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Procedia Environmental Sciences 12 (2012) 432 438

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Procedia Ciencias Ambientales 12 (2012) 432 - 438 1878-0296 2011 Publicado por Elsevier BV Seleccin y / o la revisin de pares, bajo la responsabilidad de la Universidad Nacional de Singapur. doi: 10.1016/j.proenv.2012.01.300 2011 Conferencia Internacional de Ciencia e Ingeniera Ambiental (ICESE 2011)

La produccin de aceites microbianos fermentada por dos pasos Fermentacin con el tallo del maz

Xin-she Li, Bu-shi Lu, Hai-Long LI, Tao Yin


Department of Biology and Chemistry Engineering Shaoyang University Shaoyang , China 422000 lixin651002@sohu.com

Abstract El tallo de maz fue fermentado primero por Trichoderma koningii para producir azcar reductor, a continuacin, la produccin fue re-fermentada por Trichosporon cutaneum para producir aceites microbianos. Las mejores condiciones de proceso se obtuvieron prueba ortogonal a travs de la medicin del contenido de la reduccin de azcar y los aceites microbianos en el producto. El resultado muestra que el contenido de azcar reductor del tallo de maz fermentado por Trichoderma koningii bajo el aditivo de Trichoderma koningii es 11% a pH 6 para 5d fue 2,385 mg / ml. El contenido de aceites microbiana del tallo del maz, fermentadas por Trichosporon cutaneum bajo el aditivo de Trichosporon cutaneum es 9% a 28para 7d era 1.276g por 100g productos de fermentacin. La investigacin proporciona un nuevo camino para la utilizacin de tallo de maz y tambin proporciona un nuevo mtodo para el desarrollo de aceites microbianos.

2011 Published by Elsevier Ltd. Selection and/or peer-review under responsibility of [name organizer] 2011 Published by Elsevier B.V. Selection and/or peer-review under responsibility of National University of Singapore.
Keywords: Corn stalk; Trichoderma koningii; Trichosporon cutaneum; Two-step fermentation; reducing sugar; Microbial oils.

1. Introduction
Aceite microbiano que tambin se conoce como aceite unicelular, se almacena en la levadura, moho, algas y otros productores de petrleo microorganismos en condiciones determinadas [1]. Tiene muchas ventajas para producir aceite microbiano. Los microorganismos se reproducen rpidamente que puede acortar el ciclo de produccin. Las materias primas son ricas y baratas que puede reducir los costos. La produccin no se ve afectada por la temporada y el clima y fcil Cultivar en gran escala
The project (2010JT4055) is supported by Hunan Provincial Natural Science Foundation of China.

1878-0296 2011 Published by Elsevier B.V. Selection and/or peer-review under responsibility of National University of Singapore. doi:10.1016/j.proenv.2012.01.300

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En la actualidad, la investigacin de la produccin de aceite microbiano que se centran principalmente en la produccin de alto valor del petrleo funcionalidad en el extranjero [2-5] . Durante su estancia en China, muchas investigaciones tambin se haba hecho [6-10], todos hacen no considerar las materias primas. Es en el nivel bajo de la produccin industrial y en la viabilidad econmica pobre debido al costo de las materias primas. As, la bsqueda de una materia prima barata es la clave de la produccin industrial de aceite microbiano. Paja son abundantes recursos renovables de la tierra. De acuerdo con estadsticas de la FAO, la produccin anual de paja en el mundo es de unos 20-30 millones de toneladas. En China, la produccin anual de la paja de la cosecha es de unos 700 millones de toneladas, que es en un 20% - 30% del total de paja en el mundo [11] Y tallos de maz, paja de trigo, paja de arroz son ms de 75% de la misma. En la actualidad, los tallos de maz se utilizan principalmente para regresar campo, para fermentar como pienso o para producir el combustible de etanol [12-15] etc, y la tasa de utilizacin es menor que 60% del total y el restos fueron quemados que caus gran desperdicio de recursos y la contaminacin ambiental. Si el maz tallos se fermenta para producir aceite microbiano para la preparacin de biodiesel, se puede evitar ser quemados y causando la contaminacin del medio ambiente y tambin pueden desarrollar una forma de energa limpia y renovable para el soluto crisis energtica actual. En este trabajo, las condiciones de proceso del tallo de maz Trichoderma koningii fermentar para producir azcar reductor, y el Trichosporon cutaneum volver a fermentar el azcar reductor para producir los aceites microbianos fueron estudiados para proporcionar una base tcnica para la produccin adicional de petrleo microbiana

