UNIVERSIDAD DE CARTAGENA FACULTAD DE INGENIERIA PROGRAMA DE INGENIERIA DE ALIMENTOS

DETERMINACIN DE MESOFILOS AEROBIO Y COLIFORMES TOTALES POR EL MTODO DE FILTRACIN POR MENBRANA Moiss D. Caro1; Roberto G. De Oro1; Yulis P. Figueroa1; Jonathan D. Jimenez1; Ivn A. Pea1; M. Duran2.
Correo electrnico: marlenelengua@gmail.com Estudiantes de ingeniera de alimentos1; profesor universidad de cartagena2. 18/03/2013

RESUMEN El objetivo principal de esta prctica fue el de aprender a realizar la tcnica de filtracin por membrana para el recuento de mesfilos aerobios yColiformes totales en muestras de
agua. Para esto se tom una muestra de agua la cual fue depositada en un sistema de filtracin, se coloc la membrana y se filtr el agua.Este procedimiento se realiz dos veces luego se situ una membrana o disco de filtro en agar plate count y la otra en agar VRBAy se incubaron durante 24 horas. En cada medio se encontr un gran crecimiento de microorganismos el cual hiso imposible realizar el recuento. De lo cual podemos concluir que la muestra analizada presentaba un alto grado de contaminacin y que el mtodo de filtracin por membrana es un mtodo muy eficiente para el anlisis de muestras liquidas en este caso agua. PALABRAS CLAVES:filtracin, membrana, recuento, mesofilos aerobios, Coliformes totales. ABSTRACT

El objetivo principal de esta prctica fue el de aprender a realizar la tcnica de filtracin por membrana para el recuento de mesfilos aerobios Coliformes totales, Coliformes
fecales, Estreptococos fecales y Mohos y levaduras en muestras de agua. Para esto se tom una muestra de agua la cual fue depositada en un sistema de filtracin, se coloc la membrana y se filtr el agua. Este procedimiento se realiz dos veces luego se situ una membrana o filtro en agar plate count y la otra en agar VRBA y se incubaron durante 24 horas. En cada medio se encontr un gran crecimiento de microorganismos el cual hiso imposible realizar el recuento. De lo cual podemos concluir que la muestra analizada presentaba un alto grado de contaminacin y que el mtodo de filtracin por membrana es un mtodo muy eficiente para el anlisis de muestras liquidas en este caso agua. . Keywords: filtracin, membrana, recuento, mesofilos aerobios, Coliformes totales.

INTRODUCCION

Este tipo de estudios es importantes debido el agua para el consumo humano debe ser de excelente calidad, la cual inicia desde su origen natural, el recorrido hasta la planta de tratamiento, los procesos realizados en esta, hasta su llegada al servicio domiciliario. A pesar de ello, las enfermedades de origen hdrico son frecuentes en los pases en desarrollo, por lo que los estudios de la bacteriologa del agua se han orientado en su mayor parte hacia el aspecto sanitario de la misma [1]. Los estudios bacteriolgicos se han orientado, en su mayor parte a evaluar los efectos de las enfermedades de origen hdrico. Uno de los criterios ms utilizados para determinar la calidad sanitaria del agua, es establecer la clase y nmero de bacterias que se encuentran presentes en una muestra de agua. El grupo de bacterias Coliformes ha sido siempre el principal indicador de calidad de los distintos tipos de agua; en este caso aguas subterrneas, el nmero de Coliformes en una muestra se usa como criterio de contaminacin y por lo tanto, de calidad sanitaria de la misma. (Pajares, Orlando, 2000). La tcnica de filtracin por membrana constituye un mtodo por el cual se filtran los microorganismos de una determinada muestra, hacindola pasar a travs de un filtro de membrana impermeable a estos, luego este filtro se coloca con una pinza estril sobre un medio de cultivo y se incuba; los principios activos del medio de cultivo difunden a travs del filtro y ofrecen la posibilidad a las bacterias presentes en la parte superior, de desarrollarse para dar colonias visibles. Para el conteo se tienen en cuenta las colonias tpicas y se hace la relacin segn el volumen o peso de muestra filtrada. El conjunto de unidad de filtracin consiste, en un embudo sin costuras que se fija a un receptculo provisto de una

