogenasas).

La mayora poseen una hidrogenasa particulada en la membrana, como es el caso de ciertas cepas de Pseudomonas (P. carboxydovorans). Est acoplada a una CTE y los electrones van a pasar a una quinona y una serie de citocromos hasta llegar al oxgeno, que 151

se reduce a agua. Se obtiene ATP por fosforilacin oxidativa. Necesitan un transporte inverso de electrones para obtener poder reductor. Cepas de Alcaligenes, como A. eutrophus, adems de tener hidrogenasas particuladas, tambin presentan una hidrogenasa soluble en el citoplasma, que le permite reducir el NAD+ a NADH. Este NADH va a ser utilizado en el ciclo de Calvin para fijar CO 2 o se reoxida para desviar los electrones desde el NAD+ hasta la CTE y as obtener ATP. Hay cepas de Nocardia que slo presentan hidrogenasas solubles. Si las 2 hidrogenasas de un microorganismo realizan la misma reaccin, esto aporta una ventaja. Una explicacin se basa en las actividades diferenciales de estas 2 enzimas cuando la concentracin de hidrgeno vara: Si la PpH2 es baja: la hidrogenasa soluble no funciona en el sentido correcto. En esta situacin no se puede reducir el NAD+ a NADH. El crecimiento va a depender de la hidrogenasa particulada, que produce los electrones para la sntesis de ATP y la reduccin del NADH por transporte inverso de electrones. Si la PpH2 es alta: se evita el grasto de energa que supone la formacin de NADH por transporte inverso de electrones. Utilizan la hidrogenasa soluble, que es una adaptacin especfica al crecimiento a elevadas PpH2.

Tambin pueden oxidar Mn, y muchas de ellas incluso azufre. Oxidan Fe+2 (ferroso) a Fe+3 (frrico): es una reaccin que suministra poca cantidad de energa, por lo que necesitan utilizar grandes cantidades de hierro. El Fe +3 en el agua forma precipitados que son muy insolubles. La mayora son acidfilas estrictas. A PH neutro, en ambientes con oxgeno, el Fe+2 espontneamente se oxida a Fe+3, forma que no puede ser utilizada. A PH cido, que es donde viven, el Fe+2 s es estable frente a la oxidacin qumica. El hierro tiene un o altsimo: obtiene muy poca energa. El potencial es muy alto y, por tanto, la cadena es muy corta hasta el oxgeno. Es necesario el transporte inverso de electrones para obtener poder reductor. Se sugiere que para obtener ATP utilizan incluso el gradiente de protones preexistente en el medio.

BACTERIAS OXIDADORAS DEL HIERRO

Thiobacillus ferrooxidans: CTE muy corta. Tiene una protena periplasmtica que contiene cobre llamada rusticianina. Siderocapsa: cocos en agrupaciones con forma de ttrada. Siderococcus Ochrobium: bacilo con 2 flagelos de distinta longitud.

BACTERIAS CARBOXIDOTRFICAS
152

Tambin llamadas carboxidobacterias.

 Son capaces de oxidar CO a CO2. En esta oxidacin participa la CO-Dhasa, que contiene molibdeno. Presentan un crecimiento quimiolitotrfico, utilizando CO como fuente de carbono y energa. Pueden ser Gram- o Gram+. En realidad algunas son bacterias del hidrgeno que pueden crecer tambin sobre CO como fuente de energa, cediendo los electrones a una CTE empleada en la sntesis de ATP. El consumo de CO por estas bacterias es importante desde el punto de vista ecolgico. Aunque se genera mucho CO por la actividad humana, el nivel apenas ha variado gracias a la proliferacin de estas bacterias, que son el principal sumidero de CO de la naturaleza. Son facultativas.

Pseudomonas carboxidovorans Alcaligenes carboxydus Bacillus schlegelii

Son Gram-, acuticas, microaerfilas y muy diversas en morfologa y metabolismo. Presentan la peculiaridad de que su movimiento (flagelar) y su direccin estn influidas por el campo geomagntico.

BACTERIAS MAGNETOTCTICAS

Aquaspirillum magnetotacticum (Magnetospirillum magnetotacticum): es una bacteria quimioheterotrofa que utiliza el oxgeno como aceptor final de electrones, y a veces incluso el nitrato. Es microaerfila y presenta flagelacin lofotrica.

Tienen la capacidad de transformar el Fe+3 extracelular en el mineral magnesita (Fe3O4). Entonces forma unas partculas llamadas magnetosomas en el citoplasma, de 5-40 partculas. En un campo magntico, orienta su eje longitudinal segn la lnea N-S. La magnetotaxis es considerada como una respuesta primitiva de comportamiento. Los fenmenos magnticos se han estudiado utilizando estas bacterias como modelos de organismos superiores.

TEMA 24: BACTERIAS GEMANTES Y/O CON APNDICES

Gram-. Quimioheterotrofas. Sobre todo marinas. 153

Tienen de peculiar que poseen prosteca, que es un tipo de apndice. Se trata de una extrusin citoplasmtica acompaada de pared celular. Si presenta funcin reproductora se denomina hifa (Hyphomicrobium). En el extremo de esa hifa se forma una yema, se produce un tabique transversal y se forma otra hifa. En otros casos, est relacionada con la absorcin de nutrientes. Aumenta la superficie celular y, por tanto, la capacidad para captar nutrientes ( Caulobacter). Se unen formando estructuras en forma de roseta gracias a una especie de botn de anclaje que tienen en el extremo, o se sujetan a un sustrato inerte. Generalmente habitan en ambientes oligotrficos. En otros casos, se trata de prostecas cortas, que aumentan la relacin s/v, por lo cual aumentan tambin la capacidad de flotacin para las bacterias acuticas.

Stella: plana, similar a una estrella. Prostecomicrobium: ms esfrica. Tambin forma yemas, que salen del cuerpo.

Existen algunas bacterias con prosteca, como Caulobacter y Asticcacaulis que no geman. Tienen un ciclo vital con divisin desigual o asimtrico , que da lugar a 2 tipos de clulas distintas: Una inmvil con prosteca: puede dividirse. Una mvil, flagelada y sin prosteca: es nadadora. No puede dividirse hasta que no pierde el flagelo y desarrolla la prosteca. El tamao de la prosteca est relacionado con las condiciones ambientales: es corta en ambientes con bajas concentraciones de nitrgeno y forma pednculos largos a bajas concentraciones de fsforo. Muchas tienen discos o botones de anclaje en el extremo o en otra parte. Forman un material adhesivo que les permite adherirse a sustratos slidos, entre s o a la pared celular de otros microorganismos.

BACTERIAS CON PROSTECA

- GEMANTES -

Pueden formar yemas en el extremo de la prosteca. Hyphomicrobium: metilotrofa facultativa. Crece mejor con compuestos de un carbono que con aminocidos o azcares. Hyphomonas. Pedomicrobium. Stella. Prosthecomicrobium. Ancalomicrobium: forma de ancla. Puede tener ms de 2 prostecas.

- NO GEMANTES -

Se dividen por fisin binaria desigual. 154

 Caulobacter: forma de bacilo ms o menos vibroide. Forma el disco adhesivo en el extremo de la prosteca. Asticcacaulis: bacilo con disco adhesivo, pero no en el extremo de la prosteca.

A veces forman un tallo o pednculo no celular. Son estructuras filamentosas no vivas, producidas por una secrecin continua de materiales polisacardicos en una zona concreta de la superficie.

BACTERIAS SIN PROSTECA

- GEMANTES Plantomyces: bacteria que forma un tallo constituido por fibrillas ms o menos rectas. Tiene forma de pera, globular, con flagelacin subpolar. Ese gran pednculo tiene un disco adhesivo en su extremo. No tiene peptidoglucano y su pared celular es de tipo S. Esta bacteria tiene una compartimentalizacin interna bastante desarrollada, particular y diferente al resto de procariotas. Pasteuria: no tiene tallo. Carece de peptidoglicano, pero presenta una glucoprotena rica en glutmico.

- NO GEMANTES Gallionella: tiene tallo. Presenta filamentos helicoidales (3-40) que estn terminados con un botn de anclaje. Este tallo presenta incrustaciones de hidrxido frrico coloidal. Es una bacteria quimiolitotrofa facultativa que obtiene energa de la oxidacin de hierro y manganeso. Fija el CO2 por el ciclo de Calvin. Habita en ambientes ricos en hierro, y se asocia muchas veces a bacterias envainadas. Son ambientes con PH neutro, en el cual el hierro, en presencia de oxgeno, se oxida espontneamente. En las interfases aerbica-anaerbica vamos a encontrar a esta bacteria junto a bacterias envainadas. En aguas a PH cido sern reemplazadas por Thiobacillus (bacteria acidfila estricta). En general, este grupo de bacterias est relacionado filogenticamente con bacterias rojas no del azufre, excepto Plantomyces y Pasteuria. Caulobacter e Hyphomicrobium pertenecen al grupo de las -proteobacterias.

BACTERIAS ENVAINADAS

Bacterias quimioheterotrofas Gram-. Inicialmente, cuando comenz su estudio, se pens que eran bacterias quimiolitotrofas, pero no acoplan la reaccin de oxidacin de compuestos inorgnicos para obtener energa. Llevan a cabo reacciones catalizadas por ciertas protenas de la vaina que conducen al depsito de xidos metlicos encima o dentro de la vaina. Aerobias: sin embargo, habitan en la interfase aerobia-anaerobia.

155

 Acuticas: crecen formando cadenas de clulas encerradas en vainas tubulares , constituidas por protenas, lpidos, polisacridos. No presentan peptidoglicano en la vaina. En la fase de crecimiento activo forman cadenas envueltas por una vaina, pero cuando hay dficit nutricional (fase estacionaria) salen de las vainas pasando a formas unicelulares (bacilos mviles por penachos de flagelos en posicin subpolar). Cuando hay alimento, pierden el flagelo y forman cadenas tras unirse a un objeto slido.

Sphaerotilus natans: vive en aguas muy contaminadas. Leptothrix: habitante de agua dulce no contaminada, pero rica en minerales, con alto contenido en hierro o manganeso.

Son -proteobacterias.

Bacterias Gram- quimioheterotrofas. Aerbicas. Algunas son, desde el punto de vista morfolgico, similares a las cianobacterias. En muchas ocasiones se las considera como homlogas no fotosintticas. Se mueven por deslizamiento, caracterstica bastante extendida entre las bacterias Gram-, aunque hay algunas Gram+ pero son muchas menos. El deslizamiento no es igual en todos los casos: Rotacin sobre el eje axial (girando). Reptacin: manteniendo slo un lado de la clula en contacto con la superficie. En general, el deslizamiento es mucho ms lento que el movimiento flagelar: la velocidad con el deslizamiento es absolutamente dependiente de la longitud de la clula (a mayor longitud, mayor velocidad). Se han postulado varias hiptesis sobre el mecanismo que permite este deslizamiento, y se ha concluido que existen al menos 2 mecanismos implicados: 1. Mecanismo presente en Cytophaga : Consiste en un deslizamiento por 2 juegos de partculas de naturaleza proteica, uno de los cuales est situado en la membrana citoplasmtica y el otro en la membrana externa. Ambos juegos estn engarzados entre s, probablemente a nivel del peptidoglucano. Estas protenas de la membrana citoplasmtica se mueven a expensas de un potencial de membrana o bien de un gasto directo de ATP. 2. Mecanismo presente en Myxococcus : Es un deslizamiento por la secrecin de una sustancia qumica mucosa a travs de unos poros especiales de la superficie celular que afectan a las fuerzas de tensin superficial entre la clula y la superficie slida. 156

BACTERIAS DESLIZANTES FOTOSINTTICAS

NO

- NO FRUTESCENTES No forman cuerpos fructferos. Son acuticos, aunque algunas actan como comensales viviendo en las mucosas. 3 rdenes, una familia y otros gneros, dependiendo del contenido en %G+C:

ORDEN I: CYTOPHAGALES
FAMILIA CYTOPHAGACEAE
La mayora son formas unicelulares, a excepcin de Saprospira que es filamentosa. %G+C = 30-50. Ocasionalmente presentan pigmentos del tipo carotenoide, responsables del color de las colonias. Presentan propiedades nutricionales importantes: pueden hidrolizar y crecer a expensas de diversos polisacridos (quitina, agar, celulosa). Hbitat: agua, suelo.

