Qu son los priones? En 1982 Stanley B.

Prusiner propuso el nombre de "prin" para el agente causante de un grupo de enfermedades degenerativas del sistema nervioso central caracterizadas por ser patologas crnicas y progresivas. En 1997, Stanley B. Prusiner fue galardonado con el premio Nobel de fisiologa y medicina por los trabajos llevados a cabo para la identificacin de agente infeccioso de las encefalopatas espongiformes transmisibles (EETs). Estas enfermedades incluyen la encefalopata espongiforme bovina (BSE), el scrapie de las ovejas y cabras as como la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob y su nueva variante en seres humanos. Los priones son pequeas partculas infecciosas de naturaleza proteica con unas sorprendentes propiedades que las hacen ms resistentes que la mayora de las protenas a la inactivacin por mtodos fsico-qumicos. La naturaleza proteica de los priones se sugiri dada su resistencia a la inactivacin por procedimientos que destruyen los cidos nucleicos, como por ejemplo la radiacin ultravioleta. Hasta la fecha la asociacin de algn tipo de cido nucleico especfico con los priones no se ha confirmado formalmente. A pesar de todo la controversia cientfica existe entre aquellos defensores de la teora de la protena nica y los defensores de la hipteis del virino o de la nucleoprotena, que sostiene que el agente infeccioso consiste en un genoma formado por cido nucleico y la protena del prin (PrP) derivada del husped. De acuerdo con la hiptesis de la protena nica, los priones se componen de una protena denominada PrP (isoforma Sc scrapie de la protena del prin). La PrP se produce por el plegamiento errneo de una protena celular de idntica C secuencia de aminocidos, presente en prcticamente todos los tejidos del organismo, denominada PrP (isoforma celular de la protena del prin)
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Cambio de plegamiento de PrP a PrP

Sc

Este plegamiento errneo confiere a la PrP dos propiedades que permiten diferenciarla de la PrP , la resistencia parcial a la C digestin por proteasas y la insolubilidad. Las causas que provocan el error en el plegamiento de la PrP definen las formas descritas de las enfermedades producidas por priones: 1. FORMAS ESPORDICAS DE LA ENFERMEDAD. Son las que aparecen sin causa aparente y para las que no hay explicacin en la actualidad. 2. FORMAS INFECCIOSAS. Se explican por la interaccin de la PrP Sc. PrP
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sobre la PrP lo que provoca su transformacin a

3. FORMAS HEREDITARIAS. Provocadas por alteraciones genticas heredables que facilitan el plegamiento errneo de la C PrP Cmo son los priones? Los priones son patgenos infecciosos que difieren de las bacterias, hongos, parsitos, virus y viroides tanto en su estructura y caractersticas fsico-qumicas como en la enfermedad que causan. Los priones presentan importantes caractersticas que los diferencian de los virus.

Diferencias fundamentales entre los priones y los virus PRIONES Formas moleculares mltiples (Isoformas). No presentan cido nucleico esencial dentro de la partcula infecciosa No inducen respuesta inmune. El nico componente conocido Sc es la protena PrP VIRUS Formas nicas con morfologas estructurales diferentes

Poseen un genoma formado por cido nucleico que sirve de molde para la replicacin. Inducen respuesta inmune ms o menos intensa segn el tipo Estn compuestos por cidos nucleicos, protenas y, a menudo, por otros constituyentes.

Propiedades fsico-qumicas de los priones La masa relativa (Mr) de la PrP es de 33-35 x 10 . Los priones se agregan en partculas sin tamao uniforme y no pueden Sc solubilizarse con detergentes si no es en condiciones que alteran la estructura de la PrP , con la consiguiente prdida de Sc infectividad. Sin embargo, utilizando fosfolpidos fue posible conseguir la solubilizacin de la PrP . "Estabilidad de los priones y los viroides (PVTV)" Los priones resisten la inactivacin con nucleasas, radiacin UV a 254 nm, tratamiento con psoralenos, cationes divalentes, iones metlicos quelantes, cido (entre pH 3 y 7), hidroxilamina, formalina, ebullicin y proteasas. La infectividad de los priones se disminuye mediante la digestin prolongada con proteasas, o con tratamientos como urea, ebullicin en SDS, lcali (>pH 10), autoclave a 132C durante ms de dos horas, solventes orgnicos desnaturalizantes (e. g., fenol) o agentes caotrpicos como el isocianato de guanidina. Morfologa del prin. A partir de tejido cerebral procedente de un individuo infectado se pueden extraer vesculas membranosas ricas en PrP . La proteolisis parcial de estas vesculas da lugar a partculas con forma de varilla, visualizables al microscopio electrnico.
Sc Sc 3