placa porosa, que soporta al filtro de membrana. Ambas partes deben ser de un diseo y construccin tales que se puede fijar el embudo al receptculo por medio de un cierre adecuado que permita que el filtro de membrana se apoye con firmeza a la placa porosa, obligando a que todo el fluido pase a travs de la membrana durante la filtracin de la muestra.[3]. Para la determinacin de Coliformes totales se utilizel medio de cultivo Violet Red Bilis Agar (VRBA) tambin conocido como Agar Rojo Neutro Cristal Violeta (RNCV), se utiliza en la enumeracin de coliformes. Contiene peptona como fuente de carbono y nitrgeno. Extracto de levadura como fuente de complejo vitamnico B, el cual estimula el crecimiento bacteriano. Las sales biliares y el cristal violeta inhiben el desarrollo de Gram positivos. Lactosa como fuente de carbohidrato y rojo neutro como indicador de pH. Los organismos fermentadores de lactosa, como los coliformes crecen formando colonias rojas con sin zona de precipitacin, en cambio los no fermentadores de lactosa se desarrollan formando colonias incoloras a transparentes con sin zona de precipitacin. Para la confirmacin de coliformes se debe traspasar colonias aisladas a Caldo Bilis Verde Brillante [2].
MATERIALES Y MTODOS Primero en el aparato de filtracin se coloc el disco de filtro de membrana y se mont el sistema de filtro luego Se tomaron 100 ml de muestra en este caso agua. Estos se depositaron en la torre de filtracin. A continuacin se hiso uso de la bomba de vaco para as llevar acabo la total filtracin del agua.

Luego se removi cuidadosamente el disco con una pinza estril. Este disco de filtro se coloc directamente sobre el medio.

CONCLUSIN Al finalizar esta experiencia se puede concluir que el agua analizada presenta un alto grado de contaminacin representado es este caso por la gran cantidad de microrganismos mesofilos aerobios y Coliformes totales hallados en el anlisis realizado y por ende no es apta para el consumo humano. Tambin nos pudimos dar cuenta de la eficacia de la tcnica de filtracin por membranas al analizar muestras liquidas. Estas tcnicas son necesarias e indispensable para determinar el grado de calidad microbiolgica de muchos alimentos y por tanto nos ayudan a mejorar cada da la industria de los alimentos.

El procedimiento anterior se realiz dos veces y siempre cerca del mechero. Un disco de filtro fue colocado en agar plate count y se incubo entre 25-35C el otro disco de filtro se deposit en agar VRBG y se incubo a 35C durante 24 h. RESULTADOS Y DISCUSIN Despus de haber transcurrido las 24 horas se observ: En el agar plate count para determinacin de recuento de mesofilos aerobios una gran cantidad de colonias. Estas colonias presentaban una coloracin clara en comparacin con el medio. Debido a que el crecimiento de microorganismos fue alto, se hiso imposible hacer el recuento. En el agar VRBG para determinacin de Coliformes totales, tambin se observ una innumerable cantidad de colonias estas presentaban pequeas coloraciones con halo de precipitacin rojizo alrededor de cada colonia. Pero debido a la gran cantidad de colonias tampoco fue posible realizar el recuento.

BIBLIOGRAFA
1. Salgado MT. Microbiologa de los Alimentos. Editorial Universidad de Caldas. 1 Edicin. 2006. pag 34. ISBN: 9588231175. 2. BacteriologicalAnalytical Manual

Online. September 2002. Captulo 4 punto G. 3. Duran M. Gua de microbiologa. tcnicas de filtracin por membrana 2013.introduccion

La presencia de la gran cantidad de mesofilos se puede corresponder a que el agua utilizada est expuesta a contaminacin proveniente del suelo y la numerosa cantidad de mesofilos aerobios se debe a que el agua esta teniendo un tratamiento deficiente o poco eficaz para el control microbiolgico.