Cytophaga: bacilo bastante largo y delgado que produce enzimas que degradan compuestos como la celulosa, agar o quitina. Estas enzimas estn unidas a la pared celular, no son secretadas al exterior. Se adhieren a la fibra de celulosa. Hay especies que son patgenas de peces y otras son patgenas de Flexibacter. Sporocytophaga: junto con Cytophaga son los principales responsables de la degradacin de celulosa en ambientes xicos. Producen microcistes, que son formas de resistencia. Flexibacter: bacilos estrechos y delgados, que se encuentran aislados o formando cadenas cortas. Muchas especies son parsitas de peces de agua dulce. Saprospira: bacteria filamentosa helicoidal.

ORDEN II: LYSOBACTERALES

FAMILIA LYSOBACTERIACEAE
%G+C = 69-71.

Lysobacter: produce enzimas lticas extracelulares capaces de degradar el peptidoglucano de otras bacterias. Es considerado, adems, alguicida y responsable de la destruccin de cianobacterias en las poblaciones naturales.

ORDEN III: BEGGIATOLES

FAMILIA BEGGIATOACEAE
%G+C = 40-55. Formas filamentosas cilndricas intracelulares de azufre. que 157 oxidan sulfuros y forman depsitos

 Hbitat: ambientes ricos en sulfuros (aguas polucionadas, residuales).

Beggiatoa: forma filamentos cilndricos y anchos. Cilindros formados por clulas estrechamente unidas extremo con extremo. Se flexionan y se retuercen estos filamentos formando como mechones. Es mixotrofa, pero algunas cepas son quimiolitoautotrofas (algunas pueden fijar CO2). Se pueden encontrar en las races de algunas plantas como en arroz, que se cultiva en fangos. Oxidan sulfuros y, a cambio, la bacteria se beneficia de la baja PpO2 que la planta tiene en esa zona de la raz. Es una relacin mutualista. Thioploca: bacteria filamentosa, constituida por clulas que forman filamentos largos rodeados por una vaina. Thiothrix: bacteria filamentosa. Formas filamentosas rodeadas tambin de vaina que se agrupan formando rosetas. De los extremos de estas estructuras se pueden liberar gonidios (formas de dispersin). Es una bacteria mixotrofa que vive en ambientes ricos en sulfuros, en sistemas de tratamiento de fangos residuales y en corrientes de agua ricas en azufre. Requieren sulfuros y compuestos orgnicos como fuente de carbono. El azufre lo depositan en forma de glbulos en el interior de la clula.

OTROS
FAMILIA SIMONSIELLACEAE
Formas filamentosas planas.

Simonsiella: vive en aguas o suelos muy hmedos. Tambin aparece como comensal en la cavidad oral del hombre y otros animales.

OTROS GNEROS
Son gneros que no encajan en los grupos anteriores.

Vitreoscilla: bacterias filamentosas cilndricas, ms o menos rectas. Leucothrix: bacterias filamentosas cilndricas ms o menos rectas. No tienen color y forman filamentos inmviles, que no se deslizan: sin embargo, s lo hacen los gonidios. Habita en el mar, es epfito de algas marinas. Se puede considerar como la versin quimioheterotrofa de Thiothrix. Se unen a los sustratos mediante un disco adhesivo fijador, formando un conjunto en forma de roseta. Se dividen por fragmentacin. Liberan de los extremos de los filamentos unas clulas que se redondean, y que son las que entran en contacto con alguna superficie y las que presentan movilidad por deslizamiento. Los gonidios son formas de dispersin. Cuando aumenta el nmero de gonidios, stos se agregan por atraccin mutua, lo que permite que comiencen a sintetizar el disco fijador y a adherirse a una superficie para constituir las estructuras con forma de roseta. 158

La filogenia de las bacterias deslizantes no fotosintticas no frutescentes es muy diversa. Son -proteobacterias.

BACTERIAS DESLIZANTES FORMADORAS DE CUERPOS FRUCTFEROS

Constituyen el orden Myxococcales, formado por bacterias quimioheterotrofas aerobias, Gram-, con un %G+C cercano al 70%. Bacterias terrestres: presentes en suelos de todo el mundo (bosque tropical, tundra rtica,). Son ms abundantes en las zonas clidas. Ciclo de vida muy notable: para algunos autores es el ciclo de vida ms complejo en los procariotas. La capacidad de deslizamiento la tienen las clulas vegetativas, que son bacilos alargados muy flexibles. Dejan un rastro de limo o material mucoso. El ciclo vegetativo dura mientras tengan la fuente nutritiva, que pueden obtener mediante lisis de otras bacterias. Se dividen por fisin binaria. Forman colonias planas, que se van extendiendo con irregularidades en el contorno. La parte externa est formada por las clulas de las bacterias que se van deslizando sobre el sustrato, dejando el rastro de limo. Las que van detrs lo aprovechan para desplazarse. El deslizamiento es bastante coordinado. Presentan cuerpos fructferos: Es un proceso de esporulacin iniciado cuando se agotan los nutrientes. Es un proceso de diferenciacin bastante complejo, desencadenado por 5 seales distintas. El cuerpo fructfero puede ser pedunculado. Son formas de esporulacin, de clulas inactivas, llamadas mixosporas, que son consecuencia de la transformacin de clulas vegetativas. Son exosporas de resistencia alta, aunque no tanto como las endosporas. La forma, tamao, color, de las mixosporas es variable. Microcistos: mixosporas capsuladas. Cisto: varias mixosporas rodeadas por una pared. Son pluricelulares. Tanto la formacin de microcistos como de cistos tiene carcter sistemtico. Bajo determinadas condiciones, las mixosporas pueden germinar y formar colonias de nuevas clulas vegetativas deslizantes. La formacin de cuerpos fructferos puede ser ventajosa porque estos microorganismos obtienen nutrientes por secrecin de enzimas hidrolticas, y luego tienen que absorber el resultado de esta lisis. Un grupo de clulas puede secretar mayor concentracin de enzimas, lo que les permite degradar ms fcilmente cualquier presa. Las clulas vegetativas pueden convertirse en mixosporas sin pasar por la etapa de cuerpo fructfero mediada por ciertos inductores qumicos. 159

 Metabolismo respiratorio: quimioheterotrofas. Los productos de digestin son pptidos pequeos. La mayora utiliza aminocidos. Las colonias suelen tener color por la presencia de carotenoides, principalmente glucosdicos, que les proporcionan fotoproteccin. Existen 2 grupos de Mixococcales: a) Bacteriolticas: Myxococcus (M. xanthus). Aparecen en suelos, heces de animales, b) Celulolticas: Polyangium (hexosas). Aparecen sobre la materia vegetal en descomposicin. Por las diferencias morfolgicas de la clula vegetativa, la forma de las mixosporas y la estructura de los cuerpos fructferos, se establecen 4 familias: Familia I: Mixococcaceae. Mixosporas redondeadas, esfricas u ovales. Pednculo no siempre presente, dependiendo de la especie. Familia II: Archangiaceae. Mixosporas con forma de bastoncillos. No forman tallos. Familia III: Cystobacteraceae. No siempre forman pednculos. Forman cistos. Familia IV: Polyangiaceae. No tienen pednculo. Mixosporas ovales o con forma de bastoncillos. Son celulolticas, degradan la celulosa y el agar.

Nannocystis: es excepcional porque carece de carotenoides glucosdicos tpicos, y es una bacteria muy frecuente en el suelo. Como muchos actinomicetos, producen geosminas, que es un producto aromtico con fuerte olor terroso, responsable del olor a tierra mojada.

Las 3 primeras familias tienen clulas vegetativas en forma de bacilos delgados y fusiformes; la familia IV presenta clulas vegetativas en forma de bacilos gruesos con extremos redondeados. Desde el punto de vista filogentico, las mixobacterias pertenecen al grupo de las proteobacterias.

TEMA 25: ARCHAEA

160

 Constituyen una divisin distinta de los procariotas: la divisin cuarta o de los Mendosicutes. Presentan una enorme heterogeneidad gentica, que se manifiesta en los bajos valores en los coeficientes de semejanza. Presentan una considerable antigedad: escasa variabilidad a lo largo del tiempo de evolucin. Es a lo que deben el nombre de Arqueas. Segn el Bergey se establecen 5 grupos de Arqueas: I. Arqueas metanognicas. II. Arqueas sulfatoreductoras. III. Arqueas halfilas extremas. IV. Arqueas sin pared celular. V. Arqueas termfilas extremas metabolizantes de azufre .

Nanoarchaea: se descubri en el 2002. Mide 0,4 de dimetro y viven pegados a la superficie de una arquea denominada Ignicoccus por una relacin simbitica. Resulta peculiar por sus ribosomas, ya que son diferentes al de bacterias, arqueas y procariotas, pero son ms similares a las de arqueas.

