Captulo 2

Antgenos
Sergio A. Zambrano Villa
La definicin de antgeno, como aquella molcula capaz de inducir una respuesta inmunitaria y reaccionar con los productos de sta, ha experimentado cambios. Hoy en da se prefiere aplicar el trmino inmungeno a cualquier sustancia capaz de inducir una respuesta inmunitaria y el de antgeno a una molcula que reacciona de manera especfica con un anticuerpo o con los receptores de una clula sensibilizada. Por consiguiente, un antgeno difiere de un inmungeno en que, si bien puede reaccionar de forma especfica, no puede por s mismo inducir una respuesta inmunitaria, la cual requiere otros estmulos. Es decir, todos los inmungenos son antgenos, pero no todos los antgenos son inmungenos. Los linfocitos poseen receptores que enlazan antgenos de manera especfica. En el caso del linfocito B, el receptor del antgeno (BCR, B-cell receptor) es una inmunoglobulina que se encuentra anclada en la membrana celular (mIg); en el caso de los linfocitos T, se denomina receptor del antgeno de la clula T (TCR, T-cell receptor). La parte del antgeno que se une a estos receptores se llama determinante antignico o eptopo. Un antgeno puede ser una protena, polisacrido, lpido o cido nucleico, o una combinacin de stos; puede ser soluble o insoluble simple o complejo, y poseer determinantes antignicos diferentes, como ocurre en las bacterias. Aunque un antgeno puede tener muchos determinantes antignicos distintos, cada uno constituido por un pequeo nmero de aminocidos o residuos de carbohidrato, la respuesta inmunitaria resultante puede dar lugar a la produccin de anticuerpos que slo reconocen unos cuantos de ellos. Asimismo, dos individuos pueden distinguir eptopos totalmente diversos, lo cual sugiere que su reconocimiento se encuentra bajo control gentico. son aquellos contra los que est dirigida la mayor parte de los anticuerpos y donde participan de manera importante la accesibilidad, naturaleza hidroflica, flexibilidad y proximidad del sitio reconocido por las clulas T auxiliares (TH). Con respecto a los factores del hospedador, la inmunogenicidad es restringida por la tolerancia a lo propio; adems, los genes de la respuesta inmunitaria cumplen la muy importante funcin de regular la capacidad del individuo para formar anticuerpos contra un antgeno especfico. Estos genes inmunorreguladores especficos de cada antgeno son parte del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC), que codifica los antgenos de transplante. Como se ver ms adelante, los mecanismos de accin del MHC consisten en su efecto en las clulas TH. Por tanto, la respuesta inmunitaria a los antgenos proteicos es regulada por la clula T. Un hapteno, que por s mismo no es inmungeno, se vuelve tal cuando se conjuga con una protena (acarreador) que induce en un individuo una respuesta de clulas T. El reconocimiento del acarreador por la clula TH especfica induce la formacin de anticuerpos en la clula B; es decir, los factores que contribuyen a la induccin de una buena respuesta de la clula T tambin coadyuvan a la del linfocito B. En una protena, la identificacin de los determinantes antignicos que reconocen las clulas T permite entender mejor la inmunogenicidad y la participacin de los genes de la respuesta inmunitaria, y quiz tambin la forma de aumentar la respuesta de anticuerpos hacia una parte del antgeno biolgicamente relevante.

Procesamiento del antgeno

En general, las protenas son los nicos elementos capaces de generar una respuesta inmunitaria y para lograrlo requieren un procesamiento por las clulas auxiliares, seguido de la presentacin en su membrana, asociadas con molculas del MHC; lo anterior est determinado por la forma en que el antgeno ingresa en la clula. As, los antgenos exgenos producidos fuera de la clula del hospedador entran en la clula por endo o fagocitosis, donde la clula presentadora del antgeno (macrfago, clulas dendrticas y linfocito B) los degrada en fragmentos peptdicos mediante un procesamiento que lleva a cabo por la va endoctica. Dentro de esta va se expresan molculas de clase II, de tal modo que los pptidos que se producen se unen a estas molculas; este complejo se enva a la superficie celular, donde lo reconocen las clulas T CD4+. La expresin de las molculas de clase II del MHC se circunscribe a clulas que presentan antgeno, por lo que la presentacin de antgenos exgenos se limita a estas clulas.

INMUNOGENICIDAD
Las molculas ms inmungenas son las protenas, seguidas de los carbohidratos. Por otra parte, los lpidos y los cidos nucleicos no son inmungenos, a menos que estn formando complejos con protenas o polisacridos. En relacin con las protenas, en principio casi toda la superficie de una protena globular debe ser capaz de inducir la formacin de anticuerpos. Sin embargo, la inmunogenicidad de la protena en sus diferentes regiones se ve limitada por factores intrnsecos a su estructura y extrnsecos dependientes del individuo reactivo y que varan entre sujetos y entre especies. Los factores intrnsecos guardan relacin con las cantidades relativas de anticuerpos dirigidos contra cada sitio o clase de sitios de la molcula; entre stos figuran los inmunodominantes, que