2. Experimental

2,1 Materiales y cepas bacterianas Los tallos de maz se recolectaron en Hunan, China, en agosto de 2009, que fueron cortados y se seca a 72 C durante 24 h. Los tallos secos del maz fueron aplastados con la amoladora [16] y depositado en el Departamento de Biologa y Ingeniera Qumica, Universidad Shaoyang, Shaoyang, China. Los microorganismos utilizados en el experimento incluy Trichoderma koningii (GIM3.444) y Trichosporon cutaneum (GIM2.68). Todos los cultivos microbianos se obtuvieron a partir de cultivos microbianos Centro de Recaudacin de la provincia de Guangdong, China, y se mantuvieron en agar papa dextrosa (PDA) en 28C.

2.2 Preparation of media


La composicin de papas dextrosa agar (PDA)[17]: 20% potatoextract1L, glucose20g, KH2PO43g, MgSO47H2O1.5g, vitamin B1, trace 8mg, agar20g, pH 6. Preparation of 20% potato extract: 200g de patatas peladas se cortron en trozos pequeos, then 1000 ml se aade agua para hervir por 20 min. After that, the potato pieces were filtered and the total volume was adjusted to 1000ml. The composition of Mandels nutrient solution [18]: KH 2 PO 4 2g, (NH 4 ) 2 SO 4 1.4g, MgSO 4 7H 2 O 3g, CaCl2 0.3 g, (Fe) 2(SO 4)3 7H 2 O 5mg, MnSO4 1.6mg, CoCl 2.0mg, distilled water 1000ml. La composicin del medio de fermentacin en estado slido de polvo de caa de maz: Maz tallo polvo de 800 g, Bran 200 g, 100 ml de solucin de nutrientes Mandels, 1250ml de agua destilada.. Todo medio se esteriliz en autoclaves de vapor de alta presin a 121 C durante 20 min

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2,3 activacin y expansin de bacterias del cultivo Trichoderma koningii y cutaneum Trichosporon eran cultivadas en agar papa dextrosa (PDA) a 28C. para 3d por tres veces. Despus de que las especies activadas Trichoderma koningii se incubaron en jugo de la patata dextrosa (PD) a 28 C para 4d y las especies activadas Trichosporon cutaneum eran incubaron en jugo de la patata dextrosa (PD) a 28 C para 3d. Entonces las cepas productoras se ha subido 2,4 Determinacin de azcar de reduccin Los azcares reductores se determinaron mediante DNS [19] . De acuerdo con la Tabla I, seis tubos de ensayo limpios fueron llevado a cabo el experimento. Cada tubo de ensayo con la solucin estndar de glucosa se midi con espectrofotometra a 540 nm y la curva estndar de glucosa se ha elaborado, la absorbancia se expresa como coordinar mientras que la concentracin estndar de solucin de glucosa se expres como abscisa
Table I Data of reagents in test tube Project Total sugar(mg) glucose solution (ml) Distilled water (ml) DNS reactivo(ml) Calor Fresco Distilled water (ml) A540nm No.of test tube Blank 0 0 1.0 2.0 1 0.2 0.2 0.8 2 0.4 0.4 0.6 3 0.6 0.6 0.4 4 0.8 0.8 0.2 5 1.0 1.0 0

Toda la solucin se hierve durante 5 min con bao de agua Refrigerado con agua corriente inmediata
9.0 0 0.381 0.804 1.265 1.537 2.010