Caractersticas generales a todas las arqueas: 1. Hbitat: todo tipo (terrestres, acuticas,) pero sobre todo en ambientes extremos. Podemos calificarlos como extremfilos. Algunos son simbiontes. 2. Requerimiento de oxgeno: pueden ser aerobios, anaerobios y anaerobios facultativos. 3. Fuente de carbono y energa: pueden ser quimioheterotrofos, quimiolitotrofos o quimioheterotrofos facultativos. 4. Temperatura ptima de crecimiento: son mesfilas o termfilas. Muchas de ellas son termfilas (viven a temperaturas superiores a 100). 5. Lpidos: presentan una caracterstica exclusiva de arqueas, ya que estn formados por unidades de isoprenil-glicerol unidas por enlaces ter (lo normal en bacterias y eucariotas son glicerolpidos unidos por enlaces ster a cidos grasos). El tomo central de carbono de la molcula de glicerol es esteroisomricamente D en eucariotas y bacterias pero L en arqueas. Las cadenas R o laterales pueden ser en arqueas: Diter: los ms habituales tienen 20 carbonos. A esta cadena se le llama fitano. Tetrater: tienen 40 tomos de carbono y a la cadena se le conoce como bifitano. La presencia de lpidos isoprenil-glicerol con enlace ter puede ser origen de prevalencia en ambientes extremos, ya que el enlace ter es mucho ms estable qumicamente que el ster. 6. Biosntesis de lpidos: sintetizan una baja cantidad de cidos grasos pero una alta cantidad de hidrocarburos en comparacin con bacterias y eucariotas. 7. Envueltas: las arqueas metanognicas muestran gran diversidad de envueltas o paredes celulares. Algunas, como las arqueas metanognicas halfilas extremas y todas las termfilas extremas, presentan unas simples capas superficiales de naturaleza proteica o lipoproteica:

161

 Capa S (capa paracristalina de simetra hexagonal): no es exclusiva de arqueas pero est presente en algunas arqueas metanognicas (Methanospirillum y Methanothrix). Son microorganismos que forman largas cadenas de clulas con espacios entre clula y clula y que est rodeada por una vaina. Envuelta celular rgida: constituida en unos casos por un heteropolisacrido (Methanosarcina, Halococcus) y en otros casos por un anlogo al peptidoglucano, la pseudomurena o pseudopeptidoglucano , presente en el orden Methanobacteriales, dentro de las arqueas metanognicas. Es un polmero de NAG y NAG-talosaminurnico unidos por un enlace (1-3), que es resistente a la lisozima. Todos los aminocidos de las cadenas tetrapeptdicas son del tipo L. La falta de peptidoglucano no es algo que nos sorprende ni est restringida a las arqueas, ya que tambin se da en Pasteuria y Thermomicrobium roseum. El rRNA diferencia en dominios a arqueas, bacterias y eucariotas: las secuencias 5S, 16S y 23S son distintas en arqueas a las de bacterias y eucariotas. Los trabajos de secuenciacin de la subunidad 16S, iniciados por Woese en los aos 80, fueron los que demostraron la separacin filogentica con las bacterias. Por aquel entonces se denominaban eubacterias. El tRNA tambin es diferente. La diferencia reside principalmente en el brazo T: donde las bacterias tienen ribotimidina, las arqueas tienen pseudouridina o 1-metilpseudouridina. Otros nucletidos minoritarios de los tRNA de arqueas tienen caractersticas de eucariotas: el 1-metil-adenosina, presente en eucariotas y arqueas pero no en bacterias. Sntesis proteica: el tRNA iniciador en eucariotas, el metionil-tRNA, es igual que en arqueas, pero en bacterias es distinto. Similitudes entre eucariotas y arqueas: EFII: es igual en arqueas y eucariotas. tRNA: coinciden algunos genes en eucariotas y arqueas. Secuencias de aminocidos de algunas protenas ribosomales. Complejidad de las RNA-polimerasas : en las arqueas son enzimas multimricas complejas similares a las de eucariotas. Las RNA-polimerasas de bacterias son 2-, mientras que en arqueas hay varios tipos de RNA-polimerasas y su estructura es ms compleja que la de las bacterias. En las arqueas metanognicas y halfilas , las RNApolimerasas tienen 8 polipptidos (5 de gran tamao y 3 ms pequeos), mientras que en arqueas hipertermfilas es ms compleja an, y se compone de, al menos, 10 polipptidos distintos. En eucariotas, la principal RNA-polimerasa contiene de 10-12 polipptidos, y sus tamaos relativos se parecen bastante con los de arqueas hipertermfilas. El antibitico rifampicina interfiere de manera especfica con la subunidad de la RNA-polimerasa de bacterias, inhibiendo el crecimiento de bacterias.

162

Es tal el parecido en la maquinaria de traduccin de eucariotas y arqueas que se han podido fabricar ribosomas hbridos (semejanza estructural y semejanza funcional). Un hbrido con una unidad 50S de una arquea y una 40S de una levadura es funcional. Un hbrido con una subunidad 50S de E. coli y una 40S de una levadura no es funcional.

ARQUEAS METANOGNICAS

Determinado grupo de arqueas que, como consecuencia de su metabolismo, generan metano. Son anaerobias estrictas. El metano se produce en la mayora de ambientes anxicos carentes de sulfatos , como por ejemplo: Digestores de aguas residuales: en plantas purificadas de agua, el metano se obtiene como un subproducto. Tracto digestivo de animales: aparecen en enormes cantidades en las termitas. Sedimentos anxicos: charcas y lagunas con abundante material orgnico en descomposicin. En la naturaleza, la produccin de metano a partir de sustancias orgnicas complejas es el ltimo eslabn de una cadena trfica que implica a muchos organismos distintos. El desarrollo de las arqueas metanognicas se limitan a que existan compuestos que puedan utilizar para generar metano ( H y CO2 a la vez, acetato, metanol, formaldehido, frmico,). A pesar de que la produccin de metano est muy extendida, no son tantos los compuestos que pueden ser utilizados para formar metano. La metanognesis es un proceso que depende de estos pocos compuestos de carbono, que a su vez deben ser producidos por otros organismos a partir de materia orgnica compleja.

- DIVERSIDAD DE ARQUEAS METANOGNICAS Existen 5 rdenes atendiendo al rRNA 16S. Son muy variados morfolgicamente: cocos, espirilos, bacilos, que, generalmente, estn aislados pero tambin pueden formar agregaciones como sarcinas. Estructura diversa.

- FORMACIN DE METANO Fuente de carbono: es CO2 bsicamente. Lo utilizan autotrficamente pero algunos catabolizan diversos compuestos de un carbono (formol, metaldehdo,) adems del CO2. Algunos necesitan un aporte exgeno de compuestos orgnicos como el acetato. 163

 Fuente de poder reductor: es, bsicamente, el hidrgeno, aunque pueden ser otros (frmico, CO, Fe0,). Sustratos para generar metano: el principal es el CO 2, aunque no es el nico. Hay 3 clases de sustratos metanognicos: Sustratos del tipo CO2: como el propio CO2, CO y el frmico (HCOOH). Sustratos con grupos metilo: metanol, metilamina. Acetato: a partir del cual se genera metano ( reaccin acetotrfica). Slo lo realizan 2 gneros de arqueas: Methanosarcina Methanothrix Es un proceso importante desde el punto de vista ecolgico, ya que se produce en medios donde no existe competencia excesiva de acetato entre los metanognicos y los organismos reductores del sulfato. Aunque se han identificado muy pocos acetotrfilos, se calcula que aproximadamente 2/3 del metano generado en la metanognesis a partir de fangos activados procede del acetato y slo 1/3 procede del CO2 + H2. Las arqueas metanognicas son especiales tambin respecto a los coenzimas que utilizan, que son exclusivas de este grupo de procariotas y esenciales en la generacin de metano y energa. Estos coenzimas estn presentes en mayores concentraciones que otros coenzimas. Tipos de coenzimas: 1. Portadores de C1: a) Metanofurano (MF): contiene un anillo furansico, que transporta los restos formilo (-HCO) desde el CO2 hasta el siguiente coenzima, que es la metanopterina. b) Metanopterina o tetrahidrometanopterina (MP): estructura similar a la del cido flico. Presenta fluorescencia azul brillante tras absorber luz a 342nm. es el coenzima que acta en el mayor nmero de reacciones de la metilreductasa. c) Coenzima M (CoM): la forma activa es el 2-mecaptoetanosulfnico o ditiodietanosulfnico. Es ms pequeo y la estructura es ms simple. Presenta una enorme especificidad en la reaccin de la metilreductasa. Es un coenzima muy cido y presenta una elevada concentracin de azufre para su tamao molecular. Es el portador del grupo metilo e interviene en el paso final. Existe un anlogo: el bromoetanosulfnico, anlogo estructural y potente inhibidor del CoM. Inhibe el crecimiento de arqueas metanognicas. Como el CoM es exclusivo de estos organismos, el bromoetanosulfnico se utiliza para inhibir especficamente la metanognesis en estudios de degradacin anxica. d) Coenzima F430 (CoF430): presenta una estructura tetrapirrlica con un nquel . Es un coenzima amarillo, soluble y absorbe luz a 430 nm pero no produce fluorescencia. No es estrictamente un transportador C 1 pero cumple un papel importante en el paso final, ya que es un cofactor del sistema metilreductasa , que es el ltimo paso.

164

2. Coenzimas que intervienen en las reacciones de oxidacin-reduccin (donadores de electrones): a) Coenzima F420 (CoF420): es un derivado de la flavina, con una estructura similar al flavn-mononucletido (FMN). La forma oxidada absorbe luz a 420 nm y presenta fluorescencia azul-verdosa. Cuando pasa a la forma reducida pierde el color. Presenta, adems, otras funciones. b) Coenzima 7-mecaptoheptanoiltreoninafosfato (CoB): tiene una estructura similar al cido pantotnico, que es parte del CoA. El CoB interviene, al igual que el CoM, en el ltimo paso, en el sistema metilreductasa. La ruta general de la formacin de metano est mediada por distintos pasos en los cuales intervienen las coenzimas anteriormente dichas. El metanofurano activa el CO2, reducindolo hasta formilmetanofurano. El resto formilo que se ha unido al metanofurano va a ser transferido a la metanopterina. Este resto formilo va a ser deshidratado y reducido en 3 etapas *. HCO Etapa 1 CH Etapa 2 = CH2 Etapa 3 - CH3

Los electrones los dona el CoF420. El resto metilo pasa de la metanopterina al CoM. El metil-CoM, con su resto metilo, se reduce finalmente a metano por accin de la metilreductasa. Es el ltimo paso, en el que participa el CoF430 y el CoB. Adems de metano, se forma un heterodisulfuro, constituido por el CoM y el CoB. Tanto uno como otro quedarn finalmente libres y regenerados. Ser el hidrgeno quien ceda los electrones para que se rompa ese heterodisulfuro. * En las fotocopias slo aparecen 2 etapas.

La fijacin de CO2 es una autotrofa. El CO2 es una fuente de metano y carbono, y se convierte en compuestos orgnicos por la va de la acetilCoA. Las arqueas metanognicas utilizan la va del acetilCoA acoplndola a la va de formacin de metano. Integran estas 2 vas porque comparten intermediarios. Tanto la va de metanognesis como la biosinttica tienen o producen restos metilo: para la biosntesis obtienen los restos metilo para producir acetato a partir de la va metanognica. La metilmetanopterina le va a ceder este resto metilo a la va biosinttica, a travs de una enzima corrinoide (Cor), que contiene un anillo de corrina, similar al de porfirina pero con un cobalto en el centro. Cor va a transferir el resto metilo a la CO-Dhasa, que, previamente, ha reducido el CO2 a CO. Probablemente acoplan ambas vas para ahorrar energa.

- BIOSNTESIS -

- OBTENCIN DE ENERGA -

La ltima parte de la ruta metanognica es la que va a permitir la obtencin de energa. 165

CO2 + H2

CH4 + 2 H2O

En condiciones naturales, la concentracin de hidrgeno es muy baja (Go = -30). Esto implica que se forma poco ATP (slo 1 ATP por cada CO2 que se reduce a CH4), pero se forma ms porque el ltimo paso de la ruta metanognica es un paso de conservacin de energa. El heterodisulfuro (CoM + CoB) se tiene que reducir, y los electrones proceden del F420 (red), procedente, normalmente, del hidrgeno. Esta reaccin de reduccin del heterodisulfuro est catalizada por la heterodisulfuro-reductasa; es una reaccin exergnica, porque est asociada a una expulsin de protones a travs de la membrana. La metanofenacina (MPH) es un transportador de electrones de la membrana que capta los electrones del F420 y se los cede al heterodisulfuro, que, finalmente, se los cede a la heterodisulfuro-reductasa. La formacin de metano dentro de la clula va a actuar a manera de sumidero de protones. Esto permitir la formacin de una fuerza protomotriz que favorece la formacin de ATP. Si se interrumpe la formacin de metano, estas arqueas pueden seguir viviendo, ya que la formacin de metano no es indispensable para formar ATP. Parece ser que todas las arqueas metanognicas son universalmente capaces de utilizar el azufre como aceptor final de electrones (Reaccin del azufre). Cuando crecen en presencia de azufre, muchos cesan virtualmente la produccin de metano, pero otros no. Cuando crecen en presencia de compuestos con restos metilo, adems de actuar la bomba de protones, acta tambin una bomba de sodio en la membrana, que es necesaria para la carboxilacin del metanofurano en la metanognesis.