La imagen procede de http://ss.niah.affrc.go.jp/bse/images/img0035.gif La mayora de estas partculas tienen un dimetro uniforme de 11 nm con una longitud media de 165 nm. Estas varillas son Sc lisas, parecidas a listones, y raramente aparecen retorcidas. Las varillas estn formadas por polmeros de PrP 27-30 Sc (generada por la proteolisis parcial de la PrP 33-35). Biologa Molecular de los priones. La protena PrP est codificada en un gen cromosmico muy similar entre las distintas especies de mamferos. El gen de la PrP existe en una nica copia y est localizado en el brazo corto del cromosoma 20 en el hombre y en una regin equivalente del cromosoma 2 en ratones. El gen del ratn contiene tres exones, mientras que el gen humano y de hmster nicamente
C

dos. La secuencia de aminocidos (ORF) de todas las protenas conocidas de priones se encuentra codificada en su totalidad dentro de un nico exn.

El gen se expresa de manera constitutiva prcticamente en todos los tejidos del organismo adulto siendo su expresin mxima en tejidos neuronales, fundamentalmente en el cerebro, cerebelo, mdula e hipotlamo. La PrP tiene un tamao comprendido entre los 33 y 35 kDa (PrP 33-35). El suceso crtico en la patognesis parece estar C Sc relacionado con un cambio estructural que transforma a la PrP en la PrP , el componente principal de las partculas infecciosas. Por tanto, ambas formas proteicas poseen idntica secuencia de aminoacidos y la nica diferencia entre ellas estriba en su estructura secundaria, es decir en la forma de plegamiento de la cadena polipeptdica. Estas diferencias Sc C conformacionales entre ambas isoformas confiere a la PrP las propiedades que permiten diferenciarla de la PrP : mientras C Sc que la PrP es digerida completamente por proteasa, la PrP es parcialmente resistente a esta digestin, resultado una protena de 27 a 30 kDa (PrP 27-30).
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Biosntesis de las isoformas Pr

PC

y PrP

Sc

El prin es pues una forma alterada de una protena celular normal que ha podido perder su funcin pero que ha adquirido la capacidad de transformar la forma normal en patolgica. La patologa se manifiesta probablemente por la acumulacin de la protena anormal. Estructura de la protena del prin. La protena celular madura, purificada en su forma nativa, tiene una estructura secundaria compuesta por un 43% de hlice y un 3% de lmina . Por el contrario, los estudios espectroscpicos permitieron establecer qu e la estructura Sc secundaria de la PrP contiene un 43 % de lmina lo que le confiere la capacidad de formar complejos supramoleculares acumulables denominados amiloides. La estructura terciaria de la protena recombinante del prin humano se ha desvelado recientemente. sta consiste en tres hlices que conforman un ncleo ordenado en el extremo carboxilo terminal de la molcula y una zona amino terminal desestructurada y flexible.

Se ha propuesto que la transformacin de PrP a PrP consiste en una transicin de las -hlices a lminas , coincidiendo con las zonas conservadas de la cadena polipeptdica. Sin embargo, se desconocen muchos detalles sobre el mecanismo de accin del proceso de transformacin. Se ha sugerido que las dos isoformas deben interaccionar entre ellas debido a que: La transmisin de los priones precisa de cierta especificidad entre las secuencias interaccionantes Fue posible generar molculas parecidas a la PrP
Sc

Sc

Sc

in vitro, mezclando PrP purificada con PrP

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o con pptidos sintticos.

Cmo afectan los priones a los animales y al hombre? Los priones causan enfermedades de tipo neurodegenerativo denominadas clnicamente como encefalopatas espongiformes transmisibles (EETs) (Tabla 2). Los signos clnicos y la patologa que producen varan dependiendo de la especie afectada e incluso de cada animal afectado. En todos los casos el desarrollo de la enfermedad es muy lento y los tiempos de incubacin, con ausencia total de sntomas, son extremadamente largos (2-10 aos dependiendo de la especie y de los individuos). En general, en los animales se pueden distinguir dos fases: (Tabla 3) FASE PSQUICA: se producen cambios en el comportamiento y el temperamento FASE ORGNICA: se observan alteraciones motoras graves. En el hombre los primeros sntomas son de origen psquico afectando a la personalidad y al comportamiento, con aparicin de trastornos de memoria. A medida que la enfermedad avanza aparecen dolores musculares en las extremidades inferiores. En una fase final los sntomas principales son demencia y diestesia. La muerte sobreviene tras 6-12 meses desde la aparicin de los primeros sntomas. En la actualidad es una enfermedad incurable. Desde el punto de vista anatomopatolgico, se puede decir que, macroscpicamente, los cerebros de los animales infectados aparecen normales, mientras que microscpicamente los cambios ms notorios consisten en astrogliosis, vacuolizacin intracelular, prdida de neuronas y formacin de placas amiloides ocasionales. Cmo se transmiten los priones? Las enfermedades de priones pueden ser: adquiridas o infecciosas, genticas o hereditarias de origen desconocido, conocidas habitualmente como formas espordicas. Las primeras evidencias de transmisin de la enfermedad en el hombre datan de los aos 50 cuando se describi el kuru, una patologa infecciosa neurodegenerativa que se extendi entre los habitantes de una tribu aborigen de Nueva Guinea debido a sus prcticas rituales canbales.