La solucin se hierve durante 5 min con bao de agua despus de la adicin de solucin de muestra de 1 ml y 2 ml Reactivo DNS en tubos de 25 ml de comparacin, entonces lo saquen y se enfra inmediatamente con agua corriente. Despus la adicin de 9,0 ml de agua destilada, se midi con espectrofotometra a 540 nm con el blanco para Por el contrario, el contenido de glucosa puede obtenerse a partir de la curva estndar de glucosa segn la absorbancia 2,5 Determinacin de aceite microbiano El aceite microbiano se determin por el mtodo de extraccin de Soxhlet [19]. Las clulas en sustrato slido fermentacin se rompieron por congelacin y meltting alternativamente de modo que el aceite microbiano puede ser liberado. Luego de 3 g de las muestras se pusieron en un vaso de precipitados pequeo secar a 72 C durante 2 h. Un trozo de papel de filtro (8 cm x 8 cm) se puso en la parte inferior del tubo de extraccin. Despus de que el pequeo frasco de extraccin Soxhlet se sec a 103105 durante 2 h, se enfri en secadora y se pesaron con una balanza electrnica analtica, a continuacin, 1/3 -1 / 2 volumen de ter anhidro se vierte pulg Cada seccin de extractor Soxhlet se asocien entre s y fue se calienta en bao de agua a 44 para el ter anhidro 4h.When estaba completamente en el frasco pequeo, saque el papel de filtro y volver de nuevo hasta dietil ter en tubo de extraccin estaba cerca de la parte superior del sifn y no se fluir en el matraz pequeo, se vierte el disolvente en el tubo de extraccin y se calienta el matraz pequeo hasta el disolvente se evapor. Despus de eso, el pequeo frasco se pes cuando se seca a 103105 para 3 0min y se enfri a temperatura ambiente. El contenido de aceite microbiano que se puede obtener de la mayor peso del matraz pequeo

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2,6 de dos pasos de fermentacin experimento Medio de fermentacin en estado slido de polvo de maz tallo estaba preparado para la cultura koningii Trichoderma en 28for algn tiempo. A continuacin, la produccin fue re-fermentada por Trichosporon cutaneum en constante temperatura para producir los aceites microbianos. Las mejores condiciones de proceso se puede obtener mediante la medicin de la contenido de la reduccin de azcar y los aceites microbianos en el producto 3. III. Resultados 3,1 Glucosa curva estndar Una serie de soluciones estndar de glucosa se prepararon y se determinaron con espectrofotometra a 540 nm, y la curva estndar de glucosa se ha elaborado en el que la absorbancia se expres como la ordenada mientras que la concentracin estndar de solucin de glucosa se expres como abscisa. Los resultados de la glucosa curva estndar se muestran en la Fig.1.

Fig.1 Standard curve of glucose

3.2 Determinacin de las condiciones de proceso de la fermentacin primero-paso El inculo de Trichoderma koningii, el pH de la fermentacin inicial y el tiempo de were3set cultura como tres factores y tres niveles de cada uno fueron tomadas. Las condiciones ptimas se obtuvieron por L93 prueba ortogonal a travs de la medicin del contenido de azcar reductor en el producto. Diseo de la prueba ortogonal de la fermentacin de primera etapa est en la lista en la Tabla II y los resultados de la prueba ortogonal y el anlisis de datos se muestra en la Tabla III. Tabla II diseo de la prueba ortogonal de la fermentacin primero-paso
Level 1 2 3 Inoculum (A)/% 9 11 13 Ph (B)/ 4 5 6 Culture time (C)/d 5 6 7

Tabla III Resultados de la prueba y el anlisis de datos ortogonal de la primera fermentacin a paso

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Test 1 2 3 4 5 6 7 8 9 k1 k2 k3 Range