Estn localizadas al final de una cadena trfica en los ambientes anaerobios, donde los compuestos pueden proceder tanto del metabolismo de microorganismos anaerobios como de la degradacin de la biomasa de organismos aerobios y anaerobios que llegan a esos ambientes. La produccin de metano requiere la participacin de muchos microorganismos anaerobios, capaces de degradar celulosa, hemicelulosa, lignina, a CO2, acetato, etc. que ya pueden ser utilizados por las arqueas metanognicas. En plantas de tratamiento de aguas residuales y pozos resulta rentable la produccin de metano y la obtencin del gas natural. El paso limitante a la hora de formar metano en estos ambientes no es la falta de CO 2, ya que es muy abundante tanto en los carbonatos como disuelto en agua. Tan pronto haya hidrgeno en el ambiente pueden prosperar las arqueas metanognicas, siempre que no haya sulfatos, ya que entonces creceran las bacterias sulfatoreductoras. El metano es un gas escasamente soluble en agua, por lo que no se disuelve y se escapa del ambiente anxico. Parte de este metano biognico escapa a la atmsfera, donde es oxidado fotoqumicamente hasta CO2, con un valor de vida media de 3-6 aos. El resto del metano no llega a la atmsfera, porque, conforme vaya subiendo la columna de agua, va a pasar a un ambiente aerobio, y ser rpidamente utilizado por organismos 166

- HBITAT -

metanotrofos. La interfase aerobia-anaerobia es una zona de gran concentracin de microorganismos. La metanognesis tiene un lado positivo y otro negativo: Positivo: es de gran importancia econmica, porque el metano es un combustible de quemado limpio y una fuente de energa muy buena. Gran parte del gas natural es metano. Por unidad de energa producida es la energa ms limpia y menos contaminante. Negativo: Ocasiona un problema ecolgico importante: el cambio climtico y el calentamiento global. El metano, cuando es irradiado por la luz infrarroja, acta como un gas invernadero. La concentracin de metano ha ido aumentando en los ltimos aos. Los metangenos pueden oxidar el Feo para generar metano y obtener energa, por lo que pueden ocasionar corrosin en materiales enterrados o sumergidos en condiciones anaerbicas (tuberas,).

Aerobias y quimioheterotrofas. Algunas cepas del gnero Halobacterium tambin pueden crecer en condiciones anxicas fermentando o llevando a cabo respiracin anaerbica. Normalmente llevan a cabo respiracin aerbica empleando habitualmente aminocidos y cidos orgnicos, aunque tambin pueden emplear azcares. En el Bergey, aparecen en la seccin IV. Viven en ambientes hipersalinos (salinas, lagos salados, salmueras,). Las manchas en el pescado seco y las pieles tratadas con sal se deben a ellos. No son patgenos. Son responsables del color rojo o prpura-rojizo de las salinas. No son los nicos que viven en ambientes hipersalinos:

ARQUEAS HALFILAS EXTREMAS

Dunaliella: alga fototrofa oxignica, casi el nico que puede encontrarse en este ambiente. Ectothiorhodospira: bacteria roja que predomina en lagos muy alcalinos.

En ambientes hipersalinos abundan tambin los sulfatos: habr bacterias sulfatoreductoras (producen sulfuros, que permiten que puedan desarrollarse bacterias del azufre). No viven plantas pero viven animales como Arthemia salina, moscas de la salmuera, y microorganismos procariotas a parte de arqueas, como bacterias halfilas (Halobacteroides, Haloanaerobium,).

- MORFOLOGA -

Presentan una morfologa variada, que puede ser: Formas inmviles (Halococcus). 167

 Bacilos mviles con un flagelo polar (Halobacterium). Requerimientos nutricionales: necesitan 1,5-2,5M de NaCl como mnimo. La concentracin ptima oscila entre 3-4M. Requieren una alta concentracin de sodio y magnesio, que es muy alta comparada con otros microorganismos (0,025M). Adems, la concentracin de sales interna es mayor que la externa, y de distinta composicin. Estos organismos no es que toleren altas concentraciones de NaCl, sino que la necesitan, ya que sus componentes celulares lo requieren. Sus enzimas requieren altas concentraciones de potasio, y son enzimas muy cidas. En resumen, requieren: Altas concentraciones de potasio intracelular y de sodio extracelular . Que la concentracin de potasio intracelular sea mayor que la de sodio extracelular. Adems, el sodio no puede ser sustituido por otro similar. La pared de Halobacterium necesita sodio, y si no lo obtiene, la pared puede romperse. Contiene glucoprotenas, que presentan altas concentraciones de aminocidos cidos. Las cargas negativas de estos aminocidos cidos resultan de algn modo estabilizadas por el sodio. Los solutos compatibles contrarestan la tendencia de la clula a perder agua. La bacteria los sintetiza y se acumulan sin modificar el metabolismo celular.

Halobacterium: presentan una organizacin genmica bastante peculiar, que se compone de una alta proporcin de DNA repetido, plsmidos grandes que contienen del orden del 25-30% de todo el material gentico de la arquea. El %G+C del plsmido (57-60%) es distinto al del DNA cromosmico (66-68%). Vive en medios que para otras clulas seran altamente estresantes, y no generan solutos compatibles. Evita la prdida de agua bombeando potasio del exterior al interior, con gasto de energa. Emplean un in inorgnico a modo de soluto compatible. La mayora presenta metabolismo respiratorio estricto, pero algunas cepas, como H. salinarium, pueden generar ATP por una fotofosforilacin diferente, pero que no deja de ser fotofosforilacin. Carecen de clorofilas y bacterioclorofilas. En condiciones de escasa aireacin, sintetizan e insertan en la membrana una cromoprotena llamada bacteriorodopsina, que es capaz de captar la luz. Caractersticas de la bacteriorodopsina: Semejanza estructural y funcional con la rodopsina (pigmento del ojo de animales). Se compone de 248 aminocidos que forman 7 cadenas que se disponen formando un poro al atravesar la membrana. Presenta una parte proteica y un cromforo. Contiene un carotenoide de 20 tomos de carbono denominado retinal, que es la parte responsable de absorber luz y catalizar el paso de electrones por la membrana. 168

 La membrana es de color prpura en condiciones de baja aireacin debido al retinal; en condiciones normales es de color anaranjado. El ltimo aminocido es la Lys. El grupo amino es el que va a reaccionar con el grupo amino del retinal. La bacteriorodopsina absorbe la luz y el retinal pasa de trans a cis. A la vez que hace eso, se transfiere un protn fuera de la membrana y vuelve a la forma trans, que es la configuracin estable. La salida de protones provoca un acmulo de protones fuera de la membrana, hasta que la membrana est lo suficientemente cargada como para dirigir la sntesis de ATP por una ATPasa de membrana. Aunque pueden generar ATP cuando las condiciones de aireacin son escasas, no crecen, porque necesitan oxgeno para formar el retinal, pero les permite mantenerse vivos. La PpO2 suele ser menor de 0,2 mg/l en aguas salinas. Esta fosforilacin tambin es responsable de la salida de sodio fuera de la clula, ya que es un sistema antiporte que permite la salida de sodio mientras que entra potasio. La entrada de aminocidos a la clula est dirigida por la luz indirectamente porque el aporte de aminocidos tiene lugar por la incorporacin de sodio mediante un sistema simporte. Debe retirarse a la vez sodio del interior. La membrana prpura se emplea, al ser fotocrmica y reutilizable, para el almacenamiento hologrfico de informacin. Halobacterium tiene 4 rodopsinas: a) Bacteriorodopsina: impulsa la salida de protones para sintetizar ATP. b) Halorodopsina: utiliza la luz para transportar cloro al interior. El potasio debe estar equilibrado con el cloro. c) Fotoreceptor de luz roja que le sirve para situarse a un nivel adecuado de luz. d) Fotoreceptor de luz azul.

ARQUEAS TERMOACIDFILAS

Todas son termfilas pero no todas acidfilas.

TEMA 26: ACTINOMICETOS

Bacterias Gram+ y quimioheterotrofas. 169

 Morfologa filamentosa: tienden a formar hifas y micelios. Presentan un crecimiento ramificado. Myces = hongo. Los menos evolucionados tienen un desarrollo micelial incompleto , presente slo en el crecimiento activo. Los ms evolucionados presentan 2 tipos de micelio: Micelio de sustrato (rizoides). Micelio fuera del sustrato (areos). Si presentan esporas, stas se sitan en el extremo de los micelios areos. En un corte transversal de una colonia , podemos ver al mismo tiempo las distintas fases de esporulacin: Centro: zona de inicio de la colonia, donde existe una privacin de nutrientes y esporas maduras. A medida que nos alejamos del centro: distintas fases de maduracin de esporas. Superficie: nutrientes, esporas. La mayora son inmviles: si hay movimiento, se limita a las esporas flageladas (zoosporas). Pared celular: existe una enorme variedad, ms de 60 tipos distintos de paredes celulares dependiendo del tercer aminocido, presencia o ausencia de puentes interpeptdicos, azcares, El tipo de pared tiene carcter sistemtico. %G+C: margen reducido (63-78%). Los que se encuentran cerca del 78% tienen el %G+C ms alto conocido entre las bacterias. Reproduccin asexual: por crecimiento apical de las hifas mediante esporas asexuales. Conidiosporas. Esporangiosporas. La esporulacin se produce por formacin de tabiques. La esporulacin est asociada a condiciones de privacin de nutrientes. No son muy resistentes a la temperatura pero s a la desecacin. Son tpicos microorganismos de vida libre en el suelo en general. Participan en la mineralizacin de la materia orgnica. Algunos son patgenos de animales o plantas. Produccin de antibiticos: son bacterias de gran importancia industrial por ser los mayores productores de antibiticos junto con Bacillus y hongos eucariotas. Se dividen en 8 secciones (slo vamos a ver 4).

Tambin aparecen en la seccin XVII. Producen conidiosporas. El gnero ms conocido es Nocardia.

SECCIN I: ACTINOMICETOS NOCARDIFORMES

170

GNEROS NOCARDIA
Morfologa similar a Actinomyces, pero se diferencian en que Nocardia es aerobia y Actinomyces es anaerobia aerotolerante. Micelio areo reducido / Micelio de sustrato fragmentable (utilizado en la reproduccin). Pared celular: poseen cidos miclicos (50-60C), ms cortos que los que presentan las Micobacterias. Utilizan una gran variedad de tomos de carbono y ceras. Cat+ Hbitat: la mayora son saprfitos de vida libre, que aparecen en el suelo y en el agua. Otros son patgenos oportunistas (Nocardia asteroides) que causan en hombres y animales nocardiosis (sintomatologa variada, porque puede afectar a distintos rganos, aunque la ms comn es la nocardiosis pulmonar, que es difcil de tratar, y desde los pulmones pasa al cerebro, piel, articulaciones, corazn,).