En todo los casos el elemento determinante de la infeccin, el prin, es transmisible dado que ha sido posible reproducir experimentalmente en ratones transgnicos la enfermedad utilizando muestras procedentes de pacientes diagnosticados de las patologas comentadas anteriormente. De igual forma, otras enfermedades neurodegenerativas animales producidas por priones (BSE, scrapie, encefalopata transmisible del visn (TME), enfermedad debilitante crnica (CWD), etc.) pueden transmitirse entre individuos de la misma especie e incluso al hombre. La posibilidad de transmisin de priones entre distintas especies ha permitido definir el concepto de barrera interespecfica. Las formas familiares o hereditarias incluyen el sndrome de Gerstmann-Strussler-Scheinker (GSS), el insomnio familiar fatal (FFI) as como el 10 % de los casos de Creuztfeld-Jacob (CJD). Las patologas familiares tienen un carcter autosmico dominante ligado a la presencia de mutaciones puntuales o insercionales en el gen que codifica la protena del prin. Las formas espordicas surgen en una poblacin sin una causa aparente, las formas hereditarias estn vinculadas a la existencia de mutaciones en la lnea germinal en el gen que codifica la protena del prin y las formas adquiridas ocurren por el contacto accidental con material contaminado. Dentro de la patologa infecciosa se pueden destacar las formas iatrognicas adquiridas El conocimiento de las barreras entre especies es de gran importancia, sobre todo para poder valorar los riesgos de transmisin a otras especies que puedan alimentarse de tejidos infectados con priones ( scrapie, BSE, etc.). En qu consiste la barrera interespecfica de los priones?} De forma general, podemos decir que la transmisin de priones entre distintas especies es un proceso estocstico. En el caso de ocurrir, este proceso es muy poco eficaz y sucede con un prolongado tiempo de incubacin. La eficiencia de la transformacin de la protena PrPC a PrPSc viene determinada por la identidad de secuencia entre la protena exgena y la protena celular, de tal forma que cuando el agente patgeno es de diferente especie y, por tanto, presenta cambios en la secuencia de aminocidos, los tiempos de incubacin hasta la aparicin de signos se alargan. Por ejemplo, ratones inoculados con protena de prin de hmster, desarrollan la enfermedad tras 500 das de incubacin, mientras que este tiempo se reduce a 130 das cuando los ratones son inoculados con protena de prin procedente de ratn. Sin embargo, una vez que el prin atraviesa la barrera de especie y por tanto adquiere la secuencia proteica determinada por el gen del husped, en sucesivas infecciones los tiempos de incubacin en la nueva especie se acortan sensiblemente. Los priones sintetizados de novo reflejan la secuencia del gen de la PrP del husped (PrP endgena) y no la de las molculas de la PrPSc del inculo (PrP exgena). El gen PrP, aunque tiene una secuencia muy conservada en todas la especies, muestra algunas diferencias de una especie a otra. Las diferencias en la secuencia del gen PrP existentes entre especies podran ser las responsables de estas barreras entre especies. Para valorar esta hiptesis se construyeron ratones nulos (knock out) que no expresan el gen de la PrP. Estos animales resultaron resistentes a la infeccin con priones. Sobre estos animales se construyeron ratones transgnicos que expresaban el gen PrP de otras especies (HaPrP de hmster y otros) en lugar de la PrP murina. Los animales transgnicos se inocularon con priones de scrapie en pases sucesivos y cruzados. Los resultados de estos experimentos demostraron que la barrera entre especies desaparece introduciendo un transgn con la secuencia de la PrP de la especie de la que procede el inculo, existiendo una relacin inversamente proporcional entre los niveles de expresin del transgn y el tiempo de incubacin. Estos experimentos permite concluir que el gen PrP es el responsable de la barrera entre especies e influyen en el comportamiento del prin (replicacin, tiempo de incubacin, sntesis de PrP Sc y alteraciones neuropatolgicas) y que la susceptibilidad de una especie a la infeccin con un prin est determinada por la homologa entre la secuencia de la PrPSc inoculada y la PrPC del animal inoculado.