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Por otra parte, el antgeno endgeno se produce dentro de la clula del hospedador, como sucede durante una infeccin viral o por efecto de una transformacin tumoral. Los pptidos se forman por degradacin en la va citoslica, y se enlazan en el retculo endoplsmico a molculas de clase I del MHC, de donde son transportadas a la membrana celu+ lar. En este caso los linfocitos T CD8 reconocen al antgeno vinculado con molculas de clase I del MHC (fig. 2-1). Como es evidente, el origen del antgeno define el tipo de molculas del MHC con las que se asocia, lo que restringe su reactividad con clulas CD4 o CD8. Las molculas que no pueden degradarse ni exponerse junto con las molculas del MHC, se comportan como inmungenos dbiles. En consecuencia, las clulas que escinden y presentan al antgeno a los linfocitos T, lo harn con mayor presteza si el estado fsico de la molcula facilita su fagocitosis. Esto explica porqu los antgenos insolubles que se fagocitan y procesan con ms facilidad son mejores inmungenos que los solubles. Este ltimo paso es indispensable porque los antgenos que no pueden ser degradados, como sucede con las protenas formadas por D-aminocidos, se comportan como malos inmungenos. Adems, los antgenos solubles tienden a comportarse como tolergenos; por ejemplo, la gammaglobulina monomrica que se obtiene por ultracentrifugacin de la gammaglobulina total es poco inmungena cuando se inyecta por va intravenosa y, a la inversa, induce tolerancia. Por otra parte, la gammaglobulina agregada por el calor es un buen inmungeno.

Requisitos fsicos y biolgicos

La inmunogenicidad de una molcula depende de varias caractersticas fsicas y bioqumicas, especficamente: tamao, composicin qumica, heterogeneidad y extraeza. Una molcula suele ser tanto ms inmungena cuanto mayor es su tamao. Las molculas con pesos moleculares <5 000 dalton (Da) son poco inmungenas, aunque se conocen algunas de ~1 000 Da que tienen esta capacidad. As, los polmeros de lisina no son inmungenos, pero adquieren inmunogenicidad si se les aade en cada extremo un radical dinitrofenol; por ejemplo, la heptalisina de <1 000 Da adquiere inmunogenicidad en esta forma, a pesar de que en este caso el peso molecular no sea superior a >1 070 Da. Sin embargo, el tamao de una molcula no es suficiente, ya que polmeros sintticos de >5 000 Da compuestos de un solo aminocido o carbohidrato no son buenos inmungenos. Aun as, si a estas molculas se les introducen aminocidos distintos, se vuelven ms heterogneas e inmungenas. As, copolmeros de cido glutmico y lisina que para inducir una respuesta inmunitaria requieren un peso molecular de ~40 000 Da, obtienen mayor inmunogenicidad con la incorporacin de aminocidos aromticos, como tirosina y fenilalanina; en estas condiciones, molculas de ~4 000 Da adquieren esta propiedad, lo que indica que la composicin es relevante en la induccin de esa respuesta. Los aminocidos aromticos proporcionan rigidez a la molcula que los contiene, lo cual incrementa en grado considerable su inmunogenicidad. Este fenmeno es muy evidente en la gelatina, cuya molcula es poco rgida y poco inmungena, aunque tales caractersticas pueden modificarse con la introduccin de tirosina (1%) por mtodos

qumicos. Sin embargo, un exceso del aminocido aromtico (3-10%) tiene el efecto opuesto, ya que los eptopos de la gelatina son encubiertos y los anticuerpos que se forman estn dirigidos principalmente hacia la tirosina. Podemos decir que una sustancia es tanto ms inmungena cuanto mayor complejidad qumica presenta; asimismo, la inmunogenicidad de una molcula depende en gran parte de su rigidez y la localizacin de sus eptopos. En un organismo sano, el sistema inmunitario est diseado para eliminar todo aquello que no le pertenece, es decir, es capaz de distinguir lo propio de lo extrao. Cuanto ms extraa es una molcula, tanto mayor es la probabilidad de que sea inmungena y de que este sistema reaccione contra ella. Es decir, aunque una molcula no sea inmungena en el hospedador en el que normalmente se encuentra, puede llegar a serlo si introduce en otro diferente. La capacidad de un individuo para distinguir lo propio se adquiere durante el desarrollo ontognico del sistema inmunitario, cuando los linfocitos inmaduros se exponen a los componentes del organismo; esto permite que los antgenos propios sean reconocidos posteriormente y no se genere una respuesta inmunitaria. Por otra parte, todas aquellas molculas que el organismo no reconoce como propias durante dicho desarrollo, pueden inducir una respuesta inmunitaria despus, cuando se ponen en contacto con el ser vivo, porque se les reconoce como extraas. Por esta razn un individuo puede recibir transfusiones de sangre compatible, sin responder inmunitariamente. El efecto opuesto se produce cuando el sujeto recibe sangre incompatible, que se reconoce como extraa. Un ejemplo tpico es el problema que presentan las mujeres embarazadas cuyos eritrocitos son Rh y que portan un feto que es Rh+ por herencia del padre; en estas condiciones, la madre se inmuniza o se sensibiliza, generalmente durante el parto, por medio de la sangre del producto, con formacin de anticuerpos contra + los eritrocitos Rh , los cuales, en un embarazo ulterior, pueden causar en el recin nacido una eritroblastosis fetal.

Clula presentadora de antgeno

CD8

Linfocito T

Clase I Antgeno

TcR

CD4

Clase II

Antgeno

Figura 2-1. Esquema de la presentacin del antgeno por la clula acce2.1 Zambrano soria (macrfago, linfocito B o clula dendrtica)Fig. asociado a molculas de clase I o II, a los linfocitos T CD8 o CD4, respectivamente.

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Inmunologa bsica y clnica

Los antgenos que se denominan secuestrados, como el esperma y el cristalino, son aquellos que no se expusieron al sistema inmunitario durante su desarrollo ontognico y que por ello pueden inducir una respuesta inmunitaria cuando se ponen en contacto con el organismo inmunitariamente maduro. Esto explica tambin porqu las molculas son tanto ms inmungenas cuanto mayor es la distancia filogentica entre el antgeno y la especie. Por ejemplo, la albmina del huevo es ms inmungena en el bovino que lo que es la albmina de esta ltima especie en la cabra.

Constitucin gentica
No hay duda de que el individuo que recibe la dosis inmunizante tambin participa de manera importante en el resultado final de la respuesta inmunitaria. En este aspecto, la constitucin gentica del receptor, as como la dosis, la va y la utilizacin de las sustancias que potencian la respuesta, conocidas como coadyuvantes, ejercen una gran influencia en el resultado final de la inmunizacin. La participacin de la constitucin gentica del individuo en la inmunogenicidad de una molcula fue puesta de relieve primeramente por los estudios de Hugh McDevitt y, ms tarde, por los de George Snell, Jean Dausset y Baruj Benacerraf, cuyas contribuciones en este campo les valieron la obtencin del Premio Nobel en 1980. Ahora se sabe que los genes que controlan la respuesta inmunitaria se encuentran en una subregin del MHC y que sus productos, junto con el antgeno procesado, son necesarios para el reconocimiento por el linfocito T, paso esencial en la induccin y la intensidad de la respuesta. Por supuesto, tambin intervienen otros genes, ya que en la respuesta inmunitaria colaboran adems otras clulas, sus receptores y molculas reguladoras. Un ejemplo que ilustra lo anterior es la capacidad que tiene el polisacrido de tipo III del neumococo de inducir una respuesta inmunitaria en seres humanos y equinos y su incapacidad de hacerlo en el conejo. En el cobayo, la poli-L-lisina es inmungena en la cepa 2, pero no en la 13. Esta capacidad de respuesta se hereda con carcter autosmico dominante.

del material inoculado. En este sentido, aquellas sustancias que los fagocitos ingieren, pero que no digieren con facilidad, son retenidas en el organismo por ms tiempo, lo que en algunos casos contribuye a aumentar su inmunogenicidad. La va de administracin del antgeno determina los rganos y poblaciones celulares donde ser captado, y la naturaleza de la respuesta inmunitaria resultante. La va ms frecuente de inmunizacin es la parenteral, le siguen la intramuscular o subcutnea y, en menor proporcin, la intradrmica. Las protenas que se administran por va subcutnea o intradrmica suelen ser ms inmungenas o inmunognicas, debido a que estos antgenos son captados en la epidermis por las clulas de Langerhans, que son clulas presentadoras de antgeno muy potentes, y eficientes transportadoras de antgenos hacia los ganglios linfticos regionales, lugar donde se inicia la respuesta inmunitaria. Por otra parte, cuando el antgeno se inocula por va intravenosa es llevado inicialmente al bazo; esta va no es recomendable porque el antgeno se elimina con ms rapidez, lo que impide una estimulacin prolongada, aunque en algunos casos resulta til como dosis de refuerzo. Los antgenos administrados por va gastrointestinal presentan efectos diferentes; frecuentemente inducen una respuesta local de anticuerpos en la lmina propia del intestino. No obstante, cuando se proporcionan despus en forma inmungena, por cualquier otra va, pueden producir un estado sistmico de tolerancia, que se manifiesta por una respuesta disminuida. En animales de laboratorio se usa con frecuencia la inoculacin intraperitoneal.

Participacin de los coadyuvantes

Con el propsito de prolongar el estmulo antignico se utilizan productos denominados adyuvantes o coadyuvantes, que favorecen o aumentan la respuesta inmunitaria. Los coadyuvantes difieren de los acarreadores proteicos en el hecho de que no forman uniones estables con el inmungeno; adems, suelen requerirse durante la inmunizacin inicial, mientras que los acarreadores se necesitan no slo para la induccin de la respuesta primaria del hapteno, sino tambin para rplicas posteriores. Su mecanismo de accin consiste en inducir reacciones inflamatorias locales, que en los macrfagos y clulas presentadoras de antgeno se asocian con una mayor expresin de coestimuladores, as como la secrecin de citocinas. Algunos de ellos actan mediante la formacin de un depsito de antgeno en los tejidos, que se libera lentamente. El coadyuvante ideal es aquel que es biodegradable y se elimina de los tejidos despus de que ha alcanzado su objetivo. Por lo general se administran asociados con el antgeno, pero a veces se inoculan antes o despus de ste. Entre los coadyuvantes utilizados figuran aceites naturales y minerales, productos de origen microbiano y compuestos sintticos. Los coadyuvantes que contienen aluminio tienen la capacidad de adsorber y precipitar al antgeno soluble, ocasionando en el tejido inoculado la formacin de depsitos, desde los cuales se liberan lentamente. La produccin de agregados tambin favorece la fagocitosis, con acumulacin de clulas fagocticas y linfocitos y la generacin de una masa densa, rica en macrfagos, denominada granuloma, donde los macrfagos activados estimulan a los linfocitos T (fig. 2-2). Se han usado geles de hidrxido de aluminio, sulfato de aluminio y

Dosis y va de administracin
En un individuo, cada antgeno presenta una dosis y va de administracin que produce una respuesta ptima. Para identificarla es necesario efectuar un estudio con diferentes dosis, en el cual tambin puede establecerse la va apropiada. Algunos antgenos en dosis muy altas (mg) o muy bajas (ng) inducen el efecto opuesto, es decir, falta de respuesta, o tolerancia inmunitaria. Para generar una respuesta inmunitaria alta por lo general es necesario administrar el inmungeno en ms de una ocasin en el transcurso de dos o tres semanas. Estos refuerzos expanden las clonas de clulas T y B especficas del antgeno, un hecho que explica en parte porque la respuesta secundaria y las subsecuentes se producen con dosis menores y logran una mayor respuesta, lo cual es un ndice de la memoria inmunitaria. Se desconoce la cantidad de antgeno que participa en la respuesta inmunitaria, aunque se piensa que slo lo hace una pequea parte. Se ha observado que despus de 48 horas de la inmunizacin se encuentra <1%

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Clula gigante CPA Th IL-2

Clula epiteloide Macrfago Linfocito

TNF

IFN

Fibroblasto Monocito

Fig. 2.2 Zambrano Figura 2-2. Esquema que ilustra la formacin de un granuloma que resulta de una respuesta inmunitaria. La reaccin hstica (tisular) se caracteriza por la presencia de macrfagos alterados (clulas epitelioides), linfocitos y fibroblastos. Estas clulas forman masas microscpicas de clulas mononucleares, que al fusionarse producen clulas gigantes. Los macrfagos activados pueden causar que las clulas T liberen linfocinas que favorecen la acumulacin de macrfagos.

alumbres de amonio y de potasio. El sulfato de aluminio y potasio al 1% se ha combinado con los toxoides tetnico y diftrico, los cuales se floculan con la adicin de hidrxido de sodio. Los ms utilizados en el laboratorio son el coadyuvante completo y el incompleto de Freund; el primero consiste de un aceite mineral, un emulsificador y Mycobacterium butyricum en suspensin. Los coadyuvantes que contienen micobacterias o Bordetella pertussis estimulan la actividad de los macrfagos y favorecen la digestin del antgeno. El principio activo del coadyuvante completo de Freund, el cual origina el aumento de anticuerpos y la induccin de hipersensibilidad retardada, es un muramilo dipptido (N-acetil-muramil-Lalanil-D-isoglutamina) que se extrae del peptidoglucano de la pared celular de la micobacteria. El muramilo dipptido induce fiebre, lisa las plaquetas sanguneas y puede producir una leucopenia temporal. Sin embargo, se han obtenido derivados purificados que no tienen efectos adversos y que pueden ser de utilidad en vacunas humanas.

del MHC. Es decir, la clula T reconoce a travs de su TCR el complejo formado por el pptido (eptopo) y la molcula del MHC (agretopo, del ingls antigen-restriction-tope) que proporciona la clula accesoria durante el procesamiento del antgeno (fig. 2-3). Las molculas del MHC enlazan ligandos peptdicos como parte integral de su estructura molecular, y son inestables cuando no se unen a ellos. Los pptidos que se enlazan a molculas de clase I del MHC contienen por lo general entre 8 y 10 aminocidos. El enlace es estabilizado en sus extremos por contacto entre tomos de los dominios aminoterminales y carboxiterminales y sitios constantes que se encuentran en cada extremo de la cavidad de todas las molculas de clase I del MHC que enlazan al pptido. Por otra parte, los pptidos que se enlazan a molculas de clase II del MHC contienen a lo largo, por lo menos, 13 aminocidos y pueden acomodar hasta 25. A diferencia de las molculas de clase I, las de clase II no presentan grupos de residuos conservados que enlacen los extremos del pptido, aunque los pptidos se encuentran en una conformacin extendida a lo largo de la cavidad. Las cavidades de enlace de las molculas de clase II son ms permisivas que las de clase I del MHC para dar acomodo a diferentes cadenas laterales de aminocidos. A diferencia del anticuerpo, las molculas de MHC carecen de especificidad y enlazan a una multiplicidad de pptidos diferentes, aunque es posible que los agretopos de estos pptidos compartan ciertas caractersticas estructurales que les permitan unirse a la misma molcula del MHC. La capacidad de un pptido para enlazarse a una molcula del MHC es necesaria pero no suficiente para inducir una respuesta inmunitaria y, adems, en un individuo el MHC determina la inmunodominancia de los eptopos de un antgeno, lo cual se ha determinado por medio de pptidos sintticos traslapados de una protena inmungena y estudios de correlacin de la capacidad de enlazarse al MHC y activar a clulas T especficas. Por otra parte, el linfocito B reacciona con los antgenos en solucin, sin los cambios vinculados al procesamiento intracelular ni a molculas del MHC, reconociendo preferentemente

Cooperacin celular
Los linfocitos reconocen solamente una pequea porcin de la molcula de antgeno. En consecuencia, durante la cooperacin celular, los linfocitos T y B identifican eptopos diferentes de la misma molcula; adems, el reconocimiento del antgeno por la clula T es diferente del que realiza la clula B. El linfocito B lo efecta uniendo sus receptores de mIg directamente a la superficie de la protena nativa, de modo que puede combinarse con aminocidos que son discontinuos en la estructura primaria pero que se encuentran juntos en la protena doblada. Por otra parte, el linfocito T responde a secuencias de aminocidos cortas y contiguas. Estas secuencias a menudo se encuentran ocultas dentro de la estructura natural de la protena y no pueden ser reconocidas directamente por el TCR, a menos que tenga lugar un desdoblamiento o procesamiento del antgeno proteico a fragmentos peptdicos. Estos fragmentos son reconocidos solamente cuando se encuentran enlazados a una molcula apropiada
TCR Eptopo Antgeno procesado Agretopo

Linfocito T

CD4 Molcula de clase II

Clula presentadora de antgeno Figura 2-3. Fragmento del antgeno procesado por la clula auxiliar. El Fig. 2.3 Zambrano esquema indica el eptopo que reconoce el TCR y el agretopo vinculado a la molcula de clase II del MHC.

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Inmunologa bsica y clnica

eptopos accesibles ubicados en la superficie de la molcula. En consecuencia, el linfocito B no identifica eptopos ocultos en el interior de una protena, y para lograrlo sta debe antes desnaturalizarse. La clula B enlaza al antgeno de manera no covalente, es decir, por fuerzas de unin que funcionan solamente a distancias cortas y, por consiguiente, requieren estrecha proximidad y complementariedad con el receptor globulnico de la clula.

de IgM, ya que el cambio (switch) de la globulina de superficie requiere la participacin de clulas T, esenciales en la afinidad y el cambio de isotipo.

ANTIGENICIDAD
El concepto de antigenicidad, como se coment antes, guarda relacin con la capacidad de un antgeno de ligarse especficamente a una molcula de anticuerpo o el TCR. Cualquier tipo de molcula biolgica, incluso metabolitos intermediarios simples, azcares, lpidos, hormonas y macromolculas (como carbohidratos complejos, fosfolpidos, cidos nucleicos y protenas) puede funcionar como antgeno.

Participacin del eptopo

El tamao del eptopo est determinado por el sitio de combinacin del anticuerpo, es decir, por su forma y residuos de aminocidos que lo conforman. Por supuesto, la dimensin del antgeno influye en cmo reacciona con el sitio de combinacin de la globulina; es decir, antgenos pequeos que se doblan en una estructura compacta encajan dentro del sitio, mientras que antgenos grandes, como las protenas globulares, ocupan un rea ms extensa en la superficie del anticuerpo. Por medio de oligopptidos sintticos de tamaos diferentes, como oligolisina, se ha estimado el tamao del sitio de combinacin del anticuerpo; estos estudios sugieren que la mxima longitud puede acomodar de seis a ocho residuos, lo que corresponde a lo observado en el caso de los oligosacridos, donde en un sistema dextrano-antidextrano son suficientes de cuatro a seis residuos de glucosa. El contacto del antgeno con la clula B especfica desencadena la seal transmembrana del BCR. sta a su vez, induce en la clula B los sucesos iniciales de activacin, entre ellos una mayor expresin de las molculas de clase II del MHC, y en el ciclo celular la salida del estado de reposo G0 hacia la fase G1; si el estmulo antignico es fuerte, se produce la proliferacin. Despus del enlace del antgeno, las molculas del BCR se introducen, ocasionando en los endosomas o lisosomas la captura del antgeno y su degradacin. En el caso de antgenos proteicos, los pptidos derivados se unen a la cavidad de las molculas de clase II, despus de lo cual el complejo es llevado a la superficie celular, donde sirve de estmulo para las clulas TH especficas.

Especificidad inmunitaria
El concepto de antigenicidad est estrechamente relacio nado con la especificidad de la respuesta inmunitaria. Uno de los precursores en el estudio de la especificidad inmunitaria fue Karl Landsteiner, quien utiliz en sus trabajos sustancias orgnicas simples o haptenos, de peso molecular reducido (<1 000 Da), que tienen la propiedad de reaccio nar con los anticuerpos, pero que no son capaces de inducir una respuesta inmunitaria. Sin embargo, si estos haptenos se conjugan qumicamente en protenas inmungenas o acarreadores (fig. 2-4), pueden inducir la formacin de anticuerpos. Los anticuerpos resultantes reconocen especficamente al hapteno, al acarreador y al complejo haptenoacarreador; en estos casos, el hapteno se comporta como un determinante inmunodominante. Con estos complejos hapteno-acarreador, Landsteiner estudi la respuesta dirigida exclusivamente contra el hapteno, para lo cual us el mismo, pero combinado con un acarreador diferente. Sus investigaciones demostraron los efectos que ejercen los cambios sutiles en la molcula del antgeno en la capacidad de sta para reaccionar con el anticuerpo. As, cuando a un grupo aminobenceno se le introduce un radical carboxilo en diferentes posiciones, los anticuerpos resultantes presentan especificidades diferentes; el anticuerpo dirigido contra el aminobenceno no reacciona con las variantes o, m o p-aminobenzoico; de igual manera, un anticuerpo dirigido contra cualquiera de estas variantes reaccionar exclusivamente con la molcula que lo indujo (cuadro 2-1). El reconocimiento del antgeno por su anticuerpo presenta una gran especificidad que le permite distinguir entre po lmeros compuestos por D o L-aminocidos; otro ejemplo de la estereoespecificidad es la capacidad que tiene un anticuerpo para distinguir entre la alfa y la beta-glucopiranosa y de discriminar la celobiosa de la lactosa, cuyas molculas difieren slo en la posicin del hidroxilo en el carbono 4 (fig. 2-5). Por ltimo, un ejemplo que resalta el tema que nos ocupa es, sin duda, la especificidad de los anticuerpos contra grupos sanguneos. El eptopo inmunodominante del grupo sanguneo A es una N-acetilgalactosamina, mientras que el del grupo B es la galactosa (fig. 2-6). Los anticuerpos anti-A no reaccionan con los eritrocitos del grupo B y viceversa, lo que indica que son capaces de distinguir la presencia o ausencia de radicales amino y acetilo presentes en la misma estructura.

Antgenos dependientes e independientes de timo

La naturaleza del antgeno define la va de activacin del linfocito B. Un grupo de antgenos requiere el contacto directo con clulas TH y no simplemente la exposicin a sus productos, es decir, citocinas; stos se denominan antgenos dependientes del timo. Otro grupo causa la activacin de las clulas B sin el requisito de TH, por lo que se llaman antgenos independientes de timo (TI). Los TI pueden actuar de dos formas: los llamados de tipo 1 o TI-1 son activadores policlonales de B, como los mitgenos, donde no interviene la especificidad antignica, y los de tipo 2 o TI-2 contienen unidades repetidas de polisacridos o protenas polimricas, como la flagelina bacteriana, que dan lugar a un entrecruzamiento de las mIg presentes sobre la superficie del linfocito B. La respuesta de los antgenos TI se caracteriza por ser dbil, sin la formacin de clulas de memoria y con produccin casi exclusiva

Antgenos

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Hapteno

Hapteno-acarreador

cido diazoarsanlico +

NH

+ OH OH HN AsO3H2

CH2 Protena NH CH C O Acarreador Protena que contiene tirosina Protena Protena NH

CH2 CH C O Protena conjugada a un hapteno diazoado Protena

Figura 2-4. Representacin de la combinacin de un hapteno diazoado con un acarreador proteico con tirosina que produce un conjugado hapteno-acarreador.

Fig. 2.4 Zambrano CH2OH O OH HO O OH Celobiosa OH OH OH OH Lactosa CH2OH O HO OH CH2OH O O OH OH OH CH2OH O

Figura 2-5. Frmulas qumicas de la celobiosa (glucosa 1 g 4 glucosa) y lactosa (galactosa 1 g 4 glucosa), que se distinguen solamente posicin de Fig.por 2.5 la Zambrano un hidroxilo en el carbono 4 de las molculas (glucosa o galactosa).

Reacciones cruzadas
Las observaciones de Landsteiner tambin pusieron de manifiesto la reaccin cruzada de un anticuerpo con antgenos

que presentan pequeas diferencias en su estructura qumica (cuadro 2-2), o bien con molculas distintas que contienen eptopos idnticos. En el primer caso, la afinidad del anticuerpo suele ser menor que la que se observa con el eptopo original. Algunos microorganismos de la flora intestinal presentan eptopos similares a los de grupos sanguneos, por lo que inducen la formacin de anticuerpos en aquellos individuos que carecen de los determinantes antignicos respectivos; los anticuerpos inducidos de esta manera reaccionan en forma cruzada con eptopos similares ubicados en los eritrocitos. Tambin algunas bacterias, como Streptococcus pyogenes, contienen en su pared celular una protena, denominada M, que induce en los individuos infectados la formacin de anticuerpos que reaccionan en forma cruzada con protenas del hospedador presentes en miocardio y msculo estriado, y causan trastornos cardiacos y renales. Un ejemplo interesante de las reacciones

Cuadro 2-1. Especificidad de la reaccin hapteno-anticuerpo: efecto del cambio de posicin del carboxilo en un grupo aminobenceno

Reaccin con: Antisuero contra Aminobenceno cido o -aminobenzoico cido m-aminobenzoico cido p -aminobenzoico Aminobenceno +++ o -aminobenzoico 0 +++ m-aminobenzoico 0 ++++ p -aminobenzoico 0 -

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Inmunologa bsica y clnica

Antgeno

Comn N-acetilglucosamina

Diferente

A Poli-D, L-alanina Poli-L-lisina

O Lpido y protena A

Fucosa N-acetilgalactosamina L-tirosina L-glutmico Figura 2-7. Esquema de dos copolmeros que se diferencian por el ordenaFig. 2.7 Zambrano miento de sus aminocidos en las cadenas laterales. A, esquema de la poli-Llisina con cadenas laterales de poli-D,L-alanina en cuyos extremos libres se unen residuos de L-tirosina y L-glutmico; B, en este copolmero los residuos de L-tirosina y L-glutmico se encuentran unidos al esqueleto de poli-L-lisina y sobre ellos se encuentran adheridas las cadenas de poli-D,L-alanina. Galactosa

Fig. 2.6 Zambrano Figura 2-6. Representacin esquemtica de los grupos sanguneos O, A y B, donde se muestra la estructura de los azcares terminales que los caracterizan.

cruzadas es la vacunacin contra la viruela, en la cual el uso de un virus que causa esta enfermedad en las vacas (Poxvirus officinale) protege contra el virus de la viruela humana (Poxvirus variolae), gracias a la similitud antignica entre ambos virus.

Accesibilidad de los eptopos

Un estudio muy ingenioso de Michael Sela, del Instituto Rehovot de Israel, acerca de la especificidad de la respuesta inmunitaria, pone de relieve la importancia de la accesibilidad de los eptopos en su reactividad con el anticuerpo. El autor us dos copolmeros sintetizados con los mismos aminocidos; el esqueleto constituido por poli-L-lisina presenta variaciones solamente en la posicin de la tirosina y el cido glutmico. En el primero (fig. 2-7A) se agrega una ramificacin de poli-D,L-alanina que contiene en su extremo terminal residuos de L-tirosina y L-glutmico, mientras que en el segundo (fig. 2-7B) se aaden directamente sobre el esqueleto los residuos de L-tirosina y L-glutmico, por encima de

los cuales se une la poli-D,L-alanina, que queda en el exterior de la molcula. Los anticuerpos dirigidos contra el primer copolmero reconocen principalmente a la L-tirosina y al L-glutmico situados en los extremos de aqul. Sin embargo, este anticuerpo no reacciona con el segundo a pesar de tener la misma composicin, ya que la L-tirosina y el L-glutmico no estn accesibles al anticuerpo. Este dato sugiere que la superficie de una molcula proteica globular es potencialmente antignica, es decir, que las regiones que sobresalen son reconocidas como eptopos, cuyos residuos suelen ser hidrfilos. Los eptopos que reconoce un anticuerpo pueden ser secuenciales o conformacionales, estos ltimos constituidos por segmentos y no por secuencias, que se unen por el doblamiento conformacional o estructura terciaria del antgeno. Lo anterior tambin se refleja en la afinidad que presentan los anticuerpos producidos por inmunizacin con la protena nativa o natural, los cuales presentan mayor afinidad hacia la conformacin nativa que hacia otras conformaciones de fragmentos o molculas desnaturalizadas. Asimismo, los anticuerpos formados contra fragmentos o molculas desnaturalizadas suelen tener una mayor afinidad para estas formas que para la conformacin natural. De esta manera, si se inmuniza un conejo con ribonucleasa nativa que contiene cuatro puentes disulfuro que le dan una conformacin definida a su cadena polipeptdica (fig. 2-8), se obtienen anticuerpos que no reaccionan con la ribonucleasa que ha sido oxidada con cido perfrmico y ha perdido su conformacin original. Del mismo modo, los anticuerpos contra la forma oxidada no reconocen a la molcula nativa.

Cuadro 2-2. Reacciones cruzadas entre eptopos estructuralmente relacionados

Reaccin con: Antisuero contra Aminobenceno p -Cloroaminobenceno p -Toluidina p -Nitroaminobenceno Aminobenceno ++++ +++ + + p -cloroaminobenceno + ++ ++ ++ p -toluidina + ++ ++ + p -nitroaminobenceno + + + +

Antgenos

19

95 1 26 84 96 40 110 58 cido perfrmico 72 110 SH SH HS

HS 84

58 65 72

HS HS

40

26

124 Ribonucleasa oxidada y desnaturalizada

Ribonucleasa nativa

Fig.nativa, 2.8 Zambrano Figura 2-8. Esquema de la enzima ribonucleasa en su forma con sus cuatro puentes disulfuro que le dan una conformacin definida. La oxidacin causa una desnaturalizacin de la molcula que ocasiona la prdida de su conformacin.

Se ha encontrado que la mayor parte de la superficie de una protena globular es potencialmente antignica, por lo cual debe mostrar una gran cantidad de sitios con esta propiedad, aunque slo unos cuantos son reconocidos por el sistema inmunitario. En este aspecto existen variaciones tanto entre especies como entre individuos de una misma especie.

ADN del cromosoma o se mantiene durante largo tiempo en forma de episoma. Es probable que las clulas dendrticas cercanas al sitio de inoculacin tambin capten al ADN y expresen el antgeno viral, particularmente porque estas clulas y no las musculares manifiestan molculas coestimulantes. Este tipo de vacunas induce inmunidad humoral y celular, y adems genera la expresin del antgeno durante largo tiempo, lo que seguramente redunda en una buena respuesta anamnsica. Sin embargo, se desconoce qu clulas precisamente capturan al ADN y qu consecuencias pueda acarrear una estimulacin prolongada del antgeno codificado. No obstante, la facilidad con que se manipula el cADN para expresar muchos antgenos diversos, y la capacidad de coexpresar otras protenas que pueden aumentar la respuesta inmunitaria, como citocinas y coestimuladores, vuelven muy promisoria esta tcnica.

MITGENOS
Los inmungenos estimulan a clulas T y B que los reconocen a travs de receptores especficos. Por otra parte, existe un grupo de sustancias llamadas mitgenos, que activan policlonalmente a los linfocitos T y B. Se conocen dos grupos principales de mitgenos, las lectinas y los lipopolisacridos de bacterias gramnegativas. Las lectinas son protenas que se enlazan a la porcin glucdica de las glucoprotenas, mientras que los lipopolisacridos reaccionan con la membrana plasmtica por medio de un lpido. La reaccin de las lectinas o lipopolisacridos con los linfocitos causa aglutinacin o agregacin, as como activacin y proliferacin celular. Entre las lectinas ms conocidas destacan la concanavalina A y la fitohemaglutina, que se obtienen de legumino sas del gnero Phaseolus, y que actan selectivamente en linfocitos T, induciendo activacin y proliferacin celular. Otra es la fitolaca, que a diferencia de las anteriores ejerce su efecto en linfocitos tanto T como B. Por otra parte, los lipopolisacridos bacterianos, en concentraciones bajas, favorecen la produccin especfica de anticuerpos, pero en cifras altas actan como activadores policlonales, estimulando la proliferacin y diferenciacin de un gran nmero de clulas B, independientemente de su especificidad antignica.

ANTGENOS RECOMBINANTES
El diseo de vacunas ha experimentado cambios importantes, gracias a los adelantos logrados en biologa molecular en los ltimos aos; en este campo, por medio de la metodologa del ADN recombinante ahora es posible obtener antgenos especficos. En esta forma, un gen que codifica una protena inmungena puede ser aislado y clonado en bacterias, levaduras o clulas de mamfero. La primera vacuna diseada de esta manera ha sido la vacuna contra la hepatitis B, en la que se aisl y clon en levaduras el gen que codifica al antgeno principal de superficie (HbsAg). Esta vacuna induce la formacin de anticuerpos protectores. Debido a que las vacunas as obtenidas son procesadas como antgenos exgenos, no tienden a inducir la activacin de clulas T restringidas a molculas de la clase I. Hoy en da se prefiere usar como vectores a bacterias o virus atenuados que se replican dentro del hospedador y, al mismo tiempo, expresan el producto del gen del patgeno, que constituye un inmungeno potente. Con este propsito se han usado el virus de la viruela vacuna, cepas atenuadas de Salmonella sp y el BCG de Mycobacterium bovis. El virus vacuno favorece tanto la respuesta humoral como la celular, en tanto que Salmonella sp, que infecta clulas de la mucosa del tubo intestinal, propicia la produccin de IgA secretora.

SUPERANTGENOS
En fecha reciente se ha descrito un grupo de antgenos, denominados superantgenos, que tienen la peculiaridad de estimular selectivamente a los linfocitos T. Se han identificado superantgenos exgenos de origen bacteriano, y endgenos codificados por algunos virus que infectan clulas de mamferos. Ambos son dependientes de linfocitos T y no requieren un procesamiento fagoctico, ya que en lugar de encajarse en el TCR donde se insertan tpicamente las molculas inmungenas, se enlazan con la regin externa del dominio Vb del TCR y simultneamente a la cadena a de las molculas DP, DQ o DR del MHC (vase captulo Complejo mayor de histocompatibilidad) ubicadas en las clulas presentadoras de antgeno (fig. 2-9). De esta manera, los superantgenos pueden entrecruzar a la clula T con una molcula de clase

USO DE VACUNAS DE ADN COMO FUENTE DEL ANTGENO AL QUE CODIFICA

Un mtodo de inmunizacin que experimentalmente ha mostrado gran eficacia es la vacunacin con un plsmido que contiene un ADN que codifica un antgeno viral. El ADN es captado por las clulas musculares y el antgeno pro teico codificado expresa e induce una respuesta humoral y celular. Se desconoce si el ADN se integra dentro del

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Inmunologa bsica y clnica

Linfocito T

TCR

Superantgeno

Molcula de clase II

Clula presentadora de antgeno Fig. 2.9 Zambrano Figura 2-9. Esquema de un superantgeno que se une por la regin externa del TCR a travs de la cadena V b y un dominio de la molcula de clase II del MHC presente en la clula auxiliar.

II de la clula accesoria, aun cuando el TCR no reconozca a un antgeno peptdico enlazado, y activar as al linfocito. Los superantgenos reaccionan con muy diversas molculas del TCR cuya estructura perifrica es similar, de manera que estimulan esta forma a mltiples clulas T que aumentan una respuesta protectora tanto de clulas T como B. As, estas molculas al combinarse con el TCR Vb y el dominio a-1 de la molcula DR, pueden inducir la proliferacin de 10% + de clulas T CD4 y originar as la liberacin de grandes cantidades de citocinas. Staphylococcus aureus produce una enterotoxina y una toxina que ocasiona un sndrome de choque txico, la segunda causa choque y muerte en el sndrome de los tampones, ocasionado por la liberacin de grandes cantidades de citocinas. Estas toxinas activan a un gran nmero de clulas TH, al entrecruzar el TCR con molculas de clase II del MHC que expresa la clula accesoria presentadora de antgeno. Un retrovirus murino que produce tumores mamarios se integra al ADN de algunas cepas de ratones; las clulas infectadas expresan en su membrana las protenas virales llamadas Mlc (del ingls minor lymphocyte-stimulating). Los antgenos virales producidos por las clulas de una cepa son capaces de activar los linfocitos T de otra cepa que expresen en su TCR ciertos dominios Vb. Se trata de una forma de reaccin de linfocitos mixta que no es ocasionada por disparidad en el MHC, sino por la presencia de genes retrovirales distintos, que se heredan de manera estable en cepas homocigotas.

Bibliografa
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