Gneros: Geodermatophillus Dermatophillus Frankia Presentan slo micelio de sustrato. Forman esporas a partir de una masa de clulas que se dividen al azar, formndose racimos de esporas. cat+. Aerobios, aunque Dermatophillus y Frankia tienden a ser microaerfilos. Se diferencian a nivel de la velocidad de crecimiento. Geodermatophillus Dermatophillus Frankia

SECCIN II: ACTINOMICETOS ESPORANGIOS MULTILOCULARES

CON

+ velocidad de crecimiento

GNEROS GEODERMATOPHILLUS
Fase filamentosa escasa, muy rudimentaria. El tallo completo es casi todo esporangio. Presenta zoosporas con penachos de flagelos polares.

DERMATOPHILLUS
171

 Formacin filamentosa de moderada a extensa. Las hifas se convierten tambin casi por completo en esporangios multiloculares. Presenta zoosporas.

FRANKIA
Filamentacin muy extensa, con hinchamientos que pueden aparecer en distintas zonas y que finalmente pueden liberarse como esporas inmviles. Hbitat: en races de plantas no leguminosas, formando ndulos (intra o extracelulares) capaces de fijar nitrgeno (por ejemplo, en el Almus,). Existe una relacin especie de Almus especie de Frankia . El proceso de fijacin de nitrgeno es similar al de Rhizobium. La nitrogenasa es tambin sensible al oxgeno y se protege en vesculas o zonas hinchadas de las plantas.

Gneros: Actinoplanes Micromonospora Micelio a menudo pigmentado, ramificado y tabicado, que no se segmenta, y escaso micelio areo. Hbitat: suelo (muchos tipos de suelo diferentes), agua dulce, marina, degradacin de materia orgnica,

SECCIN III: ACTINOPLANETOS

GNEROS ACTINOPLANES
Presenta esporangios que surgen del micelio de sustrato y se forman por un crecimiento y enrollamiento del micelio. Son zoosporas. Aerobios estrictos.

MICROMONOSPORA
Se encuentra en este apartado porque su rRNA 16S es similar al de Actinoplanes y otros gneros, pero no tiene el mismo desarrollo. No tienen esporangios. Aerobios estrictos, excepto alguna cepa que es anaerobia y fermenta celulosa.

SECCIN IV: ESTREPTOMICETOS

El gnero principal es Streptomyces.

GNEROS
172

 STREPTOMYCES
Ms de 500 especies, todas muy relacionadas (%G+C oscila entre 69-73%). Morfologa: micelio areo y de sustrato no fragmentable. Filamentos de dimetro de 0,5-1 , longitud indefinida y que a menudo carecen de paredes celulares transversales. Crecimiento: a partir de extremos de los filamentos. Suelen ir acompaados por ramificacin. Forman colonias muy compactas, enroscadas y muy pegadas al sustrato. Los filamentos areos se denominan esporforos, y se proyectan por encima de la superficie de la colonia. Esporas inmviles que se sitan en los extremos de las hifas areas ( conidiosporas). Se producen por la formacin de tabiques en los esporforos multinucleados. La forma de las esporas (lisa, con pelos, verrugosa) y su disposicin son caracteres sistemticos. Las esporas suelen estar pigmentadas, dando color a la colonia. Otras veces el color de la colonia se debe al color de los micelios. El aspecto compacto y el color de la colonia hacen que sea fcil identificarlas. Nutricionalmente, son microorganismos muy adaptables, con pocos requerimientos. Emplean muchos compuestos (aromticos, aminocidos, azcares ,) incluso otros compuestos difcilmente utilizables por otros microorganismos ( caucho, queratina, peptina, taninos, lignina, ltex, ), para lo que tienen enzimas especiales que degradan estos compuestos. Son aerobios estrictos. El crecimiento en cultivo lquido se estimula por una aireacin forzada. Slo veremos esporulacin si no se agita el medio, o si el medio es slido. Salvo excepciones, no son patgenos.

Streptomyces scabies: produce la roa de la patata. S. somaliensis: en el hombre, produce una enfermedad llamada actinomicetoma, que es una enfermedad cutnea que conduce a la formacin de abscesos, infecciones, descalificacin sea, si no se trata. S. albus: se ha aislado en pacientes con diversas dolencias y puede ser patgeno.

Hbitat: viven principalmente en suelos alcalinos y neutros, que son ms favorables para su desarrollo que los suelos cidos. El olor terroso de los suelos se debe a metabolitos denominados geosminas, producidos entre otros por actinomicetos. Las geosminas son compuestos que forman anillos no saturados de carbono, oxgeno y nitrgeno. Aislar estos microorganismos es fcil: se diluye una muestra de suelo con agua estril, se pone en un medio y se incuba a 25C durante una semana.

Aproximadamente el 75% de los antibiticos conocidos son producidos por actinomicetos, y especialmente por el gnero Streptomyces. Las colonias adyacentes a estas bacterias suelen morir por estos antibiticos.

- PRODUCCIN DE ANTIBITICOS -

173

Se llevan a cabo numerosos estudios por su importancia mdica. Se han encontrado miles de sustancias con efecto antibitico (se descubren unas 300 al ao). La mayora no son tiles porque no son selectivamente txicas y afectan a organismos vivos. Slo se utilizan unas 50 de todas las que se han descubierto. Algunos microorganismos producen varios antibiticos distintos, que pueden no tener relacin qumica entre ellos.

S. griseus: gran productor de antibiticos, que produce al menos 40 tipos diferentes.

Un cambio nutricional puede causar un cambio en la naturaleza del antibitico producido. Son resistentes a sus propios antibiticos, pero pueden ser sensibles a los producidos por otros Streptomyces. Se han encontrado varias especies que contienen plsmidos lineales de unas 500 pb, que contienen a veces genes responsables de la biosntesis de antibiticos. El desarrollo de cepas resistentes obliga a la bsqueda de otros antibiticos. A pesar del enorme trabajo de investigacin, y de que la industria farmacolgica es una industria millonaria, se conoce muy poco sobre las razones ecolgicas de la produccin de antibiticos en Streptomyces. La produccin de antibiticos est relacionada con la esporulacin, y podra darse para inhibir el crecimiento de otros microorganismos que compiten por los nutrientes. Los antibiticos son metabolitos secundarios que slo se producen en fase estacionaria.

TEMA 27: CARACTERES GENERALES DE LOS VIRUS

Los virus no son ni organismos ni microorganismos, ya que no tienen ni organizacin ni estructura celular. Son entidades biolgicas; microprotenas con cierta capacidad replicativa pero que dependen de clulas. En el siglo XIX, el concepto de virus se aplicaba a bacterias y, en general, a todo lo que causase enfermedades. Ms tarde se descubriran por primera vez por Ivanowsky y se estudiaran mejor por Beijerinck. Los llamaron virus filtrables, aunque hoy en da se sabe que todos los virus son filtrables. En 1892, Ivanowsky incluy la existencia de virus estudiando la enfermedad del mosaico del tabaco. Vio que se poda transmitir esta enfermedad por los extractos biolgicos de una planta a otra, incluso despus de filtrarlo para eliminar bacterias. Dedujo que exista un agente filtrable responsable de la enfermedad. Ahora sabemos que tambin podra haber sido causa de exotoxinas. 174

BLOQUE IV. INTRODUCCIN A LA VIROLOGA

Beijerinck repiti esos experimentos y demostr que si fuesen exotoxinas y cogiese una planta enferma e inoculase sus extractos filtrados a otra planta, si volvisemos a filtrar exudados a plantas sucesivas, se producira la infeccin pero cada vez con menos potencia, ya que la concentracin de la exotoxina ira disminuyendo. En el caso de los virus, la potencia va aumentando porque el virus se va replicando. Es a Beijerinck y no a Ivanowsky a quien se debe el descubrimiento de los virus. ste los denomin como flujo biolgico vivo, ahora llamados virus. En 1915, Twort y dHerelle vieron que estos agentes tambin producan daos en las bacterias (bacterifagos). En 1898, Loeffler y Frosch descubrieron el virus de la fiebre aftosa o glosopeda, que afecta a animales domsticos. Todos estos estudios pusieron en evidencia que la presencia de virus est asociada a enfermedades, por lo que los virus son siempre patgenos, ya que necesitan a la clula para replicarse.

CARACTERSTICAS DE LOS VIRUS

Los virus son los elementos genticos ms distribuidos en la naturaleza . Son entidades con gran xito biolgico. Presentan un ciclo de vida con 2 fases: 1. Extracelular: Donde es una partcula inerte con capacidad infecciosa (virin). Se compone de: Proteccin proteica o cpsida proteica. cido nucleico viral. Envoltura con lpidos y protenas (puede estar presente o no). Juntas forman la nucleocpsida

La cpsida proteica est formada por capsmeros. 2. Fase de provirus o profago: Cuando el virin entra en la clula, ya se denomina provirus (clulas) o profago (bacterias). Sintetizan los capsmeros para comenzar su replicacin. Tanto la replicacin, transcripcin como la traduccin la realizan a expensas de la clula. Son parsitos obligados y, por tanto, patgenos. Los virus son peculiares tambin por la estructura de su cpsida. En las clulas siempre existe ms de un tipo de cido nucleico, pero los virus slo tienen una clase, DNA o RNA, pero nunca ambos a la vez, y siempre tienen capacidad gentica (el RNA en clulas nunca tiene informacin gentica). Teniendo slo una clase de material gentico, existen muchas posibilidades de virus: a) DNA monocatenario (D/1): parvovirus, microvirus, b) DNA bicaternario (D/2): herpesvirus, adenovirus, c) RNA monocatenario (R/1): picornavirus, mixovirus, d) RNA bicatenario (R/2): reovirus, orbivirus, 175

La singularidad de los virus respecto a su genoma llega ms lejos, porque independientemente de la naturaleza del material gentico, puede estar formando una estructura circular o lineal, o incluso los dos a la vez:

Virus : DNA bicatenario que en la fase de virin es lineal y en la de provirus es circular.

Tambin se puede presentar como una molcula nica, o como segmentos o pequeos cromosomas:

Mixovirus: RNA unicatenario segmentado. Adenovirus: DNA bicatenario formando una molcula nica.

Generalmente son cubiertas protectoras de naturaleza proteica que protegen el genoma de las nucleasas. Existen 2 tipos bsicos (todos los dems son variaciones): 1) Helicoidales: estructura proteica que, formando un helicoide, envuelve a todo el genoma. 2) Icosadricas: formado por 2 bases pentagonales invertidas que se cierran por caras triangulares. Cumple el teorema de Euler: C+V=A+2 Los capsmeros de los vrtices se denominan hexmeros y el resto se llaman pentmeros. Para cerrar tridimensionalmente un espacio, la estructura ms pequea y sencilla es el hexaedro. El otro extremo es la esfera, pero requiere muchos elementos de pequeo tamao. El icosaedro est intermedio. Tiene ventajas de ambos. Si los capsmeros son muy grandes, necesitan un mayor genoma para traducirse, y si fuesen muy pequeos, tendran que traducirlo muchas veces, lo que aumentara la frecuencia de las mutaciones. Existen variedades: a) Simetra mixta: tienen elementos de simetra helicoidal y simetra icosadrica. b) Simetra compleja: no es ni helicoidal, ni icosadrica ni mixta. A veces es un indicador de asimetra. Independientemente de la simetra y de la composicin y disposicin espacial, pueden o no presentar envuelta. Muchos virus animales presentan envoltura, que adquieren normalmente de la clula de la que se han replicado y suele derivar de la membrana citoplasmtica, porque la arrastra al salir de la clula. En otros casos deriva del RE, aparato de Golgi o membrana nuclear, dependiendo de dnde se replique el virus. Es un carcter diferencial. Hersey y Chase descubrieron que siempre hay 2 constantes: 1) La presencia de cido nucleico. 2) La presencia de una cpsida como elemento protector. Para ello marcaron una cpsida con S35, el cual vieron que se quedaba fuera de la clula, y el cido nucleico con P32, el cual entraba dentro. Esto no se puede generalizar ya que a veces tambin introducen la cpsida. 176

- MICROCPSIDA -

Si el virus presenta DNA bicatenario, la clula lo va a replicar ya que tambin tienen DNA bicatenario, y por lo tanto, presentan los mecanismos para replicarlo. Por la similitud con el mecanismo celular, estos virus aseguran su replicacin. Los virus con DNA monocatenario o RNA bi o monocatenario tienen que introducir su cpsida, porque, adems de ser capsmeros estructurales, lo son tambin enzimticos y participan en su replicacin. La cpsida, por una serie de modificaciones activas dentro de la clula, activa sus capsmeros, que son polimerasas que replican el material gentico. DNA bicatenario: la replicacin la lleva a cabo la clula. RNA bi- o monocatenario o DNA monocatenario: pueden necesitar replicacin y/o traduccin (que puede o no depender de la clula) y transcripcin (siempre depende de la clula). El RNA monocatenario puede ser reconocido por la clula como mRNA y replicarlo. Si no lo reconoce como mRNA es entonces cuando los virus tienen que introducir su cpsida obligatoriamente. En algunos casos, slo el cido nucleico del virus es infeccioso. En otros casos no lo es si no entran con la cpsida. RNA bi- o monocatenario: no es infeccioso por s solo. DNA bicatenario: s es infeccioso por s solo. Las DNA polimerasas de las clulas no diferencian el DNA viral del suyo propio, por lo que lo replican y crean mensajeros, que se traducirn y formarn protenas especficas del virus. DNA monocatenario: entra en la clula, y los sistemas de reparacin celular lo reparan haciendo una copia de l para convertirlo en bicatenario, y entonces lo replica. Casper y Klug vieron que los virus adoptan una posicin intermedia: nunca son esfricos. Un icosaedro con n nmero de lados, que ha dividido sus caras en 3 partes, parece esfrica. Las fases de virin y provirus/profago presentan una fase de infeccin, que se compone de: 1) Etapa de adhesin o adsorcin superficial: proceso fsico de contacto de superficies que implica el contacto de los receptores con el capsmero. 2) Etapa de absorcin: el virus entra dentro de la clula. Baltimore y Temin ganaron el premio Nobel por descubrir la esencia de los virus, que es conseguir que la clula cree mRNA. Clasificaron a los virus por clases: 1. Clase I: virus con D/2. Es infectivo por s mismo menos en el caso de los poxvirus, cuyo DNA se queda en el citoplasma, por lo que tiene tambin que introducir la cpsida. 2. Clase II: virus con D/1. 3. Clase III: virus con R/2. 4. Clase IV: virus con R/1. Este genoma tiene un triplete de iniciacin (polaridad +), que acta por s solo como mRNA. Slo necesita entrar en el genoma para que se produzca el ciclo infectivo. 5. Clase V: virus con R/1. Este genoma no acta como mensajero. Tiene la imagen especular del triplete de iniciacin (polaridad -). Tienen una transcriptasa en la cpsida. 177

6. Clase VI: virus con R/1. La aclar Temin. El genoma tiene polaridad de mRNA, pero en vez de emplear su genoma para transcribirse en el citoplasma, se va al ncleo, donde convierten su genoma en D/2. Utiliza una transcriptasa inversa (DNA polimerasa dependiente de R/1) o retrotranscriptasa.

- DIFERENCIAS ENTRE VIRUS Y ORGANISMOS Autocapacidad de reproduccin. La sntesis de materia que forma los virus es independiente (se realiza en distintos sitios y a distintos tiempos en la clula), mientras que la sntesis de los componentes celulares es integral. Los virus son parsitos intracelulares obligatorios. Son incapaces de crecer en cultivos. En general, se entiende como un sistema vivo aquel que toma cosas del medio y sintetiza productos con ellos, que es sensible al medio y lo modifica, relacionndose con l, y que se puede reproducir autnomamente. En cierto modo, los virus pueden hacer esto pero no se replican autnomamente. Es imposible que los virus precedan a las clulas evolutivamente, porque dependen de ellas. Pueden haber existido nucleoprotenas autoreplicativas antes que las clulas, pero en ningn caso virus.

- NOMENCLATURA -

Segn el tipo de hospedador, existen: Virus bacterianos. Virus animales. Virus vegetales. La nomenclatura binomial no se aplica en virus. Se designan por letras y/o nmeros que dan informacin sobre el virus. Un comit especial sugiri que los virus se describiesen como criptogramas virales, que dan informacin sobre el virus y sirve para designarlos. Es una informacin codificada de los virus, que consta de 4 trminos, todos cocientes. 1. Naturaleza del genoma y cadenas que tiene el virus: R/2, R/1, D/2 2. El numerador indica los millones de Daltons que pesa su genoma y el denominador representa el porcentaje que supone el peso de su genoma con respecto al pero total de la partcula. 3. Indica la morfologa del virus. A veces coincide con la morfologa de la cpsida, pero siempre se refiere a la morfologa de la partcula viral en su conjunto. S = icosadrico. E = elongado, helicoidal. X = complejo o mixto. 4. El numerador indica el rango de hospedadores: B = bacterias. V = vertebrados. I = invertebrados. S = plantas con semillas. El denominador indica el vector de transmisin, en el caso de que lo use: 178

O = contagio directo. Fu = transmisin por hongos. Di = dpteros. Ac = caros.

Se caracterizan a nivel poblacional por una curva de crecimiento, que se diferencia de la bacteriana. Se denominan curvas de multiplicacin de un solo paso, porque se pretende sincronizar el cultivo en un proceso de un solo paso. A mayor nmero de virus, mayor posibilidades de infectar a una clula. n de virus n de clulas Moi determina la probabilidad con la que se van a infectar las clulas. A una determinada moi, unos virus empezarn la infeccin antes que otros. Cuando infectamos un n de clulas con un n determinado de virus, la infeccin comienza con una adhesin superficial que precede a la absorcin. Es un proceso al azar: no todas empiezan el principio de multiplicacin al mismo tiempo. Se pretende sincronizar el cultivo, ya que no todos los virus hacen lo mismo al mismo tiempo. Las curvas de multiplicacin de un paso consisten en: 1) Infectamos a las clulas y las dejamos un tiempo corto (10-30 segundos). Aadimos anticuerpos contra el virus, que secuestra los que quedan libres, y as evitamos infecciones posteriores. De esta manera, todo lo que est infectado lo est sincrnicamente. Tras 10 segundos, filtramos y nos quedamos con las clulas que han precipitado, que son las que estn infectadas sincrnicamente. La curva de crecimiento viral no es asimilable a la bacteriana. [N] moi = moi (multiplicidad de infeccin)

- DIVERSIDAD VIRAL -

2)

t 179

Periodo de latencia viral pe pai periodo de liberacin

Rendimiento

t [virus] total [virus] extracelulares

Si infectamos con una moi = 1, y hacemos una curva de multiplicacin de un paso, vemos que la velocidad de infeccin a tiempos muy cortos baja muchsimo, y segn vamos sacando muestras a diferentes tiempos, va subiendo hasta que sobrepasa moi y se estabiliza. pai = periodo de acumulacin intracelular o tiempo que tarda el virus en salir fuera. pe = periodo de eclipse o tiempo que se tarda en volver a las condiciones moi iniciales. Periodo de latencia = pai + pe. Periodo de liberacin = desde el pai hasta que se alcanza el rendimiento viral. El valor que se alcanza cuando la curva de desarrollo vital de virus extracelulares e intracelulares se iguala sobre las ordenadas se denomina rendimiento viral.

TEMA 28: VIRUS BACTERIANOS

/2

Son los ms diversificados, pertenecen a la clase II y fueron los primeros que se descubrieron.

CORTICOVIRUS
D

/2 : 5/12 : S/S : B/O

PM2: afecta a Pseudomonas marina. Presenta 2 cpsidas proteicas.

MIOVIRUS
180

/2 :

100

/45 : X/X : B/O

Genoma de mayor tamao que el de los corticovirus. Mio = msculo contrctil. Su vaina o cuello es contrctil.

T2, T3, T4: son virus que afectan a enterobacterias. SP50: afecta a Bacillus. HM3: afecta a Clostridium.

PEDOVIRUS O PODOVIRUS
D

/2 : 50/50 : X/X : B/O

Son virus que tienen una cola o pie muy corto, tambin contrctil. No presentan ni fibras ni espculas. Son menos complejos que los miovirus.

STYLOVIRUS
D

/2 : 60/50 : X/X : B/O

Cuello no contrctil y largo. Carecen de envoltura.

Fago : virus atenuado que puede establecer lisogenia con las clulas, introduciendo su genoma lineal en la clula, el cual se circulariza en la fase profago y se inserta en la clula.

/1
D

INOVIRUS
/1 : 2/12 : E/E : B/O
Ino = filamento. Aspecto elongado.

fd M13

MICROVIRUS
D

/1 : 2/26 : S/S : B/O

181

 Son menos complejos que los Inovirus. Son icosaedros perfectos.

x174: primer DNA con actividad biolgica que se sintetiz in vitro. Afecta a E. Coli.

/1
R

LEVIVIRUS
/1 : 1/35 : S/S : B/O
Levi = ligero. Son muy simples, pequeos e icosadricos perfectos. Necesitan transcriptasa viral porque su genoma es antimensajero.

Q: afecta a E. Coli. R17: afecta a E. Coli.

TEMA 29: VIRUS ANIMALES

Ambos grupos (DNA y RNA) estn muy diversificados.

/1
D

PARVOVIRUS O PICORDNAVIRUS
/1 : 1/35 : S/S : V/O
Parvo = pequeo. Virus poco complejos, que pesan poco y forman una estructura icosadrica perfecta.

Virus del moquillo canino.

/2
D

PAPOVAVIRUS
/2 : 4/1O : S/S : V/O
182

Virus del papiloma. Virus del polioma. Virus vacuolantes (SV40,). Papiloma Polioma Vacuolantes = Papovavirus

ADENOVIRUS
D

DNA lineal. Son fcilmente distinguibles porque presentan fibras de pentn, que son proyecciones proteicas que aparecen en los vrtices y que terminan en unas protenas globulares denominadas pentones. Estas fibras se pueden romper por una proteasa especfica llamada bromelina, que rompe los pentones y provoca que el virus deje de ser infectivo. Son los puntos de adhesin especfica entre virus y clulas. Afectan a aves, simios, humanos. Provocan sndromes intestinales y respiratorios; otros incluso son tumorales.

/2 : 25/13 : S/S : V/O

HERPESVIRUS
D

Presentan una envoltura que adquieren de la membrana nuclear. Muchos producen tumores. Afectan a anfibios, aves y humanos.

/2 : 90/7 : S/S(e) : V/O

Virus tipo 2: provoca el calcinoma cervical. Virus de Luck: afecta a ranas. Virus de la enfermedad de Mareck: afecta a aves. Virus EB (Epstein y Barr): produce la mononucleosis infecciosa o linfoma de Burkitt. Virus de la varicela: cuando afecta a un individuo por primera vez origina la varicela, pero en infecciones posteriores origina el herpes zster.

IRIDOVIRUS
D

/2 :

140

/15 : S/S(e)* :

V,I

/O

A veces presenta una envoltura de origen citoplasmtico. Afecta a insectos y vertebrados. Provoca la fiebre porcina africana de los cerdos. No es un virus tumoral. 183

 Son los nicos virus con D/2 que se reproducen en el citoplasma , junto con los poxvirus. Necesitan transcriptasa viral.

Virus FV3 (Frog Virus 3): afecta a ranas.

POXVIRUS
D

/2 :

180

/6 : X/X : V/O,Di

Tamao grande: a veces incluso pueden verse al microscopio ptico. Morfologa compleja (no mixta). Toda la cpsida entra en la clula. Se dividen en subgrupos: a) Ortopoxvirus: Virus de la viruela: afecta a humanos y vacas. Las clulas infectadas presentan corpsculos de Paschen-Guarnieri, que es el DNA de la progenie. Avipoxvirus: afecta a aves. Capripoxvirus: afecta a cabras. Leporipoxvirus: afecta a conejos, liebres, provocando mixomatosis, que a veces es tambin un tipo de tumor. Entomopoxvirus: afecta a insectos.

b) c) d) e)

HEPADNAVIRUS
D

Causante de la hepatitis B.

/2

/1
R

PICORNAVIRUS
/1 : 2/30 : S/S : V/O
Estn ampliamente distribuidos por la naturaleza. Tamao muy pequeo. Existen 3 tipos: a) Enterovirus: normalmente afectan al sistema digestivo y son estables a PH cidos.

Virus de la hepatitis A. b) Rhinovirus: pueden entrar por las vas respiratorias. No son estables a PH cido. 184

Poliovirus: causante de la poliomelitis.

Virus de la fiebre aftosa o glosopeda. c) Calicivirus: unos son estables a PH cido y otros no. Este grupo lo componen los virus que no se clasifican serolgicamente en los otros 2 grupos anteriores.

Virus del exantema porcino.

TOGAVIRUS
R

/1 : 4/6 : S/S(e) :

V,I

/O,Di,Ac

Toga = envoltura. Los ms importantes se transmiten por dpteros y caros. Antes se denominaban arbovirus porque se pensaban que todos estaban transmitidos por artrpodos (arthropod-borne viruses = arbovirus), pero actualmente se sabe que no es verdad. Existen diversos subgrupos dependiendo de los antgenos que comparten: a) Alfavirus: Virus de la encefalitis equina. b) Flavivirus:

Virus de la fiebre amarilla: transmitida por un mosquito.

Virus de la hepatitis C: se replica especficamente en el hgado. c) Rubelavirus: Rubeola: vacuna que se administra con la Triple Vrica. Cuando se adquiere en la edad previa a la pubertad no ocasiona serios problemas pero tiene un especial tropismo por tejidos que se dividen rpidamente, como los fetos, por lo que es peligroso para mujeres embarazadas. Si una mujer embarazada tiene la rubeola, como es un virus teratognico, provocar malformaciones fetales. La vacuna contiene el virus atenuado. La embarazada no se debe vacunar porque el virus atenuado tambin es teratognico, aunque menos.

d) Pestivirus:

Virus del clera porcino.

ORTOMIXOVIRUS
R

/1 : 5/1 : E/S(e) : V/O

En algunos libros los agrupan junto a los paramixovirus en un solo grupo llamado Mixovirus. Genoma fragmentado en bloques o mdulos. En el caso del virus de la gripe humana son 7 fragmentos. Presenta envuelta citoplasmtica.

Virus HIN5: gripe aviar. 185

Virus de la gripe humana.

PARAMIXOVIRUS
R

Presentan genoma continuo y envuelta citoplasmtica.

/1 : 7/1 : E/S(e) : V/O

RT viral Genoma (7-8 mdulos) Mensajeros (7-8 mdulos)

Neuraminidasa Hemaglutinina Capsmeros Replicasa

Las neuroaminidasas y las hemaglutininas las enva el virus a la membrana citoplasmtica de la clula infectada. Se replica el RNA en 7 trozos y salen de la clula una especie de gemaciones por la zona de la membrana donde est la neuroaminidasa y la hemaglutinina. Tiene una membrana citoplasmtica como una envoltura que deriva de la membrana celular pero con elementos del virus (hemaglutinina y neuraminidasa). Hemaglutinina: reconocen a los glbulos rojos y los aglutinan. Neuraminidasa: corta restos de cidos silicos de las glucoprotenas. La interaccin de la neuraminidasa con los cidos silicos es el punto inicial de la infeccin. Son tambin los antgenos mayoritarios de estos virus. Mutan con mucha frecuencia estos antgenos por la poca fidelidad de copia de las enzimas implicadas en la replicacin y transcripcin del RNA viral. Esto se denomina deriva antignica, y es la causa por la que la gripe vara cada ao. Son antignicamente muy poco estables. Estos virus tienen otra peculiaridad porque como su genoma es fragmentado y existe el proceso de deriva gentica, se dan saltos antignicos, es decir, que los virus pueden intercambiar mdulos con otros virus, provocando la aparicin de nuevos virus. Si un mdulo que reconoce receptores humanos pasa a un virus animal, puede infectar a humanos. Se originan virus recombinantes, que pueden originar pandemias (epidemias a nivel mundial, no localizadas).

Virus de la gripe aviar (N1H5): N1 = neuraminidasa tipo 1 y H5 = hematoglutinina tipo 5. Si cambian estos 2, pueden afectar a humanos.

La ltima gripe asitica se produjo por recombinacin de un mixovirus de cerdo y uno humano. 186

Esto no ocurre con los paramixovirus porque no pueden realizar intercambio gentico al no presentar mdulos. Son genticamente ms estables.

Virus del sarampin: es un paramixovirus. Slo se pasa una vez en la vida. Paperas o parotiditis. Enfermedad de New Castle (NDV): afecta a aves.

Rubola Triple Vrica Paperas Sarampin Trivalente Vrica Poliomelitis (3 serotipos de poliovirus que pueden originar la poliomelitis)

CORONAVIRUS
R

/1 : 9/10 : E/S(e) : V/O

Aspecto esfrico de la partcula global. A diferencia de los mixovirus, su genoma tiene polaridad de mensajero, por lo que necesita transcriptasa viral. Son virus respiratorios. La envoltura deriva del RE: geman en el RE y adquieren de ah su envoltura. De una manera anloga a los mixovirus, insertan elementos estructurales de lo que luego ser su estructura para luego recogerlos. Son los peplmeros, que los ponen en el RE y luego los rescatan al adquirir la envoltura. El aspecto de coronas de los peplmeros les dio el nombra de coronavirus.

Virus de la bronquitis infecciosa de las gallinas. Virus de Sars (Severe Acute Respirating Syndrome) o neumona asitica.

ARENAVIRUS
R

/1 : : S/(e) :

Virus de roedores, con poca importancia en los humanos. Presentan un genoma fragmentado. Tienen RT. Son los nicos virus con ribosomas : cuando la clula se lisa y engloban a la cpsida, engloban tambin a los ribosomas. Les da aspecto granulado al microscopio. Son ribosomas no funcionales pero estructuralmente forman parte del virin. 187

 BUNYAMWERAVIRUS
R

/1 : :

V,I

/Di,Ac

Nunca se transmiten por contacto directo. Geman en el aparato de Golgi, por lo que su envoltura procede de este orgnulo.

LEUKOVIRUS
R

/1 : 6/2 : S/S(e) : V/O

Se denominan de diferente manera: retrovirus, oncornavirus o leukovirus. Todos los virus tumorales que infectan a animales se encuentran en esta familia. Su envoltura procede de la membrana citoplasmtica. RT: tienen polaridad de mensajero pero no van al ncleo, sino que se convierte en DNA y generan RNA. Son virus oncognicos con RNA. Existen 3 subfamilias: a) Subfamilia de los Oncornavirus: virus de las leucemias , sarcomas, tumores mamarios, tienen alta homologa con los fragmentos del propio genoma humano. b) Subfamilia de los Spumavirus: virus que, cuando infectan a una clula, sta forma sincitios con las de al lado. Se encuentran en el reservorio de animales domsticos y en el ganado. c) Subfamilia de los Lentivirus:

Enfermedad de Visna en las ovejas. Virus del SIDA (VIH). El periodo de incubacin puede durar hasta 10 aos. Bloquean y rompen los linfocitos. El virus elimina el sistema inmune. Estos enfermos mueren por enfermedades secundarias oportunistas. La causa mayor de muerte en pacientes con SIDA es un hongo, Candida albicans, que forma parte de nuestra flora normal. Los enfermos de SIDA no controlan la poblacin de este hongo, que invade el cuerpo y se convierten en patgenos.

- FAMILIAS CON REPRESENTANTES TANTO ANIMALES COMO VEGETALES -

RHABDOVIRUS
R

/1 : 4/2 : E/U(e) :

V,I,S

/O,Di,Ac

Morfologa peculiar: aunque la cpsida tiene morfologa helicoidal, la partcula global tiene morfologa baliforme. La nucleocpsida es helicoidal pero flexible. 188

 Geman en la membrana plasmtica.

Virus de la rabia: se transmite por contacto directo. Su reservorio natural son las zorras. Se transmite a otros cnidos y de ah a los humanos.

REOVIRUS
R

/2 :

15

/15 : S/S :

V,S

/O

ORBIVIRUS
R

/2 :

15

/20 : S/S :

V,I,S

/Di,Ac

Tanto Reovirus como Orbivirus a veces se clasifican en una familia llamada Diplornavirus, porque tienen R/2. Genoma fragmentado en 10 fragmentos. Los Reovirus tienen doble cpsida: una icosadrica dentro de otra ms grande.

Virus del enanismo del arroz.

TEMA 30: VIRUS VEGETALES

Existen ms de 30 familias reconocidas. Explotan los genomas con RNA y ms los de RNA monocatenarios. Los RNA bicatenarios se reducen a los Reovirus.

/1

Son relativamente pocos. La familia ms importante es la de Geminivirus. Tienen DNA monocatenario y circular. Se asocian las cpsulas por pares. Virus del estriago del maz.

/2

La familia ms importante es la de Caulimovirus; dentro de esta familia, el virus ms representativo es el que produce el mosaico de la coliflor. Virus con simetra icosadrica. Son transmitidos por fidos.

189

/1

1) Sistema multiparticulado: Simetra icosadrica. Simetra helicoidal. 2) Sistema monoparticulado: Simetra icosadrica. Simetra helicoidal. Simetra helicoidal con envoltura.

El genoma se encuentra englobado en distintos tipos de partculas. El conjunto de estos diferentes tipos de partculas forman el genoma infectivo. a) Simetra icosadrica: Familia Bromovirus Transmitidos por colepteros. Infectan al gnero Bromus. Genoma dividido en 4 fragmentos.

- SISTEMA MULTIPARTICULADO -

BMV: virus del mosaico en el gnero Bromus. Tiene 4 fragmentos genmicos: 1. 1,1 KDa. 2. 1 KDa 3. 0,75 KDa. 4. 0,28 KDa.

Uno de estos mdulos codifica para los capsmeros de la cpsida, que es icosadrica. Todas las cpsulas son iguales. El fragmento mayoritario se encapsida en un tipo de partcula. Los 2 fragmentos ms pequeos en otros tipos de partcula, y el fragmento restante en otra. Las cpsidas son idnticas pero las partculas son distintas porque cada una contiene un fragmento genmico distinto. Esto origina que la poblacin de Bromovirus se distinga en 3 tipos de partculas: Heavy: 1,1 KDa. Medium: 0,75 KDa + 0,28 KDa. Light: 1 KDa. El concepto de virin hace referencia al conjunto de los 3 tipos de partculas. Si se infecta una clula con una sola partcula de forma aislada, no se produce la replicacin. Estos virus utilizan los vectores de transmisin para asegurar su ciclo: Transferidos por fidos: Cucumovirus. Es el virus del mosaico del pepino. Tiene 4 fragmentos de cidos nucleicos y 3 tipos de partculas virales. Transmitidos por nematodos: Nepovirus. Virus vegetales que tienen 2 segmentos genmicos y 2 tipos de partculas. Produce el entrenudo corto de la vid. 190

 Transmitidos por infeccin mecnica: Ilarvirus. Constan de 4 bloques de cidos nucleicos y 3 tipos de partculas. Provocan lesiones circulares grandes en rosceas. b) Simetra helicoidal: Transmitidos por contacto directo: Hordeivirus. Afectan al genoma Hordeum (cebada). Tiene 3 fragmentos genmicos y 3 tipos de partculas.

- SISTEMA MONOPARTICULADO a) Simetra icosadrica:

Tymovirus: transmitidos por colepteros. Provocan el mosaico amarillo. Luteovirus: transmitidos por fidos. Provocan amarilleo en muchas gramneas. Tombosvirus: se transmiten por contacto directo. Provocan el enanismo en el tomate.

b) Simetra helicoidal: Transmitidos por fidos:

Carlavirus: el primer virus descubierto de esta familia. Provoca una enfermedad en los claveles. Closterovirus: produce la tristeza del naranjo, clorosis del manzano, amarillez en la remolacha, Potyvirus: el primer virus que se descubri en esta familia fue el virus X, que afecta a las patatas. El segundo que se descubri tambin afecta a las patatas y lo llamaron virus Y. Son virus que producen el mosaico de la remolacha, enfermedad de la patata, degeneracin del ajo, mosaico de la caa de azcar y maz, anillado negro de la col, raquitismo amarillo de las cebollas,

Transmitidos por contacto directo:

Potexvirus: es el virus X. Tobamovirus: por ejemplo, el virus del mosaico del tabaco (TMV).

c) Simetra helicoidal y con envoltura: Virus que producen las manchas bronceadas en el tomate.

VIROIDES

No son virus: son agentes con RNA monocatenario, el cual es especial ya que tiene un aumento de la complementariedad interna, por lo que el genoma adapta una conformacin especial, en forma de horquillas.

191

Constan exclusivamente de un RNA que no est encapsulado. Se trata de un mRNA infeccioso de bajo peso molecular, que nunca llega a 1 milln de Daltons. Estos RNA se replican autnomamente por s mismos. Los viroides se designan por los acrnimos del nombre de la enfermedad que produce, terminando con una V seguida de una d.

PST Vd: provoca en los tubrculos de las patatas una especie de husos o fibras. CE Vd: provoca la exocortis de los ctricos.

Los viroides no tienen cpsula ni codifican para ello. Su patogenicidad para las plantas se debe a las propiedades de su genoma, no de sus protenas, ya que no codifican ninguna protena. La RNA polimerasa II, que en las clulas es dependiente de DNA, tiene una actividad lateral que en presencia de viroides es capaz de replicarlos en modo de crculo rodante. El dao no lo produce ninguna protena, sino su replicacin, porque secuestra la ARN polimerasa II y entonces priva a las clulas infectadas de la accin normal de la ARN polimerasa II, provocando una diferenciacin anormal de las clulas. Adems, interviene con el DNA genmico actuando como molculas reguladoras represoras en el ncleo, bloqueando partes del genoma. Tambin interfiere en la maduracin del mRNA celular, es decir, en su procesamiento. La accin de estos 3 actos es lo que provoca la patogenicidad celular. Se debe directamente al genoma, y no a su expresin. Los viroides no proceden de virus degenerados sin envoltura. Se cree que proceden de la semicircularizacin de intrones celulares , actuando como agentes patgenos. Los viroides son resistentes a las ribonucleasas.

PRIONES

Agentes infecciosos que tienen protenas, pero no cidos nucleicos. Se replican siendo protenas y producen infeccin careciendo de cidos nucleicos. Desde el punto de vista estructural, son slo protenas. En los aos 50-60 se les consideraban virus lentos y se les llamaba virinos. Estn relacionados con enfermedades neurodegenerativas, como la encefalopata espongiforme, que ocasiona la lisis de las neuronas, provocando oquedades en el cerebro. El trmino prin lo introdujo Prusiner. Son protenas infecciosas, que no tienen ni DNA ni RNA. Estn extendidos en animales. La encefalopata ms comn es la que afecta a ovejas y cabras, denominada scrapie o prurito lumbar , porque origina escozor en la espalda. Se conoce desde hace siglos y la incidencia de esta enfermedad aumenta con la edad, lo que indica que el periodo de incubacin es alto. Se lleg a erradicar en Australia mediante el sacrificio de ovejas infectadas. 192

La encefalopata espongiforme bovina se detect en Inglaterra. Se cree que su origen se debe a alimentar a las vacas con restos mortales de ovejas con scrapie, lo que ocasion la manifestacin del prin en vacas. En humanos existen 4 variedades prinicas, todas variedades neurodegenerativas: Kuru o risa mortal. Enfermedad de Creutofeldt-Jakob. Sndrome de Gerssman-Strausler. Sndrome del insomnio fatal. Se sospecha que el Parkinson, esclerosis, se sospecha que tambin son prinicas.

Es la primera enfermedad prinica que se descubri en humanos, alrededor de 1850. Se detect slo entre los aborgenes de Nueva Guinea, en miembros de la tribu Fore, que estaba aislada. En ms de 100 pueblos se advirti que haba muchos individuos que tenan una enfermedad caracterizada por ataxia (prdida de coordinacin) y demencia. Se vio que todos los enfermos haban participado en algn rito canbal consistente en comerse los sesos de los difuntos, y slo participaban los hombres, por lo que slo se daban en el gnero masculino. Al abolirse esta prctica, desapareci la enfermedad, lo que indicaba que el agente era lento y se encontraba en aquellos que participaban en estos ritos. El difunto tambin haba manifestado en vida los sntomas. Hoy en da ya casi est erradicada.

- KURU O RISA MORTAL -

Se produce un caso por milln al ao. Se conoce como demencia senil. Aparece en los ltimos aos de vida y puede ser tanto hereditaria como infecciosa. Se cree que el Kuru deriva de este sndrome.

- ENFERMEDAD DE CREUTIFELDT-JAKOB -

Los daos ms notables ocurren en el cerebelo. El periodo de manifestacin de la enfermedad es mayor que la de Creutifeldt-Jakob, por lo que aparece an en personas ms mayores.

- SNDROME DE GERSSMAN-STRAUSLER -

- SNDROME DEL INSOMNIO FATAL -

La causa no es el insomnio. Es un efecto ms que una causa de la infeccin. Caractersticas de los priones: Los priones no tienen forma, excepto la correspondiente a una disposicin tridimensional proteica. Son glucoproteinas. Se asocian entre s formando placas amiloides, visibles en neuronas afectadas por priones. No contienen nada de cidos nucleicos. 193

 El prin que origina el scrapie es una protena de 30 Kb. Se conoce su secuencia, cmo se glucosida, La esencia es preguntarse cul es el origen de estas protenas: hoy en da se ha podido aclarar. Se aisl por primera vez un prin, se secuenci, se us como sonda. Se vio que en el hombre en concreto hay una zona del brazo corto del cromosoma 20 que codifica para priones. El DNA de aves tambin codifica con esta sonda. Las levaduras tambin codifican priones. Todas las clulas codifican genes que codifican a los priones. La mera codificacin de los priones no es la causa de la enfermedad, ya que adems de expresarse, traducirse y transcribirse, debe ocurrir algo para que los productos gnicos se conviertan en algo daino. Estas molculas tienen 2 isoformas: a) PrPc: forma inocua, normal de la clula. Forma de protena prinica. Protena con esqueleto proteico en cuyo centro hay 4 regiones con estructura terciaria de cadenas . b) PrPsc: protena prinica scrapie. Tiene la misma secuencia inicial pero la zona central difiere en algo (un aminocido quizs) que hace que su estructura terciaria sea planal . La PrPsc puede ocasionar mutaciones en la isoforma normal, que induce el cambio de las cadenas a la estructura planal . Se adquiere por: Herencia gentica. Mutaciones puntuales. Adquisicin de un prin, que al contacto con la forma normal le induce un cambio que la vuelve prinica. Es una forma de reproduccin: una protena prinica que entra convierte a la normal en protenas patognicas (PrPsc). El prin se multiplica y, por tanto, es infeccioso. Se propagan al entrar en contacto con molculas prinicas normales, induciendo la configuracin a PrPsc. Es un proceso muy lento y ocurre en el SNC, especialmente en el cerebro. Tarda a veces decenios en el hombre. Cuando se producen muchas se forman las placas amiloides. La deposicin neuronal de las placas amiloides ocasionan las oquedades por la lisis de las neuronas. La estrategia de los priones no tiene precedentes en ninguna otra entidad biolgica. Una caracterstica inquietante es la capacidad de transmisin, saltando incluso barreras entre especies. Se ha visto que esto es posible slo bajo determinadas circunstancias. La posibilidad de adquirir la enfermedad por ingesta de vacas cocinadas es bastante improbable. Son agentes termoestables pero es difcil ya que existen normas sanitarias que evitan poner en el mercado animales con sntomas, y cuando ms similar sea una protena prinica, ms fcil es su salto entre especies.

194

Lo malo de los priones es que no inducen la formacin de anticuerpos, porque el agente patgeno deriva de una forma normal de las clulas, y el organismo la reconoce como propia. No hay vacunas ni defensas inmunolgicas ante las enfermedades por priones. Frente a los priones estamos desarmados: el uso de frmacos estn orientados a estabilizar las hlices intentando evitar su conversin a . Tambin se ha sugerido eliminar el gen que codifica a PrPc. parece que, de hecho, en animales superiores, la eliminacin no supone ningn problema en el individuo adulto, pero se cree que este gen es importante en la etapa fetal, por lo que no es muy til esta tcnica.

195