Inoculum (%) 9 1 11 2 13 3 9 1 11 2 13 3 9 1 11 2 13 3 0.644 1.756 1.536 1.113

pH 4 1 4 1 4 1 5 2 5 2 5 2 6 3 6 3 6 3 1.127 1.339 1.470 0.342

Culture time d 5 1 6 2 7 3 6 2 7 3 5 1 7 3 5 1 6 2 1.846 0.973 1.117 0.873

Content 0.467 1.822 1.093 0.268 1.063 2.686 1.195 2.385 0.829

of

reducing

sugar mg/ml

Se puede observar a partir de la Tabla III que la mejor combinacin fue A2B3C1. El orden de los valores de rango es RA> RC> RB. Entre todos los factores, el inculo es el factor ms influyente en el experimento y seguido por el tiempo de cultivo, el pH es el factor menos influyente. El contenido de azcares reductores de la caa de maz fermentado por Trichoderma koningii era 2.385mg/ml cuando el inculo de Trichoderma koningii was11% a pH 6 durante 5 das. 3.3 Determinacin de las condiciones de proceso de la fermentacin segundo paso El inculo de Trichosporon cutaneum, la temperatura y el tiempo de cuture cuture se establece como tres factores y se tomaron tres niveles de cada uno. Las condiciones ptimas se obtuvieron por L9 33 prueba ortogonal a travs de la medicin del contenido de aceite microbiano en el producto. Diseo de la prueba ortogonal de caa de maz fermentada por Trichosporon cutaneum aparece en la tabla cand resultados de la prueba y el anlisis de datos ortogonal de caa de maz fermentada por Trichosporon cutaneum se enumeran en la Tabla C.
Tabla C diseo de la prueba ortogonal de la fermentacin de segunda etapa
Test 1 2 3 Inoculum (A)/ % 9 11 13 Cuture temperature (B)/ 26 28 30 Culture time (C)/d 6 7 8

Tabla C Prueba ortogonal y el anlisis de datos de la fermentacin de segunda etapa


Test 1 2 3 Inoculum (%) 9 1 11 2 13 3 Cuture temperature () 25 1 28 2 31 3 Culture time d 6 1 7 2 8 3 Content of oil (g/100g) 0.439 1.276 0.278

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4 5 6 7 8 9 k1 k2 k3 Range

9 1 11 2 13 3 9 1 11 2 13 3 0.664 0.535 0.319 0.345

25 1 28 2 31 3 25 1 28 2 31 3 0.328 0.857 0.436 0.529

7 2 8 3 6 1 8 3 6 1 7 2 0.411 0.639 0.466 0.228

0.316 0.893 0.395 0.228 0.403 0.326

Se puede observar de la Tabla que la mejor combinacin es A1B2C2. El orden de los valores de rango es RB> RA> RC. Entre todos los factores, la temperatura de la cultura es el factor ms influyente en el experimento y seguido de inculo, tiempo de cultivo es el factor menos influyente. El contenido de aceites microbiana del tallo del maz nuevo fermentada por Trichosporon cutaneum es 1.276g por productos de fermentacin 100g en el marco del inculo de Trichosporon cutaneum es de 9% a 28 C durante 7 quinquies.

4. Conclusions and Discussion


1) El contenido de azcares reductores del tallo de maz fermentado por Trichoderma koningii era 2.385mg/ml bajo el inculo de Cellulomonas flavigena de 5% a 31C para 3d. El contenido de aceites microbiana del tallo del maz nuevo fermentada por Trichosporon cutaneum era 1.276g por productos de fermentacin 100g bajo el inculo de Trichosporon cutaneum de 11% a 28 C durante 7 quinquies. 2) El contenido de aceites microbianos en productos fermentados no slo se ser decidido por las caractersticas genticas de las clulas, sino tambin con las condiciones de cultivo. Si vamos a explorar el mejor mtodo de tratamiento previo del maz acecha an ms para mejorar la tasa de conversin de polisacrido o si vamos a hacer la transformacin gentica de Trichosporon cutaneum para mejorar la tasa de produccin de aceites microbianos y tambin si vamos a explorar las condiciones ptimas de fermentacin tales como temperatura, tiempo, pH, oxgeno disuelto, velocidad de agitacin, el tamao del inculo, etc medio e n el fermentador para obtener los mejores cintica de fermentacin, se espera que la produccin de petrleo para aumentar an